慢性酒精中毒大鼠学习记忆障碍与海马p-CREB表达

目的 通过建立慢性酒精中毒致大鼠学习记忆障碍模型,定量分析大鼠海马各亚区磷酸化环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(p-CREB)的分布与表达.方法 60只成年雄性SD大鼠随机平均分为4组:对照组、低浓度染毒组(LAA组)、中剂浓度染毒组(MAA组)、高浓度染毒组(HAA组).对照组以生理盐水灌胃,LAA组、MAA组和HAA组分别按照每天每只5ml/kg、10ml/kg、15ml/kg标准用55%酒精灌胃造模.通过Morris水迷宫检测大鼠学习记忆损伤情况,采用免疫组织化学SABC染色法检测海马CA1、CA3区及齿状回p-CREB的分布及表达.在Olympus显微镜及图像分析系统下,测定海马p-CREB阳性细胞数.结果 慢性酒精中毒后LAA组、MAA组和HAA组大鼠海马各亚区p-CREB免疫阳性细胞数量逐渐减少.对照组海马p-CREB 阳性反应物分布较多,以CA3和CA1区着色最深,齿状回颗粒细胞层未见表达;LAA组、MAA组和HAA组海马CA1区和CA3区p-CREB免疫阳性细胞数[分别为(85.45±4.32)个,(74.42±8.94)个,(73.56±7.64)个和(245.29±15.36)个,(206.90±15.37)个,(201.96±11.37)个]与对照组海马CA1区和CA3区p-CREB免疫阳性细胞数[分别为(90.54± 6.38)个,(273.79±16.87)个]比差异有统计学意义( P <0.05),MAA组和HAA组海马CA1区和CA3区p-CREB免疫阳性细胞数与LAA组比差异有统计学意义( P <0.05).结论 高浓度白酒灌胃6周,大鼠学习记忆功能有不同程度损伤,各染毒组大鼠海马各亚区p-CREB有不同程度表达,提示p-CREB在大鼠慢性酒精中毒学习记忆障碍中可能起重要作用.     

NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B mRNA在成年大鼠海马的表达

目的 研究NMDA受体亚单位（NR1，NR2A和NR2B）mRNA在正常成年大鼠海马结构各区的表达及形态特点。方法 原位核酸分子杂交组织化学反应和图像处理与分析。结果 NR1，NR2A和NR2BmRNA在正常大鼠海马结构各区锥体细胞和颗粒细胞普遍表达，其中NR1mRNA的表达最强，NR2AmRNA的表达最弱，NR1mRNA在齿状回（DG）的表达水平明显强于CA1区和CA3区；NR2AmRNA在CA1区的表达水平则强于CA3区和DG；NR2BmRNA在海马各区的表达水平基本相同。结论 NR1，NR2A和NR2BmRNA在正常成年大鼠海马各区的表达模式不同，其中NR2AmRNA在海马CA1区以及NR1mRNA在DG高表达的分布特点可能与海马的学习，记忆等生理功能以及选择性易损现象有关。     

NR1和GluR2在成年大鼠海马结构的共表达

目的探讨NMDA受体NR1亚单位(NMDA/NR1)和AMPA受体GluR2亚单位(AMPA/GluR2)在正常成年大鼠海马结构的分布特征。方法在多聚甲醛固定的海马切片上,采用免疫荧光组织化学方法染色,通过激光扫描共聚焦显微镜观察NR1和GluR2在正常成年大鼠海马结构中的表达与分布。结果NR1和GluR2在正常成年大鼠海马结构广泛表达,并且两者免疫荧光染色阳性表达的分布基本一致,其中在CA1和CA3区的锥体细胞层以及齿状回门区的中间神经元表达最强;在CA1和CA3区的分子层以及齿状回的颗粒细胞层中也有明显的NR1和GluR2免疫荧光染色颗粒的分布;但在CA3区的分子层和齿状回的多形层NR1的表达阳性强于GluR2。阳性反应主要位于神经细胞的胞膜和突起。结论NMDA/NR1和AMPA/GluR2在海马结构中的分布特征基本一致,提示它们可能共同参与完成海马的某些重要功能。     

GluR1在大鼠海马结构的表达

目的：观察AMPA受体亚单位GluR1在大鼠海马的表达．方法：在多聚甲醛固定的海马切片上，用免疫组化SP法观察GluR1在正常成年大鼠海马结构的表达与分布。结果：GluR1在正常大鼠海马有广泛表达，在CA3区的起层、锥体细胞层和透明层及齿状回门区内的中间神经元表达最强，阳性表达在CA1区主要见于神经元的胞膜和突起，而在CA3区还可见于胞质。结论：GluR1在海马CA1区和CA3区的表达不同，这种差异可能与海马不同区域具有不同功能有关。     

正常大鼠海马NMDA受体2B亚单位蛋白及其mRNA的平行分布规律

目的 观察正常大鼠海马NMDA受体2B亚单位（NR2B）蛋白质及其mRNA的基础性表达特征及两者在海马不同区域的表达关系。方法 正常SD大鼠海马，灌注取脑，连续冰冻切片，ABC免疫组织化学方法染色和原位杂交组织化学染色，光镜下观察NR2B蛋白质及其mRNA的表达。结果 NR2B蛋白质在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的免疫反应强度存在明显差异，CA1区最强，CA3区次之，齿状回着色较弱。NR2BmRNA在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的原位杂交组织化学反应强度与NR2B蛋白质免疫反应强度存在平行变化，也是CA1区最强，CA3区次之，齿状回着色较弱。结论 NR2B蛋白质及其mRNA在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的表达强度不同，并存在平行表达差异关系，这种基础状态的分布特征可能与海马缺血易损性和耐受性相芰。     

大鼠脑创伤对学习记忆及海马环磷腺苷反应元件结合蛋白的影响

目的 观察脑创伤早期的脑含水量、环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化水平,探讨脑创伤和磷酸化CREB(p-CREB)水平的改变对学习记忆的影响.方法 将54只成年雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为正常组、对照组、创伤性脑损伤(TBI)组,每组18只.采用改良的Feeney法和前期实验参数建立TBI大鼠模型,Western blot观察创伤后12h脑海马组织CREB和p-CREB表达、干湿质量法测定脑组织含水量和Morris水迷宫实验.结果 大鼠TBI后12 h脑组织含水量,与正常组和对照组相比,TBI组升高明显(P＜0.01).与正常组和对照组比较,TBI组大鼠TBI后12h海马CREB和p-CREB蛋白的表达量降低明显;潜伏期增加,2 min内寻求正确次数减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TBI后脑水肿明显,CREB和p-CREB水平降低,可能是使认知和学习记忆功能受损的原因之一.     

戊四氮点燃大鼠海马脑源性神经营养因子受体TrKB、P75NTR表达的变化

目的:探讨戊四氮点燃大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)受体TrKB、P75NTR表达的变化.方法:40只成年健康雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组采用戊四氮点燃法制备癫(癎)模型,对照组不做处理.第2周及第4周,2组各取10只大鼠,采用免疫组织化学方法观察海马结构内TrKB、P75NTR的表达水平.结果:第2周及第4周,对照组大鼠海马CA1、CA3区锥体细胞层及齿状回和门区可见TrKB阳性神经元和纤维;CA1、CA3 区锥体细胞层、齿状回及门区可见大量P75NTR阳性神经元.与对照组比较,实验组海马相应部位TrKB的表达升高(P<0.05),P75NTR的表达降低(P<0.05).结论:在癫(癎)形成过程中,BDNF的2类受体TrKB 、P75NTR可能参与了癫(癎)后海马异常苔藓纤维出芽及突触重建过程;2类受体可能相互拮抗.     

不同发育阶段大鼠海马 CA2～3区nNOS的表达

目的观察不同发育阶段大鼠海马的形态学变化及海马CA2～3区nNOS的表达.方法取大鼠28只,按鼠龄大小分为1周龄、3周龄、3月龄及老龄(24～28月龄)4个年龄组,分别观察不同发育阶段大鼠海马形态学特征和免疫组化ABC法对海马CA2～3区nNOS的表达定位及定量分析.结果不同发育阶段大鼠海马结构呈现明显的形态学变化;nNOS在各年龄组大鼠海马CA2～3区中均有表达,阳性细胞积分光度值(IOD)以3周龄组为最高,其次为3月龄组,而1周龄和老龄组大鼠最低.结论不同发育阶段大鼠海马CA2～3区nNOS的表达表现出明显的动态变化特征;提示一氧化氮(NO)与海马的发育、突触的形成和成熟以及学习记忆具有密切关系.     

不同发育阶段大鼠海马CA2—3区nNOS的表达

目的 观察不同发育阶段大鼠海马的形态学变化及海马CA2-3区nNOS的表达。方法 取大鼠28只，按鼠龄大小分为1周龄，3周龄，3月龄及老龄（24-28月龄）4个年龄组，分别观察不同发育阶段大鼠海马形态学特征和免疫组化ABC法对海马CA2-3区nNOS的表达定位及定量分析。结果 不同发育阶段大鼠海马结构呈现明显的形态学变化;nNOS在各年龄组大鼠海马CA2-3区中均有表达，阳性细胞积分光度值（IOD）以3周龄组为最高，其次为3月龄组，而1周龄和老龄组大鼠最低。结论 不同发育阶段大鼠海马CA2-3区nNOS的表达表现出明显的动态变化特征；提示一氧化氮（NO）与海马的发育，突触的形成和成熟以及学习记忆具有密切关系。     

剥夺异相睡眠导致大鼠海马中神经元性一氧化氮合酶阳性细胞表达减少与记忆维持

目的: 揭示记忆是否在异相睡眠中得到加强和巩固,取消异相睡眠是否导致记忆维持能力下降及其下降的机制. 神经元性一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase, nNOS)是否参与记忆中枢海马结构调节,剥夺异相睡眠(paradoxical sleep deprivation,PSD)是否改变它们在海马的表达. 方法: ①采用小平台法建立PSD大鼠动物模型. 应用Morris水迷宫测试系统检测大鼠空间参考记忆获得及维持的变化; ②海马的nNOS免疫组化研究:PSD 24,48和72 h后,立即取脑、固定、行冰冻切片(片厚25 μm)、SABC法免疫组化染色、光镜下进行观察分析、摄像. 结果:①PSD可造成大鼠空间参考记忆维持能力的损伤; ②PSD组大鼠海马中nNOS免疫反应阳性细胞在CA1,CA2,CA3,CA4及锥体细胞层、颗粒层、齿状回稀疏,数目较相应的大平台组(tank control groups, TC group)、正常饲养组(control groups, CC group)明显减少(P<0.05). 而TC组与CC组相比较无明显变化. 结论: ① PSD可以造成大鼠空间记忆的巩固障碍,异相睡眠与空间记忆维持有关; ② PSD可以造成海马nNOS阳性细胞的表达减少,海马中的nNOS可能参与了大鼠空间记忆巩固的过程.     

p38MAPK信号通路在癫痫大鼠海马结构中的激活

目的 探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)在癫痫持续状态(SE)大鼠海马结构的活性变化规律及其意义.方法 建立氯化锂-匹罗卡品(LiCL-PILO)癫痫持续状态模型,在不同时间点用免疫组化法检测海马结构p38的磷酸化状态(P-p38),并观察组织病理学改变.结果 SE 30min P-p38在各区活化程度均增高,6h后P-p38表达减弱.在所有时间点,齿状回免疫组化阳性的神经元均显著高于CA1区和CA3区,海马结构各区可见到许多神经元发生变性和坏死.结论 p38MAPK信号转导途径在匹罗卡品致痫过程中被激活,并可能参与了CA1区、CA3区癫痫后神经神经元易损性的形成.     

Two-dimensional electrophoretic separation of subproteomes in adult rat hippocampal subregions after membrane protein enrichment with sequential extraction]

OBJECTIVE: To establish a method for analysis of the subproteomes following membrane protein enrichment, so as to investigate the differences in cytosolic and membrane protein/peptide contents among different hippocampal subregions (CA1, CA3 and dentate gyrus) of rats. METHODS: The hippocampal subregions were isolated by microdissection, and after membrane protein enrichment with protein solubility-based sequential sample extraction, subproteome profiling was accomplished using modified two-dimensional electrophoresis and silver staining method compatible with high-performance mass spectrometry, which displayed cytosolic or membrane proteins/peptides separately. The efficacy of the electrophoresis was evaluated by image analyzing software. RESULTS: The membrane proteins were enriched by 8 folds, and around 30% more spots were shown on the integrated dentate gyrus map than on the conventional map obtained by one-step protein extraction. Such improvement could also be seen in protein mapping of CA1 and CA3 regions. CONCLUSION: When analyzing hippocampal subregions sequential extraction and two-dimensional electrophoresis more effectively separate and display enriched membrane protein/peptides, which may play important roles in such cellular events as signal transduction.     

重组人促红细胞生成素对衰老大鼠脑组织不同部位BDNF表达的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对衰老大鼠脑组织内不同部位脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响.方法 40只2月龄雄性SD大鼠,随机分为4组:阴性对照组(N),D-半乳糖组(D),EPO干预组(E),阳性对照组(P),每组10只.应用免疫组化染色对比观察外源性rhEPO干预后D-半乳糖衰老大鼠脑组织不同部位BDNF表达的变化.结果 不同组大鼠比较发现相同部位BDNF表达存在显著差异:D组大鼠海马CA1、CA3、DG及额叶皮质区BDNF阳性细胞计数较N组相同部位明显减少(P<0.05),而应用rhEPO干预后的E组和P组大鼠海马CA1、CA3、DG及大脑皮质运动区BDNF阳性细胞计数较D组及N组相同部位显著增加(P<0.05);但E组和P组比较无差异.同组大鼠不同部位BDNF阳性细胞比较发现:同组大鼠不同部位BDNF阳性细胞个数存在显著不同(P<0.05),其中额叶皮质区阳性细胞数最多,其次是海马CA3区,海马DG区,海马CA1区.结论 rhEPO对增强大鼠神经细胞BDNF的表达具有普遍性,提示rhEPO可能能够通过增强内源性BDNF对神经系统衰老发挥保护作用.     

海马不同地区域缺血时损伤和hsp70mRNA表达差异

目的：探讨缺血再灌注后鼠脑海马CA1区选择性易损伤和迟发神经元死亡现象,以及hsp70mRNA差异表达的可能机制。方法：观察鼠前脑缺血再灌注时,海马CA1区、CA3区及齿状回锥体细胞在组织学变化;以及原位杂交技术检测各区hsp70mRNA的诱导表达。结果：缺血再灌注7d后海马CA1区锥体细胞缺失明显,而CA3区及齿状回未见明显形态学变化。CA1区hsp70mRNA的诱导较其余两区迟,而持续时间较长。结论：在缺血早期加强或在缺血后期抑制hsp70mRNA的诱导,有可能保护CA1区锥体细胞。     

小鼠海马内HDAC2的表达及其与NMDA受体、PSD-95的共定位

目的探讨组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)在成年C57BL/6小鼠海马内的分布及其与突触后致密区(PSD)蛋白成员的共定位,为揭示HDAC2与PSD蛋白复合物之间的内在联系及在海马相关的学习记忆过程中可能起到的调控作用提供形态学依据。方法应用免疫组化方法观察HDAC2在C57BL/6小鼠海马各区的表达分布。应用免疫荧光双标技术研究HDAC2与PSD蛋白成员N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位1(NR1)、PSD-95之间是否存在共定位。结果 HDAC2在小鼠海马CA1～CA3区锥体细胞和齿状回颗粒细胞均具有明显表达,而在各区的始层、辐射层、腔隙-分子层以及齿状回多形细胞层表达均较少。免疫荧光双标染色图片的重叠表明,HDAC2与NR1、PSD-95在小鼠海马CA1～CA3区锥体细胞层和齿状回颗粒细胞层内均可见显著共表达现象,其他区域偶见散在分布的双染神经元。结论 HDAC2在小鼠海马锥体细胞层和颗粒细胞层表达丰富,并与PSD蛋白成员间存在共定位现象。本实验结果为探讨HDAC2对谷氨酸能突触后神经元依赖的突触可塑性的调节机制提供了形态学依据。     

福尔马林痛模型中海马FOS的表达

目的 研究福尔马林诱发的大鼠海马原癌基因的表达。方法 注射福尔马林于大鼠左前爪掌心１ｈ后,采用免疫组化学方法,观察海马结构内ＦＯＳ免疫反应。结果 在海马结构观察到大量ＦＯＳ免疫反应细胞,主要见于下托,海马ＣＡ１,ＣＡ２／Ａ３和ＣＡ４区锥体细胞层以及齿状回内侧部和背侧部颗粒细胞层,齿状腹侧部偶见单个阳性细胞,除海马锥体细胞层和齿状回颗粒细胞层外,其它各层未见ＦＯＳ免疫反应细胞。结论 大鼠海马在福尔马     

山茱萸环烯醚萜苷对穹隆海马伞切断大鼠海马区神经元存活和细胞凋亡调控因子的影响

目的探讨山茱萸环烯醚萜苷(cornel iridoid glycoside,CIG)对脑损伤大鼠海马区神经元存活的影响及其作用机制。方法 成年SD大鼠行穹隆海马伞切断(fimbria-fornix transection,FFT)手术,造模后CIG灌胃给药28d,采用尼氏染色方法光镜下观察海马CA1区和齿状回存活神经元的变化;采用Western blotting法检测海马区细胞凋亡调控因子Bcl-2、Bax和细胞色素C的蛋白表达变化。结果 尼氏染色结果显示,FFT模型大鼠海马CA1区和齿状回存活神经元明显减少;CIG(20、60、180mg.kg-1)灌胃给药能够增加模型大鼠海马区存活神经元的数量。Western blotting结果显示,FFT模型大鼠海马区Bcl-2表达减少,Bax和细胞色素C表达增高;CIG能够增强模型大鼠海马区Bcl-2表达,抑制Bax和细胞色素C的表达,避免凋亡信号进一步激活。结论 CIG能够减少FFT模型大鼠海马区神经元死亡数量,其作用机制可能与上调细胞凋亡抑制因子、下调细胞凋亡促进因子有关。