丹参麦冬煎剂对过氧化氢所致血管内皮细胞凋亡保护机制的研究

目的研究丹参与麦冬的水提浓缩液1部位（MD-1）对过氧化氢H2O2损伤人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC凋亡的保护作用及机制。方at体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,以H2O2行内皮细胞凋亡造模后,再加入不同浓度的MD—1作用24h。用M1rr法检测细胞生长活力,流式细胞仪检测凋亡率,Westem Blot检测抗凋亡Bcl-2蛋白含量变化。结果H2O2造模后,细胞增殖明显受抑,流式细胞检测出明显凋亡峰,Bcl-2的表达量有明显的下降,而加药组的Bcl-2表达量一定程度回升与正常组相比P〈0．01,具有明显的统计学意义。结论丹参与麦冬的丹参与麦冬的水提浓缩液MD-1保护内皮细胞,抗内皮细胞凋亡。     

当归CO2超临界萃取物对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的 研究当归CO2超临界萃取物对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用.方法 采用过氧化氢(H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型.将细胞分为正常对照组、损伤组、给药组,其中给药组给予当归CO2超临界萃取物预培养24 h后加入1.25mmol/L H2O2,继续培养2 h.MTT法检测细胞存活率;通过各种化学方法检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的活性;用流式细胞仪检测细胞周期改变及凋亡.结果 当归CO2超临界萃取物能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞SOD和NO的活性,降低LDH和MDA水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖.结论 当归CO2超临界萃取物具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤.     

芝麻素通过lncRNA WEE2-AS1/miR-515-5p通路影响高糖诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的：探讨芝麻素对高糖诱导的血管内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及其可能作用机制。方法：高糖诱导HUVEC建立细胞损伤模型,用不同浓度的芝麻素处理细胞;qRT-PCR法检测LncRNA WEE2-AS1与miR-515-5p的表达量;sh-NC、sh-WEE2-AS1转染至HUVEC后加入30 mmol/L葡萄糖处理细胞(HG+sh-NC组、HG+sh-WEE2-AS1组);构建WEE2-AS1稳定过表达HUVEC细胞,用30 mmol/L葡萄糖处理细胞(HG+WEE2-AS1-LV组),用40μmol/L芝麻素与30 mmol/L葡萄糖共同处理细胞(HG+SES+WEE2-AS1-LV组);MTT、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡率;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的水平;双荧光素酶报告基因实验检测WEE2-AS1与miR-515-5p的靶向关系;Western blotting法检测cleaved-caspase3蛋白表达量。结果：芝麻素可降低高糖诱导的HUVEC中WEE2-AS1的表达量(P<0.05),可降低凋亡率和cleaved...     

低氧条件下M2型巨噬细胞外泌体对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响及机制

目的 探究低氧条件下M2型巨噬细胞外泌体对卵巢癌细胞生物学功能的影响及机制。方法 人单核细胞系THP1诱导分化为M2型巨噬细胞，提取并且鉴定正常培养条件下M2型巨噬细胞外泌体(N-M2 exo)以及缺氧培养条件下M2型巨噬细胞外泌体(H-M2 exo)。SKOV-3细胞分为PBS组、N-M2 exo组和H-M2 exo组，分别与PBS、10μg/ml的N-M2 exo和H-M2 exo共孵育48 h, CCK-8法检测各组细胞增殖能力，Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭能力，流式细胞术检测各组细胞凋亡水平，Western blot检测各组细胞MEK和ERK的磷酸化水平。结果 相比于PBS组，N-M2 exo组和H-M2 exo组SKOV-3细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均显著增加(P<0.05),细胞凋亡水平显著下降(P<0.001),MEK和ERK的磷酸化水平显著增加(P<0.001)。相比于N-M2 exo组，H-M2 exo组SKOV-3细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均显著增加(P<0.05),细胞凋亡水平显著下降(P<0.001),M...     

骨肉瘤外泌体中miRNA促侵袭及血管化机制研究

目的 研究骨肉瘤分泌外泌体中的miR-301 a-3p对骨肉瘤U2-OS细胞侵袭能力以及对血管内皮细胞成血管能力的作用及机制.方法 免疫荧光染色用以检测外泌体能否进入人血管内皮细胞(HUVEC)中发挥作用,Western blot法检测miR-301a-3p对于血管相关蛋白CD31及a-SMA以及信号通路蛋白表达的影响,侵袭实验检测miR-301a-3p对骨肉瘤细胞侵袭性的影响.结果 骨肉瘤细胞分泌的外泌体成功进入HUVEC中发挥作用,血管相关蛋白CD31及a-SMA含量高表达,PI3K/Akt、Mek/Erk通路蛋白高表达,血管生长能力较未处理组增强;miR-301a-3p处理后骨肉瘤细胞侵袭能力增强.结论 骨肉瘤来源外泌体中的miR-301a-3p可能通过PI3K/Akt、Mek/Erk信号通路促进骨肉瘤U2-OS细胞侵袭能力以及HUVEC的成血管能力.     

二苯乙烯苷上调Bcl-2抑制内皮细胞凋亡

目的研究二苯乙烯苷（TSG）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用,以及对抗凋亡基因Bcl-2表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,筛选造模内皮细胞凋亡的H2O2浓度,以不同浓度二苯乙烯苷作用24 h。采用MTT法检测细胞生长活力,Hoechst33258染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-blot检测Bcl-2蛋白的含量。结果过氧化氢能引起内皮细胞损伤,抑制细胞增殖,并且随着浓度增加,细胞生存率逐渐降低。其中300μmol/L H2O2作用后细胞增殖明显受到抑制,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞,流式细胞仪检测出明显的凋亡峰,Bcl-2蛋白的表达量显著减少;加入二苯乙烯苷作用后,随着TSG浓度增加,细胞生存率增加,凋亡率逐渐降低;与H2O2造模组比较,10μmol/L的二苯乙烯苷预处理能够显著提高细胞生存率,抑制细胞的凋亡,并且使Bcl-2表达增加（P〈0.05）。结论二苯乙烯苷能抑制过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,该作用与上调Bcl-2表达有关。     

葛根素上调miR-155-3p降低内脏脂肪素诱导人脐静脉内皮细胞损伤

目的 研究葛根素对内脏脂肪素（visfatin）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）炎症因子及miR-155-3p表达的影响;方法 采用visfatin干预HUVEC建立细胞损伤模型,不同浓度（0.5,1.0,2.0 g/L葛根素分别干预细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,ELISA法检测细胞内CRP和NF-κB的水平,RT-PCR法检测细胞内miR-155-3p水平,western blotting测髓样分化因子(myeloiddifferentiationfactor88, MyD88)蛋白水平;结果 visfatin能显著抑制HUVEC增殖,并且诱导其凋亡,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）,葛根素中、高浓度组可明显抑制visfatin对HUVEC细胞损伤作用;此外,葛根素中、高浓度组能显著降低细胞上清CRP 和NF-κB水平,增加细胞内miR-155-3p基因表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.01）。增加miR-155-3p水平可显著降低下游MyD88蛋白表达,抑制HUVEC分泌CRP 与NF-κB,与模型组相比差异显著（P<0.05）。 结论 葛根素能显著减轻visfatin诱导HUVEC炎症损伤效应,其机制可能与葛根素上调miR-155-3p水平抑制靶基因MyD88蛋白表达,从而降低细胞内CRP与NF-κB水平有关。     

内皮祖细胞外泌体抑制紫杉醇诱导的血管内皮细胞焦亡

目的：探索内皮祖细胞外泌体（EPCs-Exo）对紫杉醇诱导的内皮细胞焦亡的影响及其可能机制。方法：培养原代骨髓间充质干细胞（BMSCs）和内皮祖细胞（EPCs）并鉴定。提取BMSCs和EPCs培养液中的外泌体,使用透射电镜观察外泌体形态并检测CD63和CD9的表达鉴定外泌体。分别用BMSCs-Exo和EPCs-Exo干预经紫杉醇诱导的内皮细胞焦亡模型,光镜下观察细胞形态;Western blot检测外泌体标志蛋白CD63、CD9和细胞焦亡相关蛋白NLRP-3、IL-18、GSDMD-N的表达情况;电镜下观察细胞超微结构的变化。基因芯片检测两组外泌体中差异的非编码RNA,RT-qPCR检测lncRNA FGD5-AS1表达情况。结果：大鼠骨髓细胞中分离培养分化出BMSCs和EPCs,免疫荧光法证实BMSCs中CD90 和CD44阳性,EPCs中CD34 和VEGFR2阳性。相比于对照组,紫杉醇组细胞膜被破坏,细胞内线粒体间距离增加,细胞内纤维排列紊乱,细胞中NLRP-3、IL-18、GSDMD-N等细胞焦亡蛋白表达增加（P ＜0.05）;相比于紫杉醇组,紫杉醇+EPCs-Exo组内皮细胞中细胞膜较完整,细胞系损伤较轻,NLRP-3、IL-18、GSDMD-N表达减少（P ＜0.05）;紫杉醇组与紫杉醇+BMSCs-Exo组内皮细胞形态和焦亡蛋白的表达差异无统计学意义。芯片及RT-PCR结果显示相比于BMSCs-Exo,lncRNA FGD5-AS1在EPCs-Exo中表达增加（P ＜0.05）。结论：EPCs外泌体抑制紫杉醇诱导的血管内皮细胞焦亡。     

氧化应激对血管内皮细胞Grx表达的研究

目的采用体外实验，研究人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells．HUVEC）是否受氧化应激而高表达Grx。方法体外分离培养HUVEC；用不同浓度H2O2处理HUVEC，MTT法检测HUVEC活力。RT—PCR半定量检测GrxmRNA表达水平的差异。结果成功获得体外培养的HU—VEC；300-500mol／L H2O2均在不同程度上抑制细胞增殖（P〈0.05）。RT—PCR结果表明，GrxmRNA的表达随着200umol／L H2O2作用时间的增加而增加，30min时与正常对照组差异显著（P〈0．01）；不同终浓度H2O2作用30min结果表明，300umol／L H2O2作用可使GrxmRNA的表达量最高（P〈0．01）。结论建立了分离培养HUVEC的方法；氧化应激可上调HUVEC Grx mRNA表达，且HUVEC内Grx的表达与H2O2刺激呈时间剂量依赖关系。     

阿魏酸镧配合物对H2 O2氧化损伤的血管内皮细胞的影响

目的：探讨阿魏酸镧配合物（ Lanthanum Ferulate,LF）对氧化损伤的血管内皮细胞的影响。方法体外培养内皮细胞,将细胞分为7组,即空白对照组、溶剂对照组（ DMSO）、氧化损伤组（ H2 O2）、氧化损伤加阿魏酸对照组、氧化损伤加阿魏酸镧配合物低、中、高浓度组（ LF- L＋ H2 O2、LF- M ＋ H2 O2、LF- H ＋ H2 O2）。阿魏酸及不同浓度阿魏酸镧配合物预培养内皮细胞24 h后,加入200μmol /L H2 O2继续培养12 h,用MTT法观察阿魏酸镧配合物对H2 O2损伤的内皮细胞活性的影响,检测各组细胞培养液内乳酸脱氢酶（ LDH）、一氧化氮（ NO）、丙二醛（ MDA）含量。结果阿魏酸镧配合物呈剂量依赖性降低H2 O2对内皮细胞生长抑制率,降低MDA、LDH量,增加培养液中NO-2/NO-3含量,各指标差异有统计学意义（P〈0.05）。结论阿魏酸镧配合物可拮抗和修复过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤,其作用可能与其抗氧化和促进NO释放有关。     

糖尿病周围神经病变患者血管内皮生长因子与可溶性血管内皮生长因子受体-2的研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)与可溶性血管内皮生长因子受体-2(sVEGFR-2)对糖尿病周围神经病变发生的影响。方法检测30例糖尿病周围神经病变患者(病变组)及31例未并发周围神经病变的糖尿病患者(无病变组)的血清VEGF及sVEGFR-2浓度。结果周围神经病变组患者血清VEGF水平高于无周围神经病变组,差异有统计学意义(P<0.01)。周围神经病变组患者血清sVEGFR-2水平稍低于无周围神经病变组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论糖尿病患者血清中VEGF水平升高未能阻止周围神经病变的发生,sVEGFR-2可能未参与周围神经病变的形成。     

血管内皮生长因子和bcl-2在肾母细胞瘤中的表达及意义

目的:探讨细胞凋亡抑制基因B-淋巴瘤细胞-2(B-cell lymphoma/leuke mia-2,bcl-2)血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在肾母细胞瘤中的表达及其相互关系.方法:用免疫组织化学和原位杂交方法研究bcl-2和VEGF蛋白及mRNA在17例肾母细胞瘤和7例瘤旁正常肾组织的表达.结果:bcl-2蛋白在肾母细胞瘤组织中的表达(82.4%)高于瘤旁正常肾组织(28.5%);VEGF蛋白在肾母细胞瘤组织中的表达(58.8%)高于瘤旁正常肾组织(14.3%);bel-2 mRNA和VEGF mRNA在肾母细胞瘤的表达率分别为88.2%和82.4%;bcl-2和VEGF的表达之间存在正相关关系(r,=0.633,P＜0.01).结论:bcl-2和VEGF在小儿肾母细胞瘤发生发展中起重要作用.     

新诊断2型糖尿病患者血管内皮功能的多因素分析

目的探讨新诊断2型糖尿病患者血管内皮舒张功能与相关因素问的关系。方法选择我院新确诊的2型糖尿病患者84例,年龄均〈60岁,分为早发亚组（年龄≤40岁）和非早发亚组（〉40岁）,非糖尿病对照组40例。应用美国HP－5500彩色多普勒超声仪测定基础状态、加压后和服用硝酸甘油后肱动脉内径的变化和血流速度。同时测定高敏C反应蛋白（HsCRP）、血糖、血脂等生化指标。结果糖尿病早发亚组和非早发亚组的HsCRP、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、空腹血糖（FPG）、餐后血糖（PPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）均显著高于非糖尿病对照组（P〈0．05）,肱动脉内皮内径变化率显著小于非糖尿病对照组（P〈0．05）。内皮依赖性血管舒张功能与HsCRP（r＝－0．221,P〈0．05）、FPG（r=－0．408,P〈0．01）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）（r＝－0．349,P〈0．01）、HbA1c（r=－0．562,P〈0．01）、PPG（r＝－0．465,P〈0．01）呈负相关,与高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）（r＝0．279,P〈O．05）呈正相关。其中HbA1c、HDL—C、LDL—C与HsCRP为独立影响因素。结论2型糖尿病患者在发病初期已经存在血管舒张功能的损害,且与众多的因素有关。     

疏血通对VEGFR-2及SRF表达的影响

目的探讨生物药品疏血通对血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)和血清应答因子(SRF)表达的影响及其促进血管生长的机制。方法在内皮细胞培养基中加入药物疏血通的稀释液,药物与细胞作用后,在6个特定的时间点,采用免疫细胞化学染色方法,通过阳性细胞计数,检测VEGFR-2和SRF蛋白的表达。结果与对照组比较,疏血通处理组VEGFR-2和SRF蛋白表达水平明显增高(P<0.01)。结论疏血通能明显增加体外培养的血管内皮细胞VEGFR-2和SRF的表达,其促血管生长的可能机制之一是通过诱导内皮细胞增殖及血管平滑肌细胞分化,从而促进新生血管形成。     

三氧化二砷对肿瘤血管内皮细胞作用的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对肿瘤血管内皮细胞生长和功能的抑制作用及其相关的抗血管形成机制。方法：采用肝癌HepG2细胞上清诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）成为肿瘤血管内皮细胞（tumor-derived endothelial cells,Td-EC）,通过细胞迁徙实验流式细胞术、流式细胞术、血管形成实验检测As2O3对Td-EC细胞生物学特征的影响。结果：As2O3在体外对Td-EC有显著促进凋亡的作用,并能抑制其迁移和血管的形成,较在同样条件下对HUVEC的凋亡、迁移和血管形成作用显著。结论：As2O3在体外可特异地抑制Td-EC生长及功能。     

环氧合酶2和血管内皮生长因子在视网膜新生血管中的表达及意义

目的:探讨环氧合酶2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜新生血管中的表达和意义.方法:以高浓度氧诱导C57BL/6J小鼠建立视网膜新生血管模型.取对照组和给氧组幼鼠眼球作荧光素血管灌注,病理切片及免疫组织化学检测观察视网膜血管的改变、视网膜新生血管内皮细胞数及COX-2、VEGF蛋白的表达.结果:给氧组视网膜大量新生血管形成,新生血管内皮细胞核教为(23.38±1.07)个,与对照组相比差异极显著(P＜0.01).COX-2蛋白及VEGF蛋白在内核层、神经节细胞层和突破视网膜内界膜的新生血管中表达.两者表达明显相关(r=0.845,P＜0.01).结论:COX-2、VEGF共同促进视网膜新生血管的形成.     

人参三七组方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子分泌及其受体2表达的影响

目的：探讨益气活血中药人参三七组方对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体2（vascular endothelialgrowth factor receptor-2,VEGFR-2）表达的影响。方法：体外培养HUVEC,分为高剂量人参三七组方（0.4 mg/mL）组、中剂量人参三七组方（0.2 mg/mL）组、低剂量人参三七组方（0.1 mg/mL）组,另设碱性成纤维细胞生长因子（bovine basic fibroblast growth factor,bFGF,320 U/mL）阳性对照组和只加培养液的空白对照组。酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中的VEGF含量,免疫细胞化学法检测VEGFR-2阳性细胞数及其光密度值,蛋白印迹法检测VEGFR-2蛋白的表达。结果：与空白对照组比较,高剂量人参三七组方组和bFGF组细胞上清液中VEGF含量增加（P〈0.05）,VEGFR-2阳性细胞数及光密度值增加,细胞中VEGFR-2蛋白表达增强。结论：促进HUVEC分泌VEGF和表达VEGFR-2可能是人参三七组方促血管生成的基础。     

血管内皮细胞生长因子受体2抑制剂三维药效团模型的构建

目的 构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)抑制剂的三维药效团模型,为设计新型抑制剂建立理论模型。方法 应用Discovery Studio 2.5中的Catalyst模块,选取已确证结合于VEGFR-2活性腔、结合模式一致、抑制活性跨度5个数量级、结构具有多样性的30个抑制剂,其中21个分子作为训练集,余9个分子作为测试集产生三维药效团模型。结果 最优药效团模型由1个氢键受体、2个疏水中心、1个芳环平面和4个排斥体积组成,预测相关性R为0.89。结论 交叉验证结果表明药效团模型具有较好的预测能力,可用于数据库搜索筛选结构新颖的抑制VEGFR-2的先导化合物。     

bcl-2在氧化低密度脂蛋白诱导人血管内皮细胞凋亡中的作用

目的 观察氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)对人血管内皮细胞株EA.hy926凋亡的影响,并探讨bcl-2在其中的作用.方法 MTT法检测不同浓度的oxLDL(50、100、150、200 oe/m1)对细胞增殖能力的影响;流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测不同浓度的oxLDL对细胞凋亡的影响;RT-PCR、Western blot和免疫荧光细胞化学法分别检测不同浓度的oxLDL对bcl-2 mRNA、蛋白表达及在细胞内表达的影响.结果 oxLDL对EA.hy926细胞形态有明显影响,并能明显抑制EA.hy926细胞增殖能力,抑制作用随处理浓度增加而增大,半数抑制浓度(IC50)约为100ug/ml;不同浓度的oxLDL处理细胞24 h后,与对照组比较,早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡细胞百分比均显著增加(P<0.05);oxLDL能够明显抑制细胞内bel-2 mRNA、蛋白表达及在细胞内的表达水平.结论 6cl-2基因在oxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡中发挥重要作用,oxLDL可能通过下调bcl-2的表达促进血管内皮细胞凋亡.     

噻唑烷二酮类药物治疗对2型糖尿病患者血管内皮功能影响

目的探讨噻唑烷二酮类药物（TZDs）对2型糖尿病患者血管内皮功能影响。方法选择TZDs的代表药物吡格列酮（PIO）,对我院2010年7月～2012年6月收治的2型糖尿病患者用PIO进行治疗,治疗前后测定空腹血糖（FPG）、2hPG、空腹胰岛素（Fins）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、血管细胞黏附分子（sVCAM-1）、糖化血红蛋白（HbAlc）、炎症因子C反应蛋白（CRP）、纤溶酶原激活物抑制物-I（PAI-1）、脂联素、肿瘤坏死因子（TNFd）、胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）、内皮依赖性血管舒张功能（ED-VD）水平的改变。结果治疗后EDVD明显改善,sVCAM-1、血糖、Fins、HbA1c、HOMA-IR、PAI-1、CRP及TNFa水平显著降低,脂联素显著升高（P〈0．05）,血脂情况得到明显改善。结论PIO可明显改善2型糖尿病患者的内皮细胞功能．TZDs对2型糖尿病患者心血管并发症的发生具有很好的预防作用,为临床应用TZDs治疗糖尿病及其并发症提供临床基础。