HLA—Ⅱ血清学分型与微量SSP法基因分型的比较分析

目的 验证微量序列特异性引物（SSP）技术进行HLA－Ⅱ类移植配型的准确性并探讨血清学分型错误发生的原因。方法 采用聚合酶链反应结合微量SSP技术（简称微量PCR－SSP法）以及单克隆抗体血清学分型技术对血清样品进行HLA分型并比较其结果。结果 （1）微量PCR－SSP法检测的110例样本中，99例检出HLA－DR的396个等位基因、11例检出HLA－DQ的22个等位基因，检出10％的单倍型个体；（2）两种方法对比研究发现单克隆抗体血清学分型检出错误和漏检率较高，其误差在DR和DQ分别为38．81％和50．75％；（3）错误发生和易混淆的抗原为：DR15／16、11／12、13／14、8、12和DQ5／6、8／9。结论 微量SSP法可以准确检定血清学易漏检和发生错误的抗原等位基因。     

PCR-SSP法HLA-A、B基因分型与血清学分型的比较

目的比较聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)进行HLA-Ⅰ类A、B抗原位点分型的准确性,并探讨血清学分型错误发生的原因。方法用PCR-SSP以及单克隆抗体血清学分型技术对HLA-A、B分型并比较。结果34例样本PCR-SSP基因分型无假阳性和假阴性出现。PCR-SSP法与血清学比较,血清学检出错误或漏检率分别为HLA-A位点23.5%,B位点26.5%。血清学发生错误或易混淆的抗原有:A2和A68、A32和A33,B5、B60和61。结论PCR-SSP法进行HLA-A、B抗原等位基因分型具有分辨率高、特异性强、重复性好、实验过程简捷快速、分型结果较血清学更加准确可靠的优点。     

PCR-SSP法HLA-A、B基因分型与血清学分型的比较

目的 比较聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)进行HLA-Ⅰ类A、B抗原位点分型的准确性，并探讨血清学分型错误发生的原因。方法 用PCR-SSP以及单克隆抗体血清学分型技术对HLA-A、B分型并比较。结果 34例样本PCR-SSP基因分型无假阳性和假阴性出现。PCR-SSP法与血清学比较，血清学检出错误或漏检率分别为HLA-A位点23.5％，B位点26．5％。血清学发生错误或易混淆的抗原有：A2和A68、A32和A33，B5、B60和61。结论 PCR-SSP法进行HLA-A、B抗原等位基因分型具有分辨率高、特异性强、重复性好、实验过程简捷快速、分型结果较血清学更加准确可靠的优点。     

HA-DR抗原标准血清学分型与基因分型的比较研究

目的：比较研究顺序特异引物聚合酶链厦应(PCR-SSP)方法与标准血清学方法对人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)分型的精确性和临床应用价值。方法：选择肾移植受者101例，供者61例，采用PCR—SSP和血清学方法同步行HLA-DR分裂，比较其检测时间、敏感性、特异性和临床实用性。结果：162份样本，PCR-SSP分型均获成功，检出DR等位基因总数308个．分型时间5小时，特异性和重复性100％。血清学分型耗时20小时，8个位点不肯定，29个分型错误，35个空白位点中20个存在第二个位点，总误差率30．2％。结论：PCR—SSP方法用于HLA-DR分型较血清学方法快速、精确，试剂与临床样本易得，适合于临床应用。     

脐血HLA-Ⅰ类抗原PCR-SSP分型的研究

目的探讨PCR-SSP(聚合酶链反应-序列特异性引物)分型方法在脐血HLA-Ⅰ类抗原分型中的应用价值.方法 53份脐血用免疫磁珠分离T淋巴细胞,单克隆抗体配型板作血清学分型,其中38份脐血用DNA快速抽提技术提取DNA后进行PCR-SSP基因分型,对两种方法分型结果进行对比研究 .结果 38份脐血中,HLA-A位点PCR-SSP方法与血清学分型方法结果符合率100%,HLA-B位点血清学方法分型误差率为13.2%,其中1个抗原错误(占1.3%),9个抗原漏检(占11.8%).脐血采集后24小时内作血清学分型较理想,超过24小时则半数以上不能进行血清学分型.抽提脐血DNA一次成功率100%,不受时间限制.结论在脐血HLA-Ⅰ类抗原分型中,PCR-SSP方法准确、省血、标本限制少,明显优于血清学方法,适用于脐血库.     

脐血HLA—I类抗原PCR—SSP分型的研究

目的 探讨PCR－SSP（聚合酶链反应－序列特异性引物）分型方法在脐血HLA－I类抗原分型中的应用价值。方法 53例脐血用免疫磁珠分离T淋巴细胞，单克隆抗体配型板作血清学分型，其中38例脐血用DNA快速抽提技术提取DNA后进行PCR－SSP基因分型，对两种方法分型结果进行对比研究。结果 38例脐血中，HLA－A位点PCR－SSP方法与血清学分型方法结果符合率100％，HLA－B位点血清学方法分型误差率为13．2％，其中1个抗原错误（占1．3％），9个抗原漏检（占11．8％）。脐血采集后24小时内作血清学分型较理想，超过24小时则半数以上不能进行血清学分型。抽提脐血DNA一次成功率100％，不受时间限制。结论 在脐血HLA－I类抗原分型中，PCR－SSP方法准确、省血、标本限制少，明显优于血清学方法，适用于脐血库。     

PCR-RSSO基础上HLA-Ⅰ、Ⅱ基因分型的研究

目的通过对PCR-DNA技术的分析,探讨人类白细胞抗原(HLA)基因分型方法。方法采用PCR反向序列特异性寡核苷酸(polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术,建立改良半量扩增体系全自动HLA-I、Ⅱ等位基因分型方法,进行了635份血液标本HLA-A、B、C、DR、DQ等位基因分型,其中166份DNA同时采用序列特异性引物技术(PCR-SSP)和手工全量扩增体系PCR-RSSO技术。对全自动半量PCR-RSSO、PCR-SSP、手工PCR-RSSO 3种方法做两两比较。结果全自动半量PCR-RSSO的分型成功率为98.4%(3 124/3 175),PCR-SSP为98.8%(656/664),手工PCR-RSSO为88.3%(733/830)。经χ2检验,全自动半量PCR-RSSO与PCR-SSP的分型成功率无统计学差异,与手工PCR-RSSO有显著差异(P<0.05)。结论PCR-RSSO可识别HLA-Ⅰ,Ⅱ共706个等位基因,覆盖WHO命名委员会2000年公布的936个等位基因的75.43%;对706个HLA等位基因的分型均为中~高分辨率,有分辨纯合子等位基因的能力;易长期保存书面的实验原始资料,即杂交条;具有成本低、劳动强度低、省时和DNA消耗量少等优点。PCR-RSSO适合于造血干细胞移植和建立造血干细胞及脐带血干细胞库的组织配型。     

序列特异性PCR在HLA-DRB1基因分型中的应用

参照HLAⅡ型基因序列设计8条序列特异性引物，应用分别代表HLA－DR1－18血清学特异性的11株DNA标准品建立序列特异性PCR（PCR-SSP）和套式PCR方法，并对64例IDDM病人和72例健康对照者进行HLA－DRB1基因分型。结果：（1）方法学鉴定示各序列特异性引物均能从11株DNA标准品中扩增出相应的等位基因，并能检出来合子。除HLA－DR3组特异引物对DR1发生交叉外，其余序列特异性引物扩增中均未出现交叉现象，且重复性好；（2）样本测定显示IDDM组与对照组HLA－DR1、DR2、DR4、DR7、DR8和DR10各等位基因频率无显著差异。结果表明，PCR-SSP不仅具有较好的敏感性、特异性和重复性，而且显得简便、快速经济，有较好的应用前景。     

微量序列特异性引物聚合酶链反应-HLA分型技术在肾移植中的应用

目的 探讨适用于临床肾移植的组织配型新技术。方法 建立微量序列特异性引物聚含酶链反应（微量SSP法）的方法，对肾移植供、受者SSP-HLA-DRB/DQB 基因分型，并与单克隆抗体一步法分型结果进行对比研究。结果 应用两种方法对142份标本进行HLA-Ⅱ类抗原/基因分型，结果完全相符，微量SSP 法不但快速、需血量少，而且分辨率高、结果准确。结论 微量SSP法具有快速、准确、省血等优点，适合在临床器官移植配型中推广应用。     

HLA—DR两种分型方法的比较

目的 探讨肾移植供受体HLA-DR血清学分型与PCR-SSP基因分型方法的优缺点。方法 对已作HLA-DR血清学分型的供受体标本,进行PCR-SSP基因分型法作HLA-DR抗原分型;并对4例血清学分型为HLA-DR一个位点,而PCR-SSP为两个位点的受者,重新抽血作HLA-DR血清学业分型。结果 血清学法耗时80min,PCR-SSP法耗时145min;血清学方法误差率（不包括重新血清学分型的例数）为11.3%(受者14.7%,供者8.0%).重新作血清学分型的4例中,有1例结果为两个们点,与PCR-SSP结果一致,其余与原结果相同.结论 改进的血清学方法暂时还适合我国尸体供肾快速配型的需要.PCR-SSP法分型具有准确、简便、快速的优点,随着其方法学的不断发展将逐步取代血清学方法在HLA-DR分型中的应用。     

顺序特异引物聚合酶链反应技术行HLA-Ⅰ类抗原基因分型与临床应用

目的 采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（PCR-SSP)建立汉族人群HLA-Ⅰ类A、B位点DNA分型方法。材料与方法 设计合成81个特异性引物和1对阳性对照引物．组成20个PCR反应用于A位点分型、41个PCR反应用于B位点分型，建立一步法PCR-SSP方法．应用于62份标准DNA和345例肾移植供受者的HLA-Ⅰ类DNA分型。结果 所有样本PCR-SSP基因分型均获得成功．无假阳性和假阴性出现．40份样本的重复率100％，总耗时5小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出A位点等位基因19个、B位点等位基因41个；实际检出汉族人群A抗原特异性13个、B抗原特异性32个。结论 PCR-SSP技术行HLA-Ⅰ类A、B位点DNA分型．分辨度高、特异性强、重复性好、相对简捷快速，分型结果较血清学方法更加精确可靠、适合于临床应用。     

PCR—RSSO基础上HLA—I、Ⅱ基因分型的研究

目的：通过对PCR－DNA技术的分析，探讨人类白细胞抗原（HLA）基因分型方法。方法：采用PCR反向序列特异性寡核苷酸（polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术，建立改良半量扩增体系全自动HLA－I、Ⅱ等位基因分型方法，进行了635份血液标本HLA－A、B、C、DR、DQ等位基因分型，其中166份DNA同时采用序列特异性引物技术（PCR－SSP）和手工全量扩增体系PCR－RSSO技术。对全自动半量PCR－RSSO、PCR－SSP、手工PCR－RSSO 3种方法做两两比较。结果；全自动半量PCR－RSSO的分型成功率为98．4％（3124／3175），PCR－SSP为98．8％（656／664），手工PCR－RSSO为88．3％（733／830）。经χ^2检验，全自动半量PCR－RSSO与PCR－SSP的分型成功率无统计学差异，与手工PCR－RSSO有显著差异（P＜0．05）。结论：PCR－RSSO可识别HLA－I、Ⅱ共706个等位基因，覆盖WHO命名委员会2000年公布的36个等位基因的75．43％；对706个HLA等位基因的分型均为中－高分辨率，有分辨纯合子等位基因的能力；易长期保存书面的实验原始资料，即杂交条；具有成本低、劳动强度低、省时和DNA消耗量少等优点。PCR－RSSO适合于造血干细胞移植和建立造血干细胞及脐带血干细胞库的组织配型。     

MicroSSP法用于器官移植病人HLA—DR／DQB1等位基因分型的研究

目的：通过快速、准确的微量序列特异性引物聚合酶链法对器官移植病人HLA－DR／DQB1等位基因分型。方法：MicroSSP法^[1]是在PCR－SSP法的基础上建立起来的。可用于低或高分辨的HLA分型；此法有理想的引物和布局；引物和对照物事先包被在干板上；应用微量SSP凝胶系统电泳仅用2－4分钟；配有视窗系统分析软件，确保了分析结果的准确性。结果：选择了76例肝、肾移植病人进行HLA－DR／DQB1分型，共检出14种DRB1、7种DQB1等位基因。频率最高的为DRB1＊1501－1502、DRB1＊1401、1404、1405、DRB1＊0701－0702、DRB1＊1201、1202。DQB1＊05、DQB1＊06、DQB1＊07。符合东方人基因频率的分布。分型全部成功。结论：MicroSSP法具有快速（整个实验仅用2小时）、需血量少、分辨率高、方法稳定、结果判断准确等优点。特别适用于尸体器官的供体配型。     

Kidd血型抗原基因定型技术的建立与初步应用

目的 建立简易的Kidd血型抗原基因分型技术.方法 设计2对引物,分别特异性针对Kidd血型基因(SLC14A1)Jka和Jkb抗原的等位基因(JKA和JKB),建立序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)技术,基因定型Jka和Jkb抗原,初步用于检测192份无偿献血者DNA样品.全部样品均进行血清学红细胞Kidd抗原鉴定.结果 建立的PCR-SSP技术检测192份DNA样品的基因分型结果均与血清学检测结果一致,样品中发现Jk(a+b-)17例(8.854%),Jk(a+b+)125例(65.104%),Jk(a-b+)50例(26.042%),未发现Jk(a-b-)个体.JKA基因频率为0.414 063(41.4%),JKB基因频率为0.585 937(58.6%).结论 成功建立Kidd血型系统抗原基因分型技术,可用于常规检测.     

河南汉族HLA-B27阳性者HLA-A、B、DRB1基因分布频率调查

目的:了解河南汉族正常人群HLA-B27阳性者HLA-A、B、DRB1等位基因分布频率。方法:从河南地区汉族正常献血者中随机选择11441例标本进行HLA-B27初检,对初检阳性者采用PCR-SSP技术进行基因分型检测,对HLA-A、B、DRB1基因频率分布进行分析。结果:11441例河南汉族正常人群中HLA-B27阳性500例(4.37%)。HLA-B27阳性者HLA-A基因座位共检出等位基因14个,以A2(0.1950)、A3(0.1530)、A11(0.1670)和A24(0.1330)最为常见;HLA-B基因座位共检出等位基因34个,以B13(0.0700)、B15/62(0.0360)、B35(0.0340)、B40/60(0.0300)、B40/61(0.0310)、B46(0.0310)和B51(0.0420)最为常见;HLA-DRB1基因座位共检出等位基因13个,以DR4(0.2100)、DR7(0.0930)、DR9(0.0970)、DR11(0.0880)、DR12(0.0930)和DR15(0.1410)最为常见。结论:河南汉族正常人群中HLA-B27阳性者HLA-A、B、DRB1位点基...     

急性淋巴细胞白血病的HLA分型

应用PCR—SSP方法对江苏地区33例高危组急性淋巴细胞白血病(ALL)患者进行HLA-I、Ⅱ类抗原基因分型，经统计分析发现HLA-B5、DR7、DR13与疾病相关。     

HLA-A、B血清学分型与DNA分型的比较研究

目的　采用PCR SSP技术对四川汉族人进行HLA A、B基因分型 ,并与血清学分型比较 ,以探索四川汉族人HLA A、Β血清学分型误定规律。方法　对 13 6例四川汉族健康献血者及移植配型供受者进行PCR SSP分型并与血清学方法比较。结果　 13 6例样本中有 60例血清学分型与PCR SSP分型不符 ( 4 4 1% )。HLA A、B纯合子血清学分型错误率是杂合子的 2倍多。HLA B血清学分型错误率是HLA A的 2倍 ( 2 0 6%VS11.2 % ,P <0 0 0 5 ) :在纯合子、杂合子分别为47 4%VS2 3 .3 %、18 4%VS9.4%。结论　HLA A、B血清学分型较PCR SSP存在很高错误率 ,其中纯合子比杂合子高 ,HLA B比HLA A高。     

PCR-SSP技术在HLA分型中的应用

PCR-SSP（Sequence specific primer,序列特异性引物）是一种基因多态性分析技术,可用于HLA复合体及其他具有多态性特点的基因分型。在本论文中我们应用PCR-SSP技术对正常人进行HLA基因分型。HLA抗原分型过去主要采用血清学和细胞学方法。与他们相比,PCR-SSP技术具有简便、快速、准确及重复性好等特点。本文介绍PCR-SSP技术在HLA分型中的应用以及该技术的方法、特点以及常见问题的处理。     

106例广东汉族群体HLA基因频率的分析及其意义

目的 探讨广东汉族群体HLA抗原多态性分布的情况。方法 随机选择了106例广东籍汉族人进行HLA分型。分别采用微量淋巴细胞毒试验及PCR－SSP方法检测了HLAⅠ类,A,B位点及HLAⅡ类DR位点。结果 共检出了HLA－A位点抗原10种,HLA－B位点抗原21种,HLA－DR位点抗原13种,并与北方人群抗原分布进行对比。结论 A11,B46和B60抗原频率比北方人群有显著增高,而A1,A3、B7等抗原则相对减少,显示广东地区汉族人群与北方人群间在HLA多态性分布上有较显著的差异。     

等位基因特异性PCR技术在DEL表型基因分型中的应用

目的：建立DEL表型的基因分型方法,用于快速鉴定DEL表型。方法：用RH Box基因分型方法鉴定标本的基因型,用血清学方法确定标本的DEL表型。根据RHD1227A等位基因序列设计等位基因特异性．聚合酶链反应（allele specific-polymerase chain reaction,AS—PCR）,用于DEL表型基因分型,结果同血清学的方法作比较,探讨临床应用的可行性。结果：28例RH Box基因分型为RHD^-／RHD^-的标本,血清学方法、基因分型方法DEL表型鉴定结果均为阴性;在25例RHBox基因分型为RHD^＋／RHD^-或RHD^＋／RHD^＋的标本中,用血清学方法检出的11例DEL表型标本,基因分型方法均扩增到867bp的1227A等位基因条带;1例血清学方法阴性,而基因分型方法检测为阳性,后经测序分析证实RHD1227A为阳性,分析此例标本可能为血清学方法漏检。这说明在鉴定DEL表型的方法中基因分型方法比血清学有更高的灵敏度。结论：AS—PCR方法可用于临床筛选Rh阴性人群中的DEL表型。