核因子-κB及细胞因子在百草枯致大鼠肺损伤中的动态变化

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠细胞因子白介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血小板源性生长因子(PDGF)和肺组织核因子-kappa B(NF-κB)的变化及四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的干预效果,以探讨百草枯致肺损伤机制.方法 SD大鼠随机分为对照组6只、PQ染毒组56只、PDTC干预组46只.染毒组和十预组给予生理盐水稀释PQ80 mg/kg一次性灌胃后2 h,染毒组给予等量生理盐水腹腔注射,PDTC干预组给予PDTC 100 mg/kg一次性腹腔注射;对照组给予生理盐水1 ml/kg灌胃后2h,给予等量生理盐水腹腔注射.ELISA法测定大鼠血清IL-1β、TGF-β1、TNF-α及PDGF水平,并分析它们分别与肺脏系数、羟脯氨酸含量的关系;电泳迁移率改变分析法测定肺组织NF-κB活性.结果 与对照组比较,染毒组IL-1β含量1、3、7 d明显升高,TGF-β1、TNF-α含量各时段均明显升高,PDGF含量7、14、28、5 6d明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);IL-1β、TNF-α分别与肺脏系数成正相关(r=0.37,0.46,P<0.05或P<0.01),TGF-β1、PDGF分别与羟脯氨酸含量成正相关(r=0.56,0.89,P<0.01);与对照组比较,染毒组肺组织NF.KB活性1、3.7、14 d明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).与染毒组比较,干预组血清IL-1β、TGF-β1、TNF-α、PDGF含量明显降低,相应时点差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);肺组织NF-κB活性1、3、7、14 d明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 NF-κB活化及细胞因子IL-1β、TGF-β1、TNF-α、PDGF的过度表达是参与PQ致肺损伤的重要机制;PDTC通过抑制NF-κB活化进而抑制上述细胞因子的表达,减轻PQ中毒大鼠的肺损伤.     

PDTC对百草枯致肺纤维化大鼠结缔组织生长因子及Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的动态变化及四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的干预效果,探讨PQ致肺纤维化机制及PDTC干预作用.方法 SD大鼠随机分为对照组(6只)、PQ染毒组(56只)、PDTC干预组(46只).染毒组和干预组给予PQ(80 mg/kg)一次性灌胃后2h,染毒组给予等量生理盐水腹腔注射,PDTC干预组给予PDTC(100mg/kg)一次性腹腔注射;对照组给予生理盐水1 ml/kg灌胃后2h,给予等量生理盐水腹腔注射.于不同处理后1、3、7、14、25、56 d蛋白免疫印迹法(Western blot)测定大鼠肺组织CTGF蛋白表达;实时荧光定量多聚酶链式反应(real-time PCR)测定CTGF、Col Ⅰ、ColⅢmRNA表达水平;同时测定肺组织羟脯氨酸(hyp)含量,观察中毒大鼠的肺组织病理变化.结果 染毒组大鼠肺组织CTGF蛋白表达随时间延长而逐渐升高,3～14d升高幅度缓慢,28～56d增幅较大,各时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).染毒组大鼠肺组织CTGF mRNA表达水平于染毒后1d即明显升高,3～14d表达迅速升高,28～56 d维持在较高水平,各时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).染毒组染毒后1、3 d Col Ⅰ mRNA表达无明显变化,7d表达略微增强,14～56 d水平大幅度升高,与对照组比较,7～56 d mRNA水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);染毒组ColⅢmRNA水平于染毒后1d即开始升高,7d达到高峰,之后呈下降趋势,各时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);Masson染色可见染毒后14～28 d成纤维细胞大量增殖,胶原纤维数量逐渐增多.与染毒组比较,PDTC干预组大鼠肺组织CTGF蛋白表达降低、CTGF、Col Ⅰ、ColⅢmRNA表达下调,相应时点的差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 CTGF表达持续增高;可能通过上调Col Ⅰ、ColⅢ转录水平,增加胶原分泌和基质合成,在PQ所致肺纤维化中起重要作用;PDTC抑制了上述因子的表达,可以减轻PQ中毒大鼠的肺损伤.     

急性百草枯中毒大鼠肺组织炎症因子表达的变化及意义

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织中炎症因子表达的变化,探讨早期及晚期炎症因子在急性PQ中毒肺损伤中的作用.方法 50只雄性SD大鼠随机分为2组:正常对照组(10只,生理盐水腹腔注射),PQ染毒组(40只,腹腔注射体积分数为1%的PQ溶液,20 mg/kg).PQ组于染毒后6 h及1、3、7 d处死,正常对照组于处理后1 d处死,检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)mRNA的表达,并观察大鼠的中毒表现及肺组织的病理改变.结果 PQ染毒组大鼠肺组织病理表现为早期充血水肿明显,大量炎性细胞浸润.与正常对照组相比,PQ染毒组大鼠肺组织中TNF-α、IL-10、HMGB-1 mRNA的表达在各时间点均有不同程度升高.PQ染毒组6 h和1 d时TNF-α mRNA表达分别为0.740±0.100和0.584±0.049,1、3 d时IL-10mRNA表达分别为0.551±0.016和0.524±0.010,6 h及1、3 d时HMGB-1 mRNA表达分别为0.695±0.060、0.87±0.154和0.819±0.188,与对照组比较,均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 大鼠急性PQ中毒后肺组织中TNF-α、IL-10及HMGB-1 mRNA的表达明显上调,早期及晚期炎症因子均参与PQ急性中毒肺损伤的致病过程.     

百草枯中毒大鼠肺组织血栓调节蛋白和内皮细胞蛋白C受体表达的变化及二巯丙磺钠的作用

目的 观察急性百草枯(paraquat,PQ)中毒大鼠肺组织中血栓调节蛋白(thmmbomodulin,TM)及内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)mRNA表达的变化及二巯丙磺钠(Na-DMPS)的十预作用.方法 80只雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(8只);Na-DMPS对照组(8只,腹腔注射200 mg/kgNa-DMPS);PQ染毒组,32只,腹腔注射体积分数为1%的PQ溶液(20mg/kg)];Na-DMPS保护组[32只,腹腔注射200 mg/kg Na-DMPS 15 min后再腹腔注射体积分数为1%的PQ溶液(20 mg/kg)].检测PQ染毒组及Na-DMPS保护组染毒后6 h及1、3、7 d肺组织中TM mRNA、EPCRmRNA的表达,并观察大鼠肺组织的病理学变化.结果 PQ染毒组染毒后3 d内炎性细胞(如中性粒细胞、淋巴细胞等)浸润明显,伴充血水肿;Na-DMPS保护组炎性细胞浸润较PQ染毒组少,充血水肿轻.与对照组相比,PQ染毒组及Na-DMPS保护组大鼠肺组织中TM mRNA、EPCR mRNA的表达增强,在6 h达高峰,1 d开始下降,7 d降至正常水平.Na-DMPS保护组6 h及1 d TM mRNA表达分别为1.071±0.097、1.055±0.051,与PQ染毒组比较,明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);Na-DMPS保护组6 h及1 d EPCR mRNA表达分别为0.678±0.005、0.650±0.007,与PQ染毒组比较,明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 大鼠急性PQ中毒后肺组织中TM mRNA、EPCRmRNA的表达升高,预防性应用Na-DMPS后,TM mRNA、EPCR mRNA的表达降低.     

氧化应激及核因子-κB在百草枯致大鼠肺损伤中的变化

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠氧化应激及肺组织核因子-κB(NF-κB)的变化,探讨四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的治疗机制.方法 SD大鼠144只随机分为对照组6只、PDTC对照组36只、pQ染毒组56只、PDTC治疗组46只.染毒组和治疗组予生理盐水稀释PQ 80mg/kg一次性灌胃后2 h,治疗组给予PDTC 100 mg/kg一次性腹腔注射,染毒组予等量生理盐水腹腔注射;对照组和PDTC对照组于生理盐水1 ml/kg灌胃后2 h,PDTC对照组予PDTC 100 mg/kg一次性腹腔注射,对照组予等量生理盐水腹腔注射.不同处理后1、3、7、14、25、56 d观察大鼠肺组织病理改变;测定血清中丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、髓过氧化物酶(MPO)活力;测定肺组织中羟脯氨酸(Hyp)含量及NF-κB p65的表达.结果 与对照组比较,染毒组血清中MDA含量和MPO活力升高,GSH-Px、CAT、SOD活力降低,相应时点差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);肺组织NF-κB活性在1、3、7、14 d明显升高,肺组织Hyp含量在14、28、56d明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01).PDTC治疗组血清中MDA含量降低,GSH-Px、CAT、SOD活力升高,与染毒组比较,相应时点差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),在14 dMPO活力为(119.56±21.23)U/L,明显低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05);与染毒组比较,治疗组在1、3、7 d肺组织中NF-κB活性明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);治疗组肺组织中Hyp含量在28、56d分别为(0.89±0.05)、(0.93±0.13)μg/mg,明显低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.01);病理检查结果显示,治疗组肺组织炎症及纤维化程度均较轻.结论 氧化应激及NF-κB活化是参与PQ致肺损伤的重要机制;PDTC能纠正氧化还原失衡,抑制NF-κB活化,减轻PQ中毒大鼠的肺损伤.     

百草枯中毒大鼠肺组织ACE和ACE2基因表达及二巯丙磺钠的保护作用

目的 探讨急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织中血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素转化酶2(ACE2)的基因表达及二巯丙磺钠(Na-DMPS)的保护作用.方法 100只SD雄性大鼠分为正常对照组(10只)、Na-DMPS对照组(10只)、PQ染毒组和Na-DMPS保护组(各40只).PQ染毒组和Na-DMPS保护组大鼠一次性腹腔注射PQ 20 mg/ks,其中保护组大鼠于染毒前15 min以Na-DMPS 200mg/kg腹腔注射进行保护.观察各组大鼠在中毒后6、24 h及3、7d各时间点的临床表现和光学显微镜下肺脏的组织学改变,并使用反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定各组大鼠各时间点肺组织ACE和ACE2 mRNA的表达.结果 PQ染毒组大鼠染毒后出现呼吸急促、抽搐,呈进行性加重,Na-DMPS保护组大鼠中毒症状出现延后且明显减轻.光学显微镜下可见,染毒组大鼠肺组织损伤的表现以肺部毛细血管和肺泡结构破坏、肺泡内渗出物增多、炎症细胞聚集为主,而Na-DMPS保护组大鼠肺组织受损则相对较轻.各时点PQ染毒组肺组织ACE及ACE2 mRNA的表达均下降,在24 h时ACE mRNA表达为0.457±0.262,3 d时为0.385±0.179;3 d时ACE2 mRNA表达为0.415±0.247,7 d时为0.365±0.215,与正常对照组(ACE mRNA为0.781±0.354,ACE2 mRNA为0.761±0.420)和Na-DMPS对照组(ACEmRNA为0.765±0.364,ACE2mRNA为0.725±0.424)比较,差异均有统计学意义(P<0.05).Na-DMPS保护组肺组织ACEmRNA表达在24 h时为0.739±0.558,3d时为0.749±0.414,ACE2 mRNA表达在3d时为0.584±0.345,7d时为0.493±0.292,明显高于相同时间点的PQ染毒组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 PQ中毒大鼠肺组织ACE和ACE2mRNA表达下降,Na-DMPS可上调肺组织ACE和ACE2 mRNA表达,减轻肺组织病理改变,对PQ中毒所致急性肺损伤有一定的保护作用.     

百草枯中毒大鼠肺组织中的4-羟基壬烯醛表达和乌司他丁的影响

目的 观察乌司他丁(UTI)对百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织中4-羟基壬烯醛(4-HNE)表达的影响.方法 将72只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、染毒组、UTI干预组,每组24只.染毒组、UTI干预组PQ灌胃(80 mg/kg)染毒建立SD大鼠肺损伤模型;对照组组等量生理盐水灌胃.UTI干预组于PQ灌胃后30 min腹腔内注射UTI 10万U/kg;对照组、染毒组腹腔注射等量生理盐水.不同处理后12、24、48、72 h观察3组大鼠肺组织病理改变及检测肺组织中4HNE表达.结果 染毒后12h,染毒组和UTI干预组大鼠肺组织4-HNE表达升高,48h达高峰,72 h 4-HNE表达下降,但仍较高.与对照组组比较,染毒组和干预组大鼠肺组织4-HNE表达明显升高,差异有统计意义(P＜0.05).干预组大鼠肺组织4-HNE表达明显低于染毒组,差异有统计意义(P＜0.01).肺组织病理学观察可见,对照组无明显变化;染毒组、干预组肺泡毛细血管扩张,伴弥漫性肺出血,肺泡腔塌陷,肺泡腔内炎性细胞浸润,其中干预组较染毒组为轻.结论 PQ中毒时4-HNE表达增强;UTI能减少4-HNE的产生,减轻PQ中毒大鼠的肺损伤.     

盐酸戊乙奎醚治疗百草枯急性肺损伤的实验研究

目的 研究盐酸戊乙奎醚注射液(长托宁)对百草枯(PQ)急性肺损伤的干预作用及其机制.方法 选取80只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组(10只)、100 mg/kg PQ染毒组(10只)、100 mg/kg PQ染毒+33 μg/kg长托宁治疗组(30只)、100 mg/kg PQ染毒+66μg/kg长托宁治疗组(30只).2个治疗组分别于给药后的36、72 h及7 d处死.HE染色行肺组织病理学检查.取肺组织检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、小窝蛋白-1、羟脯氨酸(HYP),取血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)进行内皮素(ET)的检测.结果 病理学检查证实大鼠急性肺损伤模型复制成功.染毒组大鼠肺组织中MMP-2、HYP及血清、BALF中ET含量分别为(1.77±0.40)μg/g、(2.91±0.79)μg/g、(505.23±124.69)μg/ml、(640.38±136.60)μg/ml,均高于对照组[分别为(0.95±0.66)μg/g、(1.48±0.69)μg/g、(95.48±46.01)μg/ml、(200.40±88.39)μg/ml]差异均有统计学意义(P<0.05);长托宁治疗组的上述各指标均较染毒组下降,差异亦有统计学意义(P<0.05).染毒组大鼠肺组织中小窝蛋白-1含量为(1.77±0.82)μg/g,明显低于对照组[(5.39±1.68)μg/g],差异有统计学意义(P<0.05);长托宁治疗组的小窝蛋白-1含量均高于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 长托宁可降低PQ染毒大鼠肺组织MMP-2、HYP以及血清和BALF中ET的含量,提高小窝蛋白-1的含量,进一步减轻百草枯所致的肺损伤.     

急性百草枯中毒大鼠氧化应激水平及二巯丙磺钠的作用

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠体内氧化应激水平及二巯丙磺钠(Na-DMPS)的作用.方法 80只雄性SD大鼠随机分为正常对照组:8只;Na-DMPS对照组:8只;PQ染毒组:32只(腹腔注射质量分数为1%的PQ溶液20 mg/kg);Na-DMPS保护组:32只.正常对照组及Na-DMPS对照组于1 d处死,PQ组及NA-DMPS保护组于染毒后6h及1、3、7d处死,留取血清、肺泡灌洗液(BALF)及肺组织,检测血清、BALF及肺组织匀浆中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活力,血清、BALF中谷胱甘肽(GSH)含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织Nrf2基因表达水平.结果 与正常对照组相比,PQ中毒组和Na-DMPS保护组血清、BALF、肺组织匀浆中MDA含量均升高,CAT活力和GSH含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与相应时点PQ染毒组比较,Na-DMPS保护组6 h、1 d时血清、BALF及肺组织匀浆中MDA含量均明显降低,6 h及1、3 d时血清,1、3 d时BALF和肺组织匀浆中CAT活力明显增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).与同时间点PQ染毒组比较,Na-DMPS保护组6 h、3 d时血清中GSH[(730.07±16.23)、(793.66±7.40)mg/L]和1、3 d时BALF中GSH[(609.75±6.74)、(631.83±12.03)mg/L]明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).1、3、7d时PQ染毒组Nrf2mRNA表达分别为(0.710±0.061)、(1.023±0.158)、(0.969±0.046),Na-DMPS保护组Nrf2mRNA表达分别为(1.005±0.060)、(1.464±0.166)、(1.066±0.191),明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与PQ染毒组比较,1、3 d时Na-DMPS保护组Nrf2mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Na-DMPS可降低PQ中毒大鼠体内MDA含量,增加的CAT活力,增加GSH含量及NRF2 mRNA的表达,促进体内氧化-抗氧化系统的平衡,具有保护作用.     

钝顶螺旋藻藻蓝蛋白抗百草枯诱导大鼠肺纤维化的研究

目的 探讨钝顶螺旋藻(spirulina platensis)藻蓝蛋白(C-phycoeyanin,C-PC)对百草枯(paraquat,PQ)染毒诱导大鼠肺纤维化的治疗作用.方法 选取健康Wistar大鼠90只,随机分为正常对照组、模型组(PQ组)和藻蓝蛋白治疗组(C-PC组),每组30只.PQ组、C-PC组以PQ(50 mg/kg)一次灌胃染毒造模.造模后,正常对照组、PQ组大鼠每天给予生理盐水(1 ml/100 g)灌胃,C-PC组每天给予C-PC (50 mg/kg)灌胃,并在第1、3、7、14、28天各组随机取6只大鼠右肺下叶肺组织匀浆测羟脯氨酸(HYP)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力;取左肺部分组织行HE染色、Masson染色进行病理观察,并用免疫组化方法观察肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、核因子-κB亚基p65(NF-κB p65)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达.结果 各观察时点C-PC组大鼠肺组织中HYP和14、28 d MDA含量明显低于PQ组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).1、7、14、28 d时C-PC组大鼠肺组织中SOD活力明显高于PQ组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).PQ组和C-PC组肺组织中TGF-β1的表达及NF-κB p65和TNF-α表达明显高于正常对照组,C-PC组肺组织的TGF-β1表达及NF-κB p65和TNF-α表达明显低于PQ组,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).病理学观察显示C-PC能减轻PQ染毒大鼠肺泡炎和肺纤维化程度.结论 C-PC对PQ诱导的大鼠肺泡炎及肺纤维化有抑制作用.     

水杨酸钠对百草枯所致大鼠肺组织核转录因子和炎性因子的影响

[目的]探讨水杨酸钠（sodium salicylate,NaSAL）对抗百草枯（paraquat,PQ）致肺损伤的作用机制。[方法]将72只雄性SD大鼠随机分为溶剂对照组（生理盐水灌胃）、PQ染毒组和PQ＋NaSAL干预组。PQ经口染毒,剂量为80 mg/kg（按大鼠体重）,干预组给予染毒组相等剂量PQ后立即腹腔注射NaSAL（120 mg/kg）。在染毒后第1、3、7、14天取对照组、染毒组、干预组各6只动物进行检查,分别用凝胶电泳迁移率实验（EMSA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织中核转录因子（NF-κB）活性变增高;肺组织中TNF-α、TGF-β1蛋白表达增强,各时点蛋白水平与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。干预组NF-κB活性较染毒组降低;与染毒组相比,干预组肺组织TNF-α、TGF-β1蛋白水平表达明显下降,相应时点差异也有统计学意义（P〈0.05）。[结论]NaSAL干预后可以降低肺组织中NF-κB的活性,减少TNF-α、TGF-β1的蛋化及肿瘤坏死因子（TNF-α）、转化生长因子-β（1TGF-β1）蛋白含量的改变。[结果]染毒组大鼠肺组织中NF-κB活性白表达,提示NaSAL可以改善PQ中毒引起的肺损伤。     

阿托伐他汀钙对百草枯致肺纤维化大鼠MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的 探讨阿托伐他汀钙对百草枯致肺纤维化大鼠MMP-9及TIMP-1表达的影响。方法 45只SPF级雄性Wister大鼠,随机分为3组,正常对照组、百草枯组(模型组)、阿托伐他汀干预组(治疗组),每组15只。百草枯组和阿托伐他汀干预组均以百草枯50 mg/kg灌胃染毒建立大鼠肺纤维化模型。阿托伐他汀干预组给予阿伐他汀钙的生理盐水悬混液20 mg/kg灌胃给药,给药体积为200 uL。分别于中毒后第7、14、28天随机处理各组中5只大鼠进行实验观察。分离右肺组织(1 cm×1 cm×0.3 cm),96 h后行石蜡包埋切片。RT-PCR检测肺组织MMP-9、TIMP-1mRNA的表达,Western-blot检测肺组织MMP-9、TIMP-1蛋白的表达。结果 MMP-9 mRNA表达结果阿托伐他汀钙治疗组高于对照组,但低于模型组。TIMP-1 mRNA表达结果正常对照组稍低,其余两组差别不大。肺组织MMP-9、TIMP-1蛋白的表达,百草枯中毒大鼠肺组织内MMP-9及TIMP-1的表达明显高于对照组及治疗组,治疗组两个细胞因子表达高于对照组,但显著低于模型组。结论 阿托伐他汀可以抑制百草枯中毒大鼠肺内MMP-9/TIMP-1的表达,拮抗百草枯所致的肺纤维化。     

阿托伐他汀对百草枯中毒损伤肺组织MMP-9及TIMP-1表达的调控

目的 研究阿托伐他汀对大鼠百草枯中毒所致肺损伤的保护作用及其对基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs)的影响。 方法 取45只雄性Wister大鼠,随机数字表法分为对照组、染毒组、治疗组,每组各15只。染毒组及治疗组均以百草枯50 mg/kg灌胃建立大鼠肺纤维化模型;治疗组每日给予阿托伐他汀20 mg/kg。分组后分别于灌胃7、14、28 d后观察大鼠一般情况并解剖,取肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,光镜观察。用免疫组化、RT-PCR、Western-blot等方法检测肺组织中MMP-9及TIMP-1水平。用RT-PCR法检测肺组织成纤维细胞中MMP-9及TIMP-1水平。用ELISA法检测血清中MMP-9及TIMP-1水平。 结果 HE染色结果显示,染毒组有明显的肺损伤,治疗组肺损伤较染毒组减轻。治疗组肺组织中MMP-9、TIMP-1表达量高于正常对照组,但低于染毒组。染毒组动物血清中的MMP-9的浓度在肺泡炎症阶段(7 d)最高,14 d、28 d后呈下降趋势,但均高于治疗组。治疗组血清中的MMP-9的浓度低于染毒组,但差异无统计学意义(P>0.05),相同时段三组TIMP-1浓度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。各组动物肺组织成纤维细胞中,治疗组表达量低于染毒组,高于对照组。 结论 阿托伐他汀具有抑制百草枯中毒大鼠肺内MMP-9、TIMP-1的表达上调的作用。阿托伐他汀对血液中系统分泌的MMP-9、TIMP-1的浓度无显著影响。     

硫化氢急性中毒大鼠肺组织氧化应激和Nrf2基因表达及乌司他丁的影响

目的 研究硫化氢急性中毒大鼠肺组织氧化应激水平及核转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)基因表达的变化及乌司他丁(ulinastatin,UTI)的影响.方法 将96只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组(8只)、UTI对照组(8只)、硫化氢染毒组(40只)、UTI干预组(40只).正常对照组和UTI对照组大鼠于染毒柜内吸人与硫化氢同样流量的空气1h,UTI对照组大鼠立即腹腔注射UTI(10万U/kg),2h后处死.硫化氢染毒组和UTI干预组大鼠在染毒柜内吸入硫化氢(浓度为283.515 mg/m3)1h,UTI干预组大鼠立即腹腔注射UTI(10万U/kg),两组大鼠分别于2、6、12、24、48 h处死,每组8只.检测肺组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)活力和谷胱甘肽(GSH)含量及Nrf2 mRNA的表达,观察肺组织病理学改变并行肺损伤评分.结果 与正常对照组比较,2、6、12 h硫化氢染毒组大鼠肺组织中SOD、CAT活力和GSH含量及2、6、12、24h GSH-Px活力明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);2、6、12、24h硫化氢染毒组大鼠肺组织中MDA含量明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).与相应时间点硫化氢染毒组比较,UTI干预组6、12h时GSH-Px活力,2、6、12h时CAT活力,2、6、12、24h时GSH含量及2、6、12、24、48 h时SOD活力明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);UTI干预组2、6、12h时MDA含量明显低于相应时间点硫化氧染毒组,差异有统计学意义(P＜0.01).染毒后2、6、12、24 h,硫化氢染毒组肺组织中Nrf2 mRNA表达(0.314±0.011、0.269±0.010、0.246±0.011、0.221士0.018)明显高于正常对照组(0.149±0.012),差异有统计学意义(P＜0.01);与相应时间点硫化氢染毒组比较,2、6、12、24、48 h UTI干预组的Nrf2 mRNA表达(0.383:±-0.017、0.377±-0.014、0.425±0.017、0.407±0.011、0.381±0.010)明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).光学显微镜下观察可见,硫化氢染毒组染毒后24h大鼠肺组织损害明显,UTI干预组大鼠肺损伤较硫化氢染毒组有所减轻.UTI干预组12、24、48 h时肺损伤评分明显低于相应时间点硫化氢染毒组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 氧化应激和Nrf2活化是参与硫化氢中毒急性肺损伤的重要因素,UTI能抑制氧自由基产生,纠正氧化还原失衡,上调Nrf2 mRNA表达水平,减轻氧化应激损伤,对肺组织损伤有保护作用.     

百草枯致大鼠急性肺损伤时肺组织c-Jun氨基末端激酶和c-Jun的变化

目的 探讨百草枯(paraquat,PQ)致大鼠急性肺损伤时肺组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)和c-Jun的变化.方法 将46只大鼠随机分为对照组(10只)、PQ组、PQ+锌原卟啉(ZnPP)组和PQ+氯血红素(Hm)组(每组各12只).PQ组大鼠腹腔注入PQ(25 mg/ks)制造PQ中毒模型;对照组大鼠腹腔注入等量生理盐水;PQ+ZnPP组大鼠在注入PQ前10min注入ZnPP(10mg/kg,10ms/ml);PQ+Hm组大鼠在注入PQ前10min注入Hm(10mg/kg,10mg/ml).不同处理后3 d,取肺组织常规HE染色和取血测定血浆中丙二醛(MDA)含量;检测肺组织中CO含量;反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织血红素氧合酶.1(HO-1)mRNA的表达;Western免疫印迹分析肺组织JNK和c-Jan磷酸化的情况.结果 PQ组、PQ+ZnPP组和PQ+Hm组血浆中MDA含量、肺组织中CO含量均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),与PQ+ZnPP组比较,PQ+Hm组MDA含量降低,而肺组织中CO含量明显升高,差异均有统计学意义(P0＜.01). PQ组、PQ+ZnPP组和PQ+Hm组的肺组织HO-1mRNA表达、JNK(55.24±9.34、38.15±10.71、128.55±19.43)及c-Jun(23.16±4.85、15.49±3.13、44.89±10.37)磷酸化相对水平较对照组均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01),PQ+Hm组肺组织的HO-1mRNA表达明显高于PQ组,PQ+Hm组JNK及c-Jun磷酸化水平高于PQ组和PQ+ZnPP组,而PQ+ZnPP组JNK及c-Jun磷酸化水平与PQ组相比又有所降低,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论 在PQ致大鼠急性肺损伤时,内源性CO产生增加.肺组织中JNK和c-Jan的磷酸化水平明显升高.     

TGF-β1、MMP-3、TIMP-3在PFD患者阴道壁组织中的表达

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶抑制剂-3(TIMP-3)在女性盆底功能障碍性疾病(PFD)患者阴道壁中的表达及三者与PFD发病的关系.方法 研究组(PFD组)为28例患者阴道壁结缔组织标本,分别为绝经前PFD组17例,绝经后PFD组11例;对照组为22例无压力性尿失禁和盆腔器官脱垂者,分别为绝经前对照组12例,绝经后对照组10例,采用RT-PCR方法测定各组阴道壁组织中TGF-β1、MMP-3、TIMP-3 mRNA的表达.结果 PFD组患者MMP-3的表达较对照组显著升高,两组之间差异有统计学意义(P=0.000<0.01),TIMP-3及TGF-β1的表达较对照组显著下降,两组之间差异有统计学意义(P值分别为绝经前0.035,0.024;绝经后0.016,0.017;均P<0.05).结论 MMP-3高表达,TIMP-3作为MMP-3的抑制剂的低表达以及TGF-β1的低表达,使盆底胶原的降解增加,从而使弹性纤维减少,导致PFD的发生.     

亚砷酸钠对大耳兔肝脏基质组织金属蛋白酶抑制因子-2和转化生长因子-β1 mRNA表达的影响

目的 探讨亚砷酸钠对大耳兔肝脏基质组织金属蛋白酶抑制因子-2(tissue inhibitor of metalloproteninase-2,TIMP-2)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA表达的影响.方法 将30只健康清洁级雄性新西兰大耳兔随机分为5组,分别为对照(自来水)组和染毒剂量为0.075、0.150、0.375、0.750 mg/kg的亚砷酸钠染毒组,每组6只.采用自由饮水方式进行染毒,连续12周.采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术测定大耳兔肝组织中TIMP-2和TGF-β1 mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,各剂量亚砷酸钠染毒组大耳兔肝脏匀浆中TIMP-2和TGF-β1的mRNA表达水平均增高,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,大耳兔肝脏匀浆中TIMP-2和TGF-β1的mRNA表达水平呈上升趋势.结论 亚砷酸钠染毒可能导致大耳兔肝脏基质组织金属蛋白酶抑制因子-2和转化生长因子-β1 mRNA表达的增高.     

百草枯中毒大鼠的肾损伤病理变化和血红素氧合酶-1的表达

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肾损伤病理变化和血红素氧合酶-1(HO-1)的表达,探讨PQ中毒肾损伤病理生理机制.方法 SD大鼠随机分为对照组和染毒组,染毒组予25 mg/kgPQ一次性腹腔注射染毒,对照组等量盐水腹腔注射.分别观察3、6、12h和1、2、3、5 d时肾组织病理学变化,采用免疫组织化学法观察血红素酶(HO-1)蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HO-1mRNA表达.结果 (1)对照组肾组织结构清晰,染毒组肾组织结构清晰度下降,染毒3 h即可见充血、水肿及空泡变性等病理变化,随时间延长而加重;重者可见核固缩,细胞结构消失,但其范围并不随时间延长而增加.肾小球、髓质部亦可受累.对照组HO-1蛋白与HO-1 mRNA多不表达;染毒组染毒3h在皮质部肾小管上皮细胞的胞膜及胞浆中HO-1蛋白呈阳性表达,免疫组织化学评分(IHS)升高,与对照组相比,除染毒5 d外其他各时间点比较,差异均有统计学意义(P<0.05);除染毒3、5 d外,其他时间点HO-1mRNA表达分别为(0.53±0.21)、(0.55±0.31)、(0.56±0.22)、(0.64±0.14)、(0.43±0.25),明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 PQ中毒肾损伤病理改变可能存在不同作用机制;HO-1蛋白及HO-1mRNA高表达提示其可能参与PQ中毒肾损伤病理生理过程.     

大鼠吸入氯气肺组织基质金属蛋白酶-9表达变化

目的探讨大鼠吸入氯气急性肺损伤(ALI)肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的变化。方法将40只雄性SD大鼠随机分为对照组和4个不同浓度[(10.28±1.73)、(42.00±3.18)、(102.00±6.96)、(160.14±6.87)mg/m3]氯气染毒组,每组8只,动式吸入染毒10min,6h后行血气分析,取肺组织测湿干重比(W/D)和病理切片观察,用ELISA方法测支气管肺泡灌洗液(BALF)中MMP-9蛋白表达水平,用RT-PCR方法测肺组织MMP-9mRNA相对表达。结果与对照组比较,各染毒组大鼠BALF中MMP-9蛋白和肺组织MMP-9mRNA水平均有升高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着氯气染毒浓度的增加,大鼠BALF中MMP-9蛋白和肺组织MMP-9mRNA水平均持续升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MMP-9表达改变可能是大鼠吸入氯气致ALI重要的发病机制之一。     

缺氧诱导因子-1α与百草枯中毒致急性肺损伤早期肺纤维化的关系

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织急性肺损伤早期肺纤维化中的作用.方法 将48只健康SD大鼠随机分为对照组(6只)和PQ染毒组(42只).对照组大鼠予生理盐水1 ml,一次性灌胃;将质量分数为20％的PQ用生理盐水稀释,对染毒组大鼠一次性灌胃染毒1 ml(500 mg/kg),按灌胃后2、6、12、24、48、72及120 h分为7个亚组,每组6只.分别测定各组大鼠的动脉血氧分压(PaO2);进行肺组织HE染色、Mason染色,观察病理学变化;肺组织荧光染色观察肺组织变化及HIF1-a蛋白表达;用免疫蛋白印迹(Western blot)法检测HIF-1α蛋白表达.结果 染毒72h组大鼠动脉血PaO2为(62.33±0.22) mm Hg,与对照组[(96.00±5.20) mm Hg]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色可见,染毒后2h大鼠肺泡毛细血管内皮细胞、肺泡上皮细胞和肺间质的急性弥漫性损害,广泛肺间质炎性细胞浸润,增厚;染毒后12h肺间质水肿减轻,肺泡间距变窄;染毒后120 h,肺泡结构紊乱,较多量片状分布瘢痕条索,成纤维细胞明显增多,外周炎症吸收.Masson染色可见,染毒后2h大鼠肺泡上皮出现明显胶原沉积;24、48 h蓝染的胶原纤维逐渐增加;染毒后120 h肺泡组织明显破坏,大片纤维结缔组织沉积.免疫荧光及Westem blot法均显示,染毒组大鼠染毒后2h肺组织中HIF1-a蛋白表达明显升高,至12h达峰值,24、48 h逐渐下降,但仍高于对照组,染毒组各时间点HIF-1α蛋白表达与对照组的差异有统计学意义(P＜0.05).染毒组各时间点HIF-1α蛋白表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PQ中毒大鼠肺组织早期即出现肺纤维化及HIF-1α蛋白的表达,HIF-1α可能参与了肺纤维化的形成.