转化生长因子β1对鼠造血祖细胞产生树突状细胞的调控作用

目的 研究转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）对造血祖细胞（ＨＰＣ）产生树突状细胞（ＤＣ）的调控作用及其分子机理。方法 分离高纯度小鼠骨髓Ｌｉｎ,Ｃ－ｋｉｔ,ＨＰＣ经粒细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）干细胞因子（ＳＣＦ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）培养,诱导产生ＤＣ。采用流式细胞仪,逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和同种异基因混合淋巴细胞反应（Ａｌｌｏ－ＭＬＲ）分析ＴＧＦ－β１对ＤＣ产生的调节作用及     

IL—1影响L—细胞造血调节作用的实验研究

目的：研究白细胞介素－１与Ｌ－细胞在造血调控中的可能关系,丰富造血调控理论。方法：在体外祖细胞培养中以不同浓度的ＩＬ－１诱导和未经诱导的Ｌ－细胞条件培养液替代造血生长因子,观察集落产率的变化,并与ＩＬ－１和ＬｃＣＭ共同作用后的集落产率作比较。结果：ＩＬ－１在１２．５￣１００ｕ／ｍｌ浓度范围内,ＬｃＣＭＩＬ－１作者后的粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）,早期红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）,晚期红系祖细胞（ＣＦ     

重组人造血生长因子对抗白血病药物作用的影响

采用流式细胞仪及ＮＴ细胞毒检测，研究造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）对抗白血病药物细胞毒性的影响，并探讨ＨＧＦ与化闻药物联合应用的作用机理，研究结果表明，３种抗白血病药物柔红霉素（ＤＮＲ），三尖杉酯碱（Ｈ），足叶乙甙（ＶＰ－１６）对白血病细胞敏感性存在较大差异：ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－３均能增加ＶＰ－１６，ＤＮＲ对白血病细胞的杀伤作用：ＧＭ－ＣＳＦ能提高Ｈ的细胞毒性作用，而对正常骨髓细胞，３种ｒｈＨＧＦ均不     

人参总皂甙对人血细胞生成的研究

从人参中提取有效成份人参总皂甙（ＴＳＰＧ），测定它对人骨髓粒单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ），红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ，ＢＦＵ－Ｅ）和多向祖细胞（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）的刺激增殖作用。结果显示：在培养中加入不同浓度的ＴＳＰＧ５．２５，５０，７５，１００ｍｇ／Ｌ，可促进造血细胞增殖，在体外形成集落。在ＴＳＰＧ５－７５ｍｇ／Ｌ时，ＣＦＵ－ＧＭ集落产率均明显高于不加ＴＳＰＧ的对照组浓度的ＴＳＰＧ使集落产率明显高于对     

HSV-tk基因特异性杀伤大肠癌细胞的实验研究

目的：探讨单纯疮疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－tk)ad基因在大肠癌组织细胞中特异地表达, 以达到靶向基因治疗的作用。方法：构建以ＣＥＡ基因顺式转录调控序列（ＴＲＳ）驱动tk基因的组织特异性重组逆转录病毒载体Ｇ１ＣＥＡtkＮa,然后以重组逆转录病毒上清染法将重组组织特异性载体及非组织特异性载体分别转导入高分泌ＣＥＡ的大肠癌ＬoＶo细胞中,以Ｇ４１８筛选阳性克隆扩增后给予前药更昔洛韦（ＧＣＶ）进行敏感试验。结果：转导     

胎肝造血基质细胞条件液对WEHI_3细胞增殖分化的影响

采用体外液体培养法，观察不同浓度及不同胎龄人胎肝造血基质细胞条件培养液（ＨＦＬＳＣ－ＣＭ）对ＷＥＨＩ＿３细胞增殖与分化的影响。结果表明：５月龄ＨＦＬＳＣ－ＣＭ能促进ＷＥＨＩ＿３细胞增殖与分化；７月和９月龄ＨＦＬＳＣ－ＣＭ抑制ＷＥＨＩ＿３细胞增殖，促进分化。文中讨论了人胎肝造血基质细胞与造血的关系以及不同时期造血基质细胞的作用。     

造血因子对急性髓性白血病细胞动力学的影响

观察了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ，ｒｈＩＬ－３，ｒｈＩＬ－６和ｒｈＩＬ－９单独或配伍与正常和急性髓性白血病（ＡＭＬ）骨髓共同培养不同时间对细胞ＤＮＡ及增殖周期的影响。结果显示正常和ＡＭＬ骨髓经４种造血因子（ＨＧＦｓ）作用后均有异倍体的检出。其异倍体的发生与Ｓ期细胞的增高有一定相关性。ＨＧＦｓ单独或配伍作用７天时ＡＭＬ骨髓细胞Ｓ％的增高明显大于正常骨髓细胞。     

小鼠骨髓基质细胞系QXMSC1促进骨髓移植后的造血重建

目的：观察骨髓基质细胞系ＱＸＭＳＣ１在骨髓移植后早期能否加速造血重建。方法：用脾克隆形成单位测定ＱＸＭＳＣ１对造血干细胞的影响。计数每根股骨有核细胞数，用半固体琼脂克隆形成法测定粒单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ），微量甲基纤维素法测定红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ－Ｅ）。结果：ＱＸＭＳＣ１细胞可明显增加ＣＦＵ－Ｓ克隆数。在骨髓移植后第１０天，ＱＸＭＳＣ１可增加骨髓有核细胞数，增加ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ     

BGM细胞,Hela细胞,HEL细胞与A549细胞对HSV-1敏感性的比较

用单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１）感染ＢＧＭ细胞、Ｈｅｌａ细胞、ＨＥＬ细胞及Ａ５４９细胞，利用空斑试验，比较四种细胞对ＨＳＶ－１的敏感性。结果示，ＨＳＶ－１在ＢＧＭ细胞培养中空斑形成单位（ＰＦＵ）数最多，出现细胞病变的时间早。提示ＢＧＭ细胞可为ＨＳＶ－１的分离培养提供一种新的、敏感细胞。     

BGM细胞,Hela细胞,HEL细胞与A549细胞对HSV—1敏感性的比较

用单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１）感染ＢＧＭ细胞、Ｈｅｌａ细胞、ＨＥＬ细胞及Ａ５４９细胞，利用空斑试验，比较四种细胞对ＨＳＶ－１的敏感性。结果示，ＨＳＶ－１在ＢＧＭ细胞培养中空斑形成单位（ＰＦＵ）数最多，出现细胞病变的时间早。提示ＢＧＭ细胞可为ＨＳＶ－１的分离培养提供一种新的、敏感细胞。     

氟尿嘧啶诱导Egr-1启动子调控造血因子基因表达对造血恢复的影响

目的 探索5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导Egr-1启动子调控造血生长因子基因表达对化疗后造血损伤的恢复作用.方法 构建携带Egr-1调控序列启动的GM-CSF和EGFP双顺反子基因pCIneo真核表达载体(Egr-EG);通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL,挑出G418抗性的阳性克隆(HFCL/EG);采用流式细胞仪和倒置荧光显微镜观察EGFP绿色荧光表达的阳性细胞;在加入5-Fu的HFCL/EG细胞培养体系中,采用RT-PCR、Western印迹和ELISA检测GM-CSF的表达;采用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸鉴定化疗通过活性氧诱导Egr-1启动子CarG 序列调控下游基因表达的特异性.将HFCL/EG细胞输入荷瘤的重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内,对其实施5-Fu化疗,观察外周血象动态改变和对肿瘤的影响.结果 构建了Egr-1调控序列启动的双顺反子基因表达载体(EgrEG);在HFCL/EG细胞中证实有外源性基因EGFP和GM-CSF的表达,在5-Fu处理后HFCL/EG细胞培养上清液GM-CSF含量较未加5-Fu组明显增高(P＜0.01);RT-PCR和Western印迹显示化疗后HFCL/EG细胞GM-CSF mRNA和GM-CSF蛋白表达增强.在5-Fu处理的HFCL/EG细胞中,N-乙酰半胱氨酸明显减少GM-CSF含量.实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻,恢复加快,而各组间肿瘤抑制率与化疗组相关,而与外源基因表达无明显的差异.结论 5-Fu诱导Egr-1启动子调控的造血生长因子基因表达对化疗后的造血损伤具有一定的恢复作用.     

IL-11基因修饰的基质细胞对造血细胞体外扩增的影响

目的　研究造血因子白介素 11(IL 11)基因修饰的基质细胞对造血细胞体外扩增的影响。方法　采用逆转录病毒载体将IL 11基因转入基质细胞HFCL ,用Northernblot检测基质细胞HFCLIL 11基因的表达 ,用流式细胞仪检测IL 11基因修饰的HFCL支持的脐血CD3 4 + 造血细胞体外扩增中表型为CD3 4 + CD3 8- 早期祖细胞和表型为CD3 4 + CD41+ 巨核系定向祖细胞的比例。结果　基质细胞HFCL能够表达逆转录病毒介导的IL 11基因 ,并且在这种IL 11基因修饰的基质细胞支持下 ,脐血CD3 4 + 造血细胞经过7d扩增 ,扩增细胞中表型为CD3 4 + CD3 8- 的早期祖细胞和表型为CD3 4 + CD41+ 巨核系祖细胞的比例分别为 (1.62± 0 .2 3 ) %、(9.9±1.1) % ,高于未转基因HFCL的 (0 .8± 0 .2 3 ) %、(6.5± 1.8) % ,而在相同条件下细胞因子支持的扩增细胞中则分别为 (0 .19±0 .14 ) %、(6.0± 1.1) %。结论　基质细胞能够表达经逆转录病毒载体介导的IL 11基因 ,而且经IL 11基因修饰的基质细胞能显著促进CD3 4 + CD3 8- 的早期祖细胞和CD3 4 + CD41+ 巨核系祖细胞扩增。     

表达人Jagged1基因的骨髓基质细胞系的建立及其在HL-60细胞分化过程中的作用

目的:建立表达人Jagged1基因的骨髓基质细胞系,并研究Jagged1基因表达在HL-60细胞诱导分化过程中的作用.方法:构建含有人全长Jagged1基因的逆转录病毒载体MSCV-Jagged1/neoR,将其导入包装细胞PT67并收获病毒上清,用病毒上清转染骨髓基质细胞系HFCL,经G418筛选得HFCL-pMSCV-Jagged1细胞,用Western印迹方法检测Jagged1基因的表达;将HL-60细胞与HFCL-pMSCV-Jagged1细胞、HFCL细胞在含有全反式维甲酸(ATRA)的培养液中共培养,流式细胞仪检测不同时间点HL-60细胞CD11b的阳性率.结果:Western印迹方法证明HFCL-pMSCV-Jagged1细胞Jagged1表达水平明显高于HFCL细胞;HL-60细胞与HFCL-pMSCV-Jagged1、HFCL共培养48和72 h后,CD11b阳性率在Jagged1组明显低于HFCL组(P<0.05).结论:Jagged1基因表达可以较为显著地抑制ATRA诱导的HL-60细胞的分化.     

人脐带血造血干细胞的分离和体外扩增

目的 :通过对人新鲜脐带血造血干细胞的体外分离 ,探讨不同细胞生长因子的体外培养体系对CD34+ 细胞的扩增作用。方法 :用SCF、FL、GM CSF、IL 3、IL 6、G CSF、TPO组合成不同的实验组 ,对脐血中分离的CD34+ 细胞进行 2 1d的体外培养 ,扩增后经流式细胞仪分析 ,从而求得细胞培养较好的细胞因子组合。结果 :不同细胞因子组细胞培养孔CD34+ 细胞比例在培养 7d时已经开始上升 ,10d时继续上升 ,到 14d达高峰 ,继续培养 18d ,CD34+ 细胞比例逐渐下降 ,但仍高于培养前水平 ,培养 2 1d ,CD34+ 持续下降。总细胞数在第一周即扩增 35 .32倍 ,10～ 14d总细胞数扩增 331.7倍 ,2 1d总细胞数扩增 4 2 2 .2倍 ,SCF +IL 3+IL 6 +TPO +FL细胞因子组合对总细胞扩增最多 ,SCF +IL 3+IL 6 +GM CSF +G CSF对总细胞扩增略少 ,其次是SCF +TPO +FL细胞因子组合 ,最少为SCF +IL 3+IL 6 +GM CSF细胞因子组合 ,细胞涂片染色观察 ,体外培养 14d ,细胞胞体小 ,胞浆量少 ,胞核体积大 ,规则 ,为早期造血干细胞。结论 :体外HSC培养 ,细胞因子对细胞的增殖有明显的作用 ,但不同的细胞因子组合对细胞的扩增作用有明显的不同     

bcl-2基因转染小鼠造血干细胞重建造血的生物学特性

目的 观察ｂｃｌ－２基因转染小鼠造血干细胞重建造血的小鼠对放化疗的抵抗作用。方法 （１）含ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体质粒,经脂质体介导转染ＰＡ３１７包装细胞,通过Ｇ４１８筛选和克隆,获得高病毒滴度的细胞株（Ｄ３）;（２）用Ｄ３细胞株的病毒上清转染小鼠胚胎肝造血干细胞;（３）经致死剂量照射小全注ｂｃｌ－２转 造血干细胞重建造血;（５）采用脾集落形成和再增殖能力观察ｂｃｌ－２转因干细胞重建造血     

Recombinant human Flt3 ligand exerts both direct and indirect effects on hematopoiesis

Objective To investigate the direct effects of the Flt3 ligand (FL) on hematopoiesis, such as the stimulation of the formation of hematopoietic colonies and the proliferation of dendritic cells, as well as the indirect stimulation of hematopoiesis, especially via the proliferation of endothelial cells.Methods Mononuclear cells from human cord blood were plated in methylcellulose medium containing different cytokines to induce hematopoietic colony formation. Dendritic cells (DCs) were induced from the mononuclear cells with a cytokine cocktail with or without recombinant human soluble FL (rhFL; 100ng/ml).The Flt3 receptors on the surface of a human microvascular endothelial cell line (ECV) were analyzed by flow cytometry. The proliferation of ECV stimulated by rhFL was measured with the microculture tetrazolium assay. The levels of FL, IL-6, IL-8, G-CSF and GM-CSF in the supernatant of ECV cultures were measured by enzyme linked immunoabsorbent assay (ELISA).Results rhFL stimulates colony formation from cord blood when used as a sole stimulant. FL in combination with other cytokines increased colony formation significantly. The number of DCs was approximately 2.5 times higher when rhFL was used. rhFL stimulates the proliferation of ECV on which Flt3 receptors are expressed. Furthermore, ECV secretes FL, IL-6, IL-8, G-CSF and GM-CSF, which were augmented by tumor necrosis factor-α and rhFL.Conclusions rhFL enhances hematopoietic colony formation and DC proliferation from human cord blood cells. FL not only     

胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用

目的 :探讨胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用。方法 :联合应用胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子如重组人干细胞因子 (rh SCF)、IL - 3、IL - 6、粒巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)、粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)、促红细胞生成素 (EPO)等先后对成人骨髓单个核细胞及 CD34 + 富集细胞培养 5 d至 2周。结果 :胎儿骨髓基质细胞与上述细胞因子具有良好的协同作用 ,CD34 +富集细胞以胎儿骨髓基质细胞 +SCF+IL- 3+IL- 6 +G- CSF+EPO培养 2周 ,可使细胞总数、粒 -单系造血祖细胞 (CFU- GM)、早期红系造血祖细胞 (BFU- E)及 CD34 +细胞分别扩增 (119.6± 30 .9)倍、(5 4.6± 17.4)倍、(2 5 .2± 4.4)倍、(11.1± 4.2 )倍。结论 :胎儿骨髓基质细胞可协同上述外源性细胞因子支持成人骨髓造血祖细胞的有效扩增     

GM-CSF诱导人脐血CD34+造血干细胞上CXCR3的表达

目的：研究GM-CSF诱导人脐血CD34^ 造血干细胞上CXCR3的表达。方法：采用流式细胞仪，实时定量逆转录PCR（RT-PCR）分析，及其配体γIP-10和Mig诱导的趋化和粘附作用分析。结果：CXCR3也表达在受GM-CSF刺激后的CD34^ 造血干细胞上，但它在新鲜分离的CD34^ 造血干细胞上不表达。应用实时定量逆转录PCR技术检测新鲜分离的CD34^ 造血干细胞有较低水平的CXCR3 mRNA表达，而GM-CSF能上调CXCR3的表达。用抗CXCR3单克隆抗体（mAb)能阻断γIP-10和Mig诱导的造血干细胞趋化作用，证实γIP-10和Mig是通过CXCR3而发挥作用的。γIP-10和Mig通过CXCR3不仅可诱导趋化作用而且还可诱导GM-CSF刺激后的CD34^ 造血干细胞粘附和聚集作用，而抗CXCR3 mAb能阻断γIP-10和Mig这些功能，但不能阻断SDF-1α的作用。γIP-10和Mig能提高整合素（CD49a和CD49b)的表达，这在GM-CSF刺激后CD34^ 造血干细胞的粘附作用中发挥重要作用。结论：在细胞因子/趋化因子微环境中，CXCR3-γIP-10和-Mig受体配体复合物及GM-CSF对CD34^ 造血干细胞分化成淋巴干细胞和髓系干细胞以及后来的免疫/炎症细胞的生理和病理过程起特别重要作用。这些过程包括CD34^ 造血干细胞的迁移、再定位、分化和成熟。     

血管内皮生长因子重组DNA的构建及体外表达

目的:以质粒PCNDA3.0为载体,研究血管内皮生长因子(VEGF)目的基因在体外真核细胞中的表达.方法:将编码人可溶性VEGF165的目的基因克隆于带有CMV启动子/增强子的PCNDA3.0载体上,重组为PCNDA3.0-VEGF165质粒载体.直接以质粒DNA形式应用脂质体介导的方法转染人脐静脉内皮细胞ECV304,收取细胞上清,用ELISA和Western blot方法检测上清中VEGF165可溶性表达产物.结果:VEGF165基因在CMV启动子/增强子的调控下,可在ECV304细胞高效表达,且在转染后72 h表达量明显高于转染后48 h的表达.结论:以质粒PCNDA3.0为载体,VEGF165基因可以在体外真核细胞中表达,为治疗缺血性疾病提供一个新的基因治疗途径.     

Functional expression of CD95/Fas Antigen and Bcl-2 on Cord bloodHematopoietic Progenitor Cell

The cell-surface expression and functional status of the CD95/Fas antigen on primitive hematopoietic progenitors isolated from human cord blood (CB) were studied. The CD34 cells freshly isolated from CB displayed low CD95 expression. The combinations of cytokines such as SCF FL could up-regulate the expression of CD95 in vitro culture and tumor necrosis factor-e (TNF-α) and interon-γ (IFN-γ) further increased the CD95 expression induced by positive cytokines. The functional status of CD95-mediated apoptosis were analyzed by incubation of CD34 CB cells in the presence of anti-CD95 monoclonal antibodies (McAbs). The effects of anti-CD95 McAbs were measured by viable cell counting, flow cytometry, LTIC and CFU-C assays. A decrease of viable cells, CFUC and LTIC numbers were observed in the presence of anti-CD95 McAbs and TNF-α or IFN-γ.However, growth factor deprivation or the early-acting cytokine such as SCF and FL cross-linking to CD95 caused low apoptosis of CD34 cells. The correlation of increased intracytoplasmic levels of bcl2 and the presence of CD95 on fresh CB CD34 cells suggested that bcl-2 might be involved in protecting against CD95-mediated apoptosis of CB CD34 cells.