人胶质瘤干细胞内在自我更新能力

目的 了解胶质瘤干细胞内在的自我更新和增殖能力。方法 观察原代胶质瘤细胞在单纯改良Eagle/F12培养液（DMEM/F12）中胶质瘤干细胞球的形成,并检测其CD133、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、微管相关蛋白（MAP2）、髓磷脂碱性蛋白（MBP）的表达。通过二代球体形成、细胞增殖测定、分化实验分析其自我更新、增殖、多能分化能力。通过裸鼠移植瘤实验观察所分离细胞球细胞与原代培养胶质瘤细胞成瘤能力的差异。结果 在单纯DMEM/F12培养液中形成的胶质瘤细胞球细胞表达神经干细胞标记CD133,不表达分化标志GFAP、MAP2,少数细胞表达MBP。分离出的胶质瘤细胞球细胞可在单纯DMEM/F12培养基中增殖,并能形成CD133阳性的二代细胞球,可分化为GFAP、MAP2、MBP阳性表达的肿瘤细胞。裸鼠成瘤实验显示其成瘤能力显著高于原代胶质瘤细胞。结论 胶质瘤干细胞能在无血清、无外源性细胞因子培养基中形成肿瘤干细胞球,胶质瘤干细胞的自我更新和增殖不依赖于外源性生长因子,它可能拥有自我更新的自身活化机制。     

地塞米松对嘧啶亚硝脲诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的观察地塞米松（DEX）对嘧啶亚硝脲（ACNU）诱导的人脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法分别以ACNU、DEX、ACNU联合DEX,作用于体外培养的人脑胶质瘤细胞系SHG—4460h,通过细胞形态学及流式细胞仪分析检测细胞凋亡。结果①形态学观察：ACNU组、ACNU联合DEX组,大部分瘤细胞呈现细胞凋亡的形态学改变。而DEX组及正常对照组仅个别细胞出现上述形态改变。②荧光显微镜观察及流式细胞仪分析：ACNU组、ACNU联合DEX组有典型的凋亡峰,且其瘤细胞的凋亡率明显高于DEX组及正常对照组瘤细胞的凋亡率（P〈0．01）,但ACNU组的SHG～44细胞的凋亡率与ACNU联合DEX组相差不显著（P〉0．05）。结论DEX对ACNU诱导人脑胶质瘤细胞凋亡没有明显影响。     

脑胶质瘤化疗敏感性实验研究

目的探讨脑胶质瘤细胞体外对化疗药物的敏感性，为临床有效治疗胶质瘤提供实验依据。方法采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测50例原代培养胶质瘤细胞在体外对替尼泊甙（VM-26）、卡氮芥（BCNU）、顺铂（CDDP）、长春新碱（VCR）、甲氨蝶呤（MTX）5种化疗药物单一或联合化疗的敏感性。结果42例获得药敏结果，成功率达84％。42例胶质瘤细胞对单一化疗药物的敏感性从高到低依次为VM-26〉BCNU〉CDDP〉VCR〉MTX。两种联合化疗方案（BCNU＋VM-26＋CDDP）和（BCNU＋VCR＋MTX）对胶质瘤细胞的敏感性明显优于单一用药（P〈0．01），且对绝大多数胶质瘤细胞增殖抑制率较高。结论两种联合化疗方案（BCNU＋VM-26＋CDDP）和（BCNU＋VCR＋MTX）可能对胶质瘤的化疗效果更好。     

免疫磁珠法分离、培养人脑胶质瘤干细胞

目的建立免疫磁珠法分离，并培养人脑胶质瘤干细胞的方法。方法将术中取得的脑胶质瘤标本，通过剪切、消化和吹打成单细胞悬液，筛网过滤，免疫磁珠分选试剂盒分选出CD133^＋细胞，用神经干细胞无血清培养法培养出具有单细胞克隆能力的细胞球，取第3代进行诱导分化，分化前后用免疫细胞荧光化学方法鉴定肿瘤干细胞及分化后细胞。结果免疫磁珠分选出的CD133^＋细胞，可悬浮生长并形成神经干细胞样细胞球，有较强的增殖能力，干细胞标志物巢蛋白（nestin）阳性，分化后细胞表达神经元小管相关蛋白β-3（β-tubulin3）和星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白质（GFAP）特异性抗原，而巢蛋白、CD133^＋阴性，并具有肿瘤的核型。结论免疫磁珠分选法可避免原代培养中众多细胞混杂生长的发生，能够从大量肿瘤细胞中分离出只占极少比例的肿瘤干细胞，细胞结合磁珠后在体外可以长期培养和传代，进一步证实了肿瘤干细胞的存在，并为胶质瘤干细胞的研究奠定基础。     

雌二醇对6-羟基多巴胺诱导PD模型SIRT1表达的影响

目的 探讨雌二醇(E2)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞帕金森病(PD)模型中沉默信息调节因子1 (SIRT1)表达及PD大鼠外周血及脑组织SIRT1的影响。方法(1)将6-OHDA作用的嗜络细胞瘤细胞(PC12),给予不同浓度的E2进行干预,根据E2干预浓度的的不同进行分组:PD模型组、E2低剂量组(E2 1×10^-8mol·L^-1)、E2中剂量组(E2 1×10^-7mol·L^-1)、E2高剂量(E21×10^-6mol·L-1),正常细胞作为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡率,免疫细胞化学法检测络氨酸羟化酶(TH)和SIRT1表达;(2)采用6-OHDA诱导并制备PD大鼠模型,将PD大鼠分为PD模型组、E2低剂量组(25μg·kg^-1)、E2中剂量组(50μg·kg^-1)和E2高剂量组(100μg·kg^-1),将健康大鼠作为对照组,10只/组。对照组...     

脑胶质瘤体外化疗药物敏感性试验与耐药基因蛋白表达的相关性研究

目的研究脑胶质瘤耐药相关基因蛋白的表达情况,分析其与化疗药物体外敏感性之间的相关性。方法采用组织培养药敏检测法测定50例脑胶质瘤标本对五种不同类型化疗药物：顺铂（cisplatin,DDP）、长春新碱（vincristine,VCR）、替尼泊甙（teniposide,VM26）、尼莫司汀（nimustine,ACNU）和替莫唑胺（temozolomide,TMZ）的体外敏感性（通过计算体外抑制率）;同时在组织芯片平台上,运用免疫组织化学法检测耐药相关蛋白O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）、P-170、TopoⅡ、谷胱苷肽-S-转移酶霄（GST-百）的表达,并用免疫组织化学法和原位杂交法检测P53蛋白及p53基因的表达。结果（1）ACNU体外抑制率与GST-盯表达水平之间呈显著性负相关r=-0．318,P〈0．05）。②耐药相关蛋白GST-π与P-170、TopoⅡ表达水平之间呈显著性相关（r分别为0.317和～0．298,P〈0．05）。③突变型P53蛋白与野生型p53mRNA之间呈显著性负相关（r=-0．806,P〈0．001）。④突变型P53蛋白与TopoⅡ表达水平之间呈显著性相关（r=0．401,P〈0．01）。结论肿瘤体外药敏试验结合耐药相关基因蛋白的检测。对于胶质瘤个体化化疗方案的制定及临床化疗疗效的预测等具有重要意义。     

低氧环境对胶质瘤细胞增殖的影响

目的探究低氧环境对胶质瘤细胞增殖能力的影响并进一步验证可能参与细胞增殖调节的信号通路。方法设计5%氧气含量条件下培养U87细胞为实验组,21%氧气含量条件培养U87细胞为对照组,以CCK-8(Cell Counting Kit,CCK8)试剂盒检测增殖活力,极限稀释法检测自我更新能力及单克隆能力,PCR实验及Western Blot实验检测中相关m RNA和蛋白表达。结果实验组胶质瘤细胞较对照组明显增殖,自我更新能力及单克隆能力增强,β-连环蛋白(β-catenin)、C-myc原癌基因(C-myc)的m RNA及蛋白表达量上调,而糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)m RNA及蛋白表达量下调。结论低氧微环境能通过激活经典Wnt信号通路(canonical Wnt/β-catenin pathway)上调Wnt通路增殖相关蛋白如C-myc,促进U87系胶质瘤细胞增殖。     

新生大鼠海马区及室管膜下区神经干细胞分离、培养和分化特性

目的建立大鼠神经干细胞（NSCs）分离、培养方法，观察其生长、增殖和分化特点。方法利用无血清培养技术，从新生大鼠海马、室管膜下区分离NSCs，进行体外扩增培养、传代观察。采用荧光免疫细胞化学检测技术，观察鉴定NSCs及其分化结果。结果分离获取的细胞具有自我更新和增殖能力，原代及传代培养均可形成细胞克隆，克隆中的细胞巢蛋白（nestin）表达阳性，显微镜下观察见典型的干细胞特征，诱导后可分化神经元和星形胶质细胞。结论上法分离培养的细胞为具有自我更新和增殖能力的NSCs，可诱导分化为终末神经细胞。     

液压性脑损伤后室下区神经干细胞的分离培养与鉴定

目的分离液压性脑损伤室下区巢蛋白（nestin）和胶质酸性纤维蛋白（GFAP）阳性（nestin^＋／GFAP^＋）共存细胞进行培养和诱导分化，观察其分裂、增殖和分化能力，以阐明损伤反应性星形胶质细胞增生过程中nestin^＋／GFAP^＋共存细胞是否具有神经干细胞特性。方法用液压冲击法建立动物模型，分离损伤成年SD大鼠室下区nestin^＋／GFAP^＋共存细胞，制成单细胞悬液，培养和诱导分化，以免疫荧光化学方法对原代和传代培养形成的神经球以及原代和传代培养诱导分化的细胞进行鉴定。结果结果显示培养及传代的细胞不断分裂增殖，可以形成悬浮生长nestin阳性的神经球；神经球诱导分化后可以分化为少突胶质细胞、神经元和星形胶质细胞。结论成年大鼠液压性脑损伤后分离的室下区细胞具有自我更新能力和多向分化潜能，是中枢神经系统神经干细胞。     

白细胞介素-6与脑胶质瘤关系的研究

目的:通过观察人脑胶质瘤细胞是否可以自发分泌白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),为进一步探讨IL-6在脑胶质瘤发生、发展中的可能作用提供线索。方法:对4例脑胶质瘤病人的手术标本进行原代细胞培养,分不同时相收获上清,并对其上清进行IL-6活性检测。结果:各组上清中均有IL-6活性,IL-6生物活性以D_(0～6)上清活性最高(1.131U/L),D_(0～6)上清活性最低(0.18U/L)。人脑胶质瘤细胞受细菌脂多糖刺激后,分泌IL-6的能力略有增强。IL-6单克隆抗体可中和脑胶质瘤上清对B9.9细胞的增殖作用。结论:原代培养的人脑胶质瘤细胞可自发分泌IL-6。     

The primary wave of epinephrine-induced platelet aggregation represents alpha 2-adrenoceptor status

We examined relationships between epinephrine-induced slope of primary wave of aggregation and the alpha₂-adrenoceptor status on platelets. A concentration (10^-9 to 10^-6 )-dependent increase in slope of primary wave with EC50 of epinephrine at 4.5 ± 0.4 × 10^-7 was observed. In studies on epinephrine binding to alpha₂adrenoceptors in competition with ³H-yohimbine to platelets, (IC₅₀) of epinephrine was 4.8 ± 3.4 x 10^-7 M. There was a significant (P<0.02) correlation between EC₅₀ of epinephrine to evoke biological response and IC₅₀ of epinephrine to bind to alpha₂-adrenoceptors (r-0.75). There was no relationship between number of receptor sites or dissociation constant of ³H-yohimbine binding and primary wave of platelet aggregation. These data show that the slope of primary wave in response to epinephrine reflects alpha₂-adrenoceptor binding of the agonist.     

雄激素受体抑制剂通过AR信号通路对胶质瘤生物学特性的影响

目的研究雄激素受体(androgen receptor,AR)抑制剂(flutamide)对人胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法采用不同浓度的flutamide(低浓度1.0×10~(-8)、中浓度1.0×10~(-7)、高浓度1.0×10~(-6)mol/L)作用于胶质瘤细胞系U251,Real Time-PCR和Western Blot检测AR m RNA及AR蛋白的表达情况;Cell Counting Kit-8法测定flutamide对胶质瘤细胞增殖的影响;Annexin V-7AAD/PE双染检测flutamide诱导胶质瘤细胞凋亡的作用;Transwell测定flutamide对胶质瘤细胞侵袭能力的改变。结果在体外胶质瘤细胞的增殖、侵袭能力能被AR抑制剂(flutamide)显著抑制且凋亡增加,与药物浓度正相关。结论 AR抑制剂(flutamide)能明显抑制胶质瘤细胞的增殖与侵袭,并且诱导细胞凋亡,AR可能是引起胶质瘤发生、发展的危险因素。     

Poly-d-lysine dependent inactivation of tissue plasminogen activator by a class pai-2 inhibitor (minactivin)

Two-chain tissue plasminogen activator (t-PA) was found to be inactive in a coupled colorimetric assay for plasminogen activators, but a high level of activity was obtained in the presence of poly-D-lysine. This stimulated activity was strongly inhibited by minactivin, a urokinase inhibitor, but unstimulated enzyme could be shown to be unaffected by minactivin. In the presence of poly-D-lysine minactivin was a very successful competitive inhibitor of t-PA with respect to the substrate, plasminogen. The K_i for minactivin determined by the Henderson method was 2.5 × 10^-12 M, compared to the K_m for plasminogen determined as 0.6 × 10^-6 M. The value of K_i for minactivin with u-PA, determined under the same conditions, was 1.6 × 10^-11 M.     

Poly-lysines as modifiers of one- and two-chain tissue-type plasminogen activator activity

Poly-L-lysine and certain mixed polymers of L-lysine and other amino acids modify the activity of one- and two-chain tissue-type plasminogen activator (t-PA) towards its substrates. In particular the rate of plasminogen activation in the presence of optimal poly-L-lysine concentrations, is increased by approximately 100-fold. In contrast, activity towards a small synthetic substrate is inhibited by 85%. These effects are observed with both the one- and two-chain forms of t-PA. The use of poly-L-lysines in a coupled assay system optimised for t-PA and plasmin activities allfys the reproducible assay of t-PA at the 10^-12 to 10^-13 molar level.     

Octopamine reduces potassium permeability of the glia that form the insect blood-brain barrier

Octopamine caused only a slight reduction in the potential across the perineurial glia of the cockroach, had no effect upon sodium-induced changes in potential, but did reduce potassium-induced changes (at 10^-7M and above). The effect of 10^-7 M octapamine was accompanied by a rise in resistance, was mimicked by 10^-7 M synephrine and blocked by 10^-6 M phentolamine. Transperineurial potassium permeability was reduced by 10^-6 M octopamine. It is concluded that octopamine receptors mediate a reduction in potassium conductance of the basolateral membrane of these glia, and a reduction in the net potassium permeability of the barrier.     

肝豆状核变性合并中央髓鞘溶解症的临床和影像学特点(附2例报告)

目的探讨肝豆状核变性(WD)合并脑桥中央髓鞘溶解症(CPM)的临床及头颅MRI特点。方法回顾性分析2例出现脑桥中央髓鞘溶解的WD患者的临床资料,总结其临床特征并进行文献复习。结果2例WD患者基础状态均较差,在妊娠反复呕吐及严重吞咽困难后,出现急性的延髓麻痹加重及四肢瘫痪;MRI在T2序列上有脑桥中央部大致对称圆形/椭圆形异常信号,DWI序列高信号,且表观弥散系数值为100×10^-6~300×10^-6mm²/s。结论WD患者在一定的诱因下可出现CPM,MRI-DWI对CPM的诊断及二者鉴别诊断有重要价值。     

不同浓度维甲酸诱导体外培养人羊膜上皮细胞分化为神经样细胞的研究

目的探讨维甲酸诱导人羊膜上皮细胞向神经样细胞分化。方法以DMEM/F12培养基培养原代人羊膜上皮细胞,并将细胞分为5组:对照组;1×10-8mol·L-1维甲酸组;1×10-7mol·L-1维甲酸组;1×10-6mol·L-1维甲酸组;1×10-5mol·L-1维甲酸组。各维甲酸组经维甲酸处理7 d后,用免疫组化检测神经干细胞巢蛋白(nestin)、微管相关蛋白2(MAP-2)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和细胞全能性标记物Oct-4表达,并计数阳性细胞比例。结果与对照组比较,各维甲酸组显著提高人羊膜上皮细胞分化为神经样细胞的比例,其中1×10-6mol·L-1维甲酸组阳性细胞比例最高;结论维甲酸体外能诱导人羊膜上皮细胞向神经样细胞分化,最适诱导浓度为1×10-6mol·L-1。     

结核性脑(脊髓)膜炎合并脊髓空洞症的临床及MRI特征

目的总结结核性脑（脊髓）膜炎合并脊髓空洞症的临床以及MRI特点。方法回顾分析9例结核性脑（脊髓）膜炎合并脊髓空洞症患者的临床表现、脑脊液和MRI结果。结果平均发病年龄（26.30±8.30）岁,男女之比约为2:1;呈亚急性或慢性起病。首发症状以发热伴头痛或咳嗽,下肢乏力、麻木及大小便障碍（6例）为主,亦可继发于抗结核治疗结束后6个月至1年;症状与体征不对称,节段性分离性感觉障碍不典型。MRI表现为脊髓中央纵行"串珠"状、"腊肠"样、梭形或细长条形长T₁、长T₂脑脊液样信号,空洞内及空洞壁无强化;病变部位蛛网膜下隙变窄且伴脊膜强化;脊髓空洞呈多房性,可累及颈髓（5例）、胸髓（8例）、腰髓（6例）或颈胸腰髓同时受累（4例）。病情轻重程度与空洞直径和长度不平行。结论脊髓空洞症可为结核性脑（脊髓）膜炎早期或迟发性并发症。其临床表现可不典型,空洞以胸髓受累常见,具多房性、多节段特点,病情轻重程度与影像学改变可不平行。提高对该病的认识并及时行MRI检查有助于早期诊断。