MiRNA-92a靶向PTEN通过PI3K/AKT信号通路促进卵巢癌细胞转移

目的:探讨miRNA-92a对卵巢癌细胞侵袭与迁移能力变化的影响和可能的作用机制。方法:RTqPCR检测卵巢癌组织和卵巢癌细胞miRNA-92a的表达水平;转染miRNA-92ainhibitor/mimic后,Transwell小室法检测SKOV3与A2780细胞的侵袭与迁移能力;蛋白质印迹法检测SKOV3与A2780细胞中p-PI3k,p-Akt和PTEN蛋白水平的变化;预测miRNA-92a靶基因并经双荧光素酶报告基因验证。结果:MiRNA-92a在卵巢癌组织和卵巢癌细胞中高表达(P0.05);转染miRNA-92a inhibitor后,SKOV3与A2780细胞的侵袭和迁移能力明显受到抑制,同时p-PI3k和p-Akt蛋白水平均显著降低,PTEN蛋白水平显著升高(均P0.05);转染miRNA-92a mimic后,以上指标相反;miRNA-92a靶基因为PTEN,且过表达PTEN能逆转过表达miRNA-92a诱导的侵袭转移与p-PI3k,p-Akt表达(均P0.05)。结论:MiRNA-92a直接结合靶基因PTEN,通过激活PI3k/Akt通路活性,促进卵巢癌细胞SKOV3的侵袭与迁移能力。     

人卵巢癌细胞SKOV3中壳多糖酶3样蛋白1的表达和对细胞增殖及侵袭的影响实验研究

目的　探讨壳多糖酶3 样蛋白1（chitinase-3-like-protein-1, CHI3L1）在卵巢癌细胞SKOV3 中的表达和对SKOV3 细胞增殖和侵袭的影响。方法　构建pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒,转染卵巢癌细胞SKOV3,使得卵巢癌细胞中的CHI3L1 基因沉默;pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒转染卵巢癌细胞SKOV3,同时转染空载质粒作为阴性对照,通过Western Blot 检测SKOV3 细胞中CHI3L1 蛋白表达水平;平板细胞克隆形成试验观察对卵巢癌细胞SKOV3 增殖的影响;采用Transwell 实验检测卵巢癌细胞SKOV3 侵袭能力的变化。结果　成功构建pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒,转染卵巢癌细胞SKOV3 后,观察到大量的绿色荧光细胞,且和对照组相比,pll3.7-CHI3L1 shRNA 转染组卵巢癌细胞SKOV3 中CHI3L1 蛋白表达水平下降,卵巢癌SKOV3 细胞的克隆数目减少,侵袭能力下降。结论　卵巢癌细胞SKOV3 中CHI3L1 的表达下调,抑制了SKOV3 细胞的增殖和侵袭能力。     

长链非编码RNA CTD-3162L10.1调节SEMA3B表达对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响

目的分析卵巢癌中长链非编码RNA CTD-3162L10.1对信号素3B(SEMA3B)表达的调节作用及对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响。方法实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测23对卵巢癌和癌旁组织中CTD-3162L10.1的表达。qPCR检测卵巢癌细胞株A2780、SKOV-3、HO-8910、OC3、OVCAR-3和人健康卵巢上皮细胞IOSE80中CTD-3162L10.1的表达。以CTD-3162L10.1表达水平最低的卵巢癌细胞株为转染对象,分别转染空载质粒和表达CTD-3162L10.1的质粒,命名为对照组和实验组。qPCR检测转染效率。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和Transwell侵袭实验分别检测高表达CTD-3162L10.1对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响。qPCR检测SEMA3BmRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SEMA3B、胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)蛋白的表达。结果 CTD-3162L10.1在卵巢癌和癌旁组织中的表达量分别为(1.05±0.35)和(7.28±1.67),卵巢癌组织中CTD-3162L10.1呈低表达(P0.05)。与人健康卵巢上皮细胞相比,卵巢癌细胞株中CTD-3162L10.1呈低表达(P0.05),OVCAR-3细胞中的表达量最少(P0.05)。与对照组相比,实验组OVCAR-3细胞中CTD-3162L10.1表达明显增加(P0.05),表明转染成功。与对照组相比,CTD-3162L10.1可明显抑制实验组OVCAR-3细胞的增殖能力和侵袭能力(P0.05)。与对照组相比,实验组OVCAR-3细胞中SEMA3B mRNA表达明显增加(P0.05)。SEMA3B、IGFBP-6蛋白表达增加,p-AKT蛋白表达降低。结论 CTD-3162L10.1在卵巢癌中呈低表达,高表达CTD-3162L10.1可抑制卵巢癌细胞OVCAR-3的增殖能力和侵袭能力,其分子机制可能是通过促进SEMA3B基因表达实现。     

上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与VEGF和P53蛋白表达的关系研究

目的研究上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与血管内皮生长因子(VEGF)和P53蛋白表达的关系。方法前瞻性收集新疆维吾尔自治区人民医院的卵巢癌组织标本112例(A组)、卵巢癌旁组织标本85例(B组)及正常卵巢组织标本75例(C组)。采用实时荧光定量PCR法对三组标本中的miRNA-22表达量进行检测。将卵巢癌SKOV-3细胞株分为转染miRNA-22-mimic(转染组)、miRNA-22-NC(空白载体组)及正常对照组。采用实时荧光定量PCR法对各组细胞中的miRNA-22表达量进行测定,通过Transwell小室法对各组细胞的侵袭能力进行检测,并用Western blot法对各组细胞中的P53及VEGF蛋白表达情况进行检测。结果 A组miRNA-22表达量较B、C组均明显下降(P 0. 05),而B、C组miRNA-22表达量的比较,并无显著差异(P 0. 05)。相比正常对照组与空白载体组,转染组细胞中的miRNA-22表达量明显升高(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组细胞中miRNA-22表达量的比较,无显著差异(P 0. 05)。Transwell小室法检测结果发现,转染组卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭能力较正常对照组与空白载体组明显减弱(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组侵袭细胞数的比较,无显著差异(P 0. 05)。Western blot法检测结果发现,转染组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平较正常对照组与空白载体组明显下降(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平的比较,无显著差异(P 0. 05)。结论上调miRNA-22表达可起到阻滞卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭的作用,其机制可能与P53和VEGF蛋白表达水平下降密切相关。     

microRNA-125b在葛根素诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡中的作用研究

目的探讨micRNA-125b在葛根素诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡中的重要作用。方法运用qRT-PCR技术检测葛根素处理卵巢癌细胞SKOV3中microRN A-125b的改变。运用干涉RNA技术抑制SKOV3细胞中microRNA-125 b表达。运用Western blot技术检测SKOV3细胞microRNA-125b低表达后,葛根素处理组与对照组中凋亡相关蛋白的改变。结果葛根素能够显著抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖活力以及促进其凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3,Bax和Bcl-2的表达,并且初步揭示了葛根素处理卵巢癌细胞SKOV3后能够促进microRNA-125b的表达;抑制卵巢癌细胞SKOV3中microRNA-125b的表达能够降低葛根素对SKOV3细胞凋亡蛋白Cleaved Caspase-3,Bax和Bcl-2的表达。结论 microRNA-125b参与了葛根素对卵巢癌细胞SKOV3的促凋亡作用,提示microRNA-125b是卵巢癌细胞SKOV3耐药机制中的关键分子。     

Gli1表达抑制对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的 抑制Glioma-associated oncogene homoglog（GLI）基因在卵巢癌SKOV3细胞中的表达,探讨GLI1表达抑制对SKOV3细胞增殖的影响.方法 构建并筛选GLI1基因的RNAi表达质粒,转染SKOV3细胞,CCK-8法比较转染前后卵巢癌细胞增殖变化,流式细胞仪检测紫杉醇诱导转染前后细胞凋亡比例,流式细胞仪检测转染前后SKOV3的细胞周期情况.Westem blot检测cyclinD、Bcl-2及Capase3蛋白表达的影响.结果 转染48 h后,在SKOV3细胞中Control组、N-Control组、GLI1 shRNA-1组、GLI1 shRNA-2组、GLI1shRNA-3组、GLI1 shRNA-4组的GLI1 mRNA水平分别为1.00±0.00、1.03 ±0.02、0.73±0.07、0.98 ±0.08、0.53±0.08、0.68±0.04,与Control组相比,GLI1 shRNA-1、GLI1 shRNA-3、GLI1 shRNA-4组GLI1 mRNA表达量均下降（P＜0.05）,转染GLI1 shRNA-3的SKOV3细胞中GLI1蛋白表达水平低于GLI1 shRNA-1、GLI1shRNA-2、GLI1 shRNA-4组（P＜0.05）,具有显著的干扰效果.转染GLI1 shRNA-3的SKOV3细胞增殖受到明显抑制（P＜0.05）,在紫杉醇的诱导下细胞凋亡比例明显增加,细胞周期主要阻滞在G1/S期.Western blot检测发现Bcl-2蛋白表达下降（P＜0.05）,Capase3蛋白表达升高（P＜0.05）,细胞周期蛋白CyclinD1蛋白表达下降（P＜0.05）.结论 GLI1 shRNh对SKOV3细胞增殖抑制作用明显,促进细胞凋亡,GLI1信号可通过抑制cyclinD1活化抑制细胞恶性增殖.     

CXCL12/CXCR4轴通过诱导miR-125b促进肝癌细胞肿瘤干性和5-氟尿嘧啶抵抗的机制

目的探究趋化因子CXCL12/趋化因子受体CXCR4轴通过诱导miR-125b促进肝癌细胞肿瘤干性和5-氟尿嘧啶(5-FU)抵抗的机制。方法选择人肝细胞癌细胞系Huh7,分为7组:对照组(正常培养的肝细胞癌系),CXCR4转染组(CXCR4模拟转染超表达),CXCR4沉默组(CXCR4低表达或者不表达),miR-125b转染组(miR-125b超表达),CXCL12+125b抑制剂组(CXCL12超表达的+抑制miR-125b的表达),5-FU处理组(10μg/L的5-FU处理细胞),5-FU+miR-125b转染组(10μg/L的5-FU处理+miR-125b超表达的细胞)。聚合酶链式反应分析miR-125b mRNA表达;蛋白质印迹法检测E-钙粘蛋白、波形蛋白、CXCR4蛋白、Caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白表达;Transwell分析各组细胞中的细胞迁移、侵袭测定;MTT检测细胞存活力;细胞计数试剂盒8(CCK-8)评估细胞增殖。结果与对照组相比,CXCR4转染组miR-125b mRNA、波形蛋白、CXCR4的蛋白表达显著升高,E黏着蛋白表达显著降低(P<0.05);与CXCR4转染组相比,CXCR4沉默组miR-125b mRNA、波形蛋白、CXCR4的蛋白表达显著降低,E黏着蛋白表达显著升高(P<0.05)。与对照组相比,miR-125b转染组细胞迁移、侵袭数量、细胞活力均显著增加,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与miR-125b转染组相比,CXCL12+125b抑制剂组,细胞迁移、侵袭数量、细胞活均显著减少,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与对照组相比,5-FU处理组细胞增殖率、Bcl-2表达显著降低,caspase-3、Bax的蛋白表达显著升高(P<0.05),与5-FU处理组相比,5-FU+miR-125b转染组细胞增殖率、Bcl-2表达显著升高,caspase-3、Bax的蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论MiR-125b通过激活CXCL12/CXCR4轴而被上调,miR-125b增强CXCR4的表达,这在触发肿瘤侵袭和进展中形成了正反馈回路。这些结果为miR-125b在肝癌进程和化学抗性的发展中的作用提供了新的线索,为肝癌的治疗提供了潜在的治疗靶点。     

miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法回顾性收集2018年3月至2019年6月海南省人民医院收治的45例患者,取肺腺癌组织及癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测组织中miR-1290的表达。将肺腺癌细胞随机分为对照组、miR-1290 mimic组和miR-1290 inhibitor组,通过脂质体2000试剂盒,分别以无意义序列、miR-1290 mimic、miR-1290 inhibitor转染细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell小室、划痕实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法检测Cyclin D1、p27、基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)蛋白的表达。经在线生物信息学和双荧光素酶报告基因检测miR-1290的靶基因,荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测miR-1290靶基因的表达。结果与癌旁组织比较,肺腺癌组织中miR-1290表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组miR-1290表达明显增加,miR-1290 inhibitor组miR-1290表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。培养48 h时,与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显增加,miR-1290 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞周期蛋白Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显增加、p27蛋白表达明显降低,miR-1290 inhibitor组Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显降低、p27蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,与对照组比较,共转染INPP4B-WT、miR-1290 mimic细胞中荧光表达量明显降低(P<0.05);与对照组比较,miR-1290 mimic组二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(INPP4B)mRNA和蛋白表达量明显降低,miR-1290 inhibitor组INPP4B mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论miR-1290在肺腺癌组织中表达上调,miR-1290可能靶向抑制INPP4B水平,促进肺腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

肿瘤抑素抗肿瘤相关肽对人卵巢癌细胞作用的体外研究

目的探讨肿瘤抑素（Tumstatin）185-203位氨基酸（19肽）对卵巢癌细胞（SKOV3）的治疗作用。方法使用NTS、Annexin／PI和蛋白印迹的方法检测肿瘤抑素19肽对SKOV3细胞增殖和凋亡的影响，以及Bcl-2、BAX等凋亡相关蛋白的表达情况。检测了19肽对SKOV3细胞侵袭能力的影响，同时应用RT-PCR的方法检测基质金属蛋白-2（matrix metallopmteinase-2，MMP-2）、组织金属蛋白酶抑制物-2（tissue inhibitors of metallopmteinase-2，TIMP-2）和膜型基质金属蛋白-1（membrane-type 1 matrix metalloproteinase，MT1-MMP）mRNA表达量的变化情况。结果19肽能够有效抑制SKOV3细胞的增殖，诱导细胞凋亡，而降低Bcl-2的表达，激活caspase通路可能是其诱导细胞凋亡的分子机制之一。此外该19肽能够有效抑制SKOV3细胞的侵袭，这与抑制MT1-MMP的表达进而抑制MMP-2的膜结合活性相关。结论肿瘤抑素19肽可以通过诱导凋亡和抑制细胞侵袭对体外培养的SKOV3产生杀伤和抑制作用。     

MiR-139-5p通过靶向NFAT抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长、集落形成、侵袭和迁移

目的:探究miR-139-5p对卵巢癌SKOV3细胞的生长、集落形成、侵袭能力以及迁移能力的影响及其机制。方法:采用qRT-PCR检测卵巢癌患者癌组织和卵巢癌细胞SKOV3中miR-139-5p表达情况。MiR-139-5p mimic转染SKOV3细胞,WST比色实验、集落形成实验和Transwell实验分别检测细胞的活性、集落形成、侵袭和迁移能力。采用TargetScan在线软件筛选miR-139-5p的潜在靶基因NFAT,并进一步验证。结果:MiR-139-5p在卵巢癌组织和SKOV3细胞中表达异常降低。MiR-139-5p过表达显著抑制SKOV3细胞的生长、集落形成、迁移及侵袭能力。NFAT是miR-139-5p的靶基因。过表达NFAT能逆转miR-139-5p过表达对SKOV3细胞集落形成、侵袭能力以及迁移能力与侵袭的抑制作用。结论:MiR-139-5p通过抑制靶基因NFAT来抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长、集落形成、侵袭和迁移能力。     

丙戊酸钠抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡与分化

为进一步研究丙戊酸钠(sodium valproate;VPA)对白血病细胞HL-60的增殖、凋亡和分化的影响,采用MTT法检测不同浓度的VPA对HL-60细胞增殖的作用;细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;NBT还原实验结合形态学作为观测细胞分化指标;应用流式细胞术检测不同浓度药物作用后细胞周期的变化及凋亡细胞的比例。结果显示:VPA能明显抑制HL-60的增殖;经2mmol/L VPA处理24-48小时后,HL-60出现胞浆空泡、核固缩、核碎裂及凋亡小体;Annexin V阳性的早期凋亡细胞比例由2.9%升高到17.1%;流式细胞术检测出明显的亚二倍体峰;G1期细胞由51.1%增加至84.6%,S期细胞由37.9%减低至14.4%。0.25mmol/L VPA作用1周后,促进HL-60细胞向中幼粒、晚幼粒阶段分化,NBT阳性细胞百分率为(47±2)%。结论:VPA能明显抑制白血病细胞HL-60的增殖,并诱导其分化及凋亡。     

成体干细胞及其分化机理

成体干细胞是存在于胎儿和成人组织器官中具有自我更新，高度增殖和多向分化潜能的细胞，在适当的诱导条件下。可变成不同类型的细胞。成体干细胞的分化是指成体干细胞具有可在体内、体外分化成不同类型细胞的能力，将其分化物植入体内后在各种情况下都能稳定地存活。目前认为分化的可能机制是：多种成体干细胞可能在不同的器官中存在，包括出生后体内仍存在的多能性干细胞。美国Minnesota大学干细胞研究所一系列的研究证明成体骨髓中确实存在具有多分化潜能的成体干细胞，命名为MAPC，能在体外由单细胞分化为具有中胚层系、外胚层系或内胚层系特征的细胞；将其注入胚泡，能分化成各种组织细胞。多能的成体干细胞在今后能用于多个不同器官的变性或遗传性疾病的治疗。     

白血病干细胞及其微环境

白血病干细胞研究是肿瘤干细胞研究的先驱，不仅有重要的理论意义，也有潜在的应用前景。干细胞的生存和发展受其微环境的直接影响，白血病干细胞及其微环境成为研究热点。作者认为白血病干细胞是群体，具有异质性和阶梯性，不能分离单个细胞形成克隆；白血病干细胞与微环境的作用可以用白血病干细胞生态位（1eu-kemia stem cell niche）的概念表述。本文就白血病细胞群体的阶梯性和异质性及白血病干细胞的生态位问题进行了评述。     

D-柠檬烯对K562细胞增殖及凋亡的影响

本研究探讨D-柠檬烯对K562白血病细胞增殖的影响及机制。应用MTT试验观察不同浓度D-柠檬烯作用后K562细胞增殖的改变；应用细胞形态学检查、流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳观察和检测细胞凋亡。结果表明：在0．125-1．0mmol／L浓度范围内，D-柠檬烯对K562细胞增殖的抑制作用呈现剂量依赖的关系。典型的细胞形态学改变、DNA琼脂糖凝胶电泳梯形条带及流式细胞仪检测出亚G1峰共同证实了D-柠檬烯能诱导K562白血病细胞凋亡。结论：D-柠檬烯抑制K562细胞的增殖并呈剂量依赖的方式，使细胞滞留于G1期，诱导其凋亡。     

Asymmetric division and lineage commitment at the level of hematopoietic stem cells: inference from differentiation in daughter cell and granddaughter cell pairs

How hematopoietic stem cells (HSCs) commit to a particular lineage is unclear. A high degree of HSC purification enabled us to address this issue at the clonal level. Single-cell transplantation studies revealed that 40% of the CD34-/low, c-Kit+, Sca-1+, and lineage marker- (CD34-KSL) cells in adult mouse bone marrow were able, as individual cells, to reconstitute myeloid and B- and T-lymphoid lineages over the long-term. Single-cell culture showed that >40% of CD34-KSL cells could form neutrophil (n)/macrophage (m)/erythroblast (E)/megakaryocyte (M) (nmEM) colonies. Assuming that a substantial portion of long-term repopulating cells can be detected as nmEM cells within this population, we compared differentiation potentials between individual pairs of daughter and granddaughter cells derived in vitro from single nmEM cells. One of the two daughter or granddaughter cells remained an nmEM cell. The other showed a variety of combinations of differentiation potential. In particular, an nmEM cell directly gave rise, after one cell division, to progenitor cells committed to nm, EM, or M lineages. The probability of asymmetric division of nmEM cells depended on the cytokines used. These data strongly suggest that lineage commitment takes place asymmetrically at the level of HSCs under the influence of external factors.     

c-myc基因在辐射诱导骨髓细胞凋亡和修复中表达及意义

迄今,c-myc基因表达在辐射诱导的骨髓造血细胞凋亡及修复中变化和意义于国内外同类文献尚未见到。本实验采用78只LACA小鼠,经γ射线全身照射,于照后4周内分批活杀,将骨髓组织石蜡包埋制片,H-E染色和制作电镜标本进行电镜观察,并将骨髓细胞涂片采用LSAB免疫细胞化学染色,动态观察c-myc蛋白在辐射诱导骨髓造血细胞凋亡及修复中变化。结果表明:照后小鼠骨髓出现明显损伤及损伤后重建现象。照后6小时,骨髓中凋亡的造血细胞明显增多,形态上表现为核染色质浓缩、边移,呈半月形、环状、戒指状或不规则状,并见凋亡小体。c-myc蛋白于照后6小时明显增多,位于造血细胞核内,而照后1-6天,其表达则进行性减少,至照后10-15天,c-myc蛋白再度增多,于照后21天后,c-myc表达趋于正常水平。因此,c-myc基因在辐射诱导的骨髓造血细胞凋亡及凋亡后的修复中表达均明显增多,可能参与了辐射诱导的造血细胞凋亡及修复过程。     

CAG方案对HL-60细胞及耐药株作用机理的研究

目的研究小剂量阿糖胞苷和阿克拉霉素联合G-CSF（CAG方案）对HL-60细胞及其耐药株HL-60／A的作用机理。方法以白血病细胞株HL-60及其耐药株HL-60／A为实验模型，模拟临床给药方式，体外加入Ara-C、ACR、G-CSF三药，作用24、48小时后收集细胞，分别进行细胞计数，细胞形态观察，MTr法检测不同药物对两种细胞株的生长抑制率，流式细胞仪检测细胞早期凋亡标记Anncxin V，细胞分化抗原CD11h以及进行细胞周期分析。结果经CAG作用48h后，两种细胞株数量明显减少，形态显示凋亡小体增多；早期凋亡标记Annexin V明显增高，CD11b表达轻度升高，与CA组比较，结果有显著差异（P〈0．05）。细胞周期分析显示，CAG作用24h后，与CA组比较，S期细胞比例增高（P〈0．05）；48h后比例下降，结果未见明显差异（P〉0．05）。HL-60细胞与HL-60／A细胞比较，两种白血病细胞株经CAG作用48h后，在细胞数量、细胞形态、凋亡细胞比例、CD11b表达及S期细胞比例的改变方面未见明显差异。结论CAG方案对白血病细胞株HL-60、HL-60／A的作用机制主要是通过GCSF促使白血病细胞进入细胞周期S期，增加小剂量Ara-C、ACR对自血病细胞的细胞毒性，以诱导细胞凋亡为主，轻度诱导分化。     

DC-CIK细胞的生物学活性及体外抗白血病作用的研究

本研究探讨树突状细胞（DC）对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）增殖能力、免疫表型、分泌细胞因子水平及抗白血病细胞的作用。健康人外周血单个核细胞诱导DC和CIK，将DC与CIK共培养，以CIK细胞单独培养为对照。用台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数，MTT法测定杀伤活性，流式细胞术分析免疫表型，ELISA双抗体夹心法测定干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-12（IL—12）的水平。结果表明：DC—CIK细胞增殖能力明显高于CIK细胞（P〈0．05）；DC、CIK细胞共培养后，CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD56^＋细胞比率较相同条件下CIK细胞组显著增多（P〈0．05）；共培养3天，DC—CIK细胞上清液中IL-12、IFN-γ水平均比CIK细胞单独培养的水平高（P〈0．01，P〈0．05）；在5：1—40：1的效靶比范围内，DC—CIK细胞对白血病细胞的杀伤率显著高于CIK细胞（P〈0．05），且杀伤率与效靶比呈正相关。结论：DC增加CIK细胞的增殖能力和抗白血病活性，有可能作为一种临床有效的抗白血病免疫治疗手段。     

成体表皮干细胞的分离培养与鉴定

目的 探讨成体表皮干细胞体外分离、培养和鉴定的技术方法。为组织工程皮肤的构建提供种子细胞。方法 通过中性蛋白酶消化成人包皮获得表皮细胞，再通过胰蛋白酶与乙二胺四乙酸（EDTA）消化并制成单个表皮细胞悬液，接种至人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内．以Dulbecco改良Eagle培养基／F12（DMEM／F12，1：1）作为表皮干细胞培养基置培养箱内培养，37℃静置10～l5min，留用快速贴壁细胞继续培养，所得细胞分别以能否呈克隆状生长、流式细胞仪测细胞周期、透射电镜观察其超微结构及β1-整合素、角蛋白19（K19）免疫细胞化学染色进行鉴定。结果 人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞继续培养24h后细胞呈克隆状生长；电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征；细胞周期分析示，第2代中静息期／DNA合成前期（G0／G1期）细胞占86．83％。β1-整合素、K19免疫细胞化学染色呈阳性。结论 成体表皮干细胞在体外得到成功分离与培养。     

兔骨髓源性血管内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

本研究探讨兔骨髓源性血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)的分离、培养及鉴定方法。抽取兔骨髓细胞,用梯度密度离心法获得单个核细胞,以内皮细胞培养液培养,通过细胞形态观察、免疫组织化学试验、流式细胞术以及内皮祖细胞吞噬功能进行鉴定。结果表明,新分离的骨髓单个核细胞呈圆形,培养48小时后可见贴壁细胞呈集落样生长,细胞呈圆形或不规则形,核分裂相明显,至培养第7天成片生长的细胞集落相互连接呈梭形的内皮样细胞。内皮祖细胞免疫组织化学检测结果显示CD133(+),CD34(+),Ⅷ因子(++),KDR(++);流式细胞术鉴定结果显示CD133的阳性率为(18.23±7.12)%,CD34的阳性率为(47.71±14.85)%,CD31的阳性率为(71.61±13.51)%,KDR的阳性率为(87.24±11.40)%。细胞吞噬功能鉴定说明超过80%的贴壁细胞都特异性地摄取了Dil-acLDL和FITC-UEA-1。结论:密度梯度离心法体外分离兔骨髓源的单个核细胞,在一定的诱导培养条件下能分化成为血管内皮祖细胞。