丁酸钠诱导结肠癌细胞分化过程中NDRG2的表达及意义

目的：研究丁酸钠诱导结肠癌细胞分化过程中抑癌候选基因NDRG2的表达特点及意义．方法：采用丁酸钠诱导结肠癌HT29,SW480,SW620细胞分化,通过碱性磷酸酶（AKP）测定和透射电镜评价结肠癌细胞的分化程度,应用Real time RT—PCR和Western Blot法测定不同分化点（0,1,2,3,4,5,6d）NDRG2mRNA和蛋白的表达特点．结果：经丁酸钠作用24h-6d后,结肠癌细胞中NDRG2基因mRNA和蛋白水平均显著高于对照组水平．结论：丁酸钠诱导结肠癌细胞分化过程中NDRG2表达显著升高,提示NDRG2是参与结肠癌细胞分化的相关基因．     

CXCR2过表达结肠癌细胞株的建立及生物学功能的初步研究

目的 建立人SW1116结肠癌细胞中稳定过表达CXCR2稳定细胞株,分析过表达CXCR2基因对人结肠癌SW1116细胞迁移能力的影响。方法 分离健康人外周血单个核细胞,Trizol提取总RNA并反转录为cDNA,PCR扩增CXCR2的CDS序列,连接至慢病毒穿梭质粒pLVX-IRES-ZsGreen1多克隆位点,进行CXCR2基因的克隆,构建pLVX-IRES-ZsGreen1-CX-CR2重组质粒。重组质粒与包装质粒通过磷酸钙共转染法包装出慢病毒上清并对人SW1116结肠癌细胞进行感染。real-timePCR及Western blot方法分析转染pLVX-IRES-ZsGreen1-CXCR2重组质粒的人SW1116结肠癌细胞中CXCR2表达情况。Tr-answell实验分析过表达CXCR2对结肠癌细胞体外迁移的影响。结果 成功建立稳定表达CXCR2基因的SW1116结肠癌细胞株,并初步阐明CXCR2能够促进结肠癌细胞体外迁移。结论 成功建立过表达CXCR2基因的结肠癌细胞并能促进其体外迁移。     

miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究

目的 探讨miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究.方法 采用脂质体LipofectamineTM 3000将miR-455-3p mimics和miR-455-3p NC转入HCT116结肠癌细胞中,Real-time PCR检测细胞中miR-455-3p表达,MTT法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP2)、MMP9、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路相关蛋白的表达.结果 与miR-455-3p NC组比较,miR-455-3p mimics组miR-455-3p表达量显著提高(P＜0.01),细胞活力、迁移能力、侵袭能力均显著降低(P＜0.01),MMP2、MMP9、PI3K及p-AKT表达量均显著下调(P＜0.01).结论 miR-455-3p mimics可能通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制HCT116细胞的迁移及侵袭.     

miR-126对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、周期及SOX2表达的影响

目的探讨miR-126通过靶向调控SOX2表达影响结肠癌细胞的增殖和凋亡。方法脂质体Lipofectamine~(TM)2000将miR-126 mimics和miR-126 NC转入SW480细胞中,RT-PCR法检测miR-126表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR法及western blot检测细胞中SOX2蛋白及mRNA表达,并进行荧光素酶报告基因分析。结果与miR-126 NC组比较,miR-126 mimics组miR-126表达量显著提高(P0.01),细胞活力降低(P0.01),细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均显著提高(P0.01),细胞周期阻滞于G1期(P0.01),同时miR-126 mimics能够靶向下调SOX2蛋白及mRNA表达(P0.01)。结论 miR-126 mimics通过靶向下调SOX2表达进而抑制SW480细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

FBXO22对结肠癌细胞侵袭迁移的影响及相关机制

目的： 探讨结肠癌细胞FBXO22基因表达沉默后对细胞侵袭迁移的影响及其相关分子机制。方法：利用siRNA-Ctrl和siRNA-FBXO22小干扰片段转染结肠癌SW620和HCT116细胞,干扰FBXO22基因表达,Western blot 检测细胞转染效率,Transwell细胞迁移实验分析干扰FBXO22对细胞侵袭迁移的影响,Western blot检测细胞侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9和MDM2水平的变化。结果：转染FBXO22 siRNA后,结肠癌SW620和HCT116细胞FBXO22的表达量明显下降、细胞侵袭转移能力降低,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低,而MDM2蛋白表达水平上调。结论： FBXO22与结肠癌细胞侵袭迁移相关,其机制可能通过调节MMP-2和MMP-9表达而实现。     

MiR-203通过SNAI2的靶向作用对胃癌细胞SGC7901侵袭和凋亡的影响

目的:研究miR-203通过SNAI2对胃癌细胞SGC7901侵袭和凋亡的影响。方法:1脂质体转染将miR-203mimics转入胃癌细胞SGC7901,Real-time PCR检测转染效果,Transwell实验和流式细胞术检测细胞侵袭和凋亡情况。2Real-time PCR和Western blot检测转染miR-203后在胃癌细胞中SNAI2的表达水平。3siRNA干扰胃癌细胞SGC7901中SNAI2的水平,Western blot验证敲减效果,并检测敲减SNAI2后细胞侵袭和凋亡情况。4转染miR-203mimics后,脂质体转染SNAI2表达质粒,检测细胞侵袭和凋亡情况。结果:1脂质体介导的miR-203mimics转染SGC7901后,细胞侵袭能力减弱,凋亡增加。2在胃癌细胞中,miR-203与SNAI2表达负相关。3敲减SNAI2后,细胞侵袭能力减弱,凋亡增加。4在过表达miR-203的胃癌细胞中转染SNAI2后能使胃癌细胞侵袭能力恢复,凋亡减少。结论:miR-203能够通过靶向调控SNAI2而降低胃癌细胞SGC7901的侵袭能力并促进其凋亡。     

MiR-148a-3p通过靶向SRPK2抑制结肠癌细胞转移

目的:MicroRNA (miRNA/miR)参与结肠癌各种生物学过程。目前,miR-148a-3p在结肠癌中的作用还不完全清楚。本研究旨在探讨miR-148a-3p对结肠癌细胞转移及侵袭能力的影响及机制。方法:实时定量PCR （qRT-PCR）检测结肠癌细胞系中miR-148a-3p及SRPK2 mRNA的表达,Western blot检测SRPK2 蛋白的表达。使用miR-148a-3p mimic, miR-148a-3p inhibitor调节HCT-116及SW480细胞中miR-148a-3p的水平。通过划痕及transwell实验检测miR-148a-3p对结肠癌细胞迁移及侵袭能力的影响。生物信息学分析预测miR-148a-3p的靶点,荧光素酶报告实验验证。Western blot及qRT-PCR检测miR-148a-3p对结肠癌细胞上皮-间质转化及SRPK2表达的影响。结果:与正常结直肠粘膜细胞FHC相比,结肠癌细胞系中miR-148a-3p水平降低（P<0.05）。结肠癌细胞中miR-148a-3p过表达可以明显抑制结肠癌细胞转移及侵袭能力（P<0.05）。相反的,敲低miR-148a-3p结肠癌细胞转移及侵袭能力增强（P<0.05）。荧光素酶报告系统结果提示SRPK2是miR-148a-3p的直接作用靶点。过表达miR-148a-3p可以抑制SRPK2在结肠癌中的表达（P<0.05）,但是敲低miR-148a-3p时SRPK2表达明显增高（P<0.05）。结论:MiR-148a-3p可能通过靶向SRPK2抑制结肠癌细胞的转移及侵袭能力。MiR-148a-3p可能成为诊断和治疗结肠癌的靶点之一。     

miR-26a靶向HMGA1基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响

目的：探讨miR-26a靶向高迁移率族蛋白1（HMGA1）基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响,阐明HMGA1基因是否为miR-26a的靶基因。方法：将miR-NC （对照）、miR-26a mimics （模拟物）和miR-26a inhibitor （抑制物）转染人结肠癌SW480细胞作为miR-NC组、miR-26a mimics组和miR-26a inhibitor组。RT-PCR和Western blotting法分别检测各组SW480细胞中HMGA1 mRNA和蛋白表达水平。采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组SW480细胞中双荧光素酶活性,以此确定HMGA1是否为miR-26a的靶基因。采用CCK8实验检测各组细胞增殖活力,Transwell小室法检测各组细胞侵袭数和迁移数。结果：HMGA1基因是miR-26a的靶基因。与miR-NC组比较,转染24、48和72 h时miR-26a mimics组SW480细胞增殖活力明显降低（P<0.01）,而miR-26a inhibitor组细胞增殖活力明显升高（P<0.01）。与miR-NC组比较,各时间点miR-26a mimics组和miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）,而miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-26a mimics组比较,各时间点miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组比较,各时间点miR-26a+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）。结论：HMGA1是miR-26a的靶基因。上调miR-26a表达可抑制人结肠癌SW480细胞增殖,下调miR-26a表达可促进人结肠癌SW480细胞增殖。     

LIMK1在结肠癌中表达与沉默对人结肠癌细胞迁移与侵袭的影响

目的探讨LIMK1在结肠癌中的表达与临床病理参数的关系和沉默LIMK1对人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭的影响。方法免疫组化检测LIMK1在结肠癌表达;RNA干扰建立LIMK1-miR/SW480细胞株;RT-PCR与Western blot分别检测LIMK1 mNRA与蛋白及磷酸化LIMK1表达;划痕实验和侵袭实验检测沉默LIMK1对SW480细胞迁移与侵袭的影响。结果免疫组化显示,LIMK1在结肠癌中表达明显高于结肠正常组织,高分化腺癌表达明显低于中分化与低分化腺癌,而低分化高于中分化腺癌;<5.0 cm的结肠癌表达明显低于≥5.0 cm;淋巴结转移显著高于无转移;Dukes分期A+B组表达明显低于C+D组（P<0.05）。RT-PCR与Western blot显示,LIMK1-miR/SW480细胞LIMK1 mNRA与蛋白表达明显下调,表明成功构建稳定沉默LIMK1基因的SW480细胞。免疫细胞化学证实,沉默组LIMK1表达较未转染组与空载体组明显降低。Western blot显示,沉默组LIMK1和磷酸化LIMK1较未转染组与空载体组明显下调(P<0.05)。划痕实验显示,沉默组癌细胞迁移率（22.53%）较对照组（76.50%）与空载体组（72.14%）明显降低（P<0.05）。侵袭实验发现,沉默组穿膜细胞（43.67±1.51个）较未处理组（143.33±1.52个）与空载体组（136.34±1.53个）明显减少（P<0.05）。结论LIMK1表达与结肠癌发生、大小、淋巴结转移及Dukes分期有关。沉默LIMK1基因可抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭。     

miR-149对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-149对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响及其可能作用机制。方法应用miRanda,Tar Base v.5c靶基因预测网站分析miR-149与FOXM1 miRNA的可能结合位点,分别将miR-149模拟物(mimics),拮抗物(inhibitors)和无关序列转染到MCF-7细胞株,以空白转染组为阴性对照,用Western blot的方法比较各组细胞FOXM1蛋白的表达,用Transwell侵袭小室检测各组细胞侵袭能力的变化。结果Western blot结果显示,miR-149 mimics转染组的MCF-7细胞中FOXM1蛋白表达较其余各组显著降低(均P<0.05),Transwell侵袭小室检测结果表明,miR-149 mimics转染组的细胞侵袭细胞数明显多于其余各组(均P<0.05)。结论 miR-149能促进乳腺癌细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制FOXM1的表达有关。     

miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的探究miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用qRT-PCR检测miR-28-5p在正常结肠细胞NCM460与结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中表达量的差异。将HCT116、SW480、SW620各分为三组:对照组,过表达组,沉默组。对照组不予特殊处理,其余两组分别转染miR-28-5p mimic和miR-28-5p inhibitor,采用qRT-PCR验证转染效率,采用CCK8法检测三组细胞的增殖能力,采用划痕实验检测三组细胞的的迁移能力。结果miR-28-5p在结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中低表达,与正常结肠细胞NCM460比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,过表达组细胞增殖和迁移能力均降低(P<0.05),沉默组细胞增殖和迁移能力均增强(P<0.05)。结论miR-28-5p在结肠癌细胞中低表达且有调控结肠癌细胞增殖和迁移的作用。     

miR-584下调CCN2对结直肠癌SW1116细胞增殖、侵袭的影响及机制研究

目的 探讨miR-584下调CCN2对结直肠癌SW1116细胞增殖、侵袭的影响及机制.方法 2020年1—4月于辽宁省肿瘤医院中心实验室进行实验,设立SW1116直肠癌细胞组、miR-NC组(空白载体)、miR-584 mimics组(过表达)、miR-584抑制剂组(低表达);各组细胞每孔设6个平行样,培养72 h....     

miR-126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的探讨MicroRNA-126(miR-126)在人结肠癌细胞中的表达以及对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法应用荧光PCR定量检测60例结肠癌患者的结肠癌组织以及癌旁组织中miR-126的表达,共60对,再测定5株结肠癌细胞(SW480、HT29、HCT116、LOVO、SW620)中的表达情况;CCK-8法、划痕实验和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并进一步通过体外实验研究miR-126对结肠癌细胞生物学行为的影响。结果与癌旁组织细胞比较,miR-126在结肠癌细胞中表达下降(95.0%vs.55.0%,P<0.05),发生转移者与未发生转移者比较,差异有统计学意义(25.0%vs.75.0%,P<0.05)。miR-126可以抑制SW480细胞的生长及其侵袭转移,有基质胶Tran—swell实验中,转染组及空白对照组细胞迁移数分别为(10.0±4.3)个和(258.0±30.6)个;无基质胶的Transwell实验中,分别为(84.0±13.2)个和(335.0±27.3)个,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-126高表达可以增强癌细胞对奥沙利铂的敏感性。结论miR-126可明显抑制结肠癌细胞的发生发展,影响多种结肠癌细胞株生物学行为。     

miR-506在乳腺肿瘤细胞增殖及转移中的作用

目的分析miR．506与乳腺癌增殖转移的关系。方法miR-506minics／inhibitor／NC瞬转入MDA—MB一231乳腺癌细胞后进行CCK-8细胞增殖,细胞计数,集落形成,Transwell小室实验及Real—TimePCR。结果miR-506相关核苷酸（mimics、inhibitor、NC）瞬转入细胞后第1天miR-506inhibitor即显现出促进细胞增殖的效应,第3天后miR-506mimics开始出现明显的细胞增殖抑制效应;集落形成实验中miR-506mimics组细胞所形成的集落数量明显少于miR-506 inhibitor组和NC组;Transwell小室实验显示三种miR．506mimics所转染细胞的穿过膜的数量少于miR-506inhibitor组和NC组。Real—TimePCR显示,与miR-506 inhibitor组相比,miR-506mimics组酌5、MMP2基因表达增高,而RASSFl基因降低。结论miR-506过表达可以明显的抑制细胞的增殖能力,单克隆集落形成能力和侵袭转移能力,即miR-506高表达可以抑制乳腺癌细胞的恶性表型。这种作用可能与p65、MMP2及RASSFl表达有关。     

miR-135b对子宫内膜癌HOXA10基因表达的调控作用

目的 探讨miR-135b对子宫内膜癌中HOXA10基因表达的调控作用.方法 RT-PCR方法检测28例子宫内膜癌组织及相应癌旁组织中miR-135b及HOXA10的表达;用miR-135b模拟物及抑制物转染RL-952子宫内膜癌细胞株,RT-PCR检测转染效果并检测FOXO1 mRNA的变化,划痕实验检测转染后对细胞迁移的影响,流式细胞技术检测转染对细胞增殖的影响,Western blot检测HOXA10蛋白的变化.结果 miR-135b在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达升高(P<0.05),HOXA10则降低(P<0.05),经miR-135b模拟物转染后,子宫内膜癌细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平下降(P<0.05);经miR-135b抑制物转染后,子宫内膜癌细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平升高(P<0.05);miR-135b能促进子宫内膜癌细胞的增殖(P<0.05).结论 miR-135b 在子宫内膜癌发生发展中有一定作用,子宫内膜中HOXA10的异常表达受miR-135b的调控.     

miR-372-5p促进结直肠癌细胞的转移：通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路

目的 探讨miR-372-5p通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路对结直肠癌细胞迁移能力的影响及机制。 方法 qRT-RCR检测miR-372-5p在结直肠癌和癌旁组织及结直肠癌细胞和正常肠上皮细胞中的表达;生物信息学和双荧光素酶实验验证miR-372-5p与PTEN的靶向关系;Western blotting检测转染inhibitor-NC/mimics-NC（miR-372-5p抑制剂/类似物的阴性对照）、miR-inhibitor（miR-372-5p抑制剂）、miR-mimics（miR-372-5p类似物）以及共转染miR-inhibitor+si-PTEN（PTEN干扰）、miR-mimics+PI3K抑制剂对PTEN、CXCL12表达和PI3K/AKT信号通路激活水平的影响;Transwell实验、划痕实验检测以上各组、共转染miR-mimics+si-CXCL12（CXCL12干扰）以及转染mimics-NC、miR-mimics后的HCT116条件培养基对细胞迁移能力的影响。结果 结直肠癌组织中miR-372-5p较癌旁组织表达升高,相对于NCM460,HCT116较SW620中miR-372-5p表达上调更显著（P<0.01）;双荧光素酶实验证实PTEN是miR-372-5p的潜在靶基因（P<0.05）。相较于NC组,miR-mimics可降低PTEN蛋白表达水平,增加CXCL12蛋白表达水平和AKT磷酸化水平,提高HCT116迁移能力;而miR-inhibitor则导致相反的结果（P<0.05）,si-PTEN可中和miR-inhibitor的作用（P<0.01）;PI3K抑制剂可降低CXCL12的蛋白表达水平,并抑制HCT116迁移能力（P<0.05）,而miR-mimics可中和这一作用（P<0.01）;miR-mimics转染HCT116的条件培养基可提高NCM460的迁移能力（P<0.01）,联合si-CXCL12可逆转miR-mimics对HCT116转移的促进作用（P<0.01）。结论 miR-372-5p通过靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路,上调CXCL12的表达,从而促进结直肠癌细胞的迁移能力。     

miRNA-451对结肠癌细胞侵袭力的影响研究

目的分析miRNA-451（miR-451）对结肠癌细胞SW480的影响,探讨miRNA-451对结肠癌细胞侵袭力的作用价值。方法化学合成miR-451mimics,脂质体包裹转染SW480细胞,分为miR-451转染组、无关序列转染组及对照组（未处理）,荧光染料标记法检测转染效率,细胞计数试剂盒-8检测细胞增殖情况,流式分析检测细胞凋亡情况以及Transwell小室检测侵袭能力情况。结果 miRNA-451对结肠癌细胞SW480的增殖能力和凋亡情况无显著影响,但是对其侵袭力具有显著的抑制作用。结论 miR-451mimics对结肠癌细胞系SW480具有抑制作用,对结肠癌细胞侵袭力具有抑制效果,值得临床深入研究。     

miR-149-5P调控β-catenin/MMP2/E-cadherin介导胃癌BGC-823和MKN28的细胞迁移

目的 观察miR-149-5P对胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移的影响。方法 采用qRT-PCR方法检测miR-149-5P在胃粘膜上皮细胞(GES-1)与BGC-823和MKN28细胞中的表达。分别转染miR-149-5P mimics、NC、inhibitor和inhibitor-NC,采用qRT-PCR方法验证转染效率,采用细胞划痕实验和Transwell实验检测过表达或抑制miR-149-5P后胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移能力。采用Western Blot检测转染miR-149-5P mimics或inhibitor后BGC-823和MKN28细胞中β-catenin、MMP2、E-cadherin蛋白表达水平。结果 qRT-PCR实验结果显示:与GES-1相比,miR-149-5P在BGC-823和MKN28细胞中表达显著降低;转染mimics后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平显著升高,而转染inhibitor后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平下降。细胞划痕实验和Transwell实验结果显示:转染mimics后可以抑制BGC-823和MKN28细胞迁移,而转染inhibitor后,可以促进BGC-823细胞迁移,MKN28细胞并无明显变化。Western Blot实验结果显示:在BGC-823和MKN28细胞中过表达miR-149-5P可上调E-cadherin的蛋白表达,抑制β-catenin和MMP2蛋白表达,而抑制miR-149-5P的表达可下调E-cadherin的蛋白表达,促进BGC-823细胞中β-catenin和MMP2蛋白表达,但转染inhibitor后MKN28细胞中E-cadherin、β-catenin和MMP2蛋白表达水平并无明显变化。结论 miR-149-5P可以抑制胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移。