β1,4-半乳糖基转移酶I影响雪旺氏细胞增殖的机制

目的:探讨β1,4-半乳糖基转移酶I影响雪旺氏细胞增殖的机制。方法:将不同浓度的β-1,4-GalT-I表达质粒转染雪旺氏细胞,采用Westernblot方法检测增殖相关信号分子cyclinD1、p16INK4以及p27Kip1的表达水平,North-ernblot方法检测p19ARF的表达变化。结果:随着β-1,4-GalT-I在雪旺氏细胞中的表达增加,cyclinD1表达降低,而p16INK4a和p19ARF呈现相反的变化;p27Kip1变化不明显。结论:β-1,4-GalT-I影响雪旺氏细胞增殖可能与cyclinD1、p16INK4a和p19ARF介导的信号传导途径有关。     

β-1，4半乳糖基转移酶-Ⅰ对雪旺氏细胞增殖的影响

目的：探讨周围神经雪旺氏细胞表达β-1，4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1，4-galactosyltransferase Ⅰ，β-1，4-GalT-Ⅰ)对其增殖的影响。方法：构建正、反义β-1，4-GalT-Ⅰ表达质粒，将其转染到分离培养的雪旺氏细胞中；运用细胞计数分析转染细胞倍增时间、培养细胞3H-TdR掺入检测转染细胞增殖程度；应用流式细胞仪分析转染细胞的细胞周期变化。结果：转染正义β-1，4-GalT-Ⅰ后雪旺氏细胞的增殖受到抑制，且这种抑制作用随转染浓度增大而增强。而转染反义β-1，4-GalT-Ⅰ有相反的作用。转染正义β-1，4-GalT-Ⅰ后，雪旺氏细胞周期主要被阻滞在G1／G0期。结论：β-1，4-GalT-Ⅰ对雪旺氏细胞的增殖有抑制作用，可能在周围神经雪旺氏细胞的有序增殖过程中发挥重要作用。     

β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ影响雪旺细胞衰老的研究

目的:探讨β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ与雪旺细胞衰老的相关性.方法:以不同浓度的β-1,4-GalT-Ⅰ表达质粒转染雪旺细胞,观察衰老相关半乳糖苷酶染色情况.以Ha-Ras转染雪旺细胞诱导衰老,采用Northern blot 方法检测转染后不同时间β-1,4-GalT-Ⅰ表达变化.结果:随着转染β-1,4-GalT-Ⅰ表达质粒浓度的提高,细胞衰老相关半乳糖苷酶染色阳性率增高;随着Ha-Ras转染时间的延长,β-1,4-GalT-Ⅰ表达逐渐增高.结论:β-1,4-GalT-Ⅰ与雪旺细胞的衰老相关,并可能在周围神经雪旺细胞的增殖调节中发挥重要作用.     

细胞外信号调节激酶在脂多糖诱导内皮细胞β-1，4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用

目的:研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ)表达的调节作用。方法:应用ERK通路抑制剂U0126预处理人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)2 h,再用LPS刺激HUVECs 4 h,分别用RT-PCR和Western-blot方法检测β-1,4-GalT-ⅠmRNA及蛋白水平表达变化,并通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变。结果:U0126显著抑制LPS引起的HUVECsβ-1,4-GalT-Ⅰ表达的上调及其黏附能力的上词。结论:ERK信号转导通路可能参与调节LPS诱导的内皮细胞β-1,4-GalT-Ⅰ的表达,并影响内皮细胞的黏附能力。     

β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在大鼠脑损伤后的表达分析

目的：探讨脑损伤后β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ（β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ）及其催化合成的β-1,4-半乳糖苷键（β-1,4-galactosylated carbohydrate,Galβ1-4GlcNAc）糖链与炎症的相关性.方法：运用免疫印迹法检测β-1,4-GalT-Ⅰ及Galβ1-4GlcNAc糖链在大鼠术后大脑皮质中的表达情况;采用免疫荧光双标,观察β-1,4-GalT-Ⅰ及Galβ1-4GlcNAc糖链在大脑皮质中的细胞定位.结果：大鼠脑损伤后,大脑皮质中β-1,4-GalT-Ⅰ及Galβ1-4GlcNAc糖链的表达水平呈现时间依赖关系,脑损伤后β-1,4-GalT-Ⅰ表达逐渐增加并持续在较高的水平,Galβ1-4GlcNAc糖链表达呈动态变化过程,在炎症早期上调达到高峰后有所降低.β-1,4-GalT-Ⅰ及其催化合成的Galβ1-4GlcNAc糖链主要定位于大脑皮质的活化的小胶质细胞中.结论：β-1,4-GalT-Ⅰ及其催化合成的Galβ1-4GlcNAc糖链在正常大脑皮质中仅有少量表达,脑损伤后两者表达均明显增高;术后高表达的β-1,4-GalT-Ⅰ主要定位于小胶质细胞,这提示该分子可能参与炎症介导的小胶质细胞的生物学行为的改变.     

β-1,4半乳糖基转移酶-I对雪旺氏细胞增殖的影响

目的 :探讨周围神经雪旺氏细胞表达 β -1,4-半乳糖基转移酶 -Ⅰ (β -1,4-galactosyltransferaseⅠ ,β -1,4-GalT -Ⅰ )对其增殖的影响。方法 :构建正、反义 β -1,4-GalT -Ⅰ表达质粒 ,将其转染到分离培养的雪旺氏细胞中 ;运用细胞计数分析转染细胞倍增时间、培养细胞 3H -TdR掺入检测转染细胞增殖程度 ;应用流式细胞仪分析转染细胞的细胞周期变化。结果 :转染正义 β -1,4-GalT -Ⅰ后雪旺氏细胞的增殖受到抑制 ,且这种抑制作用随转染浓度增大而增强。而转染反义 β -1,4-GalT -Ⅰ有相反的作用。转染正义 β -1,4-GalT -Ⅰ后 ,雪旺氏细胞周期主要被阻滞在G1/G0期。 结论 :β -1,4-GalT -Ⅰ对雪旺氏细胞的增殖有抑制作用 ,可能在周围神经雪旺氏细胞的有序增殖过程中发挥重要作用     

小细胞肺癌p14ARF、p16INK4a蛋白表达及其临床意义

目的研究p14ARF、p16INK4a蛋白在小细胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)中的表达及其临床意义.方法应用免疫组织化学S-P方法检测24例SCLC癌组织标本中两种蛋白表达.结果 24例标本中,15例p14ARF蛋白表达阴性(62.50%),4例p16INK4a蛋白表达阴性(16.67%),3例p14ARF、p16INK4a蛋白表达均阴性(12.50%).p14ARF、p16INK4a蛋白阴性率均与患者性别、年龄、临床分期及淋巴结转移无显著性差异(P＞0.05).结论 SCLC中p14ARF、p16INK4a蛋白表达阴性是各自独立的事件,可能与SCLC的发生有关,其中p14ARF表达阴性占主要地位.     

益气化瘀补肾方对D-半乳糖诱导小鼠腰椎间盘衰老的影响

目的:观察益气化瘀补肾方对D-半乳糖诱导小鼠腰椎间盘衰老的影响。方法:8周龄雄性健康C57BL/6J小鼠30只,随机分为空白对照组、诱导盐水灌胃组及益气化瘀补肾方组。空白对照组皮下注射生理盐水,其余2组均皮下注射D-半乳糖复制腰椎间盘衰老模型;盐水灌胃组灌胃等容量生理盐水,益气化瘀补肾方组灌胃中药水溶液。连续给药10周后处死小鼠,取下腰部椎间盘,进行免疫组化分析以及实时定量RT-PCR检测。结果:免疫组化染色显示,益气化瘀补肾方可以明显降低软骨终板及纤维环中p16INK4a和p27KIP蛋白表达;实时定量RT-PCR分析发现,益气化瘀补肾方可显著增加Bmi1、CDK4和C-myc mRNA的表达,降低p16INK4a、cyclin D1、RB、p19ARF、Mdm2和p53 mRNA表达。结论:益气化瘀补肾方具有延缓D-半乳糖诱导小鼠腰椎间盘衰老的作用,并且这种延缓作用与调控衰老相关基因及细胞周期相关蛋白表达相关。     

p14~(ARF)和p16~(INK4a)蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义

目的 探讨p14ARFF和p16INF4a蛋白在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及其与临床病理参数的关系.方法 应用免疫组化SP法检测57例PTC、21例甲状腺乳头状微小癌(PTMC)和40例甲状腺腺瘤中p14ARF和p16INK4a蛋白的表达情况.结果 p14ARF和p16INK4a蛋白在PTC组的表达阳性率显著低于腺瘤组及PTMC组,差异有统计学意义(分别为P<0.01和<0.05).p16INK4a慨蛋白在PTMC组的阳性率明显低于腺瘤组,差异有统计学意义(P<0.05).PTC组中,p14ARF蛋白表达与淋巴结转移成负相关;p16INK4a蛋白表达与肿瘤复发成负相关,与临床分期成正相关.结论 p14ARF和p16INK4a可能参与了PTC的发生和发展,可作为临床判定其生物学行为的辅助指标.     

β-1,4-半乳糖基转移酶I影响雪旺细胞衰老的研究

目的:探讨β-1,4-半乳糖基转移酶I与雪旺细胞衰老的相关性。方法:以不同浓度的β-1,4-GalT-I表达质粒转染雪旺细胞,观察衰老相关半乳糖苷酶染色情况。以Ha-Ras转染雪旺细胞诱导衰老,采用Northern blot方法检测转染后不同时间β-1,4-GalT-I表达变化。结果:随着转染β-1,4-GalT-I表达质粒浓度的提高,细胞衰老相关半乳糖苷酶染色阳性率增高;随着Ha-Ras转染时间的延长,β-1,4-GalT-I表达逐渐增高。结论:β-1,4-GalT-I与雪旺细胞的衰老相关,并可能在周围神经雪旺细胞的增殖调节中发挥重要作用。     

p27Kip1、cyclin D1蛋白和Ki-67在口腔鳞癌中的表达及其意义

目的 研究口腔鳞癌组织中p27Kip1及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达以及与临床生物学特性和细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化方法检测53例原发性口腔鳞癌组织及20例正常口腔黏膜组织中p27Kip1及cyclin D1蛋白的表达水平,Ki-67作为细胞增殖活性的指标也被检测.结果 p27Kip1在口腔鳞癌中阳性表达率显著低于正常口腔黏膜组织(P＜0.05),cyclin D1蛋白和Ki-67在口腔鳞癌中阳性表达率显著高于正常口腔黏膜组织(P＜0.05) ;cyclin D1蛋白过表达与临床分级及淋巴结转移有关(P＜0.05),p27Kip1缺失表达与淋巴结转移有关(P＜0.05);p27Kip1负表达和cyclin D1过度表达与细胞增殖评价因子Ki-67呈负相关(r=-0.587和-0.667,P＜0.05).结论 在鳞癌的发生发展过程中,p27Kip1的缺失表达和cyclin D1的过度表达两者可能单独或共同参与.p27Kip1的缺失可能还与口腔鳞癌细胞的分化、转移及增值和预后有关.     

人参皂苷Rg1延缓造血干细胞衰老及其相关机制

目的 探讨人参皂苷Rg1调控造血干细胞(HSC)衰老的机制,为寻找延缓HSC衰老方法 提供理论指导和实验依据.方法 免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC后分5组:对照组、衰老组、Rg1组、Rg1治疗衰老组、Rg1延缓衰老组.β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养观察Rg1延缓Sca-1+HSC衰老的生物学作用.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测衰老相关基因p161NK4a、p19Arf、p53、p21Cipl/Wafl mRNA的表达.Western印迹检测p16INK4a、p21 Cipl/Wafl、细胞周期蛋白(cyclin)D1、cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK2蛋白表达.结果 Rg1治疗衰老组及Rg1延缓衰老组Sca-1+HSC的SA-β-Gal染色阳性率(30.1%±2.4%,21.5%±2.8%)低于衰老组(69.5%±5.0%);G1期细胞比例(81.4%±1.2%,78.2%±1.4%)低于衰老组(87.5%±4.0%);生成CFU-Mix数[(8.0±2.2)个/104Sca-1+HSC、(9.2±1.8)个/104 Sca-1+HSC]高于衰老组[(3.0±1.6)个/104Sca-1+HSC];Rg1治疗衰老组及Rg1延缓衰老组Sca-1+HSC的p16INK4a、p19Arf、p53、p21 Cipl/Wafl mRNA及p16INKa、p21 Cipl/Wafl、cyclinD1蛋白表达均下调(均P＜0.01),CDK4、CDK2、cyclinE蛋白表达均上调(均P＜0.01).Rg1延缓衰老组各检测指标均较Rg1治疗组变化明显.结论 Rg1具有延缓及治疗Sca-1+HSC衰老的作用,p16INK4a-Rb及p19Aarf-Mdm2-p53-p21Cipl/Wafl信号通路在其中可能发挥重要作用.     

p16~(INK4A)、p14~(ARF)和Ki-67在宫颈癌中的表达特点

目的:研究p16INK4A、p14ARF蛋白和Ki-67在宫颈癌患者中的表达水平,探讨它们之间的相互关系及临床意义。方法:采用免疫组化法对55例宫颈癌标本,40例宫颈上皮内瘤变(CIN)标本和45例正常宫颈标本进行p16INK4A、p14ARF和Ki-67检测。根据细胞核中出现棕褐色染色为阳性细胞的比例分为(-)、(+)、(++)、(+++)。对比各组的阳性表达。结果:随着CIN分期的增高和宫颈癌的发生,p16INK4A、Ki-67的表达有逐渐增高的趋势,宫颈癌患者(-)、(+)、(++)、(+++)的比例与正常宫颈标本比较,差异有统计学意义(P<0.01),CINⅢ期和宫颈癌患者(++)、(+++)的比例与CINⅠ期比较,差异有统计学意义(P<0.01);宫颈癌发生p14ARF的表达有逐渐增高的趋势,但在CIN期(+++)的表达增高不明显,宫颈癌患者p14ARF的表达于正常宫颈标本比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:p16INK4A、p14ARF和Ki-67与宫颈癌的形成及进展密切相关。     

18β-甘草次酸对人胃癌细胞BGC823增殖的抑制

目的:观察18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetinic acid,GA)对人胃癌细胞系BGC823细胞增殖的影响,并从细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(p16,p21,p27)方面探讨GA可能的作用机制.方法:以不同浓度的GA处理胃癌BGC823细胞后,用MTT法检测细胞增殖,以流式细胞仪检测细胞周期,采用Western blot方法检测胃癌细胞p16,p21,p27蛋白水平变化.结果:GA能抑制BGC823细胞增殖,且呈浓度依赖性.胃癌细胞经GA处理后,细胞周期发生G0/G1期阻滞.另外发现,胃癌细胞p21,p27的蛋白水平上调,但p16的蛋白水平没有明显变化.结论:GA可抑制人胃癌细胞增殖,其机制与G0/G1期阻滞、p21,p27表达上调有关.     

p16INK4a蛋白在宫颈疾病中的表达特点及其与HPV感染的关系

目的 研究伴有高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,hr-HPV)感染及无hr-HPV感染的宫颈癌(cervical cancer,CC)、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈炎中p16INK4a蛋白表达水平的变化及意义,探讨宫颈癌及癌前病变中p16INK4a蛋白表达与HPV感染的相关性.方法 应用免疫组化方法检测126例宫颈疾病(CC 40例,CIN 67例和宫颈炎19例)组织中p16INK4a蛋白的表达,其中,hr-HPV( )宫颈疾病89例(CC 32例,CIN 48例和宫颈炎9例),hr-HPV(-)宫颈疾病37例(CC 8例,CIN 19例和宫颈炎10例),进行半定量分析及统计学检验.结果 40例CC中,p16INK4a全部阳性表达;48例hr-HPV( )和19例hr-HPV(-)CIN中,p16INK4a阳性表达分别为39例和12例;9例hr-HPV( )和10例hr-HPV(-)宫颈炎组织中,p16INK4a阳性表达均为4例.hr-HPV( )或hr-HPV(-)宫颈炎、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中p16INK4a蛋白表达水平均依次升高.CC和CIN中p16INK4a蛋白表达与hr-HPV感染相互间无显著相关性(P＞0.05).结论 细胞周期抑制蛋白p16INK4a在CC及癌前病变中过表达,且与hr-HPV感染无关,提示p16INK4a蛋白在宫颈癌的发生、发展中所起的作用和作用机制可能与其在其他恶性肿瘤中不同.检测p16INK4a蛋白表达有助于CC的早期诊断.     

p16~(INK4a)基因在CLD新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达

目的 探讨p16~(INK4a)基因在高氧致慢性肺疾病(CLD)新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达.方法 足月新生SD大鼠于生后12 h内分别持续吸入0.85高氧和空气,于3,7,14,21 d随机处死动物后,进行肺成纤维细胞的原代培养,应用流式细胞仪测细胞周期;免疫组化、Western blot法检测p16~(INK4a)蛋白表达;real-time PCR法检测p16~(INK4a) mRNA含量变化.结果 生后3 d时2组p16~(INK4a)蛋白及mRNA的表达无明显差异(P>0.05),生后7 d时高氧组表达开始减少(P<0.05),14 d、21 d明显减少(P<0.01).结论 高氧可下调肺成纤维细胞p16~(INK4a)基因的表达,使得其抑制细胞增殖的作用减弱,肺成纤维细胞过度增殖,最终导致肺纤维化的发生.     

p16,cyclin D1, cdk4基因在卵巢癌中的表达及其意义

目的探讨p16, cyclin D1, cdk4在卵巢癌中的表达及其意义.方法免疫组织化学检测p16, cyclin D1, cdk4蛋白在卵巢癌中的表达,原位杂交检测p16和cyclin D1在卵巢癌中的存在状况.结果 p16在卵巢癌中低表达,cyclin D1和cdk4过度表达;p16 与 cdk4呈负相关关系(P＜0.05),cyclin D1与cdk4呈正相关关系(P＜0.05).结论卵巢癌发生机制可能涉及p16, cyclin D1, cdk4调节环路中多个基因的异常,p16低表达和cyclin D1高表达一起在卵巢癌发生中起协同作用.     

CIN和宫颈浸润癌组织中p16INK4a蛋白表达检测的意义

目的 研究p16INK4a蛋白表达在宫颈浸润癌前病变(CIN)和宫颈浸润癌组织中的意义.方法 应用免疫组化技术对68例CIN和36例宫颈浸润癌病变组织中p16INK4a蛋白表达进行检测.结果 CIN组中p16INK4a蛋白表达阳性率为39.7%(27/68),其中CIN Ⅰ为24.0%(6/25),CIN Ⅱ为36.4%(8/22),CIN Ⅲ为61.9%(13/21).CIN组中p16INK4a蛋白表达阳性率3组间的差别有统计学意义(P=0.03).宫颈浸润癌组织中p16INK4a蛋白表达阳性率为66.6%(24/36).CIN组中p16INK4a蛋白表达阳性率低于宫颈浸润癌组,差别有统计学意义(P=0.009).p16INK4a蛋白阳性表达率依次为宫颈浸润癌＞CIN Ⅲ＞CIN Ⅱ＞CIN Ⅰ,差异有统计学意义(P=0.004).正常宫颈上皮和宫颈糜烂组中未发现有p16INK4a蛋白表达阳性细胞.p16INK4a蛋白过度表达现象( ～ )在CIN为23.5%(16/68),宫颈浸润癌为61.1%(22/36),两组间差别有统计学意义(P=0.0001).CIN组中p16INK4a蛋白过度表达现象分别为CIN Ⅲ(47.6%)＞CIN Ⅱ(18.2%)＞ CIN Ⅰ(8.0%),3组间的差别有统计学意义(P=0.005).p16INK4a蛋白过度表达现象在CIN Ⅲ和宫颈浸润癌明显要多于CIN Ⅱ和CIN Ⅰ.结论 p16INK4a蛋白表达的检测可能作为在CIN人群中筛选高危个体的标志物.尤其是有过度表达现象出现时的意义更大.     

雪旺氏细胞表达β-1，4半乳糖基转移酶-Ⅰ对神经元轴突生长的影响

为了探讨周围神经雪旺氏细胞中不同β-1，4半乳糖基转移酶-I(β-1，4-galactosyltransferase 1，β-1，4-GalT-I)表达水平对神经元轴突生长的影响，本实验首先构建了正、反义β-1，4-GalT-I表达质粒；然后将构建的不同浓度的正、反义表达质粒超表达于分离、纯化的大鼠雪旺氏细胞；最后将转染的雪旺氏细胞与分离的大鼠背根神经节共培养，根据共培养神经元轴突延伸的数目和面积，分析雪旺氏细胞中不同β-1，4-GalT-I表达水平对神经元轴突生长的影响。结果发现：转染正义β-1，4-GalT-I的雪旺氏细胞能促进共培养神经节轴突的长出和延伸。在一定的转染浓度内，这种促神经生长作用随转染浓度增大而增强，而转染反义β-1，4-GatT-I却有相反的作用。提示周围神经雪旺氏细胞中表达β-1，4-GalT-I可能在维持正常神经的功能和促进损伤神经的修复发挥重要作用。     

103例非小细胞肺癌p16INK4a蛋白表达及其临床意义

目的研究p16INK4a蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义.方法应用免疫组织化学S-P方法检测103例NSCLC癌组织标本中p16INK4a蛋白表达,同时以20例肺部炎症病变组织做对照.结果 103例标本中,p16INK4a阳性表达58例,阴性表达45例,表达阴性率为43.69%,其中鳞癌、腺癌、肺泡癌中p16INK4a表达阴性率分别为58.82% (20/34)、39.39% (13/33)、33.33% (12/36),且鳞癌与肺泡癌之间p16INK4a表达阴性率差异有显著意义(P<0.01).临床Ⅲ Ⅳ期病例p16INK4a蛋白表达阴性率为60.71%,明显高于临床Ⅰ Ⅱ期病例(35.14%),差异有显著性意义(P<0.05).结论 p16INK4a蛋白表达异常在肺鳞癌中常见,提示p16INK4a蛋白表达异常在肺鳞癌的发生、发展中起重要作用,它有可能成为预测肺癌患者病程进展的指标之一.