基于代谢组学的四逆汤中附子-干姜药对配伍前后毒效变化规律分析

目的 探讨附子干姜配伍前后的毒效变化规律,揭示二者配伍内涵。方法 将60只SD大鼠随机分为空白组、空白-附子组、空白-附子干姜组、模型组、模型-附子组、模型-附子干姜组,后3组采用尾静脉注射阿霉素复制心力衰竭大鼠模型,前3组尾静脉注射等量生理盐水,并对比分析附子单煎液与附子干姜合煎液对正常大鼠与模型大鼠生化指标、心肌组织病理学形态的影响;对大鼠血清样品进行代谢组学分析,运用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）筛选组间差异代谢物,并分析差异代谢通路;结合网络药理学筛选附子干姜配伍前后与增强抗心衰药效、调控心脏毒性相关的代谢物及其关联靶点、通路,采用蛋白免疫印迹法（Western blot）对筛选出的代表性通路进行验证。结果 与空白组比较,模型组脑钠肽（BNP）、肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌钙蛋白（cTn）-T含量显著升高（P<0.01）,空白-附子组CK、LDH、cTn-T含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,空白-附子干姜组CK含量显著升高（P<0.01）;与空白-附子组比较,空白-附子干姜组LDH含量明显降低（P<0.05）,病理切片显示2种煎液均可导致正常大鼠心肌组织病理损伤。与模型组比较,模型-附子干姜组BNP、CK、LDH、cTn-T含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,模型-附子组BNP、LDH、cTn-T含量明显降低（P<0.05,P<0.01）;与模型-附子组比较,模型-附子干姜组CK含量显著降低（P<0.01）,2种煎液均可改善模型大鼠心肌组织病理学形态。代谢组学结果显示,附子单煎液与附子干姜合煎液分别可回调模型大鼠422种与459种代谢物,附子干姜合煎液对正常大鼠的代谢干扰作用弱于附子单煎液。网络药理学关联分析结果显示,干姜增强附子抗心衰药效方面,脱氧尿苷酸等3个代谢物关联到56个代谢物,82个靶点,13条通路,包括钙信号通路、肾素分泌、肾素-血管紧张素系统等;干姜影响附子心脏毒性方面,酪醇等3个代谢物关联到24个代谢物,55个靶点,14条通路,包括心肌细胞肾上腺素能信号转导、碳代谢等。Western blot验证实验结果显示,与空白组比较,模型组大鼠心肌组织中血管紧张素转换酶（ACE）、血管紧张素转换酶2（ACE2）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,模型-附子组、模型-附子干姜组ACE、ACE2、AngⅡ表达显著降低（P<0.01）,与模型-附子组比较,模型-附子干姜组ACE2、AngⅡ表达显著降低（P<0.01）;与空白组比较,空白-附子组、空白-附子干姜组细胞外信号调节激酶（ERK）、蛋白激酶B（Akt）、cTn-I3表达显著升高（P<0.01）,与空白-附子组比较,空白-附子干姜组ERK、Akt、cTn-I3表达降低,但差异无统计学意义。结论 附子-干姜药对在病理状态下表现出一定程度的配伍增效关系,在正常生理状态下表现出一定程度的配伍减毒关系,二者的药效特征、配伍实质与机体生理状态密切相关。     

基于代谢组学技术研究参附配伍对大鼠心脏毒性的影响

运用UPLC-Q-TOF/MS技术研究人参与附子配伍对大鼠血清中内源性标记物的影响,旨在发现人参对附子减毒作用的内源性标记物及其分子机制。连续7 d给予健康雄性Wistar大鼠不同配伍的参附水煎液20 g·kg^-1,收集血清,通过主成分分析和偏最小二乘判别法分析参附配伍对内源性代谢物的影响。参附合并组中,谷胱甘肽、磷脂酰胆碱、柠檬酸含量下降,同时抗坏血酸、尿酸、D-半乳糖、色氨酸、L-苯丙氨酸的含量上升。说明参附合煎液中附子对心脏产生了毒性影响。参附合煎组中与空白组对比表现出了类似或者稍弱的趋势,但是大部分并不具有统计学意义。对比参附合煎组与合并组,可以得出参附配伍减毒的科学性。结果可见,人参与附子配伍可以减轻附子的心脏毒性, 柠檬酸、谷胱甘肽、磷脂酰胆碱、尿酸可作为附子造成心脏毒性的潜在标记物。     

巴戟天经不同比例甘草炮制后对腺嘌呤致肾阳虚模型大鼠肾功能和HPG轴改善作用的比较

目的 通过比较巴戟天生品及不同比例甘草炮制品对腺嘌呤致肾阳虚模型大鼠肾功能和下丘脑-垂体-性腺轴（HPG轴）的改善作用，以及对大鼠组织中Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路蛋白表达的调节作用，分析不同比例甘草炮制（甘草与巴戟天质量比分别为0∶100、3∶100、6∶100、12∶100、24∶100，以下分别简称无甘草炮制品和100∶3、100∶6、100∶12、100∶24炮制品）对巴戟天补肾助阳功效的影响，阐释制巴戟天的炮制内涵。方法 巴戟天炮制品按2020年版《中华人民共和国药典》收载的制巴戟天方法进行制备。采用腺嘌呤灌胃给药复制肾阳虚大鼠模型，利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E₂）、睾酮（T）水平，分光光度法测定尿素氮（BUN）和肌酐（SCr）水平，苏木素-伊红（HE）染色法评价组织病理形态变化，免疫组织化学法分析E-钙黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Wnt2b、β-catenin、Smad1和Smad4蛋白的表达。结果 100∶6、100∶12炮制品对体态的改善较好，100∶12炮制品降低血清中BUN、SCr、FSH和LH水平及调整E₂/T比值的作用最优，100∶6、100∶12炮制品调节E-cadherin、α-SMA、Wnt2b、β-catenin、Smad1和Smad4蛋白表达的作用较佳。结论 巴戟天经100∶6、100∶12比例甘草炮制后对腺嘌呤致肾阳虚模型大鼠肾功能和HPG轴有较好的改善作用，这与其能更好地调节大鼠肾脏和睾丸组织中Wnt/β-catenin通路及睾丸组织中TGF-β₁/Smads通路密切相关。     

酸枣仁总皂苷改善对氯苯丙氨酸诱导失眠大鼠模型学习记忆损伤机制的研究

目的 基于代谢组学技术考察酸枣仁总皂苷（total saponins of Ziziphi Spinosae Semen,SZSS）对失眠大鼠内源性代谢物的影响,并探讨酸枣仁总皂苷改善学习记忆的药效及其作用机制。方法 采用对氯苯丙氨酸（DL-4-chlorophenylalanine,PCPA）诱导大鼠失眠模型,给予地西泮和酸枣仁总皂苷干预后,进行旷场实验及Morris水迷宫实验;采用苏木素-伊红（HE）染色观察海马组织病理变化;采用ELISA测定海马组织5-羟色氨（5-hydroxytryptamine,5-HT）、γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）及NO （nitric oxide,NO）水平。利用UPLC-Orbitrap-MS/MS技术对大鼠海马组织代谢轮廓进行分析,结合多元统计分析筛选差异性代谢物,并基于MetaboAnalyst 5.0数据库进行代谢通路及代谢网络分析,多角度探讨酸枣仁总皂苷改善学习记忆的代谢特征及作用途径。结果 与模型组比较,酸枣仁总皂苷组大鼠学习能力显著提高（P<0.05、0.01）,海马组织病理结构明显改善,海马组织中5-HT、GABA及NO水平显著升高（P<0.05、0.01）;代谢组学共鉴定出18种与学习记忆损伤相关的潜在生物标志物,酸枣仁总皂苷主要通过苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸等7条主要氨基酸代谢通路发挥改善记忆损伤的作用。结论 酸枣仁总皂苷能够通过回调海马组织内源性差异代谢物,并调控相关氨基酸代谢通路,从而改善失眠引起学习记忆减退。     

醋制商陆正丁醇部位降低肝肾毒性作用机制研究

目的 采用代谢组学的方法探究商陆Phytolacca acinosa醋制前后正丁醇部位肝肾毒性的差异及减毒作用机制。方法 采用UPLC-Q-TOF/MS的方法对商陆醋制前后正丁醇部位的成分变化进行研究。小鼠ig商陆生醋品正丁醇部位低、高剂量（27、54 mg/kg）28 d后,通过血清生化指标和病理切片评价商陆醋制前后的肝肾毒性差异;采用UPLC-Q-TOF/MS对血清进行数据采集;通过QI、HMDB及MetaboAnalyst 5.0寻找与商陆炮制减毒相关的差异代谢物及代谢通路。结果 商陆醋制后部分皂苷类成分含量下降显著,并能够明显降低生品导致的肝肾功能指标的异常升高。病理切片结果显示,与对照组比较,生品组的肝、肾组织病变明显;醋制后病变程度显著减轻。通路富集分析发现胆汁酸代谢可能与商陆醋制减毒密切相关;进一步对胆汁酸进行半定量分析发现,商陆醋制后能够改善生品导致的结合型胆汁酸含量的下降及次级胆汁酸含量的升高,从而改善胆汁酸代谢紊乱。结论 商陆生品具有肝肾毒性,醋制后皂苷类成分含量下降,毒性显著降低,其作用机制可能与改善胆汁酸代谢紊乱密切相关。     

通阳化浊方与四妙勇安汤干预动脉粥样硬化模型家兔的粪便代谢组学比较研究＊

目的 通过粪便代谢组学技术，考察通阳化浊方与四妙勇安汤在治疗动脉粥样硬化家兔中的作用机制。方法 40只白兔，雄性，每组10只，随机分为4组，包括空白组、模型组、通阳化浊方组与四妙勇安汤组。空白组给予8周正常饮食；模型组和两个给药组以高脂饲料喂养，4周后，用球囊法手术损伤实验兔的右侧颈总动脉；两个给药组在术后，分别每日1次灌胃给予通阳化浊方和四妙勇安汤至第8周。模型组与实验组每组抽取3只家兔，采集粪便后，用LC-MS技术进行粪便代谢组学检测，运用PCA与OPLS-DA分析法来寻找差异性表达的代谢物和代谢途径。结果 相较于模型组，通阳化浊方与四妙勇安汤组分别存在59和48个差异化合物，通阳化浊方组涉及20条代谢通路，5条主要代谢通路分别为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、花生四烯酸代谢、视黄醇代谢、苯丙氨酸代谢以及淀粉和蔗糖代谢；四妙勇安汤组涉及15条代谢通路，4条主要代谢通路包括酪氨酸和色氨酸的生物合成、苯丙氨酸代谢、苯丙氨酸、亚油酸代谢和花生四烯酸代谢。结论 在治疗动脉粥样硬化模型家兔的过程中，通阳化浊方与四妙勇安汤在粪便代谢组学方面存在差异性代谢产物，干预相应的代谢通路，可能会对药物的作用产生影响。     

不同炮制方法对川乌抗痛风性关节炎及心脏毒性作用的影响

目的 研究不同炮制方法对川乌抗痛风性关节炎及心脏毒性的影响,探讨川乌不同炮制方法可能的减毒增效机制。方法 抗痛风性关节炎试验中以大鼠膝关节肿胀度、炎症因子［白细胞介素（IL）-1β,IL-18,肿瘤坏死因子（TNF）-α］水平、肝脏能量代谢相关酶［Ca²⁺-Mg²⁺-三磷酸腺苷（ATP）酶,Na⁺-K⁺-ATP酶,琥珀酸脱氢酶（SDH）］活性为指标评价2020年版《中华人民共和国药典》收载的方法（简称“药典法”）蒸制川乌、药典法煮制川乌、建昌帮法制川乌、樟帮法制川乌及生川乌的抗炎作用。心脏毒性试验中以肌酸激酶（CK）,乳酸脱氢酶（LDH）活性和B型脑钠肽（BNP）含量为指标评价川乌及其不同炮制品的心脏毒性强弱。结果 在抗痛风性关节炎试验中,与空白组比较,模型组大鼠膝关节明显肿胀（P<0.01）,血清中IL-1β,IL-18,TNF-α水平显著升高（P<0.01）,Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性显著下降（P<0.01）。与模型组比较,生川乌及其炮制品均能减轻大鼠膝关节肿胀,降低血清中IL-1β,IL-18,TNF-α水平;药典法蒸制川乌组大鼠肝脏中Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性显著高于模型组（P<0.01）,其他给药组则均无统计学差异。在心脏毒性试验中,与空白组比较,生川乌组和药典法蒸/煮制川乌组CK,LDH活性显著增强,BNP水平显著上升（P<0.01）。在LDH活性和BNP含量方面,樟帮法和建昌帮法制川乌组显著低于生川乌组（P<0.01）;在CK活性方面,樟帮法制川乌组显著低于生川乌组（P<0.01）。结论 生川乌及其炮制品均具有抗炎效果,但在不同评价指标之间存在一定差异;生川乌及其炮制品在心脏毒性方面存在较大差异,其中建昌帮法和樟帮法制川乌的心脏毒性较弱。     

基于代谢组学分析热炎宁合剂联合利奈唑胺对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其生物膜的抑制机制

目的 探讨热炎宁合剂（RYN）联合利奈唑胺（LNZ）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）及其生物膜的抑制作用。方法 采用微量稀释法测定RYN和LNZ对MRSA的最低抑菌浓度（MIC）；微孔板法检测在生物膜生长过程中4个时间点（0，6，12，24 h）的MRSA给药前后活菌量的变化；扫描电镜观察24 h时MRSA形态学变化；细胞代谢组学技术检测在4个时间点时两药联合干预MRSA的内源性小分子终端代谢物的变化。结果 RYN和LNZ的MIC分别为1/2原液和4 mg·L^-1。单用LNZ（2 mg·L^-1）0 h活菌量抑制效果优于1/16 RYN单用，6，12，24 h则单用1/16 RYN优于单用LNZ。RYN联合LNZ在4个时间点的抑制作用均优于单用组。两药联用对24 h时MRSA生物膜形态学结构的破坏优于单用组。环磷酸腺苷（cAMP），二磷酸腺苷（ADP）-D-核糖和2-甲基丁酰辅酶A（2M-CoA）是与被膜形成相关的代谢物；LNZ对这3个代谢物无治疗作用，RYN在12，24 h分别对2M-CoA和ADP-D-核糖产生影响；两药联用在24 h对三者均有治疗作用。L-色氨酸、苯丙酮酸、胞苷和癸二酸是LNZ的药效代谢标志，相关的生物通路有苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成，苯丙氨酸代谢。L-组氨酸，尿酸，L-赖氨酸等4个代谢物是RYN的药效标志，相关的生物通路有苯丙氨酸代谢和氨酰转移核糖核酸的生物合成。L-色氨酸，L-赖氨酸，鞘氨醇-1-磷酸等9个代谢物与两药联用的药效相关，相关的生物通路有氨酰转移核糖核酸的生物合成，苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成，新生霉素生物合成和酪氨酸代谢。结论 RYN联合LNZ干预MRSA在其生物膜生长的各时间点均有抑菌增效作用；抑制被膜的机制与cAMP代谢相关；两药联合增效作用则与氨酰转移核糖核酸的生物合成，苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成相关。RYN与LNZ联用可作为临床治疗MRSA感染的潜在有效方案。     

麸炒苍术多糖与正丁醇部位对脾虚大鼠代谢组学的影响

目的 采用非靶向代谢组学技术探究麸炒苍术多糖与麸炒苍术正丁醇部位对脾虚大鼠血浆代谢产物的影响,进而阐明二者健脾作用机制。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、多糖组（0.075 6 g·mL^-1）和正丁醇部位组（0.012 1 g·mL^-1）,每组10只。除空白组外,其余3组采用过度劳倦、饮食失节加苦寒泻下的复合因素造模方法复制脾虚大鼠模型,造模结束后多糖组和正丁醇部位组分别给予相应药液灌胃治疗7 d,空白组和模型组给予等体积生理盐水。采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法（UHPLC-Q-Orbitrap-MS）分析空白组、模型组、多糖组与正丁醇部位组大鼠血浆样品,并采用多元统计分析筛选差异代谢产物;采用京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库结合MetaboAnalyst 5.0软件对筛选出的差异代谢物进行代谢通路分析。结果 多元统计分析结果显示,模型组与空白组、多糖组、正丁醇部位组间代谢产物均存在明显差异。空白组与模型组间共有380个差异代谢物,麸炒苍术多糖与麸炒苍术正丁醇部位分别回调了其中78个和57个差异代谢物。代谢通路富集结果显示,麸炒苍术正丁醇部位主要影响了甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢及D-精氨酸、D-鸟氨酸代谢;麸炒苍术多糖主要影响了甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,生物素代谢,硫胺素代谢及三羧酸循环。结论 麸炒苍术多糖与正丁醇部位均对脾虚大鼠的代谢异常有明显调节作用,其中正丁醇部位主要涉及氨基酸代谢,多糖除影响氨基酸代谢外,还参与调节能量代谢与辅因子和维生素代谢。     

热性中药附子调节机体内源性代谢产物的分子作用机制研究

目的 采用代谢组学技术观察附子Aconiti Lateralis Radix Praeparata对小鼠血清内源性代谢物的影响，寻找其相关生物标志物和可能表征附子临床治疗作用的代谢途径及相关靶点，探讨其发挥疗效的分子机制。方法 将20只雄性小鼠随机分为2组，分别ig附子水煎液和蒸馏水，小鼠给药量为15 mL/（kg·d），连续ig 4 d；采集各组血样，利用UPLC-MS/MS技术进行分析，主成分分析（PCA）、偏最小二乘判别分析（PLS-DA）等分析方法进行数据模式识别，并根据变异权重系数（VIP）大于1和手动积分计算筛选出差异代谢物；利用差异代谢物进行通路分析；运用Cytoscape和MetScape对差异代谢物进行网络模块化分析并筛选靶标。结果 通过数据模式识别，附子组与对照组均能完全分离；共筛选出18个差异代谢物，其含量都呈上调趋势；通过通路分析，得出5条相关通路，分别为亚油酸代谢、花生四烯酸代谢、淀粉和蔗糖代谢、烟酸和烟酰胺代谢和磷酸肌醇代谢通路；网络模块化分析共得到14个模块，其中最大的2个模块是花生四烯酸代谢通路和亚油酸代谢通路；在整个网络中，花生四烯酸（59）、亚油酸（55）、烟酰胺（26）和棕榈酸（11）节点度值大于均值（8.010），涉及的通路分别为花生四烯酸代谢、亚油酸代谢、烟酸和烟酰胺代谢和饱和脂肪酸β-氧化通路；共筛选出26个相关基因，同属于细胞色素P450（CYP450）酶系。结论 附子可能通过作用于CYP450，影响花生四烯酸代谢等途径，进而调节机体能量代谢，从而发挥临床治疗作用。     

浅议影响小儿头皮静脉穿刺的因素

头皮静脉穿刺是儿科护士必备的技术，其成功率的高低直接危机患儿的痛苦乃至生命，掌握这门过硬的技术，尽量做到一针见血，是儿科护士的天职，也是衡量合格护士的标准之一。本人从事儿科护理工作已多年，现将这方面的体会做一报告。     

对《伤寒论》与《温疫论》的再思考

通过分析伤寒与温疫的证治特点、《伤寒论》与《温疫论》的篇章结构、张仲景与吴又可所处的时代背景,以及现代医学对出血热与鼠疫的认识,梳理热病证治的发展历史与脉络。     

基于《伤寒论》引发古代伤寒学派思考

《伤寒论》这一中医经典著作,指导临床,疗效显著,活人无数,尤其是对外感热病的发展影响颇深.伤寒学派是以研究或阐述张仲景《伤寒论》辨证论治及理法方药为中心的医学学术群体,该学派学术璀璨,连绵千年.现就以古代此派的形成、发展、争鸣3个阶段进行初步探析,认为其形成于晋唐,发展于宋元,争鸣于明清.     

基于效应的针刺穴位组学研究思考

根据“穴位组学概念”的提出,针对针刺机理进行深入研究。目的在于揭示针刺的生物学基础,阐明针刺的科学性,并对相关针刺处方进行优化,围绕临床针刺治疗手段中的关键技术进行标准化与规范化研究,实现针刺科学机理转化为实际应用,从而更好的服务于临床。     

中药蛇床子的研究进展

概述近年来有关蛇床子的化学成分、药理作用和临床应用和研究进展。     

百年以来《伤寒论》理论研究述评(之二)

从中华人民共和国建立到文化大革命爆发的近20年间,是新时期仲景学说研究队伍的形成———发展期。在这一时期,对《伤寒论》原著的注释和校正工作,揭开了新中国教材编写的序幕;对《伤寒论》中一些有代表性问题或关键性字词的考订,是一个特点;对《伤寒杂病论》方法论的研究,也是这一时期出现的新特点。此外,这一时期,对六经的研究逐渐深入;对方证的研究仍是热门话题;对伤寒方中用药规律的研究出现热潮;对张仲景治疗方法原理的研究开始活跃;比较性研究热度不减;专题性研究渐成趋势。     

百年以来《伤寒论》理论研究述评(之一)

近百年来,公开发表的研究《伤寒论》的学术论文约3万篇,内容涉及张仲景生平事迹、《伤寒论》版本传承、《伤寒论》学术思想和临床应用研究等多个方面。民国时期是近代仲景学术研究的萌芽——发动期,这一时期的文章具有以下时代特点:①期刊和作者群有明显的地域和社团性;②体现了中西医结合的研究方向;③研究空间不断扩大;④学术争鸣空前活跃。     

辨证施护喘证

喘证的一般护理注意调整病室环境、体位与休息、严密观察生命体征、饮食护理、情志护理;根据中医辨病与辨证相结合的方法,同病异护、异病同护,实施具有针对性、个性化的护理措施,保障治疗措施的实施,促进疾病康复。     

变应性鼻炎研究概要

对变应性鼻炎的发病机理、流行情况、实验及试验研究、中医药治疗、针灸治疗、治疗前景的实验研究等方面进行了综述 ,并提出从辨证指标入手的观点。     

七情学说实验研究相关问题探讨

对近年来有关中医七情学说的实验研究现状进行了简要评述。指出实验研究对七情学说的创新和发展具有重要的意义，并着重对今后开展七情学说实验研究所要解决的关键问题以及七情学说实验研究所涉及的动物模型等问题进行了初步探讨。