阴道和宫颈涂片镜检诊断细菌性阴道病

确定阴道涂片和宫颈涂片检查诊断细菌性阴道病的敏感性和特异性。方法对１９６例（包括９４例细菌性阴道病）育龄期未孕患者进行阴道分泌物涂片及宫颈涂片检查，显微镜下观察计数细菌形态及数量。结果以临床诊断为标准，阴道涂片和宫颈涂片诊断细菌性阴道病的敏感性和特异性分别为９４．７％（８９／９４）、９８．０％（１００／１０２）和８５．１％（８０／９４）、９５．１％（９７／１０２）。细菌性阴道病的涂片特征为阴道加德纳菌、类杆菌形态及革兰变异弯曲弧菌形态的小细菌占优势，并且乳酸杆菌形态细菌缺乏。结论应用阴道涂片及宫颈涂片检查诊断细菌性阴道病，使筛查和及时治疗细菌性阴道病成为可能。     

阴道分泌物910例检验结果分析

目的通过对910例正常健康人群妇女体检中阴道分泌物涂片的检验结果分析,了解病原菌检出率、病原菌分布及阴道分泌物清洁度情况。方法将910例患者按年龄分为25～34、35～44、45～54、≥55岁等四组采集阴道分泌物行革兰染色在显微镜下查白假丝酵母菌、滴虫、加德纳菌。结果910例阴道分泌物涂片165例检出病原菌,阳性检出率18.13%;以加德纳菌为主,占14.07%,其次是假丝酵母菌和滴虫分别为3.74%和0.22%。各年龄组（25～34岁组,35～44岁组,45～54岁组,≥55岁组）合计阴道炎的发生率分别为28.95%（22/76）、45.14%（79/175）、57.60%（216/375）、67.61%（192/284）,细菌性阴道病的发生率45～54岁组最高（16.80%）,非特异性阴道炎的发生率≥55岁组最高（52.11%）。清洁度Ⅳ度时病原菌检出率最高,其次为Ⅲ度、Ⅱ度,清洁度为Ⅰ度时未检出病原菌。结论细菌性阴道病和非特异性阴道炎是常见阴道感染性疾病,围绝经期及绝经期女性多见。     

女性生殖道感染患者阴道加德纳菌的检测及耐药性分析

目的:为了解本地区女性生殖道阴道加德纳菌(GV)感染情况以及阴道加德纳菌对抗菌药物的敏感性,探讨阴道加德纳菌实验室检测方法的应用效果,为细菌性阴道病的诊断和治疗提供切实可行的检测依据.方法:阴道加德纳菌分离培养鉴定和K-B法抗菌药物敏感试验、生殖道分泌物常规检查、涂片革兰染色找线索细胞、BV试验、胺试验.结果:156例阴道病患者GV的总检出率为39.7%,其中100例宫颈炎患者GV的检出率为41%;56例阴道炎患者的GV检出率为37.5%;健康妇女GV检出率为8.3%.抗菌药敏感率依次为头孢噻肟98.5%(64/65)、氧哌嗪青霉素93.8%(61/65)、先锋霉素V92.3%(60/65)、氨苄青霉素84.6%(55/65)、红霉素69.2%(45/65)、林可霉素52.3%(34/65)、环丙沙星38.5%(25/65)、庆大霉素32.3%(21/65).结论:细菌性阴道病与加德纳菌感染密切相关;GV的分离率与阴道分泌物的pH值、白细胞数、取材部位相关;本地区BV患者分离出的GV对头孢类、青霉素类抗菌药物敏感,而对喹诺酮类、氨基糠苷类抗菌药物耐药性较高.     

白带涂片革兰氏染色法对细菌性阴道病诊断的探讨

目的探讨对细菌性阴道病检测方法以降低漏诊率。方法白带涂片采用“金标准”Amsel、s法同时结合本室建立的革兰染色法进行检测。结果200例受检者Amsel、s标准法检出患者40例、革兰染色查出线索细胞31例，分别占20％和15．5％。计算乳酸杆菌和加德纳菌的数量变化阳性56例、临界状态10例，分别占28．0％和5．0％；乳酸杆菌和加德纳菌的数量变化以Amsel、s法为标准，革兰染色计算两种细菌的数量变化诊断BV的敏感性为92．5％，特异性88．1％。阳性检出率明显高于Amsel、s标准法——（x^2=10．2，P〈0．005）。结论目前使用传统的Amsel、s标准法因某些因素干扰而致漏诊，我院采用革兰氏染色计算乳酸杆菌和加德纳菌的数量变化可降低细菌性阴道病的漏诊率。     

阴道加德纳菌的分离与快速细菌性阴道病的检测方法比较

目的比较阴道加德纳菌的分离与快速细菌性阴道病的检测方法。方法应用改良血琼脂培养基,对326例非特异性阴道炎患者的阴道分泌物进行阴道加德纳菌分离培养,同时与快速细菌性阴道病的检测新方法BV-fast及BV-blue进行比较。结果 分离培养方法检出该菌75株,检出率为23.00％;BV-fast方法的检出率为25.46％(83/326);BV-blue方法的检出率为23.92％(78/326);BV-fast方法检测率略高,将BV-fast与BV-blue和分离培养方法比较,结果差异无显著性,P>0.05。结论临床上分离培养、BV-fast、BV-blue均可诊断细菌性阴道病,但BV-fast更简便。     

聚合酶链反应在检测阴道细菌中的临床应用分析

目的：研究聚合酶链反应在检测阴道细菌中的临床应用。方法患有细菌性阴道炎的妇女,为感染组(n=80);对照组为在我院进行健康体检的妇女(n=81),分别用实时荧光定量PCR方法与革兰染色方法检测阴道分泌物中的加德纳菌,比较两种方法加德纳菌的检出情况。结果对80例感染组和81例对照组采样革兰染色法检测,阳性率分别为73.75%和7.4%;用PCR荧光定量法对2组进行检测,阳性率分别为93.75%和8.64%。 PCR荧光定量检测与革兰染色法检测研究组与对照组研究对象加德纳菌阳性率,2种方法检测结果差异均有统计学意义(χ2=115.7, P<0.001;χ2=73.6, P<0.001)。在细菌性阴道炎患者中检测加德纳菌,将荧光定量PCR和革兰染色法检测结果进行比较,荧光定量PCR检测阳性率显著高于培养法(χ2=11.76, P<0.001)。结论实时荧光定量PCR方法检测加德纳菌的准确性高、方法简单易操作,可满足临床诊断细菌性阴道炎的需要,值得在临床上推广应用。     

革兰染色法在妊娠期细菌性阴道病诊断中的应用分析

目的:观察革兰染色法在妊娠期细菌性阴道病诊断中的应用价值。方法:选取妊娠期细菌性阴道病孕妇40例为观察组,并选取健康检查的生育年龄孕妇40例为对照组,分别采用革兰染色法与PCR法诊断加德纳菌的检出情况。结果:加德纳菌是妊娠期细菌性阴道病的重要感染病菌。两种诊断加德纳菌阳性率分别为:革兰染色法75.0%、PCR法85.0%,经χ2检验,两种检测方法阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:妊娠期细菌性阴道病是一种常见孕妇感染性疾病,而革兰染色法对其中的加德纳菌仍然具备很好的诊断价值,值得推广应用。     

460例阴道分泌物检测结果分析

目的通过对460例阴道分泌物检测结果分析，总结阴道炎主要类型以及病原体微生物主要种类。方法超高倍显微系统检测阴道毛滴虫、线索细胞及筛查支原体、衣原体，支原体、衣原体再通过试剂盒鉴定，Gram染色检出革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌、革兰阴性双球菌、真菌菌丝、孢子体，真菌及细菌经培养生化反应鉴定。结果阴道分泌物阳性检出率为88．3％，支原体(包括人型支原体、解脲支原体)、阴道加德纳菌、念珠菌检出率分别为32．7％、29．8％、24．8％。结论本地区阴道炎以非淋菌性阴道炎、细菌性阴道炎、真菌性阴道炎为主，病原微生物以支原体、阴道加德纳菌、念珠菌为主。     

实时荧光定量PCR检测阴道加德纳菌的方法与应用

目的：建立检测阴道加德纳菌的实时荧光定量PCR方法,用于细菌性阴道病的诊断。方法：按照Amsel诊断标准诊断细菌性阴道病;定性PCR检测患者阴道分泌物中的阴道加德纳菌;实时荧光定量PCR测定患者阴道分泌物中的阴道加德纳菌的DNA含量,同时测定标本中总的细菌16SrRNA的DNA含量进行校正,即用阴道加德纳菌的DNA含量／16Sr RNA的DNA含量比值来表示阴道加德纳菌的相对含量。用受试者工作曲线（ROC）评价对细菌性阴道病的诊断价值。结果：定性PCR的特异度为31．9％,敏感度为93．2％。实时荧光定量PCR检测阴道加德纳菌含量的线性范围1×10～1×10^5拷贝数／ml。阴道加德纳菌在细菌性阴道病中的相对含量为0．5613400,明显高于霉菌性阴道炎（P〈0．01）、其他阴道炎（P〈0．01）及健康体检者（P〈0．01）。但与滴虫性阴道炎无明显差异（P〉0．05）。ROC曲线分析结果显示,曲线下面积（AUC．ROC）为0．909,当阴道加德纳菌的DNA含量／16Sr RNA的DNA含量的截断值为0．1026035时,其诊断细菌性阴道病的总体敏感度和特异度分别为92．9％和80．3％。结论：实时荧光定量PCR检测阴道加德纳菌的方法敏感度和特异度较高,准确性和重复性良好。对细菌性阴道病的诊断有一定的临床应用价值。     

痰热清治疗轻型肾综合征出血热的临床观察

细菌性阴道病是近年来被确定与性传播有关的疾病,其病原体为阴道加德纳菌,随着性病病原体感染谱的变化,发病率有逐年增高的趋势[1].阴道加德纳菌的检测越来越引起人们的重视,寻找阴道分泌物中的线索细胞是诊断加德纳菌阴道病的重要指标. 在长期的临床检验工作中我们发现检验报告和医生的诊断常常不符,为此作了统计:医生疑为加德纳细菌阴道病50例,而实验室查出线索细胞为19例,细菌性阴道病主要病原体的检出率不高,符合率为38 %.对于这个问题我们和许多妇科医生及同事进行了探讨,认为原因有以下几点.     

EMA-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的 将叠氮溴化乙锭 （ethidium monoazide bromide,EMA）与PCR技术相结合,建立一种有效、快速检测活肠出血性大肠杆菌O157∶H7的方法。方法 以rfbE为PCR检测靶基因,O157∶H7培养物经EMA处理后制备模板进行PCR检测,并对EMA使用浓度、作用时间等进行优化。结果 不抑制O157∶H7活菌PCR扩增的最大EMA浓度为10 μg/mL;抑制2×107 CFU/mL死菌PCR反应的最小EMA浓度为0.5 μg/mL;该法对O157∶H7检测的灵敏度为2×104 CFU/mL,结果显示能检出混合体系中含有的1%的活菌。结论 EMA-PCR技术能有效检测活的O157∶H7,在突发公共卫生事件的快速检测中具有良好的应用前景。     

聚合酶链反应技术早期诊断关节结核

目的：早期诊断关节结核。方法：应用聚合酶链反应技术对３３例共３８个关节的关节液行结核杆菌检测;同时将所取关节液抗酸染色涂片镜检,以病理诊断为金标准并比较基华 病理确诊的关节结核有１７个,其中ＰＣＲ法与涂片法出的阳怀数分别为１２个和３个,ＰＣＲ法的灵敏度为７０．６％,而涂片法仅为１７．６％,经统计学处理差异有显著性意义。３８个关节中,ＰＣＲ法与涂法检出的阳性数分别为１４个和５个,ＰＣＲ法和涂片法的     

新型隐球菌聚合酶链反应的检测方法

目的：从基因角度为新型隐球菌性脑膜炎的快速诊断提供一种新方法．方法：应用聚合酶链反应技术检测和鉴定脑脊液中的新型隐球菌特异性基因．结果：对引物的特异性试验证明具有较高的特异；对引物的敏感性试验可扩增出１０个菌细胞；用墨汁复染、分离培养、ＰＣＲ技术，对１５例脑膜炎患者的脑脊液同时进行检测，结果分别为：６６．６％、８６．６％、９３．３％．结论：以新型隐球菌特异性基因片段进行体外扩增，对新型隐球菌性脑膜炎的早期诊断具有重要的临床意义．     

连接酶链反应结合荧光PCR法检测UGT1A1*28基因多态性

目的: 建立一种连接酶链反应结合荧光PCR的方法,检测结肠癌患者外周血UGT1A1*28基因多态性,并探讨其临床应用价值。方法: 设计连接酶荧光PCR引物和探针,首先通过连接酶反应,然后结合荧光PCR技术检测UGT1A1*28基因多态性,构建标准品评判该体系的特异性和敏感性,并检测50例结肠癌患者外周血标本,与DNA测序进行平行比较。结果： 此方法能准确地区分UGT1A1*28基因TA6/6、TA7/7及TA6/7基因型,且最低可检测5 ng人基因组DNA, 50例结肠癌患者外周血标本的检测结果与测序结果一致。 结论： 连接酶链反应结合荧光PCR可准确检测出UGT1A1*28基因多态性。     

Detection and amplification of Helicobacter pylori urease gene A in gastric biopsies by using nested polymerase (?)hain reaction

A nested polymerase chain reaction(N-PCR)for the spegific detection of Helicobacterpylori(H.pylori)was developed with two primer pairs(nested primers)derived from ureasegene A of H.pylori.The N-PCR was used to detect 21 different samples of H.pylori including20 clinical isolates and 1 reference strain NCTC 14126,but it was negative for other bacterialspecies,showing the N-PCR assay to be 100% specific.Tenfold serial dilution experiments re-vealed the detection of as little as 0.1 fg of H.pylori DNA by N-PCR.To evaluate the PCR as-say for clinical samples,gastric biopsies were tested with N-PCR,and the results were comparedwith those of culture,urease test and histologic examination(reference standard,RS).In 30biopsy specimens,H.pylori DNA sequences were detected by PCR in all of 20(100%)positivetissue and none of the 10 negative tissues.PCR is a specific and sensitive method that can detectthe presence of H.pylori without the need for culture and would have significant importance di-agnostically and epidemiologically.     

A study on detecting and identifying enteric pathogens with PCR

Objective To develop a rapid and definite diagnostic test of bacterial enteritis caused by pathogenic enterobacteria, the most frequent etiologic agent of infectious enteritis in the world.Methods A set of conventional PCR assays were applied to detect and identify salmonella, shigella,and E. coli O157:H7 directly from pure culture and fecal samples.The general primers of pathogenic enterobacteria were located on the uidA gene, which were found not only in E. coli nuclear acid, but also in Shigella and salmonella genes.Shigella primer was from ipaH gene whose coded invasive plasmid relative antigen existed both in plasmid and in genome.The primers of salmonella were designed from the 16SrRNA sequence.The primer of E.coli O157:H7 was taken from eaeA gene.Five random primers were selected for RAPD. The detection system included common PCR,semi-nested PCR and RAPD. Results This method was more sensitive, specific and efficient and its processing was rapid and simple. For example, the method could be used to specifically detect and identify salmonella, shigella, and E. coli O157:H7,and its sensitivity ranged from 3 to 50CFU, and its detection time was 4 hours. Conclusion This PCR method, therefore, can serve as a routine and practical protocol for detecting and identifying pathogenic microorganisms from clinical samples.     

PCR技术在猴免疫缺陷病毒(SIV)感染模型中的应用

目的(1)建立RT PCR方法,定性测定SIV感染猴血浆中病毒RNA,比较其与传统血浆病毒分离方法的敏感性;(2)建立DNA PCR方法,检测SIV感染猴外周血淋巴细胞(PBMCs)中的前病毒DNA。(3)检验DNA PCR和RNA PCR方法在猴SAIDS模型应用中的实用性和可操作性。方法用SIVmac251静脉感染恒河猴,定期采血,从血浆中提取病毒RNA,以RNA为模板通过RT PCR法扩增,凝胶电泳定性;从感染猴PBMC中提取带有整合的SIV前病毒DNA的细胞基因组DNA,巢式PCR扩增,凝胶电泳定性。结果DNA PCR和RNA PCR经两轮扩增后均得到一长度为477bp的特异条带,测序鉴定确为目的片段。9只实验猴感染SIV后7d,RNA PCR结果为79阳性,DNA PCR结果为100%阳性,而血浆病毒分离只有59阳性;此后一直到感染后的42d,RNA PCR和DNA PCR的结果一直为100%阳性,而血浆病毒分离阳性率在感染后35d下降到49,到42d时下降为零。结论PCR方法比病毒分离方法的敏感性高。尤其是DNA PCR,既可检测具有活跃病毒复制的受感染细胞,又可检测那些携带病毒处于转录休眠期的细胞,所以在感染的早期和中后期———血浆病毒水平较低的情况下或病毒处于潜伏感染的阶段,它作为猴艾滋病(SAIDS)模型病毒学指标之一有其必要性和重要性。这个指标的检测方法应该是较血浆病毒RNA检测更为敏感。     

多联实时荧光PCR检测几种重要肠道致病菌的实验研究

目的建立一种能同时检测志贺氏菌(Sh)、O139霍乱弧菌(O139VC)和空肠弯曲菌(CJ)的多联实时荧光PCR定量方法。方法根据Sh的ipaH基因序列、O139VC的wbfR基因序列、CJ的c基因序列的开放读码框(orf),分别利用ABI primer experess 2.0和DNAStar中的Primer Select软件设计出数对特异性的引物和探针,筛选出最佳的各组引物和探针组合,对引物、探针的浓度、Mg2 浓度、Taq酶的用量、反应条件等进行优化,从而建立了检测临床标本中Sh、O139VC和CJ的多联荧光PCR反应体系和检测方法。结果实验显示该方法具有特异性强,灵敏度高,均达到100copies/ml。结论多联实时荧光PCR方法可同时定量地检测临床标本中Sh、O139VC、CJ,结果显示快速简便,准确高效,有利于上述病原菌所致疾病的早期诊断和治疗。     

空肠弯曲菌套式PCR快速检测方法的建立与初步应用

目的建立套式PCR快速检测实验动物空肠弯曲菌的方法。方法根据GenBank数据库的空肠弯曲菌flaA基因设计2对引物，对空肠弯曲菌抽提DNA作PCR扩增及克隆测序。同时，对其他病原菌抽提核酸扩增，并对120份临床样品进行检测。结果空肠弯曲菌经2对引物分别扩增出1719bp和640bp片段，与预期大小一致。套式PCR检测的最低限度为10CFU。整个检测过程可在8h内完成。而其他病原菌未出现特异性扩增条带。采用套式PCR对121份临床样品进行检测，检出31份阳性，与传统的细菌分离方法完全一致。结论本研究建立的套式PCR方法具有很好的特异性和敏感性，可用于实验动物空肠弯曲菌的快速检测。     

聚合酶链反应技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒

目的建立聚合酶链反应(PCR)技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法。方法提取感染REV-T和脾坏死病毒(SNV)的SPF鸡胚成纤维细胞DNA为模板,利用前病毒长末端重复序列(LTR)区引物进行扩增。采集肿瘤病鸡,以及人工感染REV 28 d后鸡肝脏、脾脏、肾脏、心脏、胸腺、法氏囊等器官,进行扩增。同时将采集的脏器组织,进行HE染色和免疫组化试验(IHC)。结果REV-T感染的组织未检测出电泳条带,而SNV感染的细胞中检测到了一条300bp特异而清晰的电泳条带,而且SNV感染的鸡组织中,PCR方法检测到了特异的条带。通过HE染色和免疫组化技术观察到了肿瘤组织,肿瘤细胞的形态、分布。结论PCR检测REV更快捷,特异更好。