丹参对耳蜗辐射防护作用的实验研究

为探讨内耳辐射损伤的防治,采用丹参作为保护药物,用相同剂量的６０Ｃｏ γ射线照射丹参防护组和单纯放射组豚鼠耳颞部,２ 周后作形态与机能检查。结果发现：丹参防护组耳蜗机能与结构损害较轻,而单纯放射组耳蜗机能明显受损,血管纹和柯替氏器病变严重;复合动作电位（ＣＡＰ） 反应阈和毛细胞损伤率两组比较差异有显著性（ Ｐ ＜ ０ ．０１） 。表明丹参对内耳辐射损伤有保护作用。     

扫描电镜下氟化物喂养大鼠耳蜗基底膜毛细胞形态

目的:观察正常大鼠和氟化物喂养大鼠耳蜗基底膜毛细胞的形态,了解两者毛细胞的形态是否有差异性。方法:取正常大鼠和添加氟化物饲料喂养180 d的大鼠各2只,处死后取出耳蜗经制样后进行扫描电镜观察,比较两组大鼠耳蜗基底毛细胞差异。结果:正常组大鼠耳蜗基底膜毛细胞排成4排,内毛细胞排成1排,静纤毛呈"一"字型;外毛细胞排成3排,静纤毛呈"V"字型,毛细胞排列整齐、规则;实验组大鼠耳蜗基底膜外毛细胞出现排列不整齐、静纤毛形态不规则的现象,外毛细胞静纤毛呈柱状或不规则的团块状,静纤毛排列有缺失。结论:实验组大鼠耳蜗基底膜毛细胞有明显形态学改变,但大鼠听力是否受到损害还有待证实。     

热休克蛋白70在CO2激光照射豚鼠耳蜗中表达的实验学研究

目的 探讨CO2激光照射豚鼠耳蜗后热休克蛋白70(Hsp70)表达的改变、耳蜗超微结构改变与听功能的变化三者之间的关系.方法 36只红目豚鼠分3组,分别以功率为1、2和3W的CO2激光在豚鼠左耳耳蜗底周打孔,听性脑干诱发电检查听功能变化,扫描电镜技术观察耳蜗形态学变化,SABC免疫组化技术及图像分析技术,观察耳蜗Hsp70表达的情况.结果 术后即刻3组听阈较术前明显升高,照射后3周1W组听阈基本恢复,2W和3W组听阈有所下降但仍高于术前;术后3周,扫描电镜观察1W组外毛细胞静纤毛个别紊乱,2W组出现散在的外毛细胞静纤毛的倒伏,排列紊乱,3W组出现外毛细胞静纤毛严重缺失、破坏和融合呈球状;术后即刻3组耳蜗中Corti器和螺旋神经节Hsp70表达较对照组明显增强,术后3周1W组Hsp70表达与对照组无明显差异,2W和3W组Hsp70表达较对照组有所增强,且A和B组术后即刻和术后3周、C组术后即刻ABR阈值的变化和Hsp70阳性反应平均灰度值的变化密切相关,而C组术后3周ABR阈值的变化和Hsp70阳性反应平均灰度值的变化无明显相关.结论 CO2激光照射豚鼠耳蜗后能诱发耳蜗热休克反应,使HSP70表达增强,其表达程度与听功能的变化、耳蜗超微结构损伤密切有关.     

γ—射线对动物耳蜗及前庭损伤的实验研究

目的：为探讨耳蜗及前庭放射损伤的始发部位和可能机理。方法：给予１６只豚鼠耳区一次５０Ｇｙ的＾６０Ｃｏγ－射线照射，采用耳蜗动作电位（ＡＰ）、眼震电流描记术和电镜技术进行研究。结果：辐射后豚鼠ＡＰ反应阈上升呈渐进性，前庭各功能试验结果表明，辐射后豚鼠眼震次数和持续时间呈进行性减少或缩短；电镜检查发现耳蜗和前庭毛细胞纤毛倒伏或缺失，其线粒体和内质网明显受损；神经末稍明显受损；细胞损伤程度；耳蜗外毛细胞     

豚鼠脑震荡后2～4周听功能与耳蜗扫描电镜的改变

目的 观察脑震荡后2～4周听功能及耳蜗毛细胞的病理改变.方法 以豚鼠为研究对象,制成脑震荡模型.20只健康豚鼠随机分为4组,正常对照组,脑震荡后即刻组、2周组、4周组.应用听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)和畸变产物耳声发射(distortion products otoacoustic emissions,DPOAE)观察脑震荡后听功能变化;应用扫描电镜观察耳蜗毛细胞的病理改变.结果 ABR Ⅰ、Ⅴ波潜伏期和Ⅱ～Ⅲ、Ⅱ～Ⅴ波间期均有变化;DPOAE于打击后在0.7、1.0 kHz频率其幅值有明显变化(P<0.05);扫描电镜下见耳蜗毛细胞的纤毛有排列紊乱和倒伏现象.结论 豚鼠脑震荡后2～4周听功能和耳蜗毛细胞均存在一定程度的病理改变.     

小鼠耳蜗体外培养后毛细胞扫描电镜观察

用器官培养结合扫描电镜方法观察成年小鼠耳蜗体外培养后毛细胞表面结构的变化。结果发现:培养1h后毛细胞表面纤毛排列整齐;3h后出现纤毛倒伏、融合;6h后出现严重结构变化,纤毛破坏消失。结果表明:小鼠离体耳蜗作实验对象以3h内为宜。     

bFGF对豚鼠庆大霉素耳毒性的对抗作用

给豚鼠中耳局部交替注射bFGF和庆大霉素，与交替注射生理盐水和庆大霉素组对照，发现实验组听力损失及眼疾缩短率均明显小于对照组（P＜0．001）。扫描电镜发现：实验组耳蜗Corti's器仅见听毛轻度粘连；对照组Corti's器内、外毛细胞散在性坏死脱落，残留毛细胞听毛严重粘连，丧失；实验组前度纤毛排列不整、部分缺失，对照组前度大部分毛细胞坏死脱落，残留毛细胞纤毛大部分丧失。提示,bFGF对豚鼠庆大霉素耳毒性有一定对抗作用。     

顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞损害的形态及机理研究

目的：观察顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞的损害，并阐述一氧化氮（nitric oxide,NO）在其耳毒性机制中的作用。方法：将20只豚鼠随机分成两组，试验组腹腔注射顺铂0．5ml，对照组给予同等量的生理盐水，5天后做听性脑干反应（auditory brainstem respones,ABR)测听，此后处死动物，取出耳蜗，应用免疫组化技术、光镜及扫描电镜观察耳蜗毛细胞的损害。结果：试验组动物测试ABR听阈明显提高，光镜下见耳蜗毛细胞明显变性，诱导型一氧化氮合酶阳性染色，电镜下见毛细胞的纤毛散乱、倒伏甚至散失。结论：顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞有明显的损害作用，而O在其耳毒性机制中发挥着重要的作用。     

bFGF对豚鼠庆大霉素耳毒性的对抗作用

给豚鼠中耳局部交替注射ｂＦＧＦ和庆大霉素，与交替注射生理盐水和庆大素组对照，发现实验组听力损失有眼震缩短率均明显小于对照组。扫描电镜发现：实验组耳蜗Ｃｏｒｔｉ‘ｓ器仅见听毛轻度粘连，对照组Ｃｏｒｔｉ’ｓ器内，外毛细胞散在性坏死脱落，残留毛的毛严重粘连，丧失；实验组前庭纤毛排列不整、部分缺失，对照组前庭大部分毛细胞坏死脱落，残留毛细胞纤毛大部分丧失。提示：，ｂＦＧＦ对豚鼠庆大霉素耳毒性有一定对抗作用     

卡波金对豚鼠缺血耳蜗的作用

目的：探讨卡波金对豚鼠缺血耳蜗的作用。方法：动物分为4组：正常对照组（Ⅰ组）；假手术组（Ⅱ组）；暴露双侧椎动脉和一侧颈总动脉；缺血组（Ⅲ组）：结扎双侧椎动脉和一侧颈总动脉建立内耳缺血模型，卡波金组（Ⅳ组）：建立内耳缺血模型的同时吸入卡波金。每组20只，10只采用微球法测血流量，10只作ABR测试及扫描电镜观察耳鼻毛细胞形态。结果：耳蜗血流量缺血组较正常对照组降低54.83%，卡波金组较缺血组增加31.46%；ABR各波潜伏期及Ⅰ-Ⅲ波间期缺血组较正常对照组延长，卡波金组较缺血组缩短；听觉阈值缺血组较正常组升高13.7dBSPL，卡波金组较缺血组降低5.5dBSPL(P均＜0.01）。缺血组耳蜗底周毛细胞纤毛出现明显的倒伏、排列率乱，人内排到外排逐渐加重，并可见少数细胞缺失，卡波金组毛细胞纤毛倒伏减轻。结论：结扎豚鼠两侧椎动脉和一侧颈总动脉使耳蜗血流量减少，吸入卡波金使缺血耳蜗的血流量增加。豚鼠耳蜗缺血后，耳蜗毛细胞及功能形态受损，吸入卡波金可损伤减轻。     

强次声对豚鼠耳蜗毛细胞超微结构的影响

目的:观察强次声对豚鼠耳蜗毛细胞超微结构的影响。 方法:将30只豚鼠分5组,1组作对照, 其余4组分别暴露于8和12 Hz, 声压极为120及130 dB SPL的次声声场中, 每日持续5 h,连续给声4 d。 应用透射电镜观察次声对豚鼠耳蜗毛细胞超微结构的损伤。 结果:强次声暴露后的4组动物耳蜗毛细胞出现一些损伤变化:表现为线粒体空泡样变性,线粒体嵴紊乱,细胞核膨胀或固缩等。 损伤特点为外毛细胞损伤, 而内毛细胞正常;130 dB SPL组比120 dB SPL组损伤明显;12 Hz组与8 Hz组损伤无明显差别。结论:强次声波对豚鼠耳蜗毛细胞造成不同程度的损伤。     

鼓阶开窗微孔技术注入胰岛素样生长因子-1对庆大霉素致聋豚鼠的治疗作用

目的 探讨通过鼓阶开窗,微孔技术注胰岛素样生长因子-1(IGF-1)入内耳鼓阶,研究IGF-1对感音神经性聋动物模型(庆大霉索致耳聋豚鼠)的治疗作用.方法 豚鼠20只,施用庆大霉素致耳聋后均分为IGF-1组和对照组,行鼓阶开窗术,微孔技术注入试剂(IGF-1组注入鼠重组IGF-1,对照组注入人工生理外淋巴液)10μl,分别在术前和术后7、14 d行ABR测试;测试完后每组3只断头取听泡,在扫描电镜下观察耳蜗毛细胞改变.结果 IGF-1组ABR反应阈(RT)术后7、14 d均比术前有显著降低;IGF-1组比对照组RT在术后14 d有显著降低.扫描电镜发现对照组较IGF-1组毛细胞受损严重;同时,IGF-1组受损毛细胞表面有指状微绒毛生长.结论 微孔技术注入IGF-1可以改善豚鼠受损听力,减轻庆大霉素耳毒性的继续损伤,其机制可能为减轻耳蜗毛细胞的损伤并修复部分毛细胞,同时保护传人神经.     

血清一氧化氮变化对豚鼠庆大霉素耳毒性作用影响的实验研究

目的:探讨豚鼠血清一氧化氮变化在药物性耳聋过程中的作用机制. 方法:24只健康豚鼠随机均分为正常组、庆大霉素组、庆大霉素加L.精氨酸(全程)组和庆大霉素加L一精氨酸(半程)组.观察各种豚鼠血清中一氧化氮、听觉脑干反应、内耳外毛细胞的形态学变化. 结果:庆大霉素组血清中一氧化氮与正常组差异无统计学意义(P＞0.05);L-精氨酸全程组和半程组治疗后血清中一氧化氮高于正常组和庆大霉素组(P＜0.05～P＜0.01).L一精氨酸组ABR反应阈较庆大霉素组降低(P＜0.05).L-精氨酸组内耳外毛细胞仅有散在损失. 结论:一氧化氮一定量升高对内耳毛细胞有细胞毒性作用,进一步升高则对外毛细胞有保护作用.L-精氨酸治疗能降低ABR阈值,减少外毛细胞损害,对耳蜗有保护作用.     

Nd:YAG激光照射鼓膜对听觉功能影响的实验研究

目的 :探讨不同功率Nd :YAG激光照射鼓膜对内耳结构和功能的影响。方法 :应用光纤末端功率为 8W、6W、4W的Nd :YAG激光针对豚鼠作鼓膜照射 2s。采用听性脑干反应、耳蜗基底膜铺片及扫描电镜技术 ,观察激光照射前后 (分即刻及饲养 2周后 )ABR阈值及形态学变化。结果 :所用激光功率与内耳损伤程度成正相关 ,3组ABR阈值在即刻和饲养 2周后均升高 ,8W、6W组均较 4W组升高明显 ,8W、6W组照射后 2周ABR阈值较照射前差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,但 4W组 2周后恢复明显 ,与照射前差异无显著性。照射后立即取材的耳蜗毛细胞形态改变的结果 :即刻 8W、6W组耳蜗外毛细胞出现肿胀 ,硝酸银浓染 ,血管纹血管扩张 ,4W组无明显改变。饲养 2周后 ,8W组外毛细胞平均损失达 45 % ,6W组平均损失 2 0 % ,以上两组内毛细胞亦有少量缺失 ,4W组内、外毛细胞形态基本正常。结论 :本实验提示 :采用Nd :YAG激光治疗中耳疾病时 ,其光纤末端输出功率应控制在 4W ,时间为 2s为宜 ,否则可能会导致不可逆的听力下降。     

豚鼠冲击波负压暴露后耳蜗毛细胞扫描电镜和透射电镜观察

目的 探讨冲击波负压(BUP)暴露后豚鼠耳蜗毛细胞的超微结构变化特点.方法 将豚鼠暴露于不同强度的实验性BUP 1次,8h～7d后应用扫描电镜和透射电镜技术观察耳蜗基底膜毛细胞的超微结构变化.结果 负压峰值为-22.4 ～-63.3kPa的BUP暴露后,豚鼠耳蜗毛细胞的超微结构变化发生了不同程度的病理性改变,主要表现为第2、3排外毛细胞散在性缺失,甚至节段性外毛细胞缺失、纤毛融合甚至巨纤毛形成及胞浆溢出,纤毛内微丝解聚、线粒体肿胀、溶酶体数量增多和胞浆内空泡形成.结论 不同强度的BUP暴露可导致豚鼠耳蜗毛细胞的超微结构病变,且BUP强度越高,病变越重.     

诱生型一氧化氮合酶在正常豚鼠耳蜗内的分布

目的：观察诱生型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ－ｓｙｎｔｈａｓｅ,ｉＮＯＳ）在正常豚鼠耳蜗内的分布,方法：以特异性ｉＮＯＳ抗体,应用免疫组化ＡＢＣ法结合显微图像定量分析技术,在１０只正常豚鼠耳蜗冰冻切片上检测ｉｎＯＳ。结果：ｉＮＯＳ的阳性免疫反应产物分布于耳蜗的血管纹、螺旋神经节细胞、Ｃｏｒｔｉ器的内、外毛细胞及神经纤维。结论：正常豚鼠耳蜗有ｉＮＯＳ表达,提示ｉＮＯＳ可     

一氧化氮在顺铂耳、肾毒性中的作用

目的:探讨一氧化氮在顺铂的耳毒性、肾毒性机制中的作用。方法:应用免疫组织化学的方法研究顺铂中毒对诱导型一氧化氮合酶活性的影响。结果:正常对照组豚鼠的耳蜗螺旋器、肾小球、肾小管的上皮细胞呈免疫组化阴性染色;而实验组的耳蜗螺旋器的内、外毛细胞,肾近曲小管、远曲小管的上皮细胞呈免疫组化阳性染色。结论:一氧化氮可能在顺铂的耳毒性、肾毒性中起重要作用。     

应用胰蛋白酶分离豚鼠耳蜗内毛细胞

目的：采用胰蛋白酶孵育后机械分离法以获得单离的豚鼠耳蜗内毛细胞。方法：豚鼠被迅速断头处死，暴露耳蜗，在解剖显微镜下去除耳蜗侧壁，经胰蛋白酶消化并轻轻吹打，以获得单离的豚鼠耳蜗内毛细胞。静置后在倒置相差显微镜下观察。结果：本法每侧耳分离出活性好的内毛细胞约5～20个，多数分离的内毛细胞能存活5h左右。结论：此技术能提供足量的单离内毛细胞，用于内毛细胞的电生理性质等研究。     

碱性成纤维细胞生长因子/绿色荧光蛋白基因对药物性耳蜗损害的防治作用

目的　探讨阳离子脂质体 (天然碱性脂SA)携带碱性成纤维细胞生长因子 /绿色荧光蛋白 (bFGF/GFP)基因在豚鼠耳蜗中的表达 ,以及对庆大霉素所致耳蜗损害的防治作用。方法　将 36只豚鼠分为 3组 ,预防组右耳圆窗注入SA bFGF/GFP复合物后次日肌肉注射庆大霉素 15 0mg·kg-1·d-18天 ,治疗组先用庆大霉素 8d后次日右耳给药 ,对照组单用庆大霉素 8d。分别于实验前后及处死前行听觉脑干诱发电位 (ABR)测试。荧光显微镜下观察耳蜗GFP的表达 ;用耳蜗琥珀酸脱氢酶染色铺片 ,扫描电镜观察毛细胞的缺失情况。结果　荧光显微镜下见双侧耳蜗均有GFP表达。预防和治疗组处死前的双耳ABR阈值与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,耳蜗内外毛细胞缺失数与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。结论　SA脂质体介导的bFGF/GFP基因单耳给药双侧耳蜗均有高效表达 ,并对庆大霉素所致的耳蜗损害有防治作用。