大鼠吸入氯气后肺表面活性物质相关蛋白-A表达变化

取40只雄性SD大鼠随机分为1个对照组和4个不同浓度的氯气染毒组,染毒10min,6h后行血气分析,取肺组织测湿干重比(W/D)和病理切片观察,ELISA法测支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清SP-A蛋白表达水平,RT-PCR法测肺组织SP-A mRNA相对表达。与对照组相比,各染毒组大鼠BALF中SP-A蛋白和肺组织SP-A mRNA水平均有降低,血清SP-A蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结果提示SP-A表达改变可能是大鼠吸入氯气后急性肺损伤(ALI)重要的发病机制之一。 更多还原     

大鼠吸入氯气后肺组织Claudin-3蛋白及其mRNA、Occludin mRNA表达变化

将40只SD雄性大鼠随机分为1个对照组和4个不同浓度的氯气染毒组,染毒10 min,6 h后行血气分析,取右肺中叶组织测湿干重比W/D和上叶组织行病理切片观察,Western blot法检测右肺副叶组织Claudin-3蛋白表达水平,RT-PCR法测右肺下叶组织Claudin-3 mRNA及Occludin mRNA相对表达。与对照组相比,(42.00±3.18)mg/m3及以上浓度氯气染毒组大鼠肺组织Claudin-3蛋白表达水平均有降低,差异有统计学意义(P0.05);且与对照组相比,各染毒组大鼠肺组织Claudin-3 mRNA、Occludin mRNA表达水平也均有降低,差异有统计学意义(P0.05)。提示大鼠吸入氯气后肺组织Claudin-3、Occludin表达减少可能是ALI肺水肿形成的机制之一。     

基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9在全氟异丁烯吸入性肺损伤中的作用

目的阐明全氟异丁烯(perfluoroisobutylene,PFIB)吸入暴露致大鼠急性肺损伤形成过程中肺组织内基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的变化规律,评价分析盐酸四环素(tetracycline hydrochloride,TET)对大鼠PFIB吸入性急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的治疗作用及其作用机制,为临床防治化学源性肺损伤提供参考。方法自制大鼠全身暴露动态吸入染毒系统构建大鼠PFIB吸入性ALI模型。在PFIB暴露前后不同时间采集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和组织样品,测定肺系数、BALF中蛋白质和磷脂,并采用酶谱分析检测BALF和肺组织中MMP-2和MMP-9活性。结果亚致死剂量PFIB吸入暴露可诱导形成典型的ALI。在正常大鼠肺组织中MMP-2和MMP-9活性极低,在BALF中几乎检测不到MMP-9。在亚致死剂量PFIB染毒组大鼠肺组织和BALF中,MMP-2活性显著性升高,而且其前体pro-MMP-2活性亦出现显著性升高;MMP-9仅观察到升高的趋势性变化,但差异无统计学意义。TET治疗能够显著改善PFIB吸入性急性肺损伤,而且能剂量依赖性的抑制肺组织和BALF中MMP-2活性,高剂量TET治疗可使肺组织中MMP-2活性降低至正常水平;其对pro-MMP-2的结果也相似。结论 pro-MMP-2与MMP-2在PFIB吸入性急性肺损伤大鼠肺组织和BALF中表达水平显著升高,且与ALI的进程高度一致;TET治疗能够显著下调pro-MMP-2与MMP-2的表达,从而减轻肺组织的损伤。提示这些MMPs在吸入PFIB所致ALI的发生过程中可能起着重要作用。     

乌司他丁对光气致大鼠急性肺损伤的保护及与基质金属蛋白酶-9的关系

目的 探讨乌司他丁对光气所致大鼠急性肺损伤的保护作用及与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的关系.方法 选取健康成年SD雄性大鼠64只,随机分为染毒组[光气染毒组(B1组)、生理盐水染毒组(B2组)、地塞米松治疗组(B3组)、乌司他丁治疗组(B4组)]和非染毒组[空气对照组(A1组)、生理盐水对照组(A2组)、地塞米松对照组(A3组)、乌司他丁对照组(A4组)],每组8只.各组大鼠均在注射相应的药物(地塞米松、生理盐水或乌司他丁)1 h后,非染毒组吸入新鲜空气5 min,染毒组吸人纯度为100%的 8.33 mg/L光气5 min.6 h后取各组大鼠的肺组织行HE染色,计算肺湿/干重量比值(W/D),检测肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白含量及白细胞计数,利用免疫组织化学法检测肺组织中MMP-9蛋白表达,酶联免疫吸附法检测血清中MMP-9活力以及明胶酶谱法检测BALF中MMP-9酶原含量.结果 与A1、A2、A3、A4组比较,B1和B2组大鼠肺W/D、BALF中蛋白含量和白细胞计数均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).与B1和B2组比较,B3和B4组大鼠肺W/D、BALF中蛋白含量及白细胞计数明显下降,差异有统计学意义(P<0.01).B1和B2组大鼠肺泡壁明显充血、增厚,肺泡壁和肺间质内可见较多白细胞浸润以及肺泡结构的破坏.B3和B4组大鼠肺泡结构较为清晰,肺泡壁稍增厚,伴少量炎性细胞浸润.非染毒组大鼠肺、支气管组织中MMP-9蛋白表达均呈弱阳性,B1组和B2组MMP-9蛋白表达呈强阳性,B3组和B4组肺组织中MMP-9蛋白表达明显减弱,恢复至正常肺组织的弱阳性表达水平.与A1、A2、A3、A4组比较,B1和B2组大鼠血清中MMP-9活力升高,差异有统计学意义(P<0.01),与B1和B2组比较,B3和B4组血清中MMP-9活力均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01).B1、B2组BALF中MMP-9酶原含量明显高于B3、B4组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 乌司他丁可以抑制MMP-9蛋白表达的上调,对于光气所致的ALI具有保护作用.     

模拟大气混合污染物对大鼠肺表面蛋白A影响

目的筛选敏感的生物标志物,探讨大气混合污染物对肺泡II型上皮细胞(AT-II)的损伤及其机制,为控制大气污染的危害提供理论依据。方法使用便携式PM2.5采样器和47mm玻璃纤维滤膜采集大气粉尘样品,制成生理盐水混悬液,实验大鼠气管注入混悬液及动态吸入SO2、NO2、CO混合气,制备大气混合污染物吸入动物模型,测定染毒不同时间血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺表面活性蛋白(SP-A)水平,肺组织中SP-A的mRNA及蛋白表达。结果染毒7 d组大鼠肺组织中SP-A mRNA表达为1.816±1.299,明显高于染毒1、30 d组(0.930±0.587;0.902±0.378)及对照组;染毒30 d组大鼠肺组织中SP-A表达吸光度值为0.385±0.068,明显低于染毒7 d组(0.438±0.069)及对照组;染毒30 d组大鼠BALF中SP-A水平为47.09±5.78,明显低于染毒1、7 d组(54.72±6.15;58.82±9.76)及对照组;染毒30 d组大鼠血清中SP-A水平明显高于染毒1、7 d组及对照组。结论 SP-A是反映AT-II功能受损严重程度的肺特异性指标。     

地塞米松预处理对大鼠光气吸入性肺损伤基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的 探讨地塞米松对大鼠光气吸入性急性肺损伤(ALI)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法 将SD大鼠随机分为3组:正常对照组(吸入与光气染毒组同等流量的空气)、光气染毒组(吸入8.33 mg/L的光气)、地塞米松预处理组(尾静脉注入2.5 mg/kg地塞米松1 h后,吸入8.33 mg/L的光气).染毒2 h后,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)测定中性粒细胞细胞数、蛋白含量和肺湿/干重比(W/D).用放射免疫法测定各组血清和BALF中MMP-9水平.进行肺组织的病理学检查,用免疫组化法和实时定量聚合酶链反应(PCR)测定MMP-9表达的变化.结果 与染毒组比较,预处理组大鼠肺W/D、BALF中中性粒细胞数和蛋白含量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).与染毒组[血清:(9.439±0.100)μg/L、BALF:(20.640±0.446)μg/L]比较,预处理组MMP-9含量[血清(4.799±0.043)μg/L、BALF:(15.052±0.029)μg/L]明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).与染毒组(2.789±0.282)比较,预处理组MMP-9mRNA的表达量(1.183±0.260)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).染毒组肺泡壁明显充血、增厚,肺泡壁和肺间质内可见较多白细胞浸润以及肺泡结构破坏;预处理组肺泡结构较为清晰,肺泡壁稍增厚,伴少量炎性细胞浸润.正常对照组大鼠肺、支气管组织中MMP-9蛋白表达呈弱阳性,染毒组MMP-9蛋白表达呈强阳性,预处理组肺、支气管组织中MMP-9蛋白表达明显减弱.结论 地塞米松能有效地保护大鼠光气吸入性ALT,可能通过抑制MMP-9表达而达到肺保护作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of dexamethasone on expression of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) in rats with acute lung injury induced by phosgene. Methods The rats were randomly divided into 3 groups: normal control group that consists of the rats with air exposure, phosgene group that consists of the rats with phosgene exposure and dexamethasone group that consists of the rats with phosgene exposure after 2.5 mg/kg dexamethasone being injected. Wet and dry ratio of the lung (W/D) was calculated, and leukocyte count and total protein content of bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were recorded at 2 h after exposure. The concentrations of MMP-9 in the serum and BALF were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. The pathologic changes of lung tissues were observed under light microscopy. The immunohistochemistry and the RT-PCR were used to detect the contents of MMP-9 in the lung tissue. Results Compared with phosgene group, the lung W/D, protein content and WBC count in of BALF dexamethasone group was significantly decreased (P＜0.01). MMP-9 levels of the serum and BALF in dexamethasone group were (4.799±0.043) μg/L and (15.052±0.029) μg/L, respectively, which were significantly lower than those [(9.439±0.100) and (20.640±0.446) μg/L] in phosgene group (P＜0.01). Compared with phosgene group (2.789±0.282), the expression level(1.183±0.260) of lung M MP-9 mRNA in dexamethasone group was significantly lower than that in phosgene group (P＜0.01).Histological experimental results showed the marked hyperemia and thickening of alveolar wallsand stroma cells infiltrating and more visible alveolar structure damage of alveolar walls in phosgene group while the alveolar structure and the alveolar walls were clear and slightly thickened with inflammatory cells in dexamethasone group. Immunohistochemical results showed that MMP-9 protein expression levels of lung and brochus tissues in normal control group and dexamethasone group were weakly positive, which in phosgene group were strongly positive. Conclusion Dexamethasone has a beneficial effects on acute lung injury induced by phosgene in rats due to the inhibiting MMP-9.     

慢性间断性酒精暴露大鼠海马组织MMP-9的表达及神经元突触超微结构改变

目的探讨慢性间断性酒精暴露(CIE)大鼠海马组织中MMP-9的表达水平及海马区突触超微结构的改变。方法将42只6周龄雄性SD大鼠随机分为染毒组和对照组,每组21只。染毒组大鼠间断性灌胃给予酒精4 g/(kg·d),灌胃2 d,戒断2 d,直至第28天。对照组大鼠给予等热量麦芽糖7 g/(kg·d)。实验期间测量大鼠体重、顶空气相色谱法测定血清酒精浓度。第0、26和28天时,每组随机处死7只大鼠,取海马组织,实时荧光定量PCR、免疫蛋白印迹法检测海马组织MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平,透射电镜观察海马区突触超微结构并定量分析突触结构参数。结果染毒组大鼠血清酒精浓度达到810 mg/L,对照组血清未检出。暴露第26和28天时,与对照组相比,染毒组海马中MMP-9 m RNA的表达水平明显升高(P0.05)。染毒组海马中MMP-9蛋白的表达量显著高于对照组(P0.05),active MMP-9的表达量在第26和第28天时分别升高2.46倍和2.16倍,pro MMP-9蛋白表达量第26和第28天时分别升高1.65倍和1.49倍,总体(total)-MMP-9蛋白表达量在第26和第28天时较对照组分别升高2.07倍和1.82倍。透射电镜结果显示,与对照组相比,染毒组海马突触后膜致密物厚度、突触界面曲率明显增加(P0.05),突触间隙略增大,但差异无统计学意义。结论慢性间断性酒精暴露可能通过改变突触超微结构从而导致大鼠海马区MMP-9表达升高。本研究为探索MMP-9在酒精依赖过程中的作用提供了新的实验依据。     

急性百草枯中毒大鼠氧化应激水平及二巯丙磺钠的作用

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠体内氧化应激水平及二巯丙磺钠(Na-DMPS)的作用.方法 80只雄性SD大鼠随机分为正常对照组:8只;Na-DMPS对照组:8只;PQ染毒组:32只(腹腔注射质量分数为1%的PQ溶液20 mg/kg);Na-DMPS保护组:32只.正常对照组及Na-DMPS对照组于1 d处死,PQ组及NA-DMPS保护组于染毒后6h及1、3、7d处死,留取血清、肺泡灌洗液(BALF)及肺组织,检测血清、BALF及肺组织匀浆中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活力,血清、BALF中谷胱甘肽(GSH)含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织Nrf2基因表达水平.结果 与正常对照组相比,PQ中毒组和Na-DMPS保护组血清、BALF、肺组织匀浆中MDA含量均升高,CAT活力和GSH含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与相应时点PQ染毒组比较,Na-DMPS保护组6 h、1 d时血清、BALF及肺组织匀浆中MDA含量均明显降低,6 h及1、3 d时血清,1、3 d时BALF和肺组织匀浆中CAT活力明显增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).与同时间点PQ染毒组比较,Na-DMPS保护组6 h、3 d时血清中GSH[(730.07±16.23)、(793.66±7.40)mg/L]和1、3 d时BALF中GSH[(609.75±6.74)、(631.83±12.03)mg/L]明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).1、3、7d时PQ染毒组Nrf2mRNA表达分别为(0.710±0.061)、(1.023±0.158)、(0.969±0.046),Na-DMPS保护组Nrf2mRNA表达分别为(1.005±0.060)、(1.464±0.166)、(1.066±0.191),明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与PQ染毒组比较,1、3 d时Na-DMPS保护组Nrf2mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Na-DMPS可降低PQ中毒大鼠体内MDA含量,增加的CAT活力,增加GSH含量及NRF2 mRNA的表达,促进体内氧化-抗氧化系统的平衡,具有保护作用.     

蓝莓对免疫性肝纤维化大鼠HGF表达影响

目的观察蓝莓对免疫性肝纤维化大鼠肝细胞生长因子(HGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响。方法 60只健康清洁级Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、蓝莓低、中、高剂量组、鳖甲软肝片组,除对照组外,其余各组大鼠腹腔注射猪血清制备大鼠肝纤维化模型,各蓝莓组在造模同时分别给予不同浓度蓝莓原浆,鳖甲软肝片组用复方鳖甲软肝片灌胃,1次/d,共12周;采用实时荧光定量RT–PCR和免疫组织化学法检测大鼠肝组织HGF、MMP-9以及TIMP-2 mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,肝纤维化模型组HGF、MMP-9、TIMP-2的mRNA水平及蛋白表达升高;与模型组比较,中、高剂量蓝莓组HGF mRNA及蛋白表达[(634.9±61.2)、(637.7±68.2)和(31.8±3.0)、(31.2±4.3)]与MMP-9 mRNA及蛋白表达[(359.1±29.5)、(361.4±27.1)和(39.4±4.0)、(38.5±3.7)]明显升高,TIMP-2 mRNA及蛋白表达[(426.0±16.7)、(431.3±33.0)和(41.6±6.2)、(37.3±4.3)]明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化有一定预防作用,其机制可能与上调HGF、MMP-9,下调TIMP-2表达有关。     

PDTC对百草枯致肺损伤大鼠TGF-β1及MMP-2和TIMP-1表达的影响

目的 探讨四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine Dithiocarbamate,PDTC)对百草枯(paraquat,PQ)致肺损伤大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1)表达的影响.方法 54只SD大鼠随机分为对照组(生理盐水组)、单纯染毒组(4个组)和干预组(4个组).除对照组外,各组均一次性灌胃PQ40mg/kg染毒,PDTC干预组在PQ染毒后立即一次性腹腔注射PDTC 120 mg/kg.在染毒后3、7、14、21 d各取1组动物,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法及荧光定量PCR法检测肺组织中TGF-β1、MMP-2和TIMP-1基因的表达,并观察肺组织病理改变.结果 与对照组相比.染毒组大鼠血浆TGF-β1蛋白、肺组织TGF-β1、MMP-2mRNA表达随时问延长呈现先升高后降低趋势,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),TIMP-1表达持续增高,差异有统计学意义(P<0.01).PDTC干预组3、14 d TGF-β1mRNA表达分别为0.54±0.08、0.72±0.04,7、14 dMMP-2 mRNA表达分别为1.62±0.50、1.97±0.34,7、21 d TIMP.1 mRNA表达分别为1.79±0.21、2.00±0.34,与单纯染毒组相比,均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 PDTC对肺损伤大鼠不同时期肺组织中TGF-β1、MMP-2及TIMP-1的mRNA表达均有一定的下调作用,可能是通过减轻中毒早期炎症的损伤、调整MMPs/TIMPs间的平衡,从而延缓肺纤维化的进程.     

百草枯中毒大鼠肺组织血栓调节蛋白和内皮细胞蛋白C受体表达的变化及二巯丙磺钠的作用

目的 观察急性百草枯(paraquat,PQ)中毒大鼠肺组织中血栓调节蛋白(thmmbomodulin,TM)及内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)mRNA表达的变化及二巯丙磺钠(Na-DMPS)的十预作用.方法 80只雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(8只);Na-DMPS对照组(8只,腹腔注射200 mg/kgNa-DMPS);PQ染毒组,32只,腹腔注射体积分数为1%的PQ溶液(20mg/kg)];Na-DMPS保护组[32只,腹腔注射200 mg/kg Na-DMPS 15 min后再腹腔注射体积分数为1%的PQ溶液(20 mg/kg)].检测PQ染毒组及Na-DMPS保护组染毒后6 h及1、3、7 d肺组织中TM mRNA、EPCRmRNA的表达,并观察大鼠肺组织的病理学变化.结果 PQ染毒组染毒后3 d内炎性细胞(如中性粒细胞、淋巴细胞等)浸润明显,伴充血水肿;Na-DMPS保护组炎性细胞浸润较PQ染毒组少,充血水肿轻.与对照组相比,PQ染毒组及Na-DMPS保护组大鼠肺组织中TM mRNA、EPCR mRNA的表达增强,在6 h达高峰,1 d开始下降,7 d降至正常水平.Na-DMPS保护组6 h及1 d TM mRNA表达分别为1.071±0.097、1.055±0.051,与PQ染毒组比较,明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);Na-DMPS保护组6 h及1 d EPCR mRNA表达分别为0.678±0.005、0.650±0.007,与PQ染毒组比较,明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 大鼠急性PQ中毒后肺组织中TM mRNA、EPCRmRNA的表达升高,预防性应用Na-DMPS后,TM mRNA、EPCR mRNA的表达降低.     

PDTC对百草枯致肺纤维化大鼠结缔组织生长因子及Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的动态变化及四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的干预效果,探讨PQ致肺纤维化机制及PDTC干预作用.方法 SD大鼠随机分为对照组(6只)、PQ染毒组(56只)、PDTC干预组(46只).染毒组和干预组给予PQ(80 mg/kg)一次性灌胃后2h,染毒组给予等量生理盐水腹腔注射,PDTC干预组给予PDTC(100mg/kg)一次性腹腔注射;对照组给予生理盐水1 ml/kg灌胃后2h,给予等量生理盐水腹腔注射.于不同处理后1、3、7、14、25、56 d蛋白免疫印迹法(Western blot)测定大鼠肺组织CTGF蛋白表达;实时荧光定量多聚酶链式反应(real-time PCR)测定CTGF、Col Ⅰ、ColⅢmRNA表达水平;同时测定肺组织羟脯氨酸(hyp)含量,观察中毒大鼠的肺组织病理变化.结果 染毒组大鼠肺组织CTGF蛋白表达随时间延长而逐渐升高,3～14d升高幅度缓慢,28～56d增幅较大,各时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).染毒组大鼠肺组织CTGF mRNA表达水平于染毒后1d即明显升高,3～14d表达迅速升高,28～56 d维持在较高水平,各时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).染毒组染毒后1、3 d Col Ⅰ mRNA表达无明显变化,7d表达略微增强,14～56 d水平大幅度升高,与对照组比较,7～56 d mRNA水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);染毒组ColⅢmRNA水平于染毒后1d即开始升高,7d达到高峰,之后呈下降趋势,各时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);Masson染色可见染毒后14～28 d成纤维细胞大量增殖,胶原纤维数量逐渐增多.与染毒组比较,PDTC干预组大鼠肺组织CTGF蛋白表达降低、CTGF、Col Ⅰ、ColⅢmRNA表达下调,相应时点的差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 CTGF表达持续增高;可能通过上调Col Ⅰ、ColⅢ转录水平,增加胶原分泌和基质合成,在PQ所致肺纤维化中起重要作用;PDTC抑制了上述因子的表达,可以减轻PQ中毒大鼠的肺损伤.     

盐酸戊乙奎醚治疗百草枯急性肺损伤的实验研究

目的 研究盐酸戊乙奎醚注射液(长托宁)对百草枯(PQ)急性肺损伤的干预作用及其机制.方法 选取80只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组(10只)、100 mg/kg PQ染毒组(10只)、100 mg/kg PQ染毒+33 μg/kg长托宁治疗组(30只)、100 mg/kg PQ染毒+66μg/kg长托宁治疗组(30只).2个治疗组分别于给药后的36、72 h及7 d处死.HE染色行肺组织病理学检查.取肺组织检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、小窝蛋白-1、羟脯氨酸(HYP),取血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)进行内皮素(ET)的检测.结果 病理学检查证实大鼠急性肺损伤模型复制成功.染毒组大鼠肺组织中MMP-2、HYP及血清、BALF中ET含量分别为(1.77±0.40)μg/g、(2.91±0.79)μg/g、(505.23±124.69)μg/ml、(640.38±136.60)μg/ml,均高于对照组[分别为(0.95±0.66)μg/g、(1.48±0.69)μg/g、(95.48±46.01)μg/ml、(200.40±88.39)μg/ml]差异均有统计学意义(P<0.05);长托宁治疗组的上述各指标均较染毒组下降,差异亦有统计学意义(P<0.05).染毒组大鼠肺组织中小窝蛋白-1含量为(1.77±0.82)μg/g,明显低于对照组[(5.39±1.68)μg/g],差异有统计学意义(P<0.05);长托宁治疗组的小窝蛋白-1含量均高于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 长托宁可降低PQ染毒大鼠肺组织MMP-2、HYP以及血清和BALF中ET的含量,提高小窝蛋白-1的含量,进一步减轻百草枯所致的肺损伤.     

阿托伐他汀对百草枯中毒损伤肺组织MMP-9及TIMP-1表达的调控

目的 研究阿托伐他汀对大鼠百草枯中毒所致肺损伤的保护作用及其对基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs)的影响。 方法 取45只雄性Wister大鼠,随机数字表法分为对照组、染毒组、治疗组,每组各15只。染毒组及治疗组均以百草枯50 mg/kg灌胃建立大鼠肺纤维化模型;治疗组每日给予阿托伐他汀20 mg/kg。分组后分别于灌胃7、14、28 d后观察大鼠一般情况并解剖,取肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,光镜观察。用免疫组化、RT-PCR、Western-blot等方法检测肺组织中MMP-9及TIMP-1水平。用RT-PCR法检测肺组织成纤维细胞中MMP-9及TIMP-1水平。用ELISA法检测血清中MMP-9及TIMP-1水平。 结果 HE染色结果显示,染毒组有明显的肺损伤,治疗组肺损伤较染毒组减轻。治疗组肺组织中MMP-9、TIMP-1表达量高于正常对照组,但低于染毒组。染毒组动物血清中的MMP-9的浓度在肺泡炎症阶段(7 d)最高,14 d、28 d后呈下降趋势,但均高于治疗组。治疗组血清中的MMP-9的浓度低于染毒组,但差异无统计学意义(P>0.05),相同时段三组TIMP-1浓度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。各组动物肺组织成纤维细胞中,治疗组表达量低于染毒组,高于对照组。 结论 阿托伐他汀具有抑制百草枯中毒大鼠肺内MMP-9、TIMP-1的表达上调的作用。阿托伐他汀对血液中系统分泌的MMP-9、TIMP-1的浓度无显著影响。     

大气混合污染物对大鼠肺组织CC16及细胞因子的影响

目的测定大气污染物对大鼠肺组织CC16、TNF-α和IL-6的mRNA表达影响。方法用日本产低流量PM10空气采样器采集PM10颗粒物,采样滤膜用生理盐水超声震荡洗脱,混悬液定容为15mg/ml。48只体重为200~240g Wistar大鼠随机分为3个实验组和1个对照组。实验组大鼠分别气管注入15mg/ml PM10的生理盐水混悬液1ml,对照组大鼠注入1ml生理盐水。次日,实验组大鼠静态吸入浓度分别为15、12、400mg/m3的SO2、NO2、CO空气混合气,每天吸入2h,对照组吸入正常空气。于吸入气体污染物1天、7天和30天后次日分别处死实验组和对照组大鼠,取肺组织,采用RT-PCR方法测定TNF-α、IL-6和CC16的mRNA表达水平;采用免疫组化和Western blotting测定肺和BALF中CC16的水平。结果吸入大气污染物组在吸入后1天和7天其肺组织CC16 mRNA的表达量明显低于对照组;细胞因子TNF-α和IL-6 mRNA表达增强,高于对照组,并于染毒初期即染毒第1天和第7天增高明显,染毒第30天,又呈下降趋势。免疫组化检测显示,实验组大鼠肺组织CC16表达水平在染毒后1天,7天时显著高于对照组,而在30天时低于对照组。BALF中CC16表现为1天和7天时显著低于对照和30天组。结论大气污染物作用于大鼠呼吸系统后,大鼠肺组织和BALFCC16表达量下降,TNF-α和IL-6 mRNA表达增强,并且在污染物作用早期变化明显。     

慢性铝暴露对大鼠海马钙调蛋白及cAMP反应元件结合蛋白的影响

目的 探讨慢性铝暴露对大鼠海马组织中钙调蛋白(calmodulin,CaM)及cAMP反应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)mRNA和蛋白表达的影响.方法 将40只初断乳清洁级Wistar雄性大鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和2、4、6 mg/ml三氯化铝染毒组,每组10只.采用自由饮水方式连续染毒3个月.检测大鼠脑组织中铝含量;采用Western blot方法检测大鼠海马组织中CaM和CREB蛋白的表达水平;采用RT-PCR方法检测海马组织中CaM和CREB mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,各浓度铝染毒组大鼠脑组织铝含量及CaM mRNA和蛋白的表达水平均升高,CREB mRNA和蛋白的表达水平均下降,差异有统计学意义(P＜0.05).随着铝染毒浓度的升高,大鼠脑组织铝含量及CaM mRNA和蛋白的表达水平均呈上升趋势,CREB mRNA和蛋白的表达水平均呈下降趋势.结论 慢性铝暴露可促进大鼠海马神经元CaM mRNA和蛋白的表达,抑制CREB mRNA和蛋白的表达.     

慢性铝暴露对雄性大鼠海马组织中TLR2蛋白及其mRNA表达的影响

目的 研究慢性铝暴露对大鼠记忆能力及海马组织中天然免疫关键蛋白Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)蛋白及其mRNA表达的影响.方法 将80只断乳后21 d清洁级雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和暴露于2、4和6 mg/ml氯化铝的染毒组,每组20只.采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒3个月.采用Morris水迷宫试验测定大鼠的记忆能力,采用Western Blot法和逆转录PCR(RT-PCR)法分别检测海马组织中TLR2蛋白及其mRNA的表达水平.结果 与对照组比较,各浓度氯化铝染毒组大鼠穿越平台次数和在原平台象限搜索距离占总距离的百分比均下降,差异有统计学意义(P<0.05);与2mg/ml组比较,6mg/ml氯化铝染毒组大鼠穿越平台次数和在原平台象限搜索距离占总距离的百分比均下降,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,各浓度氯化铝染毒组大鼠海马组织中TLR2蛋白及其mRNA表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05);与2 mg/ml组比较,4和6 mg/ml氯化铝染毒组大鼠海马组织中TLR2蛋白及其mRNA表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05);随着氯化铝染毒浓度的升高,大鼠海马组织中TLR2蛋白及其mRNA表达水平呈先升高后降低的趋势.结论 慢性铝暴露可损伤大鼠的记忆能力,这可能与海马组织中TLR2蛋白及其mRNA的表达增高有关.     

N-乙酰-L-半胱氨酸对急性SiO2染尘肺组织基质金属蛋白酶表达的影响

目的观察N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)对急性SiO2染尘肺组织基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响。方法清洁级Wistar大鼠随机分为3组,对照组经气管注入生理盐水,损伤组和干预组注入SiO2粉尘悬液,其中干预组在注入SiO2粉尘悬液前1 h用NAC预处理。3组大鼠分别在染尘后第1,3,7,14,28天取出肺组织,应用免疫组织化学和RT-PCR方法观察其MMP-2和MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化。结果损伤组肺组织MMP-2和MMP-9表达均较对照组增高。MMP-2蛋白表达在各时间点分别是对照组的1.440,1.811,2.379,1.672和1.412倍,差异均有统计学意义(P<0.01);mRNA表达分别是对照组的2.061,2.261,2.931,2.000和1.615倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。MMP-9蛋白在各时间点分别是对照组的1.450,1.661,2.186,1.563和1.526倍,差异均有统计学意义(P<0.01);mRNA表达在第1,3,7,14天高于对照组,分别是对照组的1.676,2.027,2.584和2.178倍,差异均有统计学意义(P<0.01)。干预组肺组织MMP-2蛋白及mRNA表达在各时间点均低于损伤组,高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。MMP-9蛋白表达在各时间点低于损伤组,高于对照组;mRNA表达在第1,3,7,14天低于损伤组,高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论应用NAC可以部分抑制急性矽尘染毒肺组织表达MMP-2和MMP-9。     

急性百草枯中毒大鼠肺组织炎症因子表达的变化及意义

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织中炎症因子表达的变化,探讨早期及晚期炎症因子在急性PQ中毒肺损伤中的作用.方法 50只雄性SD大鼠随机分为2组:正常对照组(10只,生理盐水腹腔注射),PQ染毒组(40只,腹腔注射体积分数为1%的PQ溶液,20 mg/kg).PQ组于染毒后6 h及1、3、7 d处死,正常对照组于处理后1 d处死,检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)mRNA的表达,并观察大鼠的中毒表现及肺组织的病理改变.结果 PQ染毒组大鼠肺组织病理表现为早期充血水肿明显,大量炎性细胞浸润.与正常对照组相比,PQ染毒组大鼠肺组织中TNF-α、IL-10、HMGB-1 mRNA的表达在各时间点均有不同程度升高.PQ染毒组6 h和1 d时TNF-α mRNA表达分别为0.740±0.100和0.584±0.049,1、3 d时IL-10mRNA表达分别为0.551±0.016和0.524±0.010,6 h及1、3 d时HMGB-1 mRNA表达分别为0.695±0.060、0.87±0.154和0.819±0.188,与对照组比较,均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 大鼠急性PQ中毒后肺组织中TNF-α、IL-10及HMGB-1 mRNA的表达明显上调,早期及晚期炎症因子均参与PQ急性中毒肺损伤的致病过程.     

硫化氢急性中毒大鼠肺组织氧化应激和Nrf2基因表达及乌司他丁的影响

目的 研究硫化氢急性中毒大鼠肺组织氧化应激水平及核转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)基因表达的变化及乌司他丁(ulinastatin,UTI)的影响.方法 将96只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组(8只)、UTI对照组(8只)、硫化氢染毒组(40只)、UTI干预组(40只).正常对照组和UTI对照组大鼠于染毒柜内吸人与硫化氢同样流量的空气1h,UTI对照组大鼠立即腹腔注射UTI(10万U/kg),2h后处死.硫化氢染毒组和UTI干预组大鼠在染毒柜内吸入硫化氢(浓度为283.515 mg/m3)1h,UTI干预组大鼠立即腹腔注射UTI(10万U/kg),两组大鼠分别于2、6、12、24、48 h处死,每组8只.检测肺组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)活力和谷胱甘肽(GSH)含量及Nrf2 mRNA的表达,观察肺组织病理学改变并行肺损伤评分.结果 与正常对照组比较,2、6、12 h硫化氢染毒组大鼠肺组织中SOD、CAT活力和GSH含量及2、6、12、24h GSH-Px活力明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);2、6、12、24h硫化氢染毒组大鼠肺组织中MDA含量明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).与相应时间点硫化氢染毒组比较,UTI干预组6、12h时GSH-Px活力,2、6、12h时CAT活力,2、6、12、24h时GSH含量及2、6、12、24、48 h时SOD活力明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);UTI干预组2、6、12h时MDA含量明显低于相应时间点硫化氧染毒组,差异有统计学意义(P＜0.01).染毒后2、6、12、24 h,硫化氢染毒组肺组织中Nrf2 mRNA表达(0.314±0.011、0.269±0.010、0.246±0.011、0.221士0.018)明显高于正常对照组(0.149±0.012),差异有统计学意义(P＜0.01);与相应时间点硫化氢染毒组比较,2、6、12、24、48 h UTI干预组的Nrf2 mRNA表达(0.383:±-0.017、0.377±-0.014、0.425±0.017、0.407±0.011、0.381±0.010)明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).光学显微镜下观察可见,硫化氢染毒组染毒后24h大鼠肺组织损害明显,UTI干预组大鼠肺损伤较硫化氢染毒组有所减轻.UTI干预组12、24、48 h时肺损伤评分明显低于相应时间点硫化氢染毒组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 氧化应激和Nrf2活化是参与硫化氢中毒急性肺损伤的重要因素,UTI能抑制氧自由基产生,纠正氧化还原失衡,上调Nrf2 mRNA表达水平,减轻氧化应激损伤,对肺组织损伤有保护作用.