鼻咽癌E-cadherin的表达与bcl-2表达的相关性

目的 :探讨鼻咽癌组织细胞中E -cadherin的表达和bcl-2基因表达的相互影响。方法 :利用免疫组化方法检测 74例鼻咽癌组织细胞中E -cadherin及bcl -2基因表达 ,计算各例的阳性表达率 ,通过非参数相关样本Wilcoxon检验 ,检验两者的相互关系。结果 :74例鼻咽癌中E -cadherin72例显示不同程度阳性表达 ,阳性率由 5 %至 10 0 % ;bcl -2在 65例中显示不同程度阳性表达。bcl-2中位阳性率明显低于E -cadherin的中位阳性率 (Z =-3 0 2 1,P =0 0 0 3 ) ,且随着E -cadherin阳性率增高而减低。结论 :鼻咽癌细胞中E -cadherin的表达可降低bcl-2基因的表达 ,促进癌细胞凋亡。     

Sjcb2基因原核表达载体的构建及表达

目的 探讨日本血吸虫（Schistosoma japonicum，Sj）中国大陆株（Chinese strain）组织蛋白酶B肽链内切酶基因（Cathepsin B endopeptidase）的原核表达载体pWR450-1的构建及表达情况。方法根据Genbank中Cathepsin B endopeptidase全序列（Genbank登录号为AY226984）设计特异性引物应用聚合酶链反应技术扩增基因全长，克隆入pUCm—T载体，酶切后亚克隆入原核表达载体pWR450-1并进行表达；利用SDS—PAGE及Western blotting观察日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶表达情况。结果成功构建了Sjcb2／pWR450-1原核表达重组质粒，该重组质粒在大肠杆菌中可经IPTG诱导表达分子量约为86kD的融合蛋白，Western blotting分析表明，该融合蛋白能被兔阳性血清所识别。结论 日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶可在原核表达载体pWR450-1中表达，为研究其功能打下了必要的基础。     

难治性癫痫大脑皮质GluR2表达

目的难治性癫痫大脑GluR2受体表达及临床意义。方法采用免疫组化方法检测非癫痫组、难治性癫痫术后皮质神经细胞GluR2受体表达。结果 GluR2受体免疫组化产物为黄色颗粒,位于神经细胞的胞浆内。GluR2在难治性癫痫高频组的表达明显低于难治性癫痫低频组,非癫痫组(P 0.05),非癫痫组、中频组低于低频组(P0.05);结论 GluR2受体参与癫痫发病机制,并与癫痫异常放电频率呈负性相关。     

pEGFP-C2-MeCP2重组质粒的构建和表达

目的构建人类甲基化CpG结合蛋白( MeCP2)基因的真核表达载体pEGFP-C2-MeCP2,在非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7)中检测其表达及定位。方法从人肝癌细胞(HepG2)中获得cDNA,以其为模板扩增MeCP2全长编码基因,克隆到载体 pEGFP-C2上。构建的重组质粒测序后转染至COS-7细胞中,荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,检测MeCP2蛋白定位,Western blot法和RT-PCR法鉴定MeCP2蛋白和基因表达。结果成功构建 pEGFP-C2-MeCP2重组质粒,酶切鉴定片段为1461 bp。 MeCP2蛋白及基因表达水平明显增加。细胞定位实验结果显示MeCP2蛋白定位于胞核。结论成功构建重组质粒 pEGFP-C2-MeCP2,该质粒的构建为进行MeCP2功能研究提供了依据。     

人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白表达载体的构建及其表达

目的 构建并表达了人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP（scHLAA-A2）融合蛋白表达载体．为进一步制备HLA-A2四聚体及其功能研究奠定了基础。方法 应用重叠延伸PCR（overlap-PCR）对编码HI，A-A2的cDNA序列进行一个碱基的同义突变．并将β2m和HLA-A2胞外段亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头（Gly．Ser）。的DNA序列进行前后拼接．并利用引物所带的BSP编码序列．构建单链β2m-HLA-A2-BSP融合基因．将测序正确的β2m-HLA-A2-BSP融合基因插入原核表达载体pET-22b中．转化BL21（DE3）细菌．SDS-PAGE检测其表达．融合蛋白于体外抗原肽存在条件下稀释复性后由Western blot鉴定其空间构象。结果 经DNA序列分析表明：同义突变与预期结果一致．β2m和HLA-A2-BSP、linker的连接顺序、方向及序列完全正确．表达载体转化BL21（DE3）细菌后可表达β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白．SDS-PAGE显示该融合蛋白分子量为45kD．与理论值一致．将融合蛋白与特异性抗原肽在体外进行稀释复性后经Western blot鉴定表明该复合物能与HLA-1类分子特异性结合的单克隆抗体W6／32结合。结论 人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白的构建及其表达获得成功．经体外复性可获得HLA-1类分子天然构象。     

乳腺癌pS2蛋白及c-erbB-2表达的临床意义

目的 探讨乳腺癌pS2蛋白及c-erbB-2表达与临床病理因素的关系,评估其作为乳腺癌预后判断和内分泌治疗指标的价值.方法 采用免疫组化法检测512例乳腺癌组织中pS2及c-erbB-2表达,分析pS2及c-erbB-2蛋白阳性表达与淋巴结转移、病理类型、ER、PR的关系.结果 512例病例中,pS2阳性表达率为40.62%,c-erbB-2强阳性(+++)表达率为9.77%.无淋巴结转移的乳腺癌患者的pS2蛋白阳性表达率明显高于有淋巴结转移的乳腺癌患者(χ2=69.896,P<0.01);浸润性小叶癌患者的pS2蛋白阳性表达率明显高于浸润性导管癌患者(χ2=136.265,P<0.01).浸润性导管癌患者的c-erbB-2蛋白强阳性表达率明显高于浸润性小叶癌患者(χ2=8.926,P<0.01);PR阳性患者中c-erbB-2蛋白强阳性表达率显著高于PR阴性患者(χ2=4.791,P<0.05).ER阳性患者中c-erbB-2蛋白强阳性表达率显著高于ER阴性患者(χ2=10.157,P<0.01).结论 在乳腺癌中c-erbB-2和pS2的表达水平与乳腺癌病理类型、是否有淋巴结转移、ER、PR水平密切相关,可以作为乳腺癌的预后判断和术后选择针对性辅助治疗方法的指标.     

淋巴瘤病人MMP-2和TIMP-2表达及其临床意义

目的探讨淋巴瘤病人血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的表达及其临床意义。方法应用酶联免疫吸附法检测32例非霍奇金淋巴瘤(NHL)和8例霍奇金淋巴瘤(HL)病人的血清MMP-2及TIMP-2水平,并动态观察10例初诊NHL病人治疗半年后MMP-2及TIMP-2的变化。结果 NHL和HL病人MMP-2、TIMP-2水平及MMP-2/TIMP-2(M/T)值均明显高于正常对照组(F=3.43～7.40,q=17.18～80.65,P<0.05)。NHL中MMP-2水平及M/T值与其病理类型、临床分期和骨髓侵犯有关(F=3.84～9.26,q=11.05～106.99,P<0.05)。结论淋巴瘤病人血清MMP-2、TIMP-2水平及其比值明显升高,检测血清MMP-2、TIMP-2水平及其比值对淋巴瘤的治疗和预后判断有重要意义。     

肺癌MMP-2和TIMP-2的表达及意义

目的探讨肺癌组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和组织基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的表达及其意义.方法采用免疫组化S-P法检测20例癌旁正常肺组织、74例肺癌组织中MMP-2和TIMP-2的表达.结果肺癌组织MMP-2表达显著高于癌旁正常肺组织(p＜0.01).肺癌MMP-2表达有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P＜0.01),Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05).肺癌TIMP-2表达有淋巴结转移者低于无淋巴结转移者(P＜0.05).结论MMP-2和TIMP-2表达与肺癌侵袭转移密切相关.     

乳癌组织中MMP-2、TIMP-2的表达

目的:探讨MMP-2和TIMP-2与乳癌浸润转移的关系.方法:采用免疫组化法分析乳腺导管内原位癌(24例)及乳腺浸润性导管癌(58例)组织中MMP-2和TIMP-2的表达情况.结果:乳腺导管内原位癌及浸润性导管癌组织中MMP-2的阳性表达率分别为54.17%(13/24)、44.82%(26/58),2组比较差异无统计学意义(P＞0.05);乳腺导管内原位癌TIMP-2的阳性率为91.67%(22/24),高于浸润性导管癌组织中的51.72%(30/58)(P＜0.05).结论:乳癌组织中TIMP-2的表达状况与乳癌的浸润和转移有关.     

CDX2和MUC2在胃癌组织中的表达

目的探讨CDX2与MUC2在胃癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学方法检测胃癌组织及正常胃粘膜中CDX2与MUC2的表达。结果在正常胃粘膜组织中CDX2和MUC2均无阳性表达。CDX2与MUC2在胃癌组织中阳性表达率分别为51.92%和55.77%。CDX2在肠型胃癌中阳性表达率为65.62%（21/32）,在弥漫型胃癌中阳性表达率为30.0%（6/20）,两型胃癌中CDX2阳性表达率有显著性差异（P〈0.05）。MUC2在肠型胃癌中阳性表达率为68.75%（22/32）,在弥漫型胃癌中阳性表达率为35.0%（7/20）,两型胃癌中MUC2阳性表达率有显著性差异（P〈0.05）。CDX2和MUC2的表达与胃癌分化程度有关（P〈0.05）,与有无淋巴结转移无关（P〉0.05）。CDX2的表达和肿瘤浸润的深度有关（P〈0.01）,MUC2表达与肿瘤浸润的深度也有关（P〈0.05）。结论CDX2与MUC2在胃癌尤其是肠型胃癌中高表达,提示CDX2和MUC2与肠型胃癌的发生更密切。     

HPV感染对宫颈COX-2表达及血PGE2表达水平的影响*

目的 探讨人乳头状瘤病毒（HPV）感染对宫颈组织环氧合酶-2（COX-2）及血前列腺素E2（PGE2）表达水平的影响及其相互关系。方法 采用杂交捕获Ⅱ代技术检测HPV,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测宫颈组织COX-2 mRNA表达情况,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血PGE2含量。结果 HPV DNA载量及COX-2表达均与宫颈病变程度呈正相关（P?<0.05）。与HPV阴性患者比较,HPV阳性患者血PGE2含量升高（P?<0.05）,随着HPV病毒载量升高,血PGE2含量随之升高,呈正相关（rs?=0.257,P?= 0.003）。宫颈癌患者COX-2表达与PGE2含量呈正相关（rs?=0.684,P?=0.000）。结论 在HPV感染的宫颈癌患者中,宫颈组织COX-2高表达,血PGE2含量升高,其相互作用可能在宫颈癌的增殖、凋亡耐受、侵袭及转移过程中占据重要位置,为临床治疗宫颈癌提供了新的思路。     

人EFNB2基因shRNA表达载体的构建及表达

目的:构建针对人EFNB2基因的特异性shRNA真核表达载体,并在宫颈癌Hela细胞中表达.方法:运用基因工程技术构建pEFNB2-shRNA载体,转染Hela细胞,通过RT-PCR及Western blot检测干扰效率,筛选抑制作用明显的载体.结果:构建获得的pEFNB2-shRNA表达载体能够有效抑制EFNB2基因...     

MMP-2在声带息肉中的表达

目的 探讨声带息肉的发病机理,了解MMP-2在声带息肉发病机理中的作用,为临床防治声带息肉提供理论依据.方法 选取经病理诊断确诊,且排除其他声带病变的声带息肉患者标本35例为实验组.取正常声带组织标本18例为对照组.所有标本经HE染色后,进行MaxVisionTM免疫组织化学染色,用PBS(磷酸盐缓冲液)代替一抗作阴性对照,并行计算机图像定量分析.结果 在正常声带中,MMP-2的表达较弱,而在声带息肉组织中的上皮细胞、成纤维细胞、炎性细胞、和血管内皮细胞表达较强.声带息肉组MMP-2阳性单位均值[(30.57±7.18)高于正常声带组(16.14±4.33),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在声带息肉的病理生理方面发挥着重要作用,参与了组织结构的重塑.选择性抑制MMP-2可望成为声带息肉病人的一种新的治疗方案.     

EZH2蛋白在前列腺癌中的表达

目的 探讨EZH2在前列腺癌中的表达及意义.方法 应用免疫组化方法 检测EZH2和PTEN在62例前列腺癌和30例良性前列腺增生症中的表达状况.结果 EZH2在前列腺癌及前列腺增生症中的阳性率分别为88.7%、66.7%,两组中的差异有统计学意义(P＜0.05).EZH2与患者的术前PSA水平、年龄、临床分期及Gleason分级均无相关性.前列腺癌中EZH2和PTEN的表达明显呈负相关(rs=-0.368,P＜0.01).结论 EZH2可能与前列腺癌的发生发展相关,并抑制PTEN基因的表达,共同参与前列腺癌的发生.     

cdx2真核表达质粒的构建

目的：构建含有cdx2全长基因的真核表达质粒并在人胃上皮细胞系中表达。方法：从人结肠上皮组织中提取总RNA,RT-PCR获得全长人cdx2基因的cDNA,测序证实序列正确后亚克隆入pcDNA3.1来构建重组真核表达载体pcDNA3.1/cdx2。使用脂质体将该重组质粒转染入人胃上皮细胞GES-1中,RT-PCR证明该细胞中出现人cdx2基因的表达。结果：酶切鉴定和测序显示靶基因cdx2克隆到pcDNA3.1质粒中,RT-PCR证实转染的人胃上皮细胞中有人cdx2基因的表达。结论：成功构建含有人cdx2基因的真核表达质粒。并在人胃上皮细胞中表达。     

结直肠癌MMP-2表达的意义

目的 :探讨基质金属蛋白酶 - 2 (Matrix metalloproteinase- 2 ,MMP- 2 )与结直肠癌浸润转移的关系。方法 :经手术证实的 30例患者均进行 MMP- 2免疫组化染色。结果 :76 .6 7%结直肠癌患者的肿瘤细胞表达 MMP- 2 (2 3/ 30 ) ,定位于胞浆 ,其中弱阳性 13例 ,阳性 4例 ,强阳性 6例 ;MMP- 2的表达与肿瘤分期、淋巴转移相关 (P<0 .0 5 )。结论 :结直肠癌组织中 MMP- 2表达的程度能够反映肿瘤的浸润。     

真核表达质粒pIRES2-eGFP-Annexin A2的构建及其在293T细胞中的表达

目的:构建含有人Annexin A2基因的真核表达质粒plRES2-eGFP-Annexin A2,并在真核细胞293T中表达.方法:将质粒pCMV5.Annexin A2上Annexin A2基因酶切后与真核表达质粒plRES2-eGFP连接,酶切鉴定及测序正确后,脂质体介导法转染293T细胞,荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测其基因和蛋白的表达.结果:构建的质粒plRES2eGFP-Annexin A2转染293T细胞后,目的基因mRNA和蛋白表达均明显增高.结论:成功构建pIRES2-eGFP-Annexin A2质粒并表达蛋白,为研究Annexin A2的生物学功能奠定了基础.     

油酸可抑制ERBB2癌基因过表达

美国Menendez等证实，油酸可降低乳腺癌细胞ERBB2癌基因的表达，并与曲妥珠单抗有协同作用(Lancet Oncol 2005：69)。     

bcl-2基因在鼻咽癌中的表达

目的研究bcl2基因在鼻咽癌中的表达及其与预后的关系。方法对84例鼻咽癌和21例非癌样本中bcl2mRNA进行逆转录聚合酶链反应定量分析及单链构象多态性分析。结果①鼻咽癌组bcl2mRNA的水平比非癌组高,差异有显著性(新发组P<0.05,复发组P<0.01);②鼻咽癌复发组bcl2mRNA的水平比新发组高,差异有显著性(P<0.05)。③逆转录聚合酶链反应单链构象多态性分析未发现所检查的基因片段有点突变。结论鼻咽癌中bcl2的表达增高,其过度表达可能是由转录增强所引起,bcl2的高表达提示鼻咽癌预后不良。