急性分离的大鼠海马及皮层神经元快速失活钾电流特性的比较

目的 探讨海马及皮层神经元细胞膜上快速失活钾通道的特性。方法 急性分离大鼠海马及皮层神经元;利用whole-cell膜片钳技术记录IA电流。结果 海马神经元上的IA通道电流幅度较皮层神经元大、潜伏期短。结论 海马神经元与皮层神经元上的IA电流特征存在差别。     

成年大鼠海马CAI区锥体细胞的急性分离方法

目的建立一种膜片钳技术(patch clamp technique,PCT)的成年大鼠海马CAI区锥体细胞(adultra hippocampal CAI pyramidal neuron,ARHCPN)的急性分离方法.方法采用酶加机械分离的方法制备ARHCPN,用相差显微镜观察其形态特征,并用PCT的细胞贴附模式记录L-型Ca2 通道的单通道电话动.结果所分离的ARHCPN不仅形成学特征保存完好,而且保存了L型Ca2 通道的电生理学特性.结论成功地建立了一种简单、快速、可靠的适用于膜片钳单通道记录的ARHCPN的急性分离方法.     

PKA参与ATP对大鼠背根神经节神经元电压门控性钙通道的抑制

目的 探讨ATP对大鼠背根神经节(DRG)神经元的电压门控性钙通道(VGCC)的抑制效应及其信号转导途径.方法 在急性分离的大鼠DRG神经元上应用全细胞膜片钳技术记录ATP诱导的电流以及VGCC电流;应用钙离子成像技术检测胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化.结果 ATP能够可逆性地抑制DRG神经元的VGCC电流和VGCC介导的[Ca2+]i升高.用PKA抑制剂H-89预处理DRG神经元,ATP对VGCC电流及其介导的[Ca2+]i升高的抑制被反转;而用PKC抑制剂bisindolylmaleimide(Bis)预处理DRG神经元,ATP对VGCC介导的[Ca2+]i升高的抑制效应则无影响.结论 在大鼠DRG神经元中,PKA参与了ATP对该神经元VGCC的抑制.     

尾核神经元的原代培养及离子通道特性的研究

  目的 建立一种稳定的大鼠尾核神经元的分离和体外培养方法,用于中枢神经元离子通道特性的研究。方法 自新生24 h内的Wistar乳鼠大脑中分离出尾核,结合酶消化及机械吹打分离尾核神经元,进行体外原代神经元培养。采用全细胞膜片钳技术记录电压门控钠通道电流和电压门控钾通道（Kv）电流。结果 分离出的神经元形态正常,细胞膜光滑有弹性,保存了主要离子通道的活性。结论 本方法适合用于中枢神经系统神经元离子通道的研究。     

一种有效记录人心房肌细胞小电导钙激活钾通道电流的方法

目的：探讨一种有效的记录人心房肌细胞小电导钙激活钾通道（small conductance Ca2＋-activated K＋channels,SK）电流的全细胞膜片钳方法。方法：以人心房肌细胞为研究对象,采用传统全细胞膜片钳技术,记录人心房肌细胞的小电导钙激活钾通道的宏观电流。传统全细胞模式形成后,分别记录在浴液中加入apamin（100 nM）前后的电流,两者相减就得到了apamin敏感的SK2的电流。结果：采用传统全细胞膜片钳技术,能有效记录人心房肌细胞上apamin敏感的宏观电流。该电流是内向整流,去极化激活时,无明显失活现象,无尾电流出现,这些都符合SK2电流特性。结论：本实验提供了一种简单、有效的记录人心房肌细胞SK2宏观电流的方法,为今后深入的研究提供了实验基础。     

左乙拉西坦对马桑内酯致痫海马神经细胞钠电流的影响

目的 探讨左乙拉西坦 (Levetiracetam, LEV) 对马桑内酯(coriaria lactone, CL)致痫SD大鼠海马神经元钠电流增加的影响.方法 利用膜片钳全细胞模式, 记录急性分离后CL致痫的大鼠海马神经元钠电流,并给予LEV进行干预,分为对照组、LEV 150 μmol/L组、LEV 300 μmol/L组和未处理组.另用LEV 300 μmol/L预处理40 min后再给予CL致痫,观察钠电流的变化情况.结果 CL致痫后钠电流增加,加入LEV 150 μmol/L后最大电流峰值增加了36.92%±2.84%(P＜0.05),与未处理组比较差异无统计学意义(P＞0.05).LEV 300 μmol/L组钠电流增加了16.58%± 1.56%(P＞0.05);但与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).经LEV预处理后,CL仍使钠电流增加了32.86%±6.73%(P＜0.05),与未处理组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LEV未能抑制CL致痫海马细胞钠电流的增加,其抗癫痫作用可能不是通过抑制钠电流而产生的.     

K+v通道亚型在急性缺氧性肺血管收缩中的作用研究

目的 探讨K+v通道亚型在急性缺氧性肺血管收缩(HPV)中的作用.方法 Wistar大鼠30只随机分为两组:常氧对照组和低氧组,采用酶消化的方法 获得单个肺动脉血管平滑肌细胞(PASMC).将分离细胞经a-actin免疫组化鉴定为PASMC细胞.采用膜片钳技术记录PASMC静息膜电位(Em)和电压门控性钾通道电流(Ikv).细胞内灌流Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1抗体混合液(1:125),探讨钾通道在HPV中的作用.结果 低氧组膜电位明显去极化,细胞内灌流Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1抗体混合液可显著抑制常氧对照组PASMC的Ikv,使Em去极化,细胞内灌流Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1抗体混合液对低氧组PASMC的Ikv和Em均无显著影响.结论 Kvl.2、Kvl.3、Kvl.5、Kv2.1可能是氧敏感型通道,并可能介导了急性缺氧性肺血管收缩.     

大白鼠海马CA_1区锥体细胞的急性分离及其电生理学特性

目的：建立适用于膜片组技术（Patchclamptechnigue，PCT）的大白鼠海马CA_4区锥体细胞（rathippocampalCApyramidalneuron，RHCPN）的急性分离方法，并测定该细胞的电生理学特性。方法：用7～21d大鼠，以链霉蛋白酶E酶解加吸管吹打法制备RHCPN，用全细胞PCT测定其电生理学特性。结果：分离的RHCPN易用于PCT，且具有正常的电生理学特性，并保存了主要的电压依赖性和受体门控性高于通道特性。结论：本法分离的RHCPN适用于PCT电生理学研究。     

PKA介导的Aβ_（25-35）对钾通道（快速失活钾电流）的抑制

目的观察PKA在Aβ25-35引起钾通道功能改变过程中的作用,阐明Aβ25-35引起钾通道功能异常的机制。方法酶解急性分离大鼠神经元;利用全细胞膜片钳技术记录电压依赖型钾电流。结果 PKA激动剂8-brom-camp抑制IA电流;PKA阻断剂H-89拮抗Aβ25-35诱导的对IA电流的抑制。结论 PKA参与了Aβ25-35对大鼠海马CA1区神经元电压依赖性钾电流的抑制。     

大鼠海马锥体神经元的急性分离方法

目的：建立一种适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法,并对其离子通道进行描述。方法：采用酶加机械分离法制备10~12 d鼠龄的大鼠海马锥体神经元,用全细胞膜片钳技术测定其生理学特性。结果：分离出的神经元形态正常,有较长突起;用膜片钳技术证实,其保存了主要的离子通道活性。结论：建立一种简单快速的适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法。     

应用红外可视脑片膜片钳技术研究大鼠海马CA1神经元的电生理特性

目的:建立红外可视脑片膜片钳技术,初步观察大鼠海马CA1细胞的电生理特性. 方法:应用红外微分干涉相差技术,结合脑片膜片钳记录,对健康SD大鼠海马CA1细胞电生理特性进行观察,并分析影响记录成功的主要因素. 结果:红外可视膜片钳技术可实时观察到脑细胞形态结构,有助于对封接过程的判断. 大鼠海马脑片CA1细胞可分为多种类型. 生理条件下,锥体细胞处于静息或自发低频状态,具有膜阻抗低、频率适应现象、后放电等特点;中间神经元自发放电频率高、膜阻抗高、无频率适应现象. 结论: 红外可视膜片钳技术克服了盲法膜片钳的缺陷,实现了实时、直视的特点,可操作性强. 应用该项技术,可根据电生理特性对大鼠海马CA1区细胞作出初步分类.     

The effect of protein kinase C on voltage-gated potassium channel in pulmonary artery smooth muscle cells from rats exposed to chronic hypoxia

Background Chronic hypoxia can cause pulmonary hypertension and pulmonary heart disease with high mortality.The signal transduction pathway of protein kinase C (PKC) plays an important role in chronic pulmonary hypertension. So it is necessary to investigate the effect of PKC on voltage-gated potassium (K+) channels in pulmonary artery smooth muscle cells of rats exposed to chronic hypoxia.Methods Male Wistar rats were randomly divided into a control group (group A) and a chronic hypoxia group (group B). Group B received hypoxia ［oxygen concentration （10±1）%］ eight hours per day for four consecutive weeks. Single pulmonary artery smooth muscle cells were obtained using an acute enzyme separation method. Conventional whole cell patch clamp technique was used to record resting membrane potential, membrane capacitance and voltage-gated K+ currents. The changes in voltage-gated K+ currents before and after applying paramethoxyamphetamine (PMA) (500 nmol/L), an agonist of PKC, and PMA plus carbohydrate mixture of glucose, fructose and xylitol (GFX) (30 nmol/L), an inhibitor of PKC, were compared between the two groups.Results The resting membrane potential in group B was significantly lower than that of group A: －(29.0±4.8) mV (n=18) vs －(42.5±4.6) mV (n=35) (P<0.01). But there was no change in membrane capacitance between the two groups: (17.9±4.6) pF (n=40) vs (19.7±5.8) pF (n=31) (P>0.05). The voltage-gated K+ currents were significantly inhibited by PMA in group A, and this effect was reversed by GFX. However, the voltage-gated K+ currents in group B were not affected by PMA.Conclusions The resting membrane potential and voltage-gated K+ currents in pulmonary artery smooth muscle cells from rats exposed to chronic hypoxia decreased significantly. It seems that PKC has different effects on the voltage-gated K+ currents of pulmonary artery smooth muscle cells under different conditions.     

川芎、当归、红花和人参萃取液对缺氧海马神经元NMDA受体的抑制

目的：研究川芎、当归、红花和人参萃取液对缺氧海马神经元NMDA（N－甲基－D－天冬氨酸）受体功能的影响，探讨川芎、当归、红花和人参萃取液保护神经元损伤的机制。方法：采用全细胞膜片钳记录模式记录正常培养10d左右的海马神经元和经缺氧处理的海马神经元NMDA诱发电流；观察0．1％和0．5％的川芎、当归、红花和人参萃取液对NMDA电流的影响。结果：与正常培养10d左右的海马神经元相比，经缺氧处理的海马神经元NMDA诱发电流明显增大，而川芎、当归、红花和人参萃取液可快速，可逆地抑制经缺氧处理的海马神经元NMDA诱发电流。结论：川芎、当归、红花和人参萃取液对缺血缺氧引起的海马神经元NMDA受体活性过度增强有抑制作用，提示川芎、当归、红花和人参萃取液具有保护因NMDA受体过渡激活引起的神经元损伤的作用。     

钙激活钾通道及ATP敏感性钾通道在海马神经元缺氧超极化中的作用

研究缺氧超极化缺氧海马神经元中的电生理机制,以提示缺氧超极化在脑损伤中的作用。方法：应用膜片钳制技术的细胞贴附式膜片记录缺氧海马神经元的单通道电流活动,经p-CLAMP软件进行采样储存数据和数据的分析处理。结果：缺氧引起钙激活钾通道（KCa通道）和ATP敏感性通道（KATP通道）的激活,增加通道的开放概率。结论：缺氧超极化可能是缺血性脑损伤早期的重要代偿机制。     

大鼠皮层神经元急性分离改良方法

目的建立一种适用于膜片钳技术的大鼠皮层神经元急性分离改良方法，并对其离子通道电流进行记录。方法采用酶加机械分离法制备12—16d鼠龄的大鼠皮层神经元。其电生理学特性测定用全细胞膜片钳技术。结果分离出的神经元形态正常，有较长的轴突；用膜片钳技术证实，其保存了主要的离子通道活性。结论成功建立了一种简单快速的适用于膜片钳技术的大鼠皮层神经元急性分离改良方法。     

单个人心房肌细胞急性分离技术及其细胞膜瞬时外向钾电流的记录

目的建立单个人心房肌细胞的急性分离技术,以满足检测人心肌细胞离子通道的需要。方法两步酶解法消化分离人心房肌细胞,采用膜片钳全细胞技术记录瞬时外向钾电流（I_to）。结果根据患者的性别、年龄及组织块的大小,选择适当的消化时间,分离得到结构清晰,横纹清楚,边缘整齐,少颗粒,舒展伸直,呈长杆状的单个心肌细胞：采用全细胞膜片钳技术能记录到瞬时外向钾电流。结论该方法能分离到形态和状态均良好的细胞,有利于进行单个人心房肌细胞膜片钳实验的研究。     

耐钙心肌细胞的分离及其L型钙通道电流观察

目的：建立大鼠心肌细胞分离方法，用于膜片钳实验，并记录L型钙通道电流，方法：基于Langendorff逆行主动脉灌流模型，以经改进的心肌细胞分离技术获得单个耐钙心肌细胞，用膜片钳全细胞方式记录L型钙电流。结果：在灌流所得50％存活单个心肌细胞中约70％为耐钙心肌细胞，并记录到典型的L型钙电流，结论：这种心肌细胞分离技术能获得大量具有正常电生理特性的耐钙心肌细胞，可用于心肌细胞离子通道和信号转导机制的研究。     

大鼠心室肌细胞单通道钙电流的记录及其电生理学特性分析

 目的分离大鼠心室肌细胞,记录大鼠心室肌细胞的单通钙电流,并分析其基本电生理学性质。方法胶原酶法分离大鼠心室肌细胞;应用膜片钳技术细胞贴附式和内膜向外式记录L-型钙通道的电流,并用pClamp10分析软件进行分析。结果分离得到了大鼠心室肌细胞,细胞存活形态良好,呈杆状或柱状,具有清晰的横纹。记录到的L-型钙通道单通道电流,平均电流幅度为（1.13±0.01）pA,电导为19pS,平均开放时间常数为（1.35±0.03）ms,平均关闭时间常数为（46.75±10.04）ms。此外,还记录到了L-型钙通道的Run-down现象。结论本实验分离得到的大鼠心室肌细胞适用于膜片钳单通道记录模式;记录到的L-型钙通道的基本电生理学性质与文献报道相符。     

无镁诱导培养大鼠海马神经元癫痫放电模型中延迟整流钾电流的变化

 摘要：目的 利用无镁细胞外液诱导原代培养大鼠海马神经元癫痫放电模型来检测延迟整流钾电流的变化。方法 采用新生24h内Wistar大鼠,分离海马神经元进行原代培养。体外培养至12-16d时,无镁细胞外液处理神经元3h并恢复正常细胞外液,应用全细胞膜片钳技术记录神经元的放电情况及延迟整流钾电流。结果 无镁处理后的神经元存在自发的“癫痫样”放电;无镁诱导可使神经元延迟整流钾电流增大。结论 延迟整流钾电流增大可能与无镁诱导体外培养大鼠海马神经元自发异常放电的基础病理机制相关。     

大鼠海马神经干细胞外向电压门控性钾通道的电生理特性

目的 研究大鼠海马源神经干细胞(NSC)外向电压门控性钾通道(Kv)的电生理特性.方法 利用无血清培养、单细胞克隆技术,体外培养SD大鼠海马组织源NSC.以免疫细胞化学方法对NSC及其分化后的子代神经细胞进行鉴定.应用膜片钳技术全细胞模式记录不同外向Kv通道的电生理特性.结果 体外培养SD大鼠海马组织源NSC表达巢蛋白(nestin),在体外可诱导分化产生分别表达Tuj1和GFAP的细胞.全细胞膜片钳可记录到三种外向Kv通道:一种缓慢激活的、对四乙基胺(TEA)敏感的延迟整流钾电流(IDR);一种快速激活和失活、可被4-氨基吡啶(4-AP)阻断的外向瞬时钾电流(IA),其在+20 mV和+50 mV的电流密度分别为11 pA/pF±3 pA/pF和29 pA/pF ±7 pA/pF(标本数=11);一种可被iberiotoxin(IbIX)抑制的大电导钙激活钾通道(BKCa),钳制电位+80mV时,加入100 nM IbTX前后的电流密度分别为56 pA/pF ±4 pA/pF和45 pA/pF±4 pA/pF(标本数=6.P＜0.05).结论 体外培养的未分化状态下SD大鼠海马源NSC至少含有IDR、IA和BKCa三种外向Kv通道.