白血病细胞中NF-κB的活化状态及其对细胞凋亡的影响

目的探讨白血病细胞株中核转录因子NF-κB的活化状态及其对白血病细胞凋亡的影响。方法流式细胞术检测白血病细胞及对照组细胞PBMC凋亡率;双荧光素酶报告基因检测各组细胞NF-κB相对活性;NF-κB抑制剂PDTC作用12h后检测各组白血病细胞NF-κB相对活性及细胞凋亡率的变化。此外,qPCR及Western Blot分别检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的mRNA及蛋白水平的改变。结果与PBMC比较,各组白血病细胞凋亡率明显下降(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示各组白血病细胞的NF-κB活性显著高于PBMC(P<0.05);PDTC作用后各组白血病细胞NF-κB活性明显下降,细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时,各组白血病细胞Bax的mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P<0.05),而Bcl-2的表达水平明显降低(P<0.05)。结论白血病细胞中存在NF-κB的持续性激活,其激活可导致白血病细胞凋亡受阻。     

核因子κB与糖尿病肾病关系的研究进展

核因子κB(NF-κB)是一种广泛存在并具有广泛生物学活性的核转录因子,其调控的靶基因包括细胞因子、趋化因子、转录因子、氧化应激相关酶及急性期蛋白等,进而参与调控炎症和免疫反应、细胞生长发育、细胞凋亡及应激反应等多种生物过程。研究发现在糖尿病肾病(DN)的局部肾组织中存在过度激活的NF-κB,其过度激活与肾小球系膜细胞增生和分泌炎性因子密切相关。因此,深入研究NF-κB与DN的关系,有助于DN的临床防治。     

HSV-1对星形胶质细胞炎性细胞因子表达的影响

目的：探讨单纯疱疹病毒1型（HSV-1）对星形胶质细胞内胞核转录因子kappa B（NF-κB）转录活性及炎性细胞因子肿瘤坏死因子α（ TNF-α）和白细胞介素10（ IL-10）表达的影响。方法 HSV-1感染星形胶质细胞,通过ELISA,Western blot等方法检测星形胶质细胞NF-κB,TNF-α,IL-10的表达;同时研究NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸（ PDTC）对TNF-α,IL-10表达的影响。结果星形胶质细胞被HSV-1感染后,胞核内NF-κB蛋白表达明显增强,星形胶质细胞分泌的TNF-α,IL-10均上调,与对照组比较差异有显著性（P＜0．05）。PDTC可抑制NF-κB活化,导致核内NF-κB蛋白表达下调,使得细胞分泌TNF-α,IL-10降低,与HSV-1组比较差异显著（ P＜0．05）。结论被HSV-1感染的星形胶质细胞通过活化NF-κB,从而上调TNF-α,IL-10的表达。     

TNF-α/NF-κB通路干预对肝癌多药耐药相关P-gp表达的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)单抗及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/p65siRNA干预NF-κB活化对肝癌HepG2细胞增殖和细胞膜糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响.方法:体外培养人HepG2细胞并给予抗人TNF-α单克隆抗体,以流式细胞术检测细胞凋亡的情况;设计并合成针对NF-κB/p65 siRNA的质粒,在转录水平干扰NF-κB活化,以Western Blot检测P-gp表达.结果:单抗作用后,肝癌细胞凋亡的比率明显增加(P＜0.01),用药后细胞株NF-κB表达水平明显降低(P＜0.01),与培养液中明显降低的TNF-α水平呈显著正相关(r=-0.89,P＜0.01); NF-κB/p65 siRNA干预后可下调化疗药物引起的癌细胞NF-κB和P-gp的过表达.结论:以TNF-α单体干预肝癌细胞中NF-κB活化,可使细胞凋亡增加,siRNA可通过特异性抑制NF-κB/p65编码的mRNA,下调P-gp水平,促进肝癌细胞凋亡.     

银杏叶提取物对哮喘大鼠气道炎症反应的影响

气道炎症是哮喘的本质,炎细胞浸润是哮喘的发病基础,细胞因子IL-4、IL-5可诱导、维持一定的IgE水平,活化嗜酸性粒细胞（EOS）并防止其凋亡,在哮喘病理进程中发挥重要作用;核因子κB（NF-κB）是一个具有广泛生物学活性的核转录因子。它的激活可诱导以上细胞因子的表达,引发气道炎症。银杏叶有润肺、平喘的作用,是治疗哮喘的传统中药,     

核因子-κB参与马桑内酯激活小胶质细胞化学研究

目的　探讨致痫剂马桑内酯引发体外培养小胶质细胞激活的细胞内机制。方法　应用马桑内酯 ( CL ,2 5μmol/ L )作用于培养的新生大鼠的小胶质细胞 ,免疫细胞化学观察小胶质细胞的形态学改变及其核转录因子 NF-κB的表达情况。结果　 CL刺激后小胶质细胞形态多为阿米巴形活化表现 ;刺激 10 m in内 NF-κB核表达细胞显著增多 ( P<0 .0 1) ,1h达高峰 ( 97.3 7± 1.94) % ,PDTC ( 10 0μmol/ L )可抑制其核表达。结论　致痫剂马桑内酯可快速激活小胶质细胞 ,其激活的细胞内机制可能与核因子 -κB的活化有关     

NOD1和NOD2在Hp阳性胃癌发生、发展中的作用机制研究

目的 研究核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)1和NOD2蛋白在幽门螺杆菌(Hp)阳性胃癌发生、发展中的机制.方法 分别采用免疫组织化学和实时荧光定量聚合酶链反应检测NOD1和NOD2蛋白、mR-NA的表达水平,并将Hp阴性和阳性胃癌组的结果 进行比较;采用Western blot检测Hp阳性的早期和中晚期胃癌组天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)和核因子-κB(NF-κB)的表达水平.结果 Hp阴性和Hp阳性胃癌组间NOD1和NOD2的蛋白表达水平差异均有统计学意义(P<0.05),其中Hp阳性胃癌组中NOD1和NOD2蛋白均呈高表达;Hp阴性和Hp阳性胃癌组间NOD1和NOD2 mRNA的表达水平差异均有统计学意义(P<0.05),其中Hp阳性胃癌组中NOD1和NOD2 mRNA呈高表达;Hp阳性的早期和中晚期胃癌组间caspase-3和NF-κB的表达水平差异均有统计学意义(P<0.05),中晚期胃癌组caspase-3和NF-κB表达水平均高于早期胃癌组.结论 Hp阳性胃癌组织NOD1和NOD2的表达增加,二者可能通过激活NF-κB通路和凋亡因子caspase-3,在胃癌的发展中发挥着促凋亡作用.     

溃结灵对Caco-2炎症细胞模型核因子-κB p65 DNA结合活性的影响

【目的】观察溃结灵含药血清对Caco-2炎症细胞模型核因子-κB(NF-κB)p65蛋白DNA结合活性的影响。【方法】采用不同剂量含药血清干预Caco-2细胞,并以促炎细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)]诱导Caco-2细胞建立炎症细胞模型,收集细胞。采用Trans AM核转录因子活性检测试剂盒检测细胞核蛋白NF-κB p65的含量(活性)。【结果】TNF-ɑ与IL-1β诱导的模型组细胞核蛋白NF-κB p65的含量显著高于正常对照组(P﹤0.01);溃结灵高、中剂量组,蛋白酶抑制剂组和阳性药(柳氮磺胺吡啶)组细胞核蛋白NF-κB p65的含量均显著降低,与模型组比较差异有统计学意义(P﹤0.01)。【结论】溃结灵含药血清对Caco-2炎症细胞模型细胞核蛋白NF-κB p65 DNA结合活性具有一定的下调作用。     

胃肠道间质瘤中PTEN、蛋白激酶B与转录因子家族NF-κ B、bcl-2关系的研究

目的 研究磷酸化抑癌基因(PPTEN)、蛋白激酶B(Akt)基因与转录因子家族NF-κB、B细胞淋巴瘤/白血病2(bcl-2)在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及意义.方法 应用RT-PCR及Western blot检测124例GIST中Akt、PTEN、NF-κB、bcl-2基因mRNA和蛋白表达情况.结果 在GIST中,随着NIH分级增高,Akt的mRNA及蛋白表达水平上调,而抑癌基因PTEN的mRNA及蛋白表达水平下调,二者阳性表达率与肿瘤侵袭转移和黏膜受侵关系密切,PTEN与pAkt蛋白阳性表达之间呈显著负相关(r=-0.386,P=0.024).NF-κB、bcl-2的mRNA的表达变化与NIH分级以及肿瘤侵袭转移、黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关;NF-κB和bcl-2 mRNA表达水平呈正相关;Akt和NF-κB、bcl-2的mRNA表达水平呈正相关.结论 GIST中PTEN基因失活可以活化蛋白激酶Akt,进一步激活NF-kB转录因子,上调凋亡相关因子bcl-2 mRNA水平的表达.     

核因子κB的研究进展

核因子κB(NF-κB)是一个可诱导转录因子,紧密地调节着大群基因的表达。作为细胞机器的一个重要成分,NF-κB在不同的细胞进程中起着重要作用,而这些细胞进程与炎症、先天性及获得性免疫、细胞应激反应、细胞黏附、细胞增殖及细胞凋亡等有关。NF-κB的激活在细胞质及细胞核内被紧密地调控着,其异常激活与感染、炎症性肠病、风湿性关节炎及肿瘤等疾病有关。     

轮状病毒感染致腹泻乳鼠模型粪便中志贺杆菌的分离、鉴定及其对人克隆结肠腺癌细胞中紧密连接蛋白表达的影响

探讨密封蛋白1（Claudin-1）和闭合蛋白（Occludin）在志贺杆菌感染的人克隆结肠腺癌细胞（Caco-2）中的表达情况,阐明志贺杆菌对人克隆结肠腺癌Caco-2细胞的影响及其相关机制。     

腺病毒55型对人肠道细胞感染性的实验研究

  目的  明确腺病毒55型（HAdV-55）对人肠道细胞的感染性。  方法  体外培养人结直肠腺癌细胞Caco-2,以HAdV-3、7、14和55感染,免疫荧光法检测感染细胞内病毒蛋白的表达,荧光定量PCR方法检测不同时间点细胞内和上清中病毒DNA水平,采用腺病毒敏感细胞株HEp-2感染实验检测Caco-2细胞上清中感染性病毒颗粒水平。  结果  免疫荧光检测结果显示,感染48 h后,Caco-2细胞内HAdV-55病毒蛋白表达为阳性。HAdV-3、7、14、55在Caco-2细胞内均能持续复制和增殖,感染细胞内和上清中病毒DNA水平随感染时间的增加而升高,并且HAdV-55病毒DNA水平明显高于HAdV-3、7和14型。Caco-2上清中HAdV-55感染性病毒颗粒高于HAdV-3、7和14,差异有统计学意义（P<0.05）。采用低剂量病毒〔1×半数组织培养感染剂量（TCID₅₀）〕感染Caco-2细胞,HAdV-55感染孔细胞病变效应（CPE）比HAdV-3、7和14感染孔细胞显著。  结论  人呼吸道病毒HAdV-55对肠道细胞易感,感染水平高于其他常见的呼吸道感染腺病毒3、7和14型。     

早孕母胎界面固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达

【目的】 明确早期妊娠母胎界面中固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达情况?【方法】 分别用免疫组织化学法及Real-Time PCR法检测12例早孕期绒毛及蜕膜组织中NOD1/NOD2表达?【结果】免疫组织化学结果显示绒毛组织中NOD1/NOD2主要定位于绒毛滋养细胞胞质中,蜕膜组织也检测到NOD1/NOD2分子的表达?在mRNA水平上,绒毛组织中NOD1/NOD2的表达量高于蜕膜基质细胞(DSC),分别为P = 0.03和P = 0.009;DSC中NOD1的表达量高于NOD2,P = 0.029,差异具有显著性?绒毛组织中NOD2的表达高于NOD1,差异无统计学意义(P > 0.05)?【结论】 NOD1/NOD2在早孕期母胎界面中绒毛组织有表达,可能参与胚泡的着床?     

Somatostatin receptor expression and biological functions in endocrine pancreatic cells: review based on a doctoral thesis

Type 1 diabetes is resulting from the selective destruction of insulin-producing betacells within the pancreatic islets. Somatostatin acts as an inhibitor of hormone secretion through specific receptors (sst1-5). All ssts were expressed in normal rat and mouse pancreatic islets, although the expression intensity and the co-expression pattern varied between ssts as well as between species. This may reflect a difference in response to somatostatin in islet cells of the two species. The Non-Obese Diabetic (NOD) mouse model is an experimental model of type 1 diabetes, with insulitis accompanied by spontaneous hyperglycaemia. Pancreatic specimens from NOD mice at different age and stage of disease were stained for ssts. The islet cells of diabetic NOD mice showed increased islet expression of sst2-5 compared to normoglycemic NOD mice. The increase in sst2-5 expression in the islets cells may suggest either a contributing factor in the process leading to diabetes, or a defense response against ongoing beta-cell destruction. Somatostatin analogues were tested on a human endocrine pancreatic tumour cell line and cultured pancreatic islets. Somatostatin analogues had an effect on cAMP accumulation, chromogranin A secretion and MAP kinase activity in the cell line. Treatment of rat pancreatic islets with somatostatin analogues with selective receptor affinity was not sufficient to induce an inhibition of insulin and glucagon secretion. However, a combination of selective analogues or non-selective analogues via costimulation of receptors can cause inhibition of hormone production. For insulin and glucagon, combinations of sst2 + sst5 and sst1 + sst2, respectively, showed a biological effect. In summary, knowledge of islet cell ssts expression and the effect of somatostatin analogues with high affinity to ssts may be valuable in the future attempts to influence beta-cell function in type 1 diabetes mellitus, since down-regulation of beta-cell function may promote survival of these cells during the autoimmune attack.     

金黄色葡萄球菌对U937细胞HSP90蛋白表达的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡以及热休克蛋白90（HSP90）在这一过程中的作用。方法当U937：金葡菌分别为0,1∶5,1∶10,1∶20,1∶50和1∶100时,培养30min;当U937：金葡菌为1∶20时,分别培养0,15,30,60和90min。采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测U937细胞凋亡率;采用Western blot方法检测HSP90蛋白的表达。结果U937细胞凋亡率随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐增高;HSP90的表达随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐升高。结论金葡菌诱导的U937的凋亡可能与HSP90蛋白表达的改变有关,并且具有感染时间及细菌浓度依赖性。     

金葡菌对人巨噬细胞系U937细胞Fas/FasL表达的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡时Fas/FasL蛋白的表达及意义。方法当细胞∶细菌为1∶20时分别培养0,15,30,60和90min,采用Western blotting检测Fas/FasL蛋白的表达情况,应用SPSS10.0软件包对结果进行统计学分析。结果Fas/FasL蛋白的表达随着金葡菌感染时间的延长而增高。结论金葡菌能够上调Fas/FasL蛋白的表达,从而可以诱导U937细胞的凋亡。     

谷氨酰胺对肠粘膜上皮细胞合成多聚免疫球蛋白受体的影响

目的:研究谷氨酰胺对体外培养肠上皮细胞合成多聚免疫球蛋白受体的胞外部分分泌片的影响,以探讨谷氨酰胺保护肠粘膜屏障功能的作用机制。方法:Caco-2细胞(20-30代)应用含有不同浓度谷氨酰胺(0、0.1、1、4mM)的DMEM培养液培养7d,细胞生长达到融合后进行实验。应用蛋白印迹杂交方法检测各组分泌片蛋白的合成;应用实时定量PCR方法检测各组分泌片mRNA的表达。结果:Western blot分析显示随着谷氨酰胺浓度的增加,Caco-2细胞合成分泌片蛋白的含量明显增加。实时定量PCR结果与Western blot结果一致,随着谷氨酰胺浓度的增加,Caco-2细胞分泌片mRNA的表达逐渐升高。结论:谷氨酰胺可以促进Caco-2细胞分泌片蛋白的合成,这一作用通过增加分泌片mRNA表达实现。     

siRNA干扰Caco-2细胞鞘磷脂合酶2 (SMS2)基因对药物转运体的影响

 目的  研究鞘磷脂合酶2 (sphingomyelin synthase 2,SMS2)缺损对人结肠癌细胞(colon cancer cell,Caco-2)中药物转运体P 糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药相关蛋白2 (multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的表达与功能的影响。方法  SMS2特异性siRNA转染至Caco-2细胞。采用RT-PCR和real-time PCR检测SMS2-特异性siRNA的干扰效率;采用Western blot法检测siRNA转染后P-gp和 MRP2蛋白表达的变化;采用胞内蓄积试验,通过HPLC检测P-gp及MRP2专一性底物罗丹明123及普伐他汀的蓄积含量,分析下调SMS2水平对Caco-2细胞中P-gp及MRP2功能的影响。结果  应用siRNA下调SMS2水平后,P-gp和MRP2的蛋白质水平均显著下调;胞内蓄积实验结果显示罗丹明123及普伐他汀的蓄积量明显增加,说明P-gp和MRP2的外排功能减弱。结论  SMS2基因表达下调对Caco-2细胞中P-gp和MRP2的表达以及功能均有显著影响。     

构建用慢病毒载体介导的RNAi敲除ABCG2的Caco-2细胞模型

目的：用重组构建的靶向ABCG2基因的慢病毒载体,感染Caco-2细胞,构建长期稳定敲除ABCG2蛋白的121服药物肠吸收的caco-2细胞体外模型。方法：采用三质粒系统慢病毒重组技术,针对ABCG2基因的4个靶点,构建4个靶向ABCG2基因的慢病毒和1个不靶向ABCG2基因的对照组慢病毒,感染Caco-2细胞,应用RT—PCR,real—timePCR进行定性和半定量检测ABCG2在细胞中mRNA水平的表达,用Western blotting检测其蛋白水平的表达。结果：慢病毒Lv—ABCG2-sh1、2、3、4感染的细胞组与Lv—Negative—sh对照组相比,ABCG2的mRNA表达量分别下调了11％、77％、2％和65％,蛋白水平的表达也相应地减少,Lv—ABCG2-sh2细胞组具最高敲除效率。结论：用慢病毒载体介导的RNAi成功构建了长期稳定敲除ABCG2的Caco-2细胞模型。