小分子干扰RNA沉默黏着斑激酶基因对人宫颈癌Hela细胞生物学特征的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默黏着斑激酶(FAK)基因对人宫颈癌Hela细胞生物学特征的影响。方法培养人宫颈癌Hela细胞,根据转染物的不同分为siRNA-FAK组、siRNA-阴性对照组和空白对照组,实时荧光定量聚合酶链反应技术检测细胞中FAK基因表达,噻唑蓝法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测各组细胞中FAK、RAF原癌基因丝氨酸/苏氨酸激酶-1(Raf-1)、磷酸化-Raf-1(p-Raf-1)、丝裂原活化蛋白激酶1/2(MEK1/2)、磷酸化-MEF1/2(p-MEK1/2)、细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化-ERK(p-ERK)蛋白表达。结果空白对照组、siRNA-阴性对照组、siRNA-FAK组细胞中FAK mRNA相对表达量、细胞凋亡率、细胞迁移细胞数、侵袭细胞数、FAK、Raf-1、p-Raf-1、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK和p-ERK蛋白相对表达量及细胞增殖能力比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组与siRNA-阴性对照组细胞中FAK mRNA的相对表达量、细胞增殖能力、细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数以及FAK、Raf-1、p-Raf-1、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK和p-ERK蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05);siRNA-FAK组细胞中FAK mRNA相对表达量、细胞增殖能力、迁移细胞数、侵袭细胞数以及FAK、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK蛋白相对表达量均显著低于空白对照组和siRNA-阴性对照组(P<0.05),细胞凋亡率及Raf-1、MEK1/2和ERK蛋白相对表达量均显著高于空白对照组和siRNA-阴性对照组(P<0.05)。结论特异性抑制人宫颈癌Hela细胞中FAK基因可减少细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,其机制可能与抑制Raf/MEK/ERK信号通路有关。     

circRNA-1565促进肿瘤相关巨噬细胞极化而诱导宫颈癌细胞的迁移和侵袭

目的 研究circRNA-1565对巨噬细胞极化所介导的宫颈癌迁移和侵袭的影响及机制。方法 将circRNA-1565过表达质粒以及Negative Control转染至M2型巨噬细胞(circRNA-1565组和Vector组),qRT-PCR检测circRNA-1565组和Vector组巨噬细胞CD16、TLR2、CD206和CD14表达,流式细胞术检测circRNA-1565组和Vector组巨噬细胞CD163和CD11B表达,Western blot检测各组细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活。将分别转染circRNA-1565过表达质粒以及Negative Control的M0型巨噬细胞与宫颈癌细胞HeLa共孵育(M0+Vector组和M0+circRNA-1565组),细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力,使用Transwell法检测细胞迁移和侵袭。结果 相比于Vector组,circRNA-1565组巨噬细胞CD206和CD14表达显著上调(P<0.001),CD163⁺CD11B⁺细胞比例显著增加(P<...     

Mig-7通过MEK/ERK信号通路抑制胶质瘤U251侵袭及血管生成拟态

目的研究迁移诱导基因7（Mig-7）通过MEK/ERK信号通路抑制人脑胶质瘤细胞株U251体外血管生成拟态（VM）形成能 力和迁移、侵袭能力的影响。方法采用RNA干扰技术将特异性针对Mig-7基因的sh-Mig-7 转入人脑胶质瘤U251细胞中,并 观察感染效率;用携带有sh-Mig-7和阴性对照（sh-NC）的慢病毒感染U251 细胞后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中 Mig-7的表达水平;采用体外三维培养和Transwell小室侵袭实验观察Mig-7基因沉默对各组U251细胞VM 形成能力和侵袭能 力的影响。采用western-blot检测各组细胞中MEK/ERK的蛋白表达水平。结果携带有sh-Mig-7和sh-NC的慢病毒成功感染 U251细胞,并获得稳定低表达Mig-7基因的U251细胞株;与感染sh-NC慢病毒和未感染病毒的的细胞相比,sh-Mig-7感染组 U251细胞中Mig-7的表达水平以显著降低（P均<0.01）;与空白对照组和sh-NC感染组相比,sh-Mig-7 感染组U251细胞的侵袭 能力明显下降（P<0.01）,并且sh-Mig-7 感染组U251 细胞VM形成能力明显下降（P<0.05）。与空白对照组和sh-NC感染组相 比,sh-Mig-7感染组U251细胞的MEK、ERK蛋白的表达水平均显著降低（P<0.05）。结论沉默Mig -7 基因的表达,可能通过 MEK/ERK信号通路抑制U251 细胞的VM 形成及侵袭能力,提示Mig -7 基因在人脑胶质瘤细胞的VM 和侵袭中发挥重要 的作用。     

木蝴蝶苷A通过调控MEK/ERK信号通路对肝癌细胞增殖侵袭和上皮间质转化的机制研究

目的:探究木蝴蝶苷A通过调控MEK/ERK信号通路对肝癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的机制。方法:将肝癌细胞HepG2分为Control组、OAL组、OAM组、OAH组、PD98059组和ML-099组。MTT法检测细胞增殖能力；Transwell小室法检测细胞侵袭能力；流式细胞仪检测细胞凋亡能力；蛋白质印迹法检测细胞中MEK.p-MEK、ERK.p-ERK蛋白及EMT相关蛋白表达。结果:OAL组、OAM组和OAH组细胞增殖和侵袭能力(82.34±2.43)、(61.04±1.61)、(32.44±1.04)均明显低于Control(110.42±3.86)组，细胞凋亡率(6.81±0.62)、(11.74±0.94)、(18.36±1.05)明显高于Control组(5.01±0.53)(F_侵袭=1068,F_凋亡=323.1,P<0.0001);细胞中上皮间质转化蛋白E-cadherin蛋白(0.42±0.04)、(0.58±0.05)、(0.97±0.09)高于Control组(0.23±0.03)(F=181.1,P<0.0...     

下调STYK1基因表达可抑制结直肠癌细胞生长与侵袭

目的 探讨STYK1基因下调对结直肠癌细胞HCT-15增殖、凋亡和迁移以及MEK/ERK和PI3 K/AKT信号通路的影响.方法 采用基因干扰技术抑制结直肠癌细胞HCT-15中STYK1的表达,Western blot检测抑制效果,CCK-8检测STYK1表达下调对HC-T15细胞增殖的影响,流式细胞仪检测STYK1表达下调对HC-T15细胞凋亡的影响,Transwell小室实验检测STYK1表达下调对HCT-15细胞侵袭的影响,通过Western blot检测STYK1表达下调对HCT-15细胞MEK/ERK和PI3 K/AKT信号通路活性的影响.结果 与干扰对照组相比,STYK1表达下调明显抑制HCT-15细胞增殖活性(P＜0.01)和侵袭能力(P＜0.01),并诱导细胞凋亡(P＜0.01);同时,STYK1表达下调明显抑制HCT-15细胞ERK1/2和AKT蛋白的磷酸水平.结论 STYK1基因干扰可以抑制结直肠癌细胞的增殖和侵袭,并诱导凋亡,其机制可能与抑制MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路活性有关.     

lncRNA LINC00978对甲状腺乳头状癌细胞的影响及其可能机制

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)LINC00978对甲状腺乳头状癌增殖和侵袭的影响及其与MAPK/ERK信号通路的关系。方法 选取TPC-1细胞构建沉默LINC00978细胞模型,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测si-RNA干扰LINC00978的效果。分别转染si-RNA、si-NC、PBS作为转染组、对照组、空白组。CCK-8法分别检测各组细胞24、48、72、96h增殖能力;划痕实验检测各组细胞迁移能力;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;Western blot法检测MAPK/ERK信号通路相关蛋白表达情况。结果 qRT-PCR检测结果显示,转染si-RNA后LINC00978的表达量明显减少(P<0.01)。转染组在转染24、48、72、96h的细胞增殖能力显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。转染组48h的细胞迁移能力及侵袭能力明显较对照组及空白组低,差异均有统计学意义(P<0.01)。转染组P-ERK1/2蛋白的表达量较其他两组降低(P<0.01),各组间ERK1/2蛋白的表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 lncRNA LINC00978促进甲状腺乳头状癌的增殖、迁移及侵袭,其机制可能跟调控MAPK/ERK信号通路有关。     

血管内皮细胞来源外泌体miR-214对H2O2诱导血管内皮细胞损伤的影响

探讨血管内皮细胞来源外泌体miR-214对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞损伤的影响。方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,并转染miR-214抑制物（in-miR-214）及其阴性对照（in-miR-NC）,分离并鉴定外泌体,同时检测miR-214表达。再次培养HUVEC,分为正常对照组（Control组）、氧化损伤组（H2O2组）、空白外泌体+氧化损伤组（exo NC+H2O2组）、in-miR-NC外泌体+氧化损伤组（exo in-miR-NC+H2O2组）和in-miR-214外泌体+氧化损伤组（exo in-miR-214+H2O2组）。qRT-PCR检测细胞中miR-214表达水平;MTT和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;Western blot检测细胞增殖、凋亡、迁移相关蛋白水平。结果 成功从HUVEC 细胞中分离出外泌体,且转染in-miR-214可抑制外泌体中miR-214表达（P＜0.05）。H2O2诱导后,HUVEC细胞增殖活力和划痕愈合率降低,凋亡率增高;同时,细胞中miR-214表达水平增高,Cyclin D1、PCNA、Bcl2、MMP2和MMP9蛋白水平降低,Bax蛋白水平增高（P＜0.05）。添加HUVEC外泌体和外泌体来源的in-miR-214可部分削弱H2O2 对HUVEC细胞的损伤,且后者的效果要明显优于前者（P＜0.05）。结论 HUVEC来源外泌体通过低表达miR-214保护HUVEC免受H2O2诱导的细胞损伤     

肿瘤样干细胞来源的外泌体促进人脐带间充质干细胞的增殖和侵袭

目的探讨Piwil2诱导肿瘤干细胞（Piwil2-iCSC）来源的外泌体对人脐带间充质干细胞（hucMSCs）肿瘤样生物学行为的影 响。方法超速离心法提取Piwil2-iCSCs外泌体,透射电镜、粒径分析、Western blot及外泌体摄入实验检测外泌体形态、直径、标 志蛋白表达及作用途径。将hucMSCs 分为对照组、PBS干预组和外泌体干预组（Exo）,CCK-8、细胞划痕实验、Transwell 和 Western blot检测各组hucMSCs的增殖、迁移、侵袭能力以及基质金属蛋白酶（MMPs）MMP2和MMP9蛋白的表达水平。细胞 染色体核型分析检测经Piwil2-iCSCs外泌体长期干预的hucMSCs的染色体结构。结果透射电镜可见Piwil2-iCSCs外泌体大 小均匀,直径在50~100 nm,呈形态较规则的圆形或椭圆形囊泡状小体,粒径分析显示外泌体直径分布集中在在100~200 nm; Western blot显示外泌体标志性蛋白CD9、CD63和piwil2蛋白阳性表达;外泌体摄入实验表明外泌体进入细胞发挥作用。与对 照组和PBS干预组相比,Exo组细胞增殖数量明显增多（P<0.05）,划痕愈合速度加快（24 h,P<0.05;48 h,P<0.01）,侵袭细胞数目 显著增加（P<0.01）。经Piwil2-iCSCs外泌体干预后的hucMSCs细胞MMP2（P<0.05 vs PBS干预组,P<0.01 vs 对照组）、MMP9 蛋白水平表达增高（P<0.05）,但染色体核型仍是46XY,无异常。结论肿瘤样干细胞Piwil2-iCSC外泌体能促进hucMSCs的增 殖、迁移及侵袭,但是未出现肿瘤样异质性改变。     

丙泊酚通过MAPK/ERK途径抑制食管癌细胞系EC9706中VEGF的表达

目的 探究丙泊酚对食管癌细胞系EC9706中血管内皮生长因子VEGF表达情况的影响及相关分子机制。方法 通过蛋白免疫印迹检测人食管癌细胞系EC9706与正常食管上皮细胞系HEEC中VEGF表达情况。分别用不同浓度的丙泊酚（0、2、6、10μg/L）培养EC9706,孵育后,对各组EC9706细胞株行MTT、流式细胞术、细胞侵袭实验、细胞划痕修复试验,观察各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力;使用qRT-PCR和蛋白免疫印迹分别检测各组细胞内VEGF、p38（MAPK）和p44/42（ERK1/2）的表达和磷酸化水平。结果 EC9706细胞中VEGF表达显著强于HEEC细胞。丙泊酚干预后,丙泊酚组细胞增殖、迁移和侵袭显著低于Ctrl组;而丙泊酚组细胞凋亡率显著高于Ctrl组。qRT-PCR和蛋白免疫印迹结果显示,丙泊酚组瘤细胞内VEGF mRNA和蛋白表达水平显著降低;丙泊酚抑制p38（MAPK）和p44/42（ERK1/2）的表达和磷酸化水平。上述这些影响都存在剂量依赖性。结论 丙泊酚抑制人食管癌细胞系EC9706的增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。其潜在的机制是通过抑制MAPK/ERK信号通路,进而抑制VEGF的表达。     

TGF-β1对M2型巨噬细胞诱导淋巴瘤细胞增殖的影响

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对M2型巨噬细胞诱导淋巴瘤细胞增殖的影响。方法用TGF-β1处理淋巴瘤细胞Jiyoye,MTT测定细胞增殖。用M2型巨噬细胞培养液上清处理淋巴瘤细胞,同时给予TGF-β1刺激,MTT测定细胞增殖,Transwell小室测定细胞迁移和侵袭,Western blot测定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞核增殖抗原(Ki-67)蛋白水平。结果 TGF-β1作用后的淋巴瘤细胞增殖能力下降,细胞侵袭数目、迁移数目明显降低,细胞中MMP-2、MMP-9、PCNA、Ki-67蛋白水平降低,与未处理的淋巴瘤细胞比较,差异有显著性(P0.05)。M2型巨噬细胞培养液上清处理后的淋巴瘤细胞增殖能力升高,细胞侵袭数目和迁移数目增多,细胞中MMP-2、MMP-9、PCNA、Ki-67蛋白水平升高,与未处理的淋巴瘤细胞比较,差异有显著性(P0.05)。淋巴瘤细胞经M2型巨噬细胞培养液上清和TGF-β1处理后细胞增殖能力、细胞侵袭数目、细胞迁移数目及MMP-2、MMP-9、PCNA、Ki-67蛋白水平较单纯TGF-β1处理的细胞相比明显升高,较单纯M2型巨噬细胞培养液上清处理后的细胞相比明显降低,差异有显著性(P0.05)。结论 TGF-β1可以降低巨噬细胞诱导淋巴瘤细胞增殖、侵袭和迁移,作用机制与MMP-2、MMP-9、PCNA、Ki-67蛋白表达有关。     

RNAi沉默N-cadherin通过MEK ERK信号通路抑制-卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移及上皮-间质转化过程

目的 探讨沉默神经性钙黏附蛋白（N-cadherin）对卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移与上皮-间质转化的影响及分子机制。方法 收集2021年3月~2021年12月我院卵巢癌患者手术切除的卵巢癌组织与邻近癌旁正常组织,采用免疫组织化学染色检测N-cadherin蛋白表达。通过RNAi 技术沉默卵巢癌细胞SKOV3细胞中 N-cadherin的表达后分为空白对照组、空载体组、siRNA-N-cadherin组。CCK-8法、细胞克隆形成实验、流式细胞术分别检测各组细胞增殖活性、克隆形成能力以及细胞周期分布,Transwell实验和细胞划痕实验分别检测各组细胞侵袭与迁移能力,实时荧光定量PCR检测各组细胞中N-cadherin、上皮性钙粘附分子（E-cadherin）mRNA表达,免疫细胞化学染色检测各组细胞中N-cadherin、E-cadherin、基质金属蛋白酶2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9）蛋白表达,Western blot检测各组细胞中MEK、ERK蛋白表达。结果 与癌旁正常组织比较,卵巢癌组织中N-cadherin呈高表达（P＜0.05）。与空白对照组和空载体组比较,沉默N-cadherin能够抑制SKOV3细胞增殖活性（P＜0.05）,细胞克隆形成数目下降（P＜0.01）,并使细胞发生S期阻滞（P＜0.01）,细胞侵袭数目和迁移数目均减少（P＜0.01）;此外,沉默N-cadherin后SKOV3细胞中N-cadherin mRNA相对表达量下降,E-cadherin mRNA相对表达量升高（P＜0.05）,细胞内N-cadherin、MMP2和MMP9蛋白阳性染色减弱,E-cadherin蛋白阳性染色增强,细胞中MEK、ERK的蛋白表达水平均下降（P＜0.05）。结论 沉默N-cadherin可抑制卵巢癌细胞活性、细胞克隆形成、侵袭、迁移与上皮-间质转化的能力,使细胞阻滞于S期,其机制可能与阻碍MEK、ERK信号通路有关。     

热疗对巨噬细胞M2极化作用及其对肺癌细胞侵袭、迁移影响的体外实验研究

背景　热疗是一种安全的辅助治疗方法,通过抑制肿瘤细胞DNA修复、促进其凋亡、提高机体免疫等作用阻碍其发生、发展。但是,对于热疗是否可以通过干预巨噬细胞间接影响肿瘤细胞的研究并不多。目的　通过体外模拟热疗产生的温热作用,探讨在热疗条件下M2型肿瘤相关巨噬细胞对肺癌细胞（LLC）的调控作用。方法　本研究于2019年6-12月实施。10 000 ng/L的干扰素γ（INF-γ）和100 000 ng/L的脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞48 h成为M1型巨噬细胞,20 000 ng/L 白介素（IL）-4诱导RAW264.7细胞48 h成为M2型巨噬细胞;通过流式细胞术和ELISA法分别检测M1、M2巨噬细胞表面标志抗原CD86、CD206的表达率和细胞因子IL-10、IL-12的分泌水平;采用CCK-8法检测不同热疗温度（41 ℃、42 ℃、43 ℃）干预对M2型巨噬细胞在24 h、48 h和72 h的增殖活性作用;采用实时荧光定量聚合酶链反应法（RT-PCR）检测M0、M2型巨噬细胞及热疗（42 ℃）后M2型巨噬细胞Arg-1、Fizz-1、Ym-1 mRNA相对表达水平;Western blotting法检测M2型巨噬细胞及热疗（42 ℃）后M2型巨噬细胞Arg-1、Fizz-1、Ym-1蛋白相对表达水平;Transwell法检测LLC+M2、LLC+M2+热疗（42 ℃）中LLC的侵袭、迁移能力。结果　IFN-γ和LPS可诱导RAW264.7细胞向M1型极化,IL-4可诱导RAW264.7细胞向M2型转化。流式细胞术检测结果显示,M2型巨噬细胞CD86、CD206的表达率高于M0型巨噬细胞和M1型巨噬细胞（P<0.001）。ELISA法检测结果显示,M2型巨噬细胞IL-10的分泌水平较M0、M1型巨噬细胞高（P<0.001）;M1型巨噬细胞IL-12分泌水平较M0、M2型巨噬细胞高（P<0.001）。CCK-8法检测结果显示,42 ℃时热疗抑制巨噬细胞的能力高于41 ℃及43 ℃时（P<0.001）。RT-PCR检测结果显示,与M0型巨噬细胞相比,M2型巨噬细胞的Ym-1、Arg-1、Fizz-1 mRNA相对表达水平升高（P<0.001）。热疗（42 ℃）后M2型巨噬细胞的Ym-1、Arg-1 mRNA和蛋白相对表达水平降低（P<0.001）。Transwell法检测结果显示,M2型巨噬细胞与LLC共培养后LLC侵袭、迁移数量增加（P<0.001）;热疗（42 ℃）后LLC侵袭、迁移数量减少（P<0.001）。结论　热疗可能通过下调M2型巨噬细胞的Arg-1、Ym-1 mRNA的表达水平从而抑制LLC的侵袭与迁移能力。     

M2型巨噬细胞通过分泌白细胞介素-10调控胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的：探讨M2型巨噬细胞通过调控白细胞介素-10(IL-10)表达影响胆囊癌（gallbladder cancer,GBC）细胞增殖、迁移、侵袭的研究。方法：将人单核细胞株THP-1在体外诱导成M2型巨噬细胞,利用RTqPCR检测相应标记物和IL-10的表达情况;利用ELISA检测细胞上清液中IL-10的表达情况。将GBC细胞株NOZ和GBC-SD分组为Control组（无血清培养基）、M2-CM组（M2型巨噬细胞条件培养基）、M2-CM+anti-IL-10组（含IL-10中和抗体的M2-CM）和M2-CM+IgG组（含IL-10同型对照抗体的M2-CM）。采用CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭变化状况,再用Western blot实验检测各组细胞的上皮间质转化标志物（E-cadherin和Vimentin）的表达量。结果：M2型巨噬细胞在体外诱导成功;与诱导前的THP-1相比,IL-10在M2型巨噬细胞内和上清液中表达明显升高（P<0.05）;M2型巨噬细胞可促进GBC细胞增殖、迁移和侵袭,以及能抑制E-cadherin表达和促...     

扁桃酸对肺腺癌H1299细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响及其机制

目的 探索扁桃酸对肺腺癌H1299细胞增殖、凋亡和迁移的作用及相关的分子机制。方法 CCK-8检测H1299细胞增殖能力变化；Hoechst 33258/PI双染分析H1299细胞凋亡水平；划痕和Transwell实验分析H1299细胞侵袭迁移能力变化；Western blot检测细胞增殖、凋亡和迁移相关通路蛋白的表达。结果 不同浓度扁桃酸均可抑制H1299细胞增殖活力和侵袭迁移能力(P<0.05)。扁桃酸可诱导细胞增殖、凋亡通路蛋白bax、cl-caspase-3高表达，p-stat3低表达(P<0.05)。此外，抑制侵袭迁移相关蛋白MMP-9和Vimentin蛋白表达(P<0.01)。结论 扁桃酸抑制肺腺癌细胞H1299的增殖，提升细胞凋亡水平，其分子生物学机制可能与stat3活化降低及激活bax/caspase-3信号轴密切相关；抑制H1299细胞侵袭迁移能力，与MMP-9和Vimentin蛋白表达降低相关。     

多发性骨髓瘤细胞分泌外泌体对破骨细胞分化的调控及其机制

目的 探究多发性骨髓瘤外泌体调控破骨细胞分化相关基因表达的功能及机制。方法 为了探究多发性骨髓瘤细胞对破骨细胞分化的影响，实验分为control组(THP-1细胞)、OPM2组(THP-1+OPM2细胞)、U266组(THP-1+U266细胞)、OPM2+GW4869组(THP-1+OPM2细胞+GW4869)和U266+GW4869组(THP-1+U266细胞+GW4869)。提取OPM2和U266细胞分泌的外泌体(OPM2 exo和U266 exo),透射电镜观察外泌体结构，Western blot鉴定外泌体标志蛋白TSG101、Hsp70、CD9。为了探究外泌体对破骨细胞分化的影响，实验分为OPM2 exo组(THP-1细胞+OPM2 exo)、U266 exo组(THP-1细胞+U266 exo)和PBS组(THP-1细胞+PBS)。qRT-PCR检测所有组细胞中活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells 1,NFATc1)、细胞原癌基因c-Fos、组织蛋白酶K(Cathepsin K,CTSK)mRNA相对表达量，Western...     

水飞蓟宾对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响及机制研究

目的 研究水飞蓟宾(silibinin, SB)对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响,并探究其作用机制。方法 CCK-8检测不同浓度SB对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响,筛选SB作用浓度。将细胞分为9组：对照组、SB-L(水飞蓟宾低剂量)组、SB-M(水飞蓟宾中剂量)组、SB-H(水飞蓟宾高剂量)组、PD98059(ERK1/2信号抑制剂)组、SB202190(p38 MAPK抑制剂)组、PD98059+SB组、SB202190+SB组和顺铂组;CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell观察各组细胞侵袭情况,实时PCR检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK 1/2)和p38 mRNA表达水平,Western blot检测MMP-2、MMP-9、ERK1/2、p38、p-ERK1/2和p-p38蛋白表达水平。结果 与对照组比较,其余各组细胞的增殖率和侵袭细胞数均显著降低(均P<0.05),MMP-...     

SLPI在卵巢癌发生、发展中的作用和机制研究

目的探讨分泌性白细胞蛋白酶抑制因子（SLPI）在卵巢癌发生、发展中的作用及可能的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测不同卵巢癌细胞系（SKOV-3、OVCAR-3、TOV-21G、A2780、OV-1063）中SLPI的表达。利用干扰质粒及过表达质粒构建不同SLPI表达水平的卵巢癌SKOV-3细胞系稳转细胞株,分为shScr组（感染shScr病毒,为敲低对照株）、shSLPI组（感染shSLPI病毒,为SLPI敲低株）、Vector组（感染Vector病毒,为SLPI过表达株对照）、SLPI组（感染SLPI病毒,为SLPI过表达株）。CCK-8法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测各组细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡变化;Westernblot法检测各组细胞增殖、凋亡及迁移侵袭相关蛋白表达水平;裸鼠皮下移植瘤实验比较各组细胞皮下移植瘤生长情况。结果与正常卵巢上皮IOSE80细胞相比,各卵巢癌细胞系中SLPImRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）。与shScr组比较,shSLPI组细胞增殖能力明显减弱,侵袭迁移细胞数目减少,且细胞凋亡率明显升高,体内移植瘤的生长也明显减慢（均P＜0.05）;Westernblot结果显示shSLPI明显降低了增殖相关细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白1（CyclinD1）以及抗凋亡相关B淋巴细胞瘤-2（B-celllymphoma-2,BCL2）蛋白的表达,而促进了促凋亡相关半胱天冬酶3（CleavedCaspase-3）/半胱天冬酶9（CleavedCaspase-9）、BCL2相关X蛋白（BAX）表达;另发现shSLPI组细胞迁移及侵袭相关基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、锌指蛋白SNAIL1（Snail1）和锌指转录因子（Slug）表达明显降低（均P＜0.05）。以上结果在SLPI组与Vector组的比较中得到验证。结论SLPI高表达促进卵巢癌细胞增殖、迁移及抗凋亡能力。     

M2型巨噬细胞外泌体对皮肤创面愈合影响的探究

目的:探究M2型巨噬细胞来源的外泌体（M2exos）对成纤维细胞增殖、迁移的影响。方法:极化RAW264.7细胞并收集M2型巨噬细胞上清,提取并鉴定M2exos。通过免疫荧光观察L929真皮成纤维细胞对M2exos的摄取情况,设对照组和M2exos组,通过CCK-8、细胞划痕实验分别观察在0、24、48、72 h对成纤维细胞的增殖和迁移作用。建立皮肤创口模型,随机将12只C57BL/6J小鼠分为PBS组和M2exos组。两组分别注射200 μL PBS、M2exos（500 μg/mL）,在第1、4、7天观察、拍摄记录,并取材进行HE染色。结果:成功极化得到M2型巨噬细胞,提取和鉴定了M2exos。与对照组相比,M2exos组在48、72 h对成纤维细胞具有促进增殖（t=26.73,P＜0.000 1;t=6.648,P＜0.01）、迁移（t=5.196,P＜0.05;t=22.00,P＜0.000 1）作用。对C57BL/6J小鼠的研究显示,与PBS组相比,在第4、7天时M2exos组创面显著缩小（t=32.80、 51.16,均P＜0.000 1）。结论:M2exos通过促进成纤维细胞增殖和迁移,对小鼠创面愈合有显著的促进作用。     

PD-L1/PD-L2对食管鳞癌细胞恶性表型的影响及耐药研究

目的 探讨程序性死亡配体1/2(PD-L1/PD-L2)对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及对化疗药物的敏感性。方法 在体外食管鳞癌KYSE150细胞系水平上,分别构建PD-L1杂合子敲除细胞系,慢病毒转染PD-L2过表达,将细胞分为WT组(PD-L1野生型)和PD-L1^+/-组(PD-L1杂合子敲除)、Ctrl组(对照)和OE-PD-L2组(PD-L2过表达),用RT-qPCR和Western blot验证PD-L1杂合子敲除和慢病毒转染PD-L2过表达效果以用于后续实验。采用EdU、细胞克隆形成实验、Transwell实验检测各组细胞增殖、迁移和侵袭能力。通过CCK8法检测细胞增殖能力并计算抑制率来评估细胞对化疗药物的敏感性。结果 与野生型WT组相比,PD-L1^+/-组细胞增殖(P<0.001)、迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.05)明显降低,差异有统计学意义。与Ctrl组相比,OE-PD-L2组细胞增殖和迁移能力增加(P<0.05),而侵袭能力无明显差异(P>0.05)。在顺铂药物梯度浓度干预下,...     

RNAi沉默PCDGF基因对喉鳞癌Hep-2细胞生物学特性的影响

目的 研究RNAi沉默畸胎瘤细胞源性生长因子(PCDGF)表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法 RT-PCR检测喉鳞癌组织中PCDGF的mRNA表达水平;Hep-2细胞分为空白对照组、阴性对照组和PCDGF-siRNA组,Western blot检测转染效果及Bcl-2、Bax、E-cadherin和MUC1蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell 小室检测细胞侵袭能力.结果 喉鳞癌组织中的PCDGF mRNA表达水平显著高于声带息肉组织(t=6.88,P=0.005).PCDGF在喉鳞癌组织中高表达.PCDGF-siRNA组喉鳞癌Hep-2细胞中PCDGF、Bcl-2、MUCI蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05),Bax、E-cadherin蛋白表达显著高于空白对照组(P<0.05),细胞增殖率显著低于空白对照组(P<0.05),细胞侵袭数显著低与空白对照组(P<0.05),细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05).结论 抑制PCDGF的表达能够抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞发生凋亡.