氧化苦参碱的镇痛作用对钙通道和γ-氨基丁酸的影响

目的通过建立神经病理性疼痛模型,观察氧化苦参碱（oxymatrine,OMT）的镇痛作用,探讨OMT的镇痛作用与高电压依赖性钙通道（highvoltage-dependentcalciumchannels,HVDCCs）mRNA表达及与γ-氨基丁酸（GABA）含量变化的关系。方法C57BL/6小鼠共66只,随机分成假手术组、模型组、OMT组,每组22只。建立部分坐骨神经结扎神经病理性疼痛模型,采用upanddown方法测定小鼠足底机械缩足反应阈值（MWT）;利用实时荧光定量PCR（real-timePCR）方法分别检测脑、脊髓组织中各HVDCCsmRNA的表达;使用ELISA试剂盒测定脑、脊髓组织中GABA含量。结果与0天比较,模型组第7、10、14天结扎侧左后足MWT降低（P<0.05）;与假手术组比较,模型组小鼠第7天结扎侧左后足MWT显著降低（P<0.05）;与0天比较,OMT组术后第7天给药前MWT降低（P<0.05）,给药后MWT则升高（P<0.05）。与假手术组比较,模型组脑组织中Cav1.2、Cav1.3、Cav2.1及Cav2.3mRNA水平明显升高,Cav2.2mRNA明显降低（P<0.05）,而脊髓组织中Cav1.2、Cav1.3mRNA水平明显升高,Cav2.1、Cav2.2、Cav2.3mRNA明显降低（P<0.05）;与模型组比较,OMT组脑组织中Cav1.2、Cav1.3、Cav2.1及Cav2.3mRNA水平明显降低,Cav2.2mRNA明显升高（P<0.05）,而脊髓组织中Cav1.3mRNA水平明显降低,Cav2.1、Cav2.2、Cav2.3mRNA明显升高（P<0.05）。与假手术组比较,模型组脑组织中GABA含量下降（P<0.05）;与模型组比较,OMT组脑组织中GABA含量升高（P<0.05）;在脊髓组织中,各组GABA的含量变化比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论氧化苦参碱对神经病理性疼痛有抑制作用,其镇痛作用可能与HVDDCs有关,其中Cav2.2可能直接影响GABA神经递质的释放。     

钙离子通道在参仙升脉口服液改善老龄大鼠窦房结功能障碍中的表达变化

目的:观察钙离子通道在参仙升脉口服液改善老龄大鼠窦房结功能障碍中的表达变化。方法:通过对大鼠心率及心电图监测进行筛选后,将大鼠分为三组:心率正常的大鼠为对照组、心率下降符合病态窦房结综合征诊断标准的大鼠分为两组:病态窦房结综合征组、参仙升脉治疗组。参仙升脉治疗组:筛选后灌胃参仙升脉口服液2 m L/d,连续30 d。采用MD3000生物信号采集处理系统记录大鼠心电图观察大鼠心率变化。HE染色法观察各组窦房结组织细胞纤维样改变。Western blot测定窦房结组织Cav 1.2,Cav 1.3和Cav 3.1,Cav 3.2,Cav3.3蛋白的表达。结果:MD3000生物信号采集处理系统记录大鼠心率显示与病态窦房结综合征组相比,参仙升脉治疗组大鼠心率明显升高(P0.05);HE染色显示与窦房结综合征组相比,参仙升脉治疗组窦房结组织纤维化程度较低(P0.05);Western blot显示与病态窦房结综合征组相比,参仙升脉治疗组Cav 1.2,Cav 1.3和Cav3.1,Cav 3.2,Cav 3.3蛋白表达显著升高(P0.05)。结论:参仙升脉口服液能干预老龄大鼠窦房结组织中Cav1.2,Cav 1.3和Cav 3.1,Cav 3.2,Cav 3.3蛋白的表达,从而改善老龄大鼠窦房结功能障碍。     

氧化苦参碱对神经痛小鼠坐骨神经功能的修复作用研究

目的:探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对神经性疼痛小鼠坐骨神经功能的修护作用。方法:将C57BL/6小鼠分为假手术组、模型组(慢性坐骨神经结扎)和氧化苦参碱组;氧化苦参碱组小鼠腹腔注射OMT,150 mg/kg,给药7 d,假手术组和模型组小鼠腹腔注射生理盐水;Von Frey纤毛笔检测各组小鼠的机械缩足反射阈值;计算坐骨神经功能指数并测定其传导速度观测坐骨神经功能恢复情况;qRT-PCR法检测各组小鼠坐骨神经IL-1βmRNA、IL-6 mRNA和TNF-αmRNA的表达;ELISA法检测各组小鼠坐骨神经IL-1β、IL-6和TNF-α炎性因子的含量。结果:氧化苦参碱组小鼠机械缩足反射阈值、坐骨神经功能指数及其传导速度均明显高于模型组;氧化苦参碱组小鼠坐骨神经IL-1βmRNA、IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达及蛋白含量均显著低于模型组。结论:氧化苦参碱对慢性坐骨神经结扎小鼠坐骨神经的功能损伤有一定的修护作用,其作用机制可能为减轻炎症反应所致坐骨神经损伤。     

枸杞多糖预处理对小鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的:观察枸杞多糖预处理对小鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:雄性ICR小鼠随机分6组:假手术组、模型组、尼莫地平(4 mg/kg)组及枸杞多糖10、20、40 mg/kg组。各组小鼠预防性灌胃给药7 d,除假手术组外各组小鼠采用线栓法制造左侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血2 h再灌注24 h后,对小鼠进行神经功能缺陷评分,制作脑组织石蜡切片进行HE染色观察各组小鼠脑细胞损伤程度,用Tunel染色观察小鼠缺血侧脑组织神经细胞凋亡程度。采用分光光度法检测各组小鼠脑组织Caspase-3蛋白活性,用Western blot法检测小鼠脑组织内BAX和BCL-2蛋白的表达。结果:与模型组比较,枸杞多糖各剂量组小鼠脑缺血后神经功能缺陷评分显著降低(P0.01),神经细胞的损伤得到不同程度的改善,大脑神经元凋亡率显著降低(P0.05),脑组织Caspase-3活性及BAX蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01),BCL-2蛋白表达显著升高(P0.01)。结论:枸杞多糖对小鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤具有良好的保护作用,其机制可能与抑制脑组织的异常凋亡有关。     

甘草对芫花抗小鼠肝癌腹水作用的影响

目的:观察不同配比甘草-芫花煎剂对肝癌腹水模型小鼠的干预影响,并探讨其作用机制。方法:取昆明种雄性小鼠135只,随机分为正常组、模型组、芫花单煎组、芫花-甘草(1∶0.25,1∶0.5,1∶1,1∶2,1∶4)组和甘草单煎组。除正常组外,其他组小鼠腹腔均接种肝癌腹水瘤细胞系H22,并分别灌胃给药,正常组和模型组给予等容积生理盐水。12 d后分别测量各组小鼠的腹水量、腹围和体重及肝肾指数,蛋白质免疫印迹(Western blot)法测定肾脏组织中水通道蛋白2(AQP2)和肾加压素受体(V2R)的蛋白表达,生化法测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),尿素氮(BUN)和尿肌酐(Cr)的水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠的腹水量、腹围、体重、肝指数及血清中ALT,AST,BUN,Cr水平均显著升高(P0.01),肾指数显著降低(P0.01),AQP2,V2R蛋白的表达显著升高(P0.01)。与模型组比较,芫花单煎组和芫花-甘草1∶0.5,1∶1和1∶2组均能显著降低小鼠的腹水量和体重(P0.05,P0.01);芫花单煎组和芫花-甘草1∶1组同时能显著降低小鼠的腹围(P0.05,P0.01),降低AQP2,V2R蛋白的表达(P0.05,P0.01)。与芫花单煎组比较,芫花-甘草1∶1组能显著降低小鼠的腹水量、腹围和体重(P0.05,P0.01),降低AQP2,V2R的表达(P0.05),芫花-甘草1∶4组则使其显著升高(P0.05,P0.01)。结论:不同比例甘草的配伍能增强或抵消芫花抗小鼠肝癌腹水的作用,且相关变化可能与其有效调节了肾组织内的AQP2和V2R蛋白表达有关。     

氧化苦参碱对高电压依赖性钙通道辅助亚基的影响

目的:通过观察氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对神经病理性疼痛小鼠的脑、脊髓、背根神经结(DRG)的高电压依赖性钙通道(high voltage-dependent calcium channels,HVDCCs)辅助亚基mRNA表达量的影响,探讨氧化苦参碱的镇痛作用相关机制。方法:将15只C57BL/6小鼠随机分成假手术组、模型组、氧化苦参碱组,每组5只,通过部分结扎小鼠左右两侧后腿坐骨神经建立神经病理性疼痛模型,应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测脑、脊髓、背根神经节(DRG)3个组织中高电压依赖性钙通道多种辅助亚基mRNA表达情况。结果:在脑组织中,模型组小鼠辅助亚基α2δ1、α2δ2的mRNA水平明显升高,α2δ3、α2δ4的mRNA水平明显降低。与模型组比较,氧化苦参碱组中α2δ1、α2δ2及γ1的mRNA水平明显著降低,α2δ4的mRNA水平明显升高。在脊髓组织中,模型组小鼠的α2δ1、α2δ2、α2δ3、γ1及γ4的mRNA水平均明显升高;氧化苦参碱(150mg/kg)处理使得其中模型组升高的α2δ1、α2δ2、α2δ3的mRNA水平显著降低。在DRG组织中,模型组小鼠α2δ1的mRNA水平明显升高,α2δ2、α2δ3的mRNA水平明显降低;氧化苦参碱(150mg/kg)处理使得其中模型组升高的α2δ1的mRNA水平明显降低。α2δ4、γ3在DRG组织中未见表达。各组织中,部分坐骨神经结扎及氧化苦参碱给药对其余β、γ等亚基的mRNA表达水平变化影响无统计学意义。结论:氧化苦参碱的镇痛作用与高电压依赖性钙通道辅助亚基α2δ1有高度相关性。     

电针对SAMP8小鼠学习记忆与海马神经元NMDA受体表达的影响

目的观察电针"百会""大椎""肾俞"对SAMP8小鼠学习记忆与海马神经元NMDA受体NR2A和NR2B表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的机制。方法 6月龄SAMP8小鼠24只,随机分为模型组和电针组,同龄正常老化SAMR1小鼠12只为对照组。电针组电针"百会""大椎""肾俞"30d。Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,免疫组化染色和Western blot检测海马神经元NR2A和NR2B的表达。结果与对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长(P0.01),原平台象限停留时间明显缩短(P0.01),跨越原平台次数明显减少(P0.01),海马神经元NR2A相对表达量明显升高(P0.01),NR2B相对表达量明显下降(P0.01);与模型组比较,电针组小鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.05),原平台象限停留时间明显延长(P0.01),跨越原平台次数明显增加(P0.05),海马神经元NR2A相对表达量明显下降(P0.05),NR2B相对表达量明显升高(P0.01)。结论电针能改善SAMP8小鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与电针抑制海马神经元NMDA受体NR2A的表达和促进NMDA受体NR2B的表达有关。     

通心络胶囊对糖尿病周围神经病变KK/Upj-Ay小鼠血管生成的影响

目的观察通心络胶囊对糖尿病周围神经病变KK/Upj-Ay小鼠血管生成的影响。方法 KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组、通心络高剂量组、通心络中剂量组和通心络低剂量组,另设C57BL/6小鼠为对照组。灌胃给药12周,测定热痛觉阈值和运动神经传导速度(MNCV);放免法测定血液中内皮素(ET)、血栓素A2(TXA2)和前列环素(PGI2)含有量;Real Time PCR(q PCR)和Western blot法测定坐骨神经造血祖细胞抗原(CD34)、血管性血友病因子(VWF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达。结果与对照组比较,模型组热痛觉阈值明显降低,MNCV明显减慢(P0.01);ET和TXA2含有量显著升高(P0.01);小鼠坐骨神经CD34、VWF、VEGF m RNA和蛋白表达显著降低(P0.01)。与模型组比较,通心络组小鼠痛觉阈值升高,MNCV明显增快(P0.05,P0.01);ET和TXA2含有量明显降低,PGI2含有量上升(P0.05,P0.01);CD34、VWF、VEGF m RNA和蛋白表达显著升高(P0.05,P0.01)。结论通心络胶囊可调节血管活性因子、升高CD34、VWF、VEGF表达,改善糖尿病周围神经病变。     

电针对心肌缺血小鼠心肌组织交感神经相关物质的影响

目的:观察电针对心肌缺血模型小鼠心肌组织交感神经相关物质的影响,探讨其作用机制。方法:将30只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组10只。模型组和电针组采用冠状动脉左前降支结扎法建立心肌缺血模型。假手术组不进行冠状动脉左前降支结扎,其余步骤同模型组。电针组电针"内关"穴,疏密波,频率2 Hz/100 Hz,电流强度2 mA,每天1次,每次20 min,共治疗5 d;假手术组和模型组仅抓取、固定,不予电针治疗。记录Ⅱ导联心电图并计算△ST值进行模型评价;采用TTC染色评价小鼠心肌梗死面积;免疫组化评价小鼠心肌组织阳性神经纤维密度;Western blot检测小鼠心肌组织神经调节蛋白-1(NRG-1)、酪氨酸羟化酶(TH)、生长相关蛋白-43(GAP-43)的蛋白表达水平。结果:Ⅱ导联心电图显示,与假手术组相比,模型组和电针组S-T段显著抬高(均P0.01),提示缺血模型成功建立;TTC染色结果显示,与假手术组相比,模型组心肌梗死面积显著增加(P0.01),与模型组相比,电针组心肌梗死面积显著减小(P0.01);免疫组化结果显示,与假手术组相比,模型组小鼠心肌TH阳性神经纤维密度显著增加(P0.01),与模型组相比,电针组心肌组织TH阳性神经纤维密度显著减小(P0.05);Western blot结果显示,与假手术组相比,模型组TH、NRG-1、GAP-43的蛋白表达水平显著升高(均P0.01),与模型组相比,电针组心肌组织中TH、GAP-43蛋白表达显著降低(均P0.01),NRG-1蛋白表达显著升高(P0.05)。结论:电针可能通过增加心肌缺血小鼠心肌组织中NRG-1蛋白表达水平,降低TH、GAP-43蛋白表达水平,抑制梗死后交感神经过度兴奋,实现心肌保护效应。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨大补元煎促进APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠海马神经发生的作用机制

目的:通过研究大补元煎对淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)小鼠海马Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的作用,探讨大补元煎促进神经发生的可能机制。方法:5月龄APP/PS1小鼠30只和野生鼠10只,分为正常组、模型组、奈哌齐组(6.5×10~(-4)g·kg~(-1)·d~(-1))和大补元煎组(13.2 g·kg~(-1)·d~(-1)),灌胃30 d,正常组和模型组给予等体积生理盐水。应用水迷宫评价小鼠学习记忆力;应用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠海马神经元病理形态变化;应用免疫组化(IHC)检测5-溴脱氧尿苷(Brdu),肾上腺皮质激素(Dcx)和神经元核抗原(Neu N)的阳性细胞数;应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马中β-catenin,糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠平台潜伏期和游泳总路程显著升高(P0.01),而穿越平台次数和目标象限时间显著降低(P0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠平台潜伏期和游泳总路程降低(P0.05,P0.01),而穿越平台次数和目标象限时间升高(P0.05)。与正常组比较,模型组小鼠海马齿状回(DG)区神经元层次和数量减少,可见明显坏死的神经元;与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠海马DG区神经元层次和数量增多,坏死神经元数量减少。与正常组比较,模型组小鼠海马DG区Brdu,Dcx和Neu N标记的阳性细胞数明显降低(P0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠海马DG区Brdu,Dcx和Neu N标记的阳性细胞数增加(P0.05,P0.01)。与正常组比较,模型组小鼠海马中β-catenin mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.01),而GSK-3β的基因和蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠海马β-catenin mRNA和蛋白表达水平升高(P0.05,P0.01),而GSK-3βmRNA和蛋白表达水平下降(P0.05,P0.01)。结论:大补元煎通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生。     

电针内关对心肌缺血大鼠电压门控钾离子通道蛋白的影响

目的研究电针内关穴对心肌缺血大鼠心肌细胞电压门控钾离子通道相关蛋白表达的影响,比较循经取穴与其他取穴方法的差异。方法健康雄性SD大鼠(SPF级)随机分成对照组、模型组、内关组、列缺组、非经非穴组,通过注射盐酸异丙肾上腺素制作动物模型,Western blot检测Kv1.4、Kv4.2、Kv4.3、KCh IP2、Kir2.1、Kir2.2六个指标,观察电针前后各组大鼠心肌细胞电压门控钾离子通道相关蛋白表达量的变化情况。结果与模型组比较,内关组和列缺组蛋白表达量均升高(P0.05),非经非穴组与模型组之间差异无统计学意义(P0.05),内关组的蛋白表达量高于列缺组,但低于对照组(P0.05)。结论电针内关穴和列缺穴均可以提高心肌缺血大鼠心肌细胞电压门控钾离子通道相关蛋白的表达量,且心包经内关穴的针刺效应优于列缺穴。     

益气活血药对心肌梗死大鼠心脏蛋白激酶C表达的影响

目的探讨益气活血中药(生脉注射液联合血塞通注射液)对心肌梗死大鼠心脏蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)表达的影响。方法 SD大鼠随机分为模型组、假手术组、卡托普利组和益气活血组。结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型(假手术组只穿线,不结扎)。模型组和假手术组给予生理盐水;卡托普利组给予卡托普利片4.39 mg/(kg·d)溶解灌胃;益气活血组给予生脉注射液3.51 m L/(kg·d)联合血塞通注射液17.54 mg/(kg·d)腹腔注射。治疗4周后取材,称重计算心脏质量指数;RT-PCR法检测左心室心肌组织PKC mRNA的表达;Western blot法检测PKC蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组心脏质量指数显著增加(P0.01),PKC的mRNA和蛋白表达亦显著增加(P0.05或P0.01);与模型组比较,益气活血组和卡托普利组心脏质量指数显著降低(P0.05),同时PKC的mRNA和蛋白表达也显著降低(P0.05或P0.01)。结论益气活血药(生脉注射液联合血塞通注射液)可以改善心脏重构,其机制与抑制心肌梗死后心肌组织PKC的高表达有关。     

补阳还五汤对Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中的作用

目的探讨Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖中的作用及补阳还五汤促神经再生的机制。方法采用大脑中动脉阻塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制小鼠脑缺血模型,将野生型(wild type,WT)和小凹蛋白-1基因敲除小鼠(caveolin1 gene knockout,Cav1 KO)分别随机分为假手术组、模型组、补阳组,每组12只,腹腔注射Brd U标记增殖细胞,干预7 d后,采用免疫荧光Brd U/Nestin双标法检测小鼠缺血侧海马NSCs增殖情况,Western blot法检测Notch1、NICD、Hes1蛋白表达,Real time PCR法检测Notch1、Hes1m RNA表达。结果 MCAO法成功复制了小鼠脑缺血模型;WT模型组、补阳组和KO模型组、补阳组缺血侧海马Brd U/Nestin双标阳性细胞,Notch1、NICD、Hes1蛋白表达及Notch1、Hes1m RNA表达均增加,与相应假手术组比较,差异有统计学意义(P0.01,P0.05),同时,WT模型组要高于KO模型组(P0.05),WT补阳组要高于WT模型组和KO补阳组(P0.01,P0.05)。结论Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中发挥重要调控作用;通过上调Cav1/Notch1/Hes1通路活性是补阳还五汤促进缺血海马神经再生作用机理之一。     

养阴润肠方对便秘小鼠结肠水通道蛋白3/9的影响

目的:探讨养阴润肠方对便秘小鼠结肠水通道蛋白3(AQP3)和水通道蛋白9(AQP9)表达的影响。方法:50只雄性ICR小鼠随机分为正常组,模型组,养阴润肠方低、高剂量组,普卢卡必利组,每组10只,采用复方地芬诺酯20 mg·kg~(-1)连续灌胃15 d建立便秘模型,每周计算粪便含水量,用养阴润肠方低、高剂量组(29.6,59.2 g·kg-1)干预15 d,取材结肠组织,进行免疫组化AQP3和AQP9定位和半定量表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测AQP3和AQP9基因和蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组粪便含水量明显下降(P0.01),AQP3表达增加(P0.01),AQP3的mRNA和蛋白表达均增加(P0.05),AQP9表达减少,AQP9的mRNA和蛋白表达亦均下降,但无统计学差异;与模型组比较,养阴润肠方低、高剂量组粪便含水量均增加(P0.05),AQP3表达下降(P0.05),AQP3的mRNA和蛋白表达均下降(P0.05);养阴润肠方低剂量组的AQP9表达增加(P0.01),AQP9的mRNA和蛋白表达均升高(P0.05),高剂量组表达有升高趋势,但无统计学差异。结论:养阴润肠方可以增加便秘小鼠粪便含水量,其机制可能与降低结肠组织中AQP3和增加AQP9的表达有关,并且大剂量作用反而不明显。     

氧化苦参碱通过免疫调节保护刀豆蛋白A诱导的小鼠免疫性肝损伤

目的:本文旨在研究氧化苦参碱(OMT)对刀豆蛋白A(Con A)所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法:Balb/C小鼠随机分为5组,分别为正常组,模型组,氧化苦参碱低、高剂量(60,120 mg·kg-1)组和双环醇(156 mg·kg-1)阳性药组。连续给药5 d,末次给药30 min后,除正常组外,其余各组均尾静脉注射Con A(15 mg·kg-1)建立肝损伤模型。造模8 h后,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL)的表达。采用Luminex多因子检测的方法,检测血清干扰素-γ(IFN-γ),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-4(IL-4),IL-6,IL-10,IL-27表达,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变。流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞CD4+IL-17A的表达,CD4+CD25+Fox P3+调节性T细胞(Treg)亚群的比例。结果:与正常组比较,Con A模型组ALT,AST,TBIL表达明显增高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,双环醇和OMT低高剂量组均可明显降低ALT活性(P0.05,P0.01)。OMT高剂量可明显抑制AST表达(P0.05),OMT低高剂量均可抑制TBIL表达(P0.05),其余各组无统计学差异。各给药组均能不同程度缓解肝脏病理改变,减少炎性细胞浸润。OMT高剂量组血清IL-10,IL-27水平与模型组比较显着升高(P0.05)。流式细胞术检测结果显示,OMT高剂量组可明显降低CD4+IL-17A表达(P0.05),上调CD4+CD25+Fox P3+Treg比例(P0.05)。结论:OMT对Con A诱导小鼠免疫性肝损伤具有较好的保护作用,抑制CD4+IL-17A的表达,上调CD4+CD25+Fox P3+Treg比例可能是其主要的作用机制。     

川芎、白芍及配伍对痛经小鼠子宫组织中一氧化氮和钙离子的影响

目的 探讨川芎、白芍及川芎-白芍配伍治疗原发性痛经的作用机理.方法 利用原发性痛经模型小鼠,观察药物对小鼠40 min内扭体次数、扭体发生率的影响;测定小鼠子宫组织中一氧化氮(nitric oxide,NO)和钙离子的含量.结果 与模型组比较,各给药组均可降低小鼠扭体次数(P<0.05或P<0.05),作用强度依次为白芍组>川芎组>川芎-白芍组;升高子宫组织中NO水平(P <0.05或P<0.01),作用强度依次为川芎组>白芍组>川芎-白芍组;显著降低子宫组织中钙离子水平(P<0.01),作用强度依次为白芍组>川芎组>川芎-白芍组.结论 川芎、白芍及川芎-白芍药对对缩宫素所致痛经小鼠扭体有显著抑制作用,可升高子宫组织中NO水平,降低钙离子水平.这些作用可能与其治疗原发性痛经的部分机制有关.     

疏肝健脾方对小鼠脊髓背跟神经元TRPV1电流通道及p-TRPV1、SP、CGRP受体表达的影响

目的探讨疏肝健脾方对小鼠脊髓背跟神经元香草酸受体亚型1(the transient receptor potential vanilloiol type 1,TRPV1)电流通道及p-TRPV1、物质P(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)受体表达的影响。方法参照血清药理学方法,正常组及疏肝健脾方低、中、高剂量组含药血清;分离并原代培养C57小鼠脊神经后角神经节(Dorsal root ganglion,DRG)细胞,通过免疫荧光法进行细胞鉴定,DRG细胞经辣椒素(Capsaicin,CAP)干预后分组(即低、中、高剂量组)予含药血清干预,利用全细胞膜片钳技术记录的DRG细胞TRPV1通道电流;采用RT-PCR及Western-blot检测小鼠DRG神经元中p-TRPV1、SP、CGRP表达变化。结果经细胞鉴定,证实成功分离小鼠DRG细胞;DRG细胞形态呈圆形,胞体较小,突起较长;结肠平滑肌细胞形态细胞形状椭圆形,束状排列,密集与稀疏处相互交错呈"峰谷"状。疏肝健脾方无法直接激活DRG神经元中的p-TRPV1通道,却可正向调控辣椒素激动的p-TRPV1电流;低、中、高剂量组DRG细胞内p-TRPV1、CGRP的mRNA及蛋白表达量随药物浓度增高逐步下降(P<0.05),SP表达mRNA及蛋白表达量随药物浓度增高逐步上升(P<0.05)。结论疏肝健脾方可通过下调p-TRPV1表达,从而抑制CGRP的表达,上调SP表达,发挥防治肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS)的效用。     

乌头汤改善下行抑制系统损伤以缓解神经病理性疼痛的作用机制

目的:明确乌头汤(Wutoutang,WTT)对神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)小鼠的镇痛药效,并探索其对下行抑制系统的影响机制。方法:ICR小鼠随机分为假手术组,模型组,普瑞巴林(pregabalin,PGB)组,WTT高(WTT-H),中(WTT-M),低(WTT-L)剂量组。除假手术组只剥离但不结扎外,其余各组均对L5脊神经进行结扎,随后分别以生理盐水,12.60,6.30,3.15 g·kg-1WTT及0.025 g·kg-1PGB对各组小鼠进行灌胃,持续21 d。采用Von Frey法检测WTT的镇痛药效;酶联免疫吸附法(ELISA)检测下行抑制系统关键脑区前扣带回皮质(anterior cingulate cortex,ACC)及延髓头端腹内侧核(rostral ventromedial medulla,RVM)中的脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)和5-羟色胺(5-hydroxytryptarnjne,5-HT)的蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylatedextracellular signal-regulated kinase,p-ERK)和突触后致密蛋白-95(postsynaptic density protein-95,PSD-95)的蛋白表达量。结果:给药第21天,与假手术组比较,模型组小鼠机械痛敏阈值明显降低(P0.01),且其RVM和ACC核团内5-HT和BDNF的表达水平也明显下降(P0.05),而p-ERK和PSD-95蛋白表达却明显升高(P0.05);与模型组比较,WTT组小鼠机械痛敏阈值显著回升(P0.01),5-HT和BDNF表达量明显提高(P0.05),同时p-ERK和PSD-95蛋白表达有所抑制。结论:WTT能缓解小鼠NP,且可能是通过调节下行抑制系统中RVM和ACC内5-HT,BDNF,p-ERK和PSD-95的蛋白表达水平而发挥作用。     

二苯乙烯苷调控CREB/BDNF信号通路对Aβ25-35损伤的小鼠神经元突触的保护作用

目的:研究中药何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)损伤的小鼠海马神经元的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:小鼠海马神经元细胞分离自新生48 h内胎鼠大脑海马,培养9 d待神经元成熟后,采用免疫荧光法对其进行鉴定。将培养成熟的神经元细胞分为正常组、模型组(Aβ25-35孵育造模)和TSG组(Aβ25-35孵育造模后,分别加入TSG 6.25,12.5,25,50,100μmol·L~(-1))。细胞增殖毒性检测(CCK-8)试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH)法检测各组细胞活性,免疫荧光法检测突触素-1(SYN-1)蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测突触后膜致密蛋白-95(PSD-95)和突触体素(SYP)的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA的表达,免疫荧光法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CREB,磷酸化CREB(p-CREB)和BDNF蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低,LDH释放量显著增高(P0.01),SYN-1,PSD-95和SYP的含量明显降低(P0.05,P0.01),p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达明显下调(P0.05,P0.01);与模型组比较,不同浓度TSG均可提高细胞存活率,降低LDH释放量(P0.05,P0.01),TSG对Aβ25-35造模的小鼠海马神经元细胞的最适治疗浓度为25μmol·L~(-1); 25μmol·L~(-1)TSG能够显著增强SYN-1的表达量(P0.01),明显提高PSD-95和SYP的含量(P0.05);上调p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达(P0.05,P0.01),但对CREB mRNA及蛋白的表达无显著影响。结论:TSG对Aβ25-35损伤的小鼠海马神经元突触具有保护作用,其机制可能与促进CREB的磷酸化使p-CREB表达增多,并促进神经营养因子BDNF的释放有关。