咬合力丧失对大鼠牙周组织中iNOS表达的影响

目的:研究咬合力丧失后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)影响牙周组织改建的分子机制.方法:选用Wistar大鼠建立咬合力丧失的动物模型,按照拔牙后的各时间段不同随机分8组,采用HE、免疫组化染色法,观察牙周细胞中iNOS的表达.结果:光镜下观察到实验组的牙周组织较正常改建明显.免疫组化染色结果:阳性物质iNOS在牙周膜中的表达实验组较对照组有显著增强,尤其是第2 d和第3周组(P＜0.01).结论:咬合力丧失促使牙周组织中iNOS的表达发生变化,提示iNOS很有可能是影响牙周组织改建的一个重要因素.     

血管内皮细胞生长因子在咬合创伤大鼠髁突软骨的表达

目的观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)在咬合创伤大鼠颞下颌关节髁突软骨的表达,探讨VEGF在髁突软骨破坏和改建中的作用。方法通过在大鼠右上第一磨牙合面粘接调改好的正畸用不锈钢舌侧扣的方法,使右侧抬高咬合约0.5 mm,建立咬合创伤动物模型,并于建模后7、14、21、28 d采取髁突标本,采用石蜡切片免疫组织化学方法检测VEGF在咬合创伤不同时期髁突软骨的表达,计算VEGF阳性细胞率。结果咬合创伤7 d VEGF的表达开始升高,21 d时降低。结论 VEGF可能在咬合创伤髁突软骨的破坏和修复过程中起重要作用。     

p38信号通路对大鼠脑创伤后MMP-9的表达及脑水肿形成的影响

目的观察并探讨阻断p38通路激活对大鼠脑创伤后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化及脑水肿形成的影响及意义。方法健康成年雄性SD大鼠130只,随机分为正常组10只,对照组40只:假手术处理;脑创伤组40只:制作改进式Feeney’s脑创伤模型;p38抑制组40只:脑创伤前15 min股静脉注射p38抑制剂(SB203580,400μg/kg)。分别在脑创伤后2 h、2 d时断头取脑,采用RT-PCR法和Western blotting法检测脑组织P38磷酸化水平及MMP-9 mRNA及蛋白表达水平,Evans Blue法测定血脑屏障通透性变化;干湿比重法测定脑组织含水量。结果(1)与对照组相比,脑创伤组磷酸化p38的水平在伤后2 h明显上升;MMP-9 mRNA和蛋白在脑创伤后2 h未见明显差异(P>0.05),但2 d时表达均显著增高(P<0.01)。与脑创伤组相比,p38抑制组伤后2 h时p38磷酸化水平明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA和蛋白在创伤后2 d时的高表达也均有明显下降(P<0.05);(2)与对照组比较,脑创伤组血脑屏障通透性在创伤后2 h明显增加(P<0.05),2 d时出现继续升高(P<0.01);脑含水量在创伤后2 h无明显变化(P>0.05),在2 d时显著增加(P<0.01)。与脑创伤组相比,p38抑制组血脑屏障通透性及脑含水量在创伤后均有明显降低(P<0.05)。结论阻断p38通路激活可下调大鼠脑创伤后MMP-9高表达,减轻血脑屏障破坏及创伤性脑水肿,提示p38信号通路可通过调节MMP-9的表达变化在创伤性脑水肿中发挥重要作用。     

兔急性心肌梗死后基质金属蛋白酶3表达规律的研究

目的:研究基质金属蛋白酶3(MMP-3)的表达在兔急性心肌梗死后心室重构过程中的作用机制。方法:采用兔冠状动脉前降支结扎法建立兔心肌梗死模型。将45只新西兰兔随机分为伪手术组与心肌梗死组。再进一步分为2 d、4 d、7 d、14 d亚组(n=3);用Western Blot法测定心肌组织的MMP-3的含量。结果:伪手术组心肌组织存在低水平MMP-3的表达,心肌梗死组MMP-3的表达在2 d开始升高,7 d达到高峰,后逐渐下降,2周时较2 d时仍高。结论:急性心肌梗死后梗死区MMP-3蛋白表达增加,MMP-3可能参与了早期心室重构的形成。     

雌激素治疗对MMP-2在去势牙周炎大鼠牙周组织中表达的影响

目的探索雌激素对去势牙周炎大鼠牙周组织中MMP-2表达的影响。方法 30只雌性Wister大鼠随机分为三组：假手术组、去势组和雌激素治疗组。大鼠适应性喂养7d后行假手术或双侧卵巢切除术,雌激素治疗组于术后第二天起经皮下注射苯甲酸雌二醇,剂量20μg/kg体重,1次/3d。术后1周,利用丝线结扎各组大鼠上颌第二磨牙的方法构建牙周炎动物模型。术后第八周,利用化学发光方法检测血清中雌二醇水平,免疫组化方法观察MMP-2在各组大鼠牙周组织中的表达。结果去势组MMP-2呈强阳性表达,雌激素治疗组和假手术组的MMP-2的表达弱于去势组。同去势组比较,假手术组和雌激素治疗组的平均光密度差异均有统计学意义（P〈0.05）。但假手术组和雌激素治疗组之间的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论雌激素水平降低可加重牙周组织的破坏程度,雌激素替代疗法可减轻去势牙周炎大鼠牙周组织的破坏。     

咬合力丧失对大鼠牙周组织白细胞介素-1β表达的影响

:目的检测正常咬合力及咬合力丧失状态下,白细胞介素-1β(IL-1β)在大鼠牙周细胞中的动态变化,初步探讨IL-1β在牙周组织改建中的作用。方法选用Wistar大鼠建立正常咬合力及咬合力丧失动物模型。采用HE染色和免疫组化方法,观察两种咬合力状态下牙周形态的变化以及牙周组织中IL-1β表达的动态变化。结果咬合力丧失状态下,形态学显示牙周膜稀疏、结构紊乱,牙槽骨吸收;免疫组化显示咬合力丧失诱导IL-1β在牙周细胞中表达较正常咬合力时显著增强。结论牙周组织结构与功能在改建中具有一致性。     

阻断ERK信号通路降低大鼠脑创伤后MMP-9的表达及减轻脑水肿

目的 观察并探讨阻断ERK通路激活对SD大鼠脑创伤后基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达变化及脑水肿形成的影响及意义。方法 取健康成年雄性SD大鼠90只,随机分为：对照组：只在颅骨上做一直径约为4 mm的骨窗,不作脑创伤;脑创伤组：制作改进式Feeney’s创伤性脑损伤模型;ERK抑制组：脑创伤前15 min股静脉注射ERK抑制剂（SCH772984,500 μg/kg）,每组30只/组大鼠。制作改进式Feeney’s 脑创伤模型后,分别在脑创伤后2 h、2 d时断头取脑,Evans Blue法测定血脑屏障通透性变化,干湿比重法测定脑组织含水量,RT-PCR法和Western blotting法检测各组大鼠脑组织ERK磷酸化的水平及MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平。结果（1）与对照组比较,脑创伤组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在伤后2 h和2 d均出现明显上升（P<0.01）,MMP-9mRNA和蛋白的表达在脑创伤后2 d时表达也出现显著增高（均P<0.01）;与脑创伤组比较,ERK抑制组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在各时间点均明显下降（P<0.01）,MMP-9 mRNA和蛋白在伤后2 d的过表达水平也较脑创伤组出现明显降低（均P<0.01）;（2）脑创伤组大鼠的血脑屏障通透性较对照组在伤后出现显著升高（P<0.05）,ERK抑制组大鼠的血脑屏障通透性则较脑创伤组出现明显降低（P<0.05）;脑创伤组大鼠的脑含水量在伤后在2 d时出现显著增加（P<0.01）,ERK抑制组大鼠的脑含水量则较脑创伤组有明显降低（P<0.01）。结论 阻断ERK通路过度的活化可显著降低大鼠脑创伤后MMP-9高表达,减轻大鼠血脑屏障破坏及创伤性脑水肿,提示ERK信号通路在脑创伤后的过度活化可通过调节MMP-9的表达在创伤性脑水肿中发挥重要作用。     

牙周夹板对咬合创伤合并牙周致病菌大鼠模型牙槽骨的影响

目的 本研究建立咬合创伤合并牙周致病菌条件下的牙周夹板复合实验性动物模型,观察大鼠磨牙牙周骨组织的变化规律,为创伤与牙周炎的治疗提供理论依据。方法 雄性Wistar 大鼠60 只,随机分三组,单颗磨牙咬合创伤组（A 组）,牙周夹板磨牙咬合创伤组（B 组）,牙周夹板磨牙咬合创伤+牙周炎复合组（C 组）,每组各20 只。面粘接方丝建立咬合创伤模型,C 组管饲P.g 菌悬液。在建模0、14、28 d 和在建模28 d 时将各组刺激物去除后的14、28 d 每组各随机处死4 只大鼠,取下颌骨,HE 染色,光学显微镜下观察组织学变化及破骨细胞总数。结果 经重复测量方差分析,3 组破骨细胞平均数值进行组间比较和不同时间效应,差异有统计学意义（P＜0.01）;单颗磨牙咬合创伤组（A 组）与牙周夹板磨牙组（B 组）比较,牙周组织损伤程度在咬合创伤时间方面比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;牙周夹板磨牙组（B 组）与加入P.g 菌形成复合因素损伤的C 组实验模型比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 应用牙周夹板可减轻创伤导致的牙动度增加,阻止龈袋内的菌斑向根尖方向移行定植,减少牙槽骨的破坏。     

咬合力丧失对大鼠牙周组织白细胞介素—1β表达的影响

目的：检测正常咬合力及咬合力丧失状态下，白细胞介素-1β（IL-1β）在大鼠牙周细胞中的动态变化，初步探讨IL-1β在牙周组织改建中的作用。方法：选用Wistar大鼠建立正常咬合力及咬合力丧失动物模型。采用HE染色和免疫组化方法，观察两种咬合力状态下牙周形态的变化以及牙周组织中IL-1β表达的动态变化。结果：咬合力丧失状态下，形态学显示牙周膜稀疏、结构紊乱，牙槽骨吸收；免疫组化显示咬合力丧失诱导IL-1β在牙周细胞中表达较正常咬合力时显著增强。结论：牙周组织结构与功能在改建中具有一致性。     

大鼠牙齿移动过程中牙周组织MMP-2的表达变化

目的:观察大鼠正畸牙齿移动过程中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达和分布变化。方法:选用40只雄性SD大鼠,于加力后0 d、3 d、7 d、14 d、21 d处死大鼠,免疫组化法检测明胶酶-2(MMP-2)的表达,计算平均光密度(OD)和积分光密度(IOD)。结果:牙齿移动后牙周膜两侧MMP-2表达增加,破骨细胞、破牙本质细胞、骨细胞、成纤维细胞和部分成骨细胞、成牙本质细胞染色阳性。OD表现动态变化,7 d最低,而后缓慢升高。加力后IOD逐渐升高,7 d达到顶峰而后缓慢下降,21 d时仍维持在高水平。结论:牙齿移动时MMP-2呈规律性变化,与牙齿正畸骨改建关系密切。     

颈总动脉钳夹致颈总动脉钝性创伤小鼠模型的建立与评估

目的 建立并评估能模拟外源性物理损伤的颈总动脉钳夹致颈总动脉钝性创伤模型.方法 取64只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组和颈总动脉钳夹致颈总动脉钝性创伤建模后1、3、7 d组,每组16只.假手术小鼠予颈部切开、缝合,建模小鼠予左侧颈总动脉钳夹30 min.取颈总动脉标本,通过H-E染色观察血管组织结构改变,免疫组织化学染色(n=10)、蛋白质印迹法(n=6)检测血管功能相关蛋白的表达.结果 H-E染色显示颈总动脉钳夹伤后血管内皮细胞出现不同程度损伤,血管基质的连续性下降.免疫组织化学染色显示颈总动脉钳夹伤后血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素1表达上调,炎症细胞标志物髓过氧化物酶(MPO)在血管壁及血管周围表达增加.蛋白质印迹法检测结果显示,颈总动脉钳夹伤后血管功能相关标志物VCAM-1、eNOS、内皮素1,炎症相关蛋白环氧化酶2、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9,以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2相关X蛋白、活化caspase 1的表达均有不同程度上调,其中血管功能相关标志物VCAM-1与eNOS表达均在钳夹后3 d到达高峰,而内皮素1表达则在钳夹后1～7 d呈上升趋势.结论 颈总动脉钳夹致颈总动脉钝性创伤小鼠模型建立成功.颈总动脉钳夹可导致血管组织损伤并发生炎症反应与细胞凋亡,这种损伤可能是创伤性血管狭窄及动脉瘤形成的重要因素.     

MMP-2抑制剂在大鼠烫伤创面愈合中的作用

目的:探讨烫伤修复创面过程中MMP-2表达的意义及其人工合成抑制剂的作用.方法:将16只大鼠随机分成实验组和对照组,在每只鼠背部制成20%TBSA深二度烧伤模型,实验组每天食物中添加卡托普利1mg/kg,烫伤后分别在24 h,4 d,7 d,14 d,20 d,29 d,35 d,62 d切取背部创面标本,采用免疫组化方法检测标本中MMP-2的表达情况;在实验中取2只正常大鼠皮肤标本,同样检测其标本中MMP-2的表达情况.结果:MMP-2在正常大鼠皮肤中无表达;在大鼠烫伤后不同时期表达强度不同,24小时后开始表达,以后逐渐增强,大约到第20 d达到高峰,持续约15 d后减弱;但到创面愈合后仍有表达.实验组MMP-2表达水平明显低于对照组,大鼠烫伤后7,14,20,29 d实验组与对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05),并且实验组创面愈合时间早于对照组.结论:MMP-2表达水平在创面愈合过程中有一定规律,与烫伤创面的愈合和瘢痕的形成有密切关系;人工合成抑制剂可抑制其活性,从而促进创面愈合.     

MMP-1及TIMP-1在大鼠肠粘连组织中的表达及其意义

目的通过大鼠肠粘连动物模型,检测基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和基质金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）在肠粘连组织及正常组织中的表达,研究MMP-1和TIMP-1在肠粘连发病中的作用。方法选取SD雄性大鼠70只随机分为3组：10只作为正常组;观察组30只刮伤其回肠浆膜,创面滴无水酒精,钳夹盲肠系膜动脉制成损伤性肠粘连模型;对照组30只大鼠与观察组一样麻醉、开腹,但不动肠组织,直接关腹。观察组及对照组分别于造模后2、7、14d3个时相点各取10只大鼠,处死并分别取小肠浆膜层浆膜粘连面组织,应用免疫组化和图像分析的方法测定MMP-1和TIMP-1在肠粘连组织及正常肠组织中的蛋白表达。结果 （1）造模术后2d,观察组中MMP-1和TIMP-1的含量均升高（P均〈0.01）,MMP-1升至峰值。（2）造模术后7d,观察组MMP-1含量降低,而TIMP-1的含量升高至峰值,与术后2d及对照组相比,差异均有统计学意义（P均〈0.01）。（3）造模术后14d,观察组MMP-1、TIMP-1的含量均下降,与术后2、7d及对照组相比,差异均有统计学意义（P均〈0.01）。（4）对照组各时相点两两比较,无明显差异（P均〉0.05）。结论 MMP-1、TIMP-1的活性变化是肠粘连形成的重要调节因素之一。     

腰椎间盘组织中MMP-7的表达及意义

目的 检测突出间盘组及对照组腰椎间盘中基质金属蛋白酶-7(MMP-7)的表达情况，探讨MMP-7在腰椎间盘退变突出中的作用。方法 应用免疫组化链霉素亲生物素-过氧化物酶法(S-P)对实验组32例腰椎间盘突出标本及对照组11例非突出间盘标本分别进行抗MMP-7蛋白单克隆抗体染色。实验组按术中病理分型分为突出、脱出、游离型。显微图象分析系统采集灰度值，数据进行统计学分析。结果 实验组MMP-7蛋白表达高于对照组，实验组中游离型及脱出型的MMP-7蛋白表达均比突出型高，游离型和脱出型之间MMP-7蛋白表达无差异。结论 腰间盘组织中MMP-7蛋白表达情况与腰椎间盘退变突出有关，MMP-7蛋白表达增加可能是导致腰间盘退变突出的原因之-。     

MMP-9与TIMP-1在肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的研究结扎大鼠单侧输尿管(UUO)制备的实验性肾纤维化模型梗阻肾基质金属蛋白酶9(MMP-9)和组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)表达的动态变化,探讨MMP-9和TIMP-1在肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法将64只雄性大鼠随机分为假手术组和UUO组(n=32),UUO组结扎单侧输尿管,术后3d、7d、14d、21d每组各处死8只大鼠,用免疫组化法检测大鼠梗阻肾组织MMP-9、TIMP-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SAM)及纤维连接蛋白(FN)的表达。结果UUO术后3d,PAS染色见少量肾小管基底膜(TBM)局灶性断裂。术后7d,TBM断裂程度加重,基底膜断裂的肾小管数增多。术后14d直至术后21d,可见部分TBM增厚、扭曲,基底膜断裂程度和基底膜断裂的肾小管数较7d时略减轻和减少。与假手术组相较,UUO组随着梗阻时间的延长,肾间质中α-SMA、FN、TIMP-1蛋白表达逐渐增多。UUO组术后3d可见MMP-9在肾小管间质有强阳性表达,术后7d达高峰,14～21d呈下降趋势。α-SMA、MMP-9、TIMP-1主要表达于肾小管上皮和肾间质。MMP-9阳性染色面积与α-SMA阳性染色面积、TBM的断裂程度、基底膜断裂的肾小管个数均呈正相关(r分别为0.894,0.854,0.821,P均<0.05)。结论肾小管间质MMP-9和TIMP-1蛋白表达的动态变化影响TBM完整性与ECM堆积。MMP-9与TIMP-1相互拮抗调节肾小管基底膜代谢,参与肾小管上皮细胞转分化,影响肾纤维化进展。     

基质金属蛋白酶-13在退变和创伤椎间盘髓核中的不同表达

目的比较基质金属蛋白酶-13(MMP-13)在退变和创伤椎间盘髓核中的不同表达,探讨其在椎间盘退变过程中的作用。方法随机选择2011年1—7月在宁波大学附属医院因腰椎间盘突出症行髓核摘除的33例患者(退变组)和因外伤性脊椎骨折行内固定的6例患者(对照组)作为研究对象。采用免疫组织化学方法检测患者髓核组织的MMP-13表达,应用Image-ProPlus5.1图像分析系统测定其灰度值。结果对照组椎间盘组织中MMP-13的表达很少,平均阳性表达率为(20.4±14.3)%。退变组椎间盘组织中MMP-13的表达呈弥漫性或局灶性强染色,平均阳性表达率为(73.2±10.9)%。退变组的MMP-13阳性表达率显著高于对照组(P<0.01)。结论椎间盘退变髓核组织中MMP-13的表达显著升高,MMP-13的异常表达可能在椎间盘退变发病过程中发挥着重要的作用。     

MMP-13在大鼠退行性变腰椎间盘中的表达及意义

目的检测MMP-13在大鼠退行性变腰椎间盘中的表达,探讨其在大鼠腰椎间盘退变中的作用。方法雄性大鼠24只,随机分为两组,实验组建立大鼠手术制备腰椎间盘退变模型,正常组不做处理,采用免疫组织化学方法检测两组椎间盘组织中MMP-13的表达。结果组织病理学显示实验组髓核细胞数目较正常组减少。实验组和正常组椎间盘组织中均有MMP-13的表达,实验组表达较对照组显著增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 MMP-13在腰椎间盘退变的过程中发挥着重要作用。     

MMP-9和TIMP-1在新生大鼠持续高氧暴露后肺组织中的动态表达

目的:探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)在高氧致慢性肺疾病(CLD)新生大鼠肺组织中的动态变化和意义。方法:足月新生大鼠生后12h分别持续吸入0.90～0.95的高氧和空气,于1,3,7,14,21d应用免疫组化和RT-PCR方法分别检测肺组织MMP-9和TIMP-1蛋白及mRNA表达。结果:MMP-9在高氧3d时蛋白和mRNA表达均较空气组增强(P<0.05,P<0.01);TIMP-1蛋白在高氧组表达高于空气组,3d和7d比较P<0.05,14d和21d比较P<0.01;TIMP-1 mRNA水平高氧组高于空气组,3d和7d比较P<0.05,和14d比较P<0.01,和21d比较无差异。结论:高氧暴露后MMP-9和TIMP-1的表达在不同阶段的变化不一致,MMP-9/TIMP-1平衡状态遭到破坏,可能是高氧后胶原异常沉积以及正常肺泡化过程受阻的重要因素。