重组嘧啶核苷磷酸化酶工程菌菌种的稳定性考察

目的 研究基因工程菌E.coli TOP10F'在LB培养基中传代50代过程中菌种的稳定性.方法 以菌体和菌落的形态、质粒稳定性(ST)、质粒酶切图谱和重组嘧啶核苷磷酸化酶(PyNPase)的表达量和酶活性为指标进行考察,以评价工程菌的稳定性.结果 重组PyNPase工程菌在传代50代的过程中质粒稳定性高,传代10代内质粒稳定性(ST)为100%,其表达产物可达发酵液总蛋白的20%,其活性为1.18 U·ml-1,传代50代的菌体与菌落呈典型的大肠杆菌形态.结论 重组嘧啶核苷磷酸化酶工程菌菌种稳定.     

川麦冬内生真菌分离和鉴定及抑菌活性初步研究

目的深入研究川麦冬内生真菌分布的多样性和特异性,并考察其抑菌活性。方法分别对野生川麦冬和大田栽培川麦冬的根部和叶部利用组织块法分别进行分离纯化,利用形态学和ITS序列聚类分析等分子生物学方法对所得内生真菌进行鉴定,利用菌饼法对其抑菌活性进行初步研究。结果从川麦冬中共分离得到27株内生真菌,其中野生麦冬内生真菌(22株)明显较大田栽培麦冬内生真菌(5株)丰富,根部内生真菌(17株)明显较叶部内生真菌(10株)丰富。此外镰刀菌属和曲霉菌属为麦冬优势菌属,且镰刀菌属有根部专一定植特性,曲霉菌属却广泛分布于根部和叶部。同时,40%的麦冬内生真菌对白色念珠菌具有抑制活性,对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和粪肠球菌抑制菌株较少。结论川麦冬具有丰富的内生真菌多样性,并且其内生真菌分布具有明显的环境和部位特异性。所分离的内生真菌具有一定的抑菌活性,其中H5、031p和H8 3株菌表现出较强抑菌活性,值得进一步研究。     

Exiguobacterium sp.MY02菌株PyNPase基因的克隆与表达

目的 鉴定、构建并高效表达从土壤中筛选到的一株耐热型、高活性的嘧啶核苷磷酸化酶(PyNPase).方法 以MY02总DNA为模板,通过简并PCR、特异PCR引物、筛选和DNA测序,在5'引物和3'引物中分别引Nco I和Xba I酶切位点,将pynp基因克隆至分泌表达载体pBAD/gⅢ A中,转化至E.coli TOP 10F',以L-阿拉伯糖诱导表达,并对诱导剂浓度、诱导时间等进行优化.结果 成功构建了重组表达载体pBAD/gⅢ A-pynp,通过磷酸化和转化反应,鉴定此酶为PyNPase.结论 优化PyNPase的纯化条件与复性条件,可获得大量的PyNPase.     

Exiguobacterium sp.MY02菌株PyNPase基因的克隆与表达

目的鉴定、构建并高效表达从土壤中筛选到的一株耐热型、高活性的嘧啶核苷磷酸化酶（PyNPase）。方法以MYO2总DNA为模板，通过简并PCR、特异PCR引物、筛选和DNA测序，在5’引物和3’引物中分别引入NcoⅠ和XbaⅠ酶切位点，将pynp基因克隆至分泌表达载体pBAD／gⅢA中，转化至E．coli TOP 10F’，以L-阿拉伯糖诱导表达，并对诱导剂浓度、诱导时间等进行优化。结果成功构建了重组表达载体pBAD／gⅢ A-pynp，通过磷酸化和转化反应，鉴定此酶为PyNPase。结论优化PyNPase的纯化条件与复性条件，可获得大量的PyNPase。     

丙泊酚联合依托咪酯用药在冠心病病人行非心脏手术全麻诱导中的效果评价

目的评价丙泊酚联合依托咪酯在冠心病病人行非心脏手术全麻诱导中的临床评价.方法选取ASA 1-2分级冠心病病人60例,根据随机双盲法分为3组;丙泊酚1.5mg/kg(p组),依托咪酯0.3mg/kg(E 组),丙泊酚1mg/kg联合依托咪酯0.15 mg/kg(L组).所有患者均采用静注咪达唑仑2毫克.舒芬太尼0.2ug/kg.顺苯阿曲库铵0.15mg/kg诱导,术中泵控丙泊酚和瑞芬太尼的麻醉方法,常规检测心电图.血氧.血压等.结果 P组血压.心侓下降明显,诱导平顺.插管无反应.E组:血压.脉搏波动不明显,但给药2.5分钟插管时,出现呛咳,个别出现肌肉痉挛.L 组:血压.脉搏平稳,诱导平顺,插管无反射.