半夏内生菌的分离及抗菌活性筛选

目的：分离三叶半夏和掌叶半夏的内生菌,并对分离的内生菌进行抗菌活性筛选。方法：采用组织块分离法从不同品种半夏中分离内生菌,并对分离所得内生菌进行初步鉴定。利用对峙法进行抗菌活性筛选,获得具有抑菌活性内生菌。结果：共分离得到内生菌39株,其中内生细菌15株、内生真菌24株。对峙法筛选实验结果表明：5株菌对大肠杆菌具有较强拮抗性,5株菌对金色葡萄球菌有较强拮抗性,4株菌对枯草杆菌有较强拮抗性。结论：半夏含有丰富的内生菌菌种资源,实验表明多株菌具有代谢抑菌活性物质的特性,在获取天然药用生物活性成分方面存在很大潜能。     

西洋参内生菌株的分离及拮抗活性菌株的筛选和鉴定

目的研究吉林产西洋参内生菌资源状况,筛选出对西洋参病原菌具有拮抗作用的内生菌。方法采用混菌法初筛和发酵液拮抗法复筛来筛选具有拮抗活性的菌株,并用16 S r DNA和ITS方法鉴定筛选得到的内生菌株。结果在西洋参中共分离获得34株内生菌,通过初筛和复筛后,从中选出了6株对西洋参病原菌具有较好拮抗作用的菌株,分别为B3、B11、B17、B23、B24、F10,其中B3对7种病原菌均表现出了抑菌作用,F10对锈腐病菌Cylindrocarpon destructan和黑斑病菌Alternaria panax的抑菌效果最好,其抑菌圈直径均大于35 mm,经鉴定B3和F10分别为芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus和暗黄青霉Penicillium citreonigrum。结论西洋参内生菌具有多样性,并有拮抗活性高的菌株存在,可以成为西洋参病害生防菌的新来源。     

山腊梅内生真菌分离及其抑菌活性初步研究

目的明确药用植物山腊梅内生菌资源及其抑菌活性。方法通过组织块法对山腊梅内生真菌进行分离,并选择大肠杆菌和金色葡萄球菌为指示菌,采用打孔法对分离菌株进行抑菌活性筛选。结果从山腊梅植物中分离获得42株内生真菌,13株菌株对指示菌具有抑菌活性,占总菌株数的30.95%,2株菌株对指示菌具有明显的抑菌活性。结论山腊梅植物组织中存在丰富的内生真菌,其代谢产物具有一定的抑菌作用。     

药用植物车前内生真菌分离及其抑菌活性初步分析

目的：研究药用植物车前可培养内生真菌多样性及其抑菌活性特征。方法：通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择小麦全蚀病菌、枸杞黑果病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和黄瓜立枯病菌5 种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌4 种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。结果：从车前根茎叶组织器官中分离出13 株内生真菌,以茎部最多,叶部次之,根部最少;经形态学初步分类鉴定归于2 个目,2 个科,5 个属;其中有11 株菌对1 种或多种植物病原真菌指示菌有不同程度的抑制作用,占菌株总数的84.6%,6 株内生真菌对1 种或多种供试细菌指示菌具有不同程度的抑制作用,占分离菌株总数的46.2%;3 株活性菌株PAEFS001、PAEFS007、PAEFS008 分别对5 种供试植物病原真菌指示菌具有明显抑制作用,菌株PAEFS001 属于束丝菌属,菌株PAEFS007 和PAEFS008 同属于曲霉属;1 株活性菌株PAEFS003 分别对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌2 种供试细菌指示菌有明显的抑制作用,属于梭孢霉属;药用植物车前内生真菌具有明显的抑菌活性,抑制植物病原真菌的范围较宽,对革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用明显,具有一定的选择性。结论：从药用植物车前内生真菌寻找新的抑菌活性物质是可行的,通过对其进行开发和利用,对提高药用植物车前的综合利用价值具有重要意义。     

宁夏枸杞内生菌的抗菌和抗肿瘤活性研究

为筛选具有抗菌抗肿瘤活性的枸杞内生菌资源,对分离自宁夏枸杞的10株内生菌发酵液的抑菌活性和体外细胞毒活性进行检测,通过ITS和16S rDNA序列分析对菌株进行了分子鉴定。结果表明,5株内生真菌对供试病原菌都未表现出抑制活性,放线菌AL6对3种病原真菌都有一定的抑制作用,而AL5仅对金黄色葡萄球菌有较强抑制活性。但内生真菌的抗肿瘤活性明显强于放线菌。当发酵液浓度为0.2 g·L~(-1)时,有4株内生真菌至少对1种肿瘤细胞的抑制率高于50%。序列分析表明,5株内生真菌隶属于曲霉属、青霉属和翘孢霉属。5株内生放线菌隶属于链霉菌属、微球菌属和拟诺卡氏菌属。曲霉属菌株FL1对A549和HeLa细胞的抑制活性都较强,其IC_(50)分别为0.022,0.028 g·L~(-1),值得进一步研究。     

人参可利用内生菌株的筛选和鉴定

目的研究吉林产人参Panax ginseng内生菌资源状况,筛选出对人参病原菌具有拮抗作用的内生菌。方法采用混菌法初筛和发酵液拮抗法复筛来筛选具有拮抗活性的菌株,并用16 S r DNA和ITS方法鉴定筛选得到的内生菌株。结果在人参中共分离获得133株内生菌,通过初筛和复筛后,从中选出了4株对人参病原菌具有较好拮抗作用的菌株,分别为B16、B25、B69和F32,其中B16、B25和B69对6种以上病原菌均表现出了抑菌作用,F32对菌核病菌、疫病菌和根腐病菌的抑菌效果最好,其抑菌圈直径均大于35 mm,经鉴定它们分别为甲基营养型芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌、死谷芽孢杆菌和齿孢青霉。结论人参内生菌具有多样性,并有拮抗病原菌活性高的菌株存在,可以成为人参病害生防菌的新来源。     

温莪术内生真菌的分离及其抗菌活性的初步研究

 目的研究温莪术内生真菌的种群组成及其代谢产物抗菌活性。方法采用内生菌常规分离法对健康温莪术植株体内的内生真菌进行了分离鉴定。以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏杆菌为测试菌种,对温莪术根、茎、叶中分离的56株内生真菌进行抗菌活性筛选。结果经初步鉴定,这些内生真菌为5目、6科、24属;抑菌实验表明,56株内生真菌中有39株对5种测试菌均有不同程度的抑制作用。结论温莪术植物含有丰富多样的内生真菌,且多数内生真菌都表现为较高的抑菌活性。     

具有抑菌活性的麻花秦艽内生细菌的分离鉴定

目的分离获得的麻花秦艽Gentiana straminea Maxim内生细菌,研究具有抑菌活性的菌株,分析其次级代谢产物。方法采用平板对峙法,筛选具有抑菌活性的内生细菌;扩增具有抑菌活性菌株的16S r RNA基因,结合形态和生理生化实验,鉴定相应菌株;采用高效液相色谱法(HPLC)对具有抑菌活性菌株的发酵产物进行初步检测。结果从分离得到的10株内生细菌中,筛选得到2株对沙门氏菌、志贺氏菌和大肠杆菌具有拮抗作用的菌株(QJ3和QJ9)。菌株QJ3归属于黄单胞菌属(Xanthomonas),在根、茎、叶、花中均有分布,占总分离内生细菌数量的59.47%,对沙门氏菌具有较强的抑菌作用,抑菌圈直径为15 mm;菌株QJ9为成团泛菌Pantoea agglomerans,仅在茎中分布,占总分离内生细菌数量的0.047%,对志贺氏菌的抑菌能力最强,抑菌圈直径为16 mm。通过对菌株QJ3和QJ9发酵液检测后发现,两株菌的次级代谢产物中均可能存在龙胆苦苷。结论麻花秦艽具有丰富的内生细菌资源,在新型抑菌药物筛选的替代资源及活性物质的应用方面具有重要的潜力。     

北沙参内生真菌的抑菌活性与分类研究

目的研究北沙参内生真菌的抗菌活性,鉴定活性真菌的分类地位。方法采用植物组织分离法从北沙参基原植物珊瑚菜Glehnia littoralis中分离内生真菌。以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母为指示菌株,采用牛津杯法研究北沙参内生真菌的抑菌活性,对具有抑菌活性的内生真菌进行分子鉴定。结果有4株内生真菌对大肠杆菌具有抑制作用,内生真菌发酵浓缩液抑菌圈直径与4 U/mL硫酸庆大霉素抑菌圈直径的比值(d/D)最大可达1.07;有15株内生真菌对金黄色葡萄球菌具有抑制作用,d/D值最大为0.65;有3株内生真菌对白色假丝酵母具有抑制作用,内生真菌发酵浓缩液与0.2 mg/mL氟康唑的d/D值最大可达1.27。19株具有抑菌活性的内生真菌归于4个目,5个科,7个属,8个种。结论北沙参植物中存在多种抑菌活性的内生真菌,对于北沙参内生真菌资源的开发及药材道地性的评价具有一定的指导意义。     

药用牡丹拮抗内生细菌的筛选鉴定及优化培养

目的:研究具有拮抗金黄色葡萄球菌的药用牡丹内生细菌,并通过优化目的菌株培养条件提高其抑菌活性。方法:采用滤纸片法和抑菌圈法,对分离于亳州、洛阳和菏泽的牡丹内生细菌进行筛选,获得最优拮抗菌株,根据常规分类学结合16S rDNA进行鉴定,并通过单因素试验、正交设计试验对其优化培养。结果:菌株X21的抑菌圈直径为17.3 mm,对病原菌有较好的抑制作用,鉴定为短小芽孢杆菌Bacillus pumilus,优化培养后X21对病原菌的抑菌性增强;培养基的最佳碳源为可溶性淀粉、氮源为牛肉膏,优化发酵条件组合为:5%接种量、20%装液量和180 r/min的转速。结论:药用牡丹根内细菌具有拮抗性,且优化培养后内生细菌抑菌活性增强。     

川麦冬内生真菌分离和鉴定及抑菌活性初步研究

目的深入研究川麦冬内生真菌分布的多样性和特异性,并考察其抑菌活性。方法分别对野生川麦冬和大田栽培川麦冬的根部和叶部利用组织块法分别进行分离纯化,利用形态学和ITS序列聚类分析等分子生物学方法对所得内生真菌进行鉴定,利用菌饼法对其抑菌活性进行初步研究。结果从川麦冬中共分离得到27株内生真菌,其中野生麦冬内生真菌(22株)明显较大田栽培麦冬内生真菌(5株)丰富,根部内生真菌(17株)明显较叶部内生真菌(10株)丰富。此外镰刀菌属和曲霉菌属为麦冬优势菌属,且镰刀菌属有根部专一定植特性,曲霉菌属却广泛分布于根部和叶部。同时,40%的麦冬内生真菌对白色念珠菌具有抑制活性,对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和粪肠球菌抑制菌株较少。结论川麦冬具有丰富的内生真菌多样性,并且其内生真菌分布具有明显的环境和部位特异性。所分离的内生真菌具有一定的抑菌活性,其中H5、031p和H8 3株菌表现出较强抑菌活性,值得进一步研究。     

无花果内生真菌分离鉴定及其活性研究

目的:分离和鉴定无花果Ficus carica植物内生真菌,并对其进行活性筛选。方法:采用形态学方法对分离菌株进行鉴定,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白菜黑斑病菌、苹果腐烂病菌、小麦赤霉病菌、草莓枯萎病菌、青霉菌为测试菌对分离得到的植物内生真菌进行抗菌活性实验。结果:从健康的无花果植物的根、茎、叶中分离共获得61株内生真菌。属于5纲,7目,12科,20属。抗菌活性试验表明有40株内生真菌具有抗菌活性,占总内生真菌的65.57%。结论:无花果植物内生真菌多样性丰富,具有很好的研究和应用价值。     

铁皮石斛内生真菌的分离及其体外抑菌和抗肿瘤活性初步研究

目的分离铁皮石斛Dendrobium officinale内生真菌,研究内生真菌的分布并初步探讨和筛选具有抑菌和抗肿瘤活性的特异菌株。方法利用组织分离法和分子生物学方法分离、鉴定内生真菌;以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌作为受试对象,采用对峙法和管碟法分别对内生真菌及其发酵代谢产物的醋酸乙酯萃取相进行抑菌实验;采用MTT法对内生真菌代谢产物醋酸乙酯萃取相进行体外抗肿瘤活性检测。结果从铁皮石斛中分离得到28株内生真菌,分子鉴定结果显示,分离的内生真菌归属于10个属,其中镰刀菌属为优势属。抑菌实验结果显示28株内生真菌中,有7株至少能对1种指示菌有抑菌作用,其代谢产物的醋酸乙酯萃取相对3种指示菌和Hep G2细胞具有不同程度的抑制作用。结论铁皮石斛内生真菌种群丰富,从中分离得到的内生真菌具有潜在的抑菌和抗肿瘤活性,为进一步开发抑菌、抗肿瘤候选药物奠定基础。     

产冬凌草甲素菌株筛选鉴定及其抗肿瘤活性研究

目的对冬凌草内生真菌进行筛选鉴定,并研究其体外抗肿瘤活性,以期得到冬凌草甲素高产抗肿瘤活性菌株。方法采用TLC法和HPLC法对前期从冬凌草中分离出的256株内生真菌进行筛选,HPLC-MS测定菌株发酵液中的冬凌草甲素。结合形态学特征、ITS序列对筛选出的菌株进行鉴定。MTT法测定筛选菌株的体外抗肿瘤活性。结果从冬凌草中分离出的256株内生真菌经筛选,获得1株冬凌草甲素高产菌株M-J-5,鉴定为青霉属草酸青霉菌Penicillium oxalicum Currie et Thom,其对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞活性具有一定抑制作用。结论从冬凌草内生真菌中筛选得到产冬凌草甲素且具抗肿瘤活性的菌株M-J-5。     

甘草内生菌20株有效菌株发酵物与宿主水煎液、总黄酮、总皂苷体外抑菌活性对比研究

目的:研究甘肃野生和栽培甘草内生菌有效菌株发酵物与宿主水煎液、总黄酮、总皂苷体外抑菌活性的差异。方法:采用体外定量抑菌方法观察20株甘草内生菌有效菌株发酵物、水煎液、总黄酮、总皂苷对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌的抑菌活性。结果:各组对金黄色葡萄球菌均有抑菌活性(P0.01),各有效菌株组均弱于宿主组;有效菌株中JTZB059、JTYB029抑菌活性相对较强,最小抑菌浓度分别为0.125 0,0.062 5 g/m L;宿主中野生、栽培甘草总黄酮抑菌活性相对较强。各组对肺炎链球菌均有抑菌活性(P0.01);与栽培甘草水煎液、总皂苷对比,JTZB005抑菌活性较强(P0.01),最小抑菌浓度0.062 5 g/m L;有效菌株中JTZB005抑菌活性相对较强,宿主中栽培甘草总黄酮抑菌活性相对较强。各组对大肠杆菌均有抑菌活性(P0.01);与栽培甘草水煎液、总黄酮对比,JTZB018抑菌活性较强(P0.01),最小抑菌浓度0.125 0 g/m L;有效菌株中JTZB018抑菌活性相对较强,宿主中野生、栽培甘草总黄酮抑菌活性相对较强。结论:20株甘草内生菌发酵物对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌均有不同程度抑菌活性,JTZB005对肺炎链球菌的抑菌活性强于栽培甘草水煎液、总皂苷,JTZB018对大肠杆菌的抑菌活性强于栽培甘草水煎液、总黄酮。     

紫花地丁根际菌的筛选鉴定及活性物质初步研究

目的从药用植物紫花地丁根部土壤中筛选出具有抗菌活性的根际菌并对其活性物质进行初步分析。方法采用稀释涂布法分离根际菌,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、费氏柠檬酸杆菌为指示菌经固定琼脂块法筛选活性菌株;通过16 s rDNA基因序列数据分析及系统发育进化树确定活性菌株的分类;采用纸片扩散法测定活性菌株发酵液抗菌活性,采用萃取法分析菌株发酵液抗菌活性物质极性。结果共分离出21株根际菌,其中2株活性菌株对指示菌有较强抑菌作用,分别命名为Y1-7、Y1-13a;菌株Y1-7为Streptomyces sp.属,菌株Y1-13a为Streptomyces californicus属。活性菌株发酵液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌均具有较强抑菌作用,抑菌圈直径10.5～17.0 mm,且Y1-13a对铜绿假单胞菌及费氏柠檬酸杆菌具有较强抑菌作用。Y1-7发酵液抑菌活性物质为脂溶性物质,Y1-13a抑菌活性物质为水溶性物质。结论菌株Y1-7、Y1-13a次级代谢产物均有一定的抑菌作用,具有进一步研究及开发利用的价值。     

40株银杏内生真菌抗菌活性比较及其活性成分研究

目的比较银杏内生真菌的抗菌活性,并对其抗菌活性成分进行分析。方法采用组织分离法从健康银杏叶、枝条、果实等组织中分离、纯化内生真菌;以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、酿酒酵母、黑曲霉和根霉为抑菌指示菌,采用滤纸片和平板孔阱扩散法,对40株银杏内生真菌发酵液抗菌活性进行初筛和复筛;利用硅胶柱色谱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱、制备型HPLC、薄层色谱(TLC)和HPLC-MS等方法,对抗菌活性较高的草酸青霉菌Penicillium oxalicum YXY009菌株的抗菌成分进行分析。结果 40株银杏内生真菌中,18株为不产孢真菌;产孢真菌中,青霉属和曲霉属为优势菌属,分别占总菌数的17.5%和15.0%;YXY009菌株发酵液的抑菌活性明显高于其他菌株,对酿酒酵母和根霉抑菌圈直径分别达到(22.35±1.32)和(23.60±0.83)mm;从YXY009菌株发酵液中分离得到抑菌活性有效成分,初步鉴定为毛果杨苷。结论首次从银杏内生真菌代谢产物中分离出具有广谱抗菌活性的化合物毛果杨苷。     

泰山黄精内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的 研究泰山黄精内生真菌的分布及其多样性,并筛选具有抑菌活性的内生真菌.方法 采用平板分离法分离黄精内生真菌,采用滤纸片扩散法测试黄精内生真菌培养物抗耐药菌活性,同时采用分子生物学方法对筛选出的活性菌株进行鉴定.结果 从泰山野生黄精的根、茎、叶和果实中共分离出32株内生真菌,分属于7个属,分布最广的类群是镰刀菌属Fusarium sp.,占总菌株的31.3％,其次是不产孢真菌Sterile mycelia (28.1％)和链格孢属Alternaria sp.(21.9％).各组织中内生真菌的分布存在一定的组织差异性,根中内生真菌的分离率最高,茎和叶中次之,果实中最少.共有来自5个属的14株内生真菌至少对1种供试菌株有抗菌活性,其中8株具有广谱抗耐药菌活性.对活性最强、抑菌谱最广的不产孢菌株HJG-10进行分子生物学鉴定,将其确定为裂褶菌Schizophyllum commune.结论 泰山黄精中蕴含着大量具有抑菌活性的内生真菌,为寻找和开发新型抑菌生物制剂开辟了一条新途径.     

五味子中内生拮抗活性细菌的分离与筛选

目的 从不同地区采集五味子植株,分离内生细菌,并进行菌群密度、拮抗菌筛选和抑菌活性研究。方法 采用平板分离法分离内生细菌并纯化典型菌株;平板对峙法测定体外拮抗活性;生长速率法测定抑菌活性。结果 不同种植地、五味子不同器官中内生细菌的菌群密度差异较大,野生的较栽培的大;五味子各器官中,根中的内生细菌最多,其次为茎,叶片中最少。从分得的大量内生细菌中共纯化出302株内生细菌,拮抗菌比率平均为24.19%。从中选出了12株对五味子茎基腐病菌、人参根腐病菌、棉花枯萎病菌、番茄灰霉病菌、人参黑斑病菌具有较好拮抗作用的菌株。12株菌株的发酵产物对供试病原菌菌丝生长均有一定的抑制作用,其中JYg-2对人参根腐病的抑制率最高,达80.02%。结论 五味子植株体内存在大量内生细菌,并且含有一定比率的拮抗菌,拮抗活性稳定。因此五味子内生细菌可以成为开发拮抗菌资源的重要途径,并具有较大潜能。     

药用植物刺五加内生真菌的分离及其抑菌活性研究

 目的研究药用植物刺五加内生真菌及其次生代谢产物的抑菌活性,旨在获得有良好抑菌活性的菌株,以寻找新型抗菌物质。方法以枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、单增李斯特菌、酿脓链球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和白假丝酵母为实验菌株,用菌饼法及纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行了抑菌实验。结果从药用植物刺五加中分离到42株内生真菌,其中有37株真菌对至少1种实验菌株有抑菌活性,占总分离菌株的88.10%;有12株内生真菌次生代谢产物对至少1种指示菌有抑菌活性,占总分离菌株的28.57%。结论药用植物刺五加的内生真菌及其次生代谢产物中存在着丰富的抑菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供资源。