游离钙在血钙中的构成比与新生儿重度窒息预后的关系

目的探讨血浆游离钙（[Ca^2＋]i）在血钙中的构成与新生儿重度窒息预后的关系。方法 73例新生儿重度窒息复苏后于生后2 h内、24～48 h、7 d各进行一次血浆[Ca^2＋]i与血钙的检测,将生后2 h内血浆[Ca^2＋]i在血钙中的构成比〉0.48的30例作为A组,将该构成比≤0.48的43例作为B组。观察患儿生后24～48 h、7 d的血浆游离钙和血钙的变化和缺氧缺血性脑病（HIE）的发生率及严重程度。计量资料采用t检验,计数资料采用χ^2检验,P〈0.05为差异有统计学意义。结果生后2 h内所有病例血浆[Ca^2＋]i与血钙的测定值都在正常范围,血浆[Ca^2＋]i在血钙中的构成比A组〉0.48,B组≤0.48。24～48 h血浆[Ca^2＋]i与血钙的测定值两组都较生后2 h内有明显的下降（P〈0.01）,且B组较A组下降幅度大（B组与A组相应值比较,P〈0.01）。B组[Ca^2＋]i的下降更为明显（B组[Ca^2＋]i在血钙中的构成比下降了1.6%,而A组仅下降了0.2%）,其中血浆[Ca^2＋]i〈0.9 mmol/L的A组8例,占26.7%,B组35例,占81.4%,B组与A组低钙血症发生率差异有统计学意义（χ^2=21.87,P〈0.001）。经过系统治疗,A组16例HIE（轻度14例,中度2例）,占53.3%,B组33例HIE（轻度21例,中度11例,重度1例）,占76.7%,两组HIE发生率比较,B组高于A组（χ^=24.39,P〈0.05）。两组中重度HIE的发生率比较,B组亦高于A组（连续性校正后χ^23=.86,P〈0.05）。结论生后2 h内血浆[Ca^2＋]i在血钙中的构成比以0.48为界可以作为早期评估新生儿重度窒息预后的依据之一,该比值等于或低于0.48提示发生HIE的可能性大。     

膜联蛋白Ⅰ的结构和生物学功能

膜联蛋白Ⅰ(ANNX-Ⅰ)是一种钙依赖的磷脂结合蛋白,是Annexins超家族中第一个被发现的成员。ANNX-Ⅰ作为表皮生长因子受体激酶和蛋白酶C的磷酸化底物-磷酯酶A2的抑制物,具有多种生物学功能,包括囊泡运输、胞吐作用的膜融合、信号转导和钙离子通道的形成、调控炎性反应、细胞分化和细胞骨架蛋白间的相互作用等。本文就ANNX-Ⅰ的结构组成,在细胞生长、分化、凋亡、信号转导、炎性反应等方面的生物学功能及其表达与肿瘤疾病的关系和作用作简要综述。     

花生四烯酸通过mTORC1／2通路促进鼻咽癌细胞的增殖

目的研究花生四烯酸（AA）对鼻咽癌细胞增殖的影响及其潜在的分子机制。方法采用CCK．8法检测AA对鼻咽癌细胞系C666．1增殖的影响,以及雷帕霉素（rapamycin,Rap）、PP242与AA共同作用对C666．1细胞增殖的影响。同时采用免疫印迹法检测AA对鼻咽癌C666—1细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路活性的影响,包括下游相关蛋白s6、Akt的表达水平及磷酸化水平,以及mTOR通路抑制剂Rap、PP242与AA共同作用对mTOR信号通路的影响。结果AA可强烈促进C666—1细胞的增殖,mTOR通路抑制剂Rap、PP242均可抑制AA促进C666．1细胞增殖。AA可激活C666．1细胞mTORC1／2下游相关蛋白s6、Akt。使其磷酸化水平升高。mTORC1通路抑制剂Rap可阻断AA对mTORCl的激活,从而降低s6（S235／236）的磷酸化水平,mTORC1／2通路抑制剂PP242可阻断AA对mTORCl／2的激活,从而降低s6（$235／236）和Akt（S473）的磷酸化水平。结论花生四烯酸通过激活mTORC1／2信号通路促进鼻咽癌C666．1细胞系的增殖。     

PTD-BDNF对海马神经元钠、钾、钙离子通道的影响

目的研究PTD-BDNF对大鼠海马神经元细胞钠、钾、钙离子通道的影响。方法全细胞膜片钳技术记录海马神经元细胞电压依赖性钠、钾、钙通道电流,观察并分析PTD-BDNF对离子通道电流的影响。结果与对照组比较,PTD-BDNF、BDNF使海马神经元钠通道电流强度峰值分别增加39.35%和41.99%（n=4,P〈0.01）;使钠通道电流-电压关系曲线下移（n=4,P〈0.01）;使海马神经元钙通道电流强度峰值分别增加39.20%和38.72%（n=4,P〈0.01）;使钙通道电流-电压关系曲线下移（n=4,P〈0.01）;使海马神经元钾通道电流IA、IK在20mv刺激处分别比对照组降低29.03%、28.06%和29.76%、33.38%;使钾电流-电压关系曲线下移（n=4,P〈0.01）。PTD-BDNF与BDNF两者之间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论PTD-BDNF显示了与脑源性神经营养因子相似的电压依赖性离子通道的调节作用,说明PTD-BDNF与脑源性神经营养因子在调节神经元静息膜电位、神经兴奋性方面有相同的分子基础。     

6％羟乙基淀粉行急性超容血液稀释对血电解质及酸碱平衡的影响

目的探讨6％羟乙基淀粉溶液（HES,200／0．5）行急性超容血液稀释（AHHD）对机体血电解质及酸碱平衡的影响。方法选择20例20—40岁、ASAⅠ～Ⅱ级择期五官科手术插管全麻患者,以6％HES15ml／kg扩容行中度血液稀释。于AHHD前、AHHD后、手术结束时测定Het、Hb、血电解质及酸碱平衡指标进行比较。结果AHHD后、手术结束时Hct、Hb较AHHD前显著降低,AHHD后Hct、Hb分别下降了23．1％和21．4％,达到中等程度血液稀释状态;AHHD后血K^＋浓度下降了13．65％,血Ca^2＋浓度也明显下降了39．80％．但均在正常范、围内;AHHD前、后pH值及血Na^＋浓度变化差异均无统计学意义。结论6％HES溶液行AHHD能有效地使Hct及Hb下降至靶水平．同时维持了机体血电解质的稳定及酸碱平衡,是一种安全有效的AHHD方法。     

反向钠钙交换体在大鼠心脏钙预处理中的作用

目的探讨钙预处理时反向钠钙交换体对抗钙矛盾损伤的作用及机制。方法25只SD大鼠随机等分为5组：正常对照（Control）组、钙矛盾（Ca PD）组、钙预处理（CPC）组、反向钠钙交换体抑制剂（KB-R7943）＋CPC组和KB-R7943＋Ca PD组。采用离体大鼠心脏Langendorff逆行灌注模型,观察各组心脏冠状动脉流量（CF）、左心室发展压（LVDP）、左心室内压变化速率（dp/dt）及冠状动脉循环流出液心肌肌钙蛋白I（cTnI）浓度的变化,HE染色观察各组心脏组织形态。结果与Ca PD组相比,CPC组CF、LVDP、dp/dt均显著提高（P〈0.001）,冠状动脉循环流出液中cTnI水平显著降低（P〈0.001）。而钙预处理过程中加入反向钠钙交换体抑制剂KB-R7943,其心肌保护作用均被明显减弱（P〈0.05）。结论钙预处理能够有效对抗钙矛盾对心肌造成的损伤,其机制涉及钙预处理时钠钙交换体反向交换活性的上调。     

PAF受体拮抗剂对脊髓损伤后花生四烯酸代谢的影响

目的：为了探讨ＰＡＦ受体阻断对脊髓损伤后脊髓组织花生四烯酸代谢的作用及ＰＡＦ受体拮抗剂对脊髓损伤的治疗作用机制。方法：应用ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１造成猫体内脊髓损伤前、后ＰＡＦ受体部分阻断，分别采用微量滴定法、＾１２５Ｉ放射免疫分析法测定脊髓损伤后６ｈ脊髓组织ＰＬＡ２活性及花生四烯酸代谢产物（ＴＸＢ２、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α）含量。结果：伤后脊髓组织ＰＬＡ２活性、ＴＸＢ２、６－ｋｅｔｏ－Ｐ     

亚慢性苯并[α]芘和铅联合染毒对小鼠海马组织Ca^2＋浓度和ATP酶活性的影响

目的观察亚慢性苯并[01]芘和铅联合染毒对小鼠行为学以及海马组织Ca^2＋浓度和ATP酶的影响,探讨其联合作用神经行为毒性机制。方法80只小鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组（植物油）、铅染毒组（54mg／L醋酸铅）、苯并[α]芘染毒组（5mg／kg苯并[a]芘）、铅＋苯并[α]芘联合染毒组（54mg／L醋酸铅＋5nlg／kg苯并[α]芘）,每组16只。以饮水行铅染毒,每星期4次腹腔注射行苯并[n]芘染毒。染毒8星期后,Morris水迷宫实验检测小鼠空间学习记忆能力,化学比色法测定海马组织钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活性,荧光标记法测定海马组织Ca^2＋浓度。结果Morris水迷宫实验结果显示：铅染毒组、苯并[α]芘染毒组、铅＋苯并[α]芘联合染毒组小鼠空间学习记忆能力较空白对照组和溶剂对照组显著下降（P〈0．05）,且铅＋苯并[α]芘联合染毒组较铅染毒组、苯并[α]芘染毒组显著下降（P〈0．05）。与空白对照组和溶剂对照组比较,铅染毒组、苯并[α]芘染毒组和铅＋苯并[α]芘联合染毒组海马组织Ca^2＋浓度显著增高（P〈0．05）,钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活性显著下降（P〈0．05）;且与铅染毒组和苯并[d]芘染毒组比较,铅＋苯并[α]芘联合染毒组小鼠海马组织Ca^2＋“浓度显著增高（P〈0．05）,钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活性显著下降（P〈0．05）。结论铅和苯并[α]芘联合作用能降低小鼠的空间学习记忆能力,可能与染毒后小鼠海马组织ca“增多以及钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活性下降有关。     

Investigation on signal transduction pathways after H1 receptor activated by histamine in C6 glioma cells: Involvement of phosphatidylinositol and arachidonic acid metabolisms

BackgroundInformation related to histamine-induced cellular responses in C6 glioma cells through second messenger pathways has not been fully studied, especially the involvement of arachidonic acid (AA) metabolism. In addition, specific labeled ligand binding to histamine receptor sites still needs to be clarified.MethodsLabeled mepyramine ligand was used to study its binding sites; [³H] inositol was used to detect inositol 4-phosphate (IP₁) formation, and fura-2/AM was used to detect intracellular free calcium ion ([Ca²⁺]i) level activated by the phosphatidylinositol-phospholipase C (PI-PLC) pathway. Also, labeled AA was used to detect the metabolism of AA and its metabolites release via the activation of phospholipase A2 in the presence of histamine.ResultsC6 glioma cells incubated with histamine in the presence of 10 mM LiCl for 60 minutes induced an increase of IP₁ and glycerophosphoric-inositol (GPI) accumulation. In addition, histamine caused an increase of extracellular AA with its metabolite release, eliciting a transient and sustained increase of free [Ca²⁺]i. The sustained increase of [Ca²⁺]i was almost or completely blocked by La³⁺ and excess ethylene diamine tetraacetic acid. The calcium ion influx associated with the sustained phase required the presence of histamine on the receptor sites, and could be blocked by a H₁ antagonist, chlorpheniramine.ConclusionC6 glioma cells possess histamine H₁ receptors that have affinity towards [³H]mepyramine binding, and are coupled to PI-PLC to generate inositol phosphates and to increase [Ca²⁺]i, and they are coupled to phospholipase A2 (PLA2) to generate GPI and AA with its metabolite release. The transient increase in [Ca²⁺]i can be attributed to Ca²⁺ release from intracellular stores, whereas the sustained increase in [Ca²⁺]i is due to influx of extracellular calcium ions. The sustained increase in [Ca²⁺]i plays a role in the activation of histamine receptor-coupled PLA2.     

花生四烯酸及5,6环氧二十碳三烯甘油酸对血管紧张素Ⅱ刺激钠和碳酸氢根重吸收的作用

目的 探讨花生四烯酸(AA)及5,6环氧二十碳三烯甘油酸(5,6EET)在肾近曲小管对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激Na+和HCO3-重吸收的作用机制.方法 手工分离野生鼠、cPLA2α缺陷鼠的单根肾近曲小管,分光光度法测定在AA或5,6EET作用下,低浓度(10-10mol/L)AngⅡ引起的Na+/HCO3-离产转运...     

麝香的药理研究：Ⅳ.麝香对大鼠炎性渗出液中白细胞花生四...

The present work was designed to further study the mechanism of the anti-inflammatory action of musk from the viewpoint of arachidonic acid (AA) metabolism: 1) effect on AA release; 2) action on leukotriene B4 (LTB4) and 5-HETE biosyntheses. Leukocytes obtained from rat inflammatory exudate by i.p. injection of 1% carrageenan were labelled with 14C-AA at 37 degrees C for 2 h. The 14C-AA labelled cells were incubated with the water soluble fraction of musk (MWF) and stimulated with calcium ionophore A23187 to release AA. The radioactivity released from the labelled leukocytes was determined as a criterion of AA release. In order to observe the influence of musk on the biosyntheses of LTB4 and 5-HETE, leukocytes were incubated with MWF and AA, and then stimulated with A23187. The LTB4 and 5-HETE produced were determined by RP-HPLC. The results showed that AA release decreased to 50-70% of the control at MWF concentration of 6.25-37.5 micrograms/ml. The biosyntheses of LTB4 and 5-HETE were not affected. However, AA release increased to 1.5-fold at the MWF concentration of 400 micrograms/ml. At the same time, biosyntheses of LTB4 and 5-HETE decreased by 66.7 and 90%, respectively, as compared with controls. This result indicates that MWF not only inhibited phospholipase A2 (PLA2) activity, but also prevented AA peroxidation and inhibited LTB4 biosynthesis. These results suggest that inhibition of the AA metabolic pathway may play a major role in the mechanism of the anti-inflammatory action of musk.     

谷胱甘肽对人离体嗜中性白细胞超氧阴离子产生和清除的影响

目的：研究谷胱甘肽（GSH）对人离体嗜中性白细胞超氧阴离子产生和清除的影响及机制。方法：用细胞色素C还原法测定3种刺激剂：N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（fMLP）、佛波豆蔻醚乙酸盐（PMA）和花生四烯酸（AA）介导的嗜中性白细胞超氧阴离子释放量。用Western blot法检测嗜中性白细胞蛋白质因子p47^phox磷酸化。结果：GSH呈浓度依赖性促进fMLP介导的嗜中性白细胞释放超氧阴离子，不影响PMA和AA介导的嗜中性白细胞释放超氧阴离子。酪氨酸激酶抑制剂5，7，45-三羟基异黄酮明显抑制fMLP介导的氧自由基产生，而蛋白激酶C抑制剂十字孢碱仅有轻度抑制作用。在非初始化的嗜中性白细胞GSH可清除fMLP、PMA和AA诱导产生的超氧阴离子。GSH刺激fMLP介导的嗜中性白细胞质因子p47如磷酸化，与其对超氧阴离子释放的影响一致。结论：GSH对刺激剂介导的超氧阴离子的产生依赖于膜受体的激活和还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶p47^phox磷酸化。     

毛冬青甲素体外给药对花生四烯酸诱导的兔血小板聚集和丙二醛生成的影响

研究了毛冬青甲素体外给药对花生四烯酸诱导兔血小板聚集和聚集液中过氧化脂质含量变化的影响。结果表明,毛冬青甲素在较大样本中可抑制花生四烯酸诱导的血小板聚集和过氧化脂质的生成,两者间具有一定的相关性,表明毛冬青甲素抗血小板作用可能与抑制过氧化脂质有关。由于后者的生成量与花生四烯酸代谢活性产物TxA_2的生成有近似等摩尔增加的关系,故推测毛冬青甲素对TXA_2的合成有阻断作用,这种作用可能为毛冬青甲素抗血小板功能的作用机制。     

重组人透明带蛋白3诱导精子的顶体反应

目的：在体外条件下检测重组人透明带蛋白诱导的顶体反应。 方法：体外采集已生育健康男子精液,采用非连续密度梯度法分离精子,将获能的精子悬液分成阴性对照组(C组,200 μL精子悬液加1 μL DMSO)、阳性对照组(A组,200 μL精子悬液加A23187至终浓度为10 μmol•L^-1)和ZP3组(200 μL精子悬液加ZP3至终浓度为10 mg•L^-1),考马斯亮蓝染色法检测重组人ZP3蛋白诱导的顶体反应。结果：C组、A组和ZP3组发生顶体反应的精子百分率分别为(5.00±1.70)%、(46.10±7.49)%和(13.20±2.70)%,各组间比较差异有显著性(P<0.05)。 结论：重组人透明带蛋白能够诱导人精子发生顶体反应。     

雌激素对正常人精子运动参数及胞内钙离子的影响

目的研究雌激素在体外对正常人精子运动参数和胞内钙离子的影响。方法用不同浓度的雌激素类物质17β-雌二醇（E2）作用于人精子，以计算机辅助精子分析系统（CASA）观察人精子体外运动参数的变化；用腺苷酸环化酶抑制剂预处理人精子，通过流式细胞术检测E2、非透膜性大分子物质雌二醇-牛血清白蛋白复合物（E2-BSA）对精子胞内Ca^2＋浓度的影响。结果0．1μmol／L的E2可显著提高精子前向运动百分率、平均曲线运动速度、平均直线运动速度和平均路径速度（P〈0．05），10μmol／L的E2明显降低精子的前向运动百分率、平均曲线运动速度和平均路径速度（P〈0．05），0．01μmol／L的E2对精子的各项运动参数无显著影响；E2（0．1μmol／L）、E2-BSA（5μmol／L）作用后，精子胞内Ca^2＋浓度均显著升高（P〈0．05）；腺苷酸环化酶抑制剂可明显抑制E2或E2-BSA引起的精子胞内Ca^2＋浓度的升高（P〈0．05）。结论雌激素在体外可增强正常人精子的运动力，该效应可能是通过雌激素与人精子膜上雌激素受体结合后，升高精子胞内Ca^2＋的浓度以及激活腺苷酸环化酶而实现的。     

大鼠皮质神经元缺氧缺糖/再灌注诱导NMDA受体亚基NR2A酪氨酸磷酸化

目的 研究大鼠皮质神经元缺氧缺糖（OGD）/再灌注诱导N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体NR2A酪氨酸磷酸化水平升高的可能分子机制.方法 以培养的大鼠皮质神经元OGD为模型,通过免疫沉淀（IP）及免疫印迹（IB）的方法 研究NR2A酪氨酸磷酸化.结果 OGD/再灌注后NR2A酪氨酸磷酸化水平快速并持续升高,至18 h达高峰（约为sham组的4.9倍）;于OGD前加入乙二醇二乙醚二胺四乙酸（EGTA）、地（艹卓）西平（MK-801）、尼莫地平（nimodipine）、染料木黄酮（genistein）和KN-62等,对NR2A酪氨酸磷酸化的升高均有明显的抑制作用.结论 OGD/再灌注诱导NR2A酪氨酸磷酸化水平的升高可能与胞外Ca2＋内流有关,并与NMDA受体通道和L-型电压门控钙通道（L-VGCC）的开放有关;而且,NMDA受体通道可以进行自身调控,L-VGCC对NMDA受体也有一定的调控作用.     

毛冬青甲素体外给药对花生四烯酸诱导的兔血小板聚集和丙二醛生成的影响

研究了毛冬青甲素体外给药对花生四烯酸诱导兔血小板聚集和聚集液中过氧化脂质含量变化的影响。结果表明,毛冬青甲素在较大样本中可抑制花生四烯酸诱导的血小板聚集和过氧化脂质的生成,两者间具有一定的相关性,表明毛冬青甲素抗血小板作用可能与抑制过氧化脂质有关。由于后者的生成量与花生四烯酸代谢活性产物TxA₂的生成有近似等摩尔增加的关系,故推测毛冬青甲素对TXA₂的合成有阻断作用,这种作用可能为毛冬青甲素抗血小板功能的作用机制。     

PRT318对胶原诱导人血小板Syk磷酸化的影响

摘要：目的  观察脾酪氨酸激酶（Syk）抑制剂PRT060318（PRT318）在体外对人血小板聚集率及Syk磷酸化的影响。方法  采用比浊法测定PRT318对胶原、二磷酸腺苷（ADP）及花生四烯酸（AA）诱导的人血小板聚集率的影响;运用Western blot检测Syk525/6磷酸化水平。结果  Syk特异性抑制剂PRT318可抑制胶原诱导的人血小板聚集率,但对ADP或AA诱导的人血小板聚集率无影响。在蛋白水平上PRT318可促进人血小板在胶原诱导下Syk525/6磷酸化水平升高。酪氨酸蛋白激酶抑制剂PP2可抑制胶原诱导的人血小板聚集,降低人血小板在胶原诱导下Syk525/6磷酸化水平,并可阻断胶原诱导下PRT318促Syk525/6磷酸化作用。结论  PRT 318对胶原诱导的血小板聚集具有抑制作用,并能促进胶原诱导的血小板膜受体糖蛋白VI信号通路上Syk525/6磷酸化,提示PRT318可能通过作用于Syk525/6磷酸化而抑制血小板聚集。

     

脑血栓形成患者血浆中AA及EPA含量的变化

目的 探讨脑血栓形成的发生及继发性脑损伤的出现与花生四烯酸（AA）及其代谢产物、廿碳五烯酸（EPA）的关系。方法 用气相色谱法检测了30例急性脑血栓形成患者血浆中AA、EPA的浓度、并与正常人相比较。结果 急性脑血栓形成患者血浆中廿碳四烯酸含量增加,而廿碳五烯酸含量下降。结论 急性脑血栓形成的发生及继发性脑损伤与其血浆中的AA、EPA含量有一定的关系。这可对脑血栓形成的预防及治疗提供一定的线索。     

小鼠ZP2抗体的制备及其免疫活性研究

目的制备抗小鼠ZP2（mZP2）抗体并研究抗血清的免疫活性。方法利用Rosetta宿主菌诱导表达mZP2重组蛋白,电泳
分离重组ZP2蛋白,切胶制备免疫抗原;利用乳化抗原主动免疫新西兰雄兔制抗血清;通过ELISA测定抗体应答水平;以免疫组
化测定抗血清特异性;通过精卵结合实验检测抗血清对小鼠卵子结合顶体反应后精子的影响。结果ELISA结果说明用重组蛋
白免疫新西兰雄兔诱发产生了抗血清。免疫组化实验证明抗血清与小鼠卵巢透明带发生了特异性反应,精卵结合实验显示抗
ZP2抗体能抑制顶体反应后精子与卵子结合。结论重组mZP2蛋白诱发产生了抗ZP2抗体,抗体能抑制顶体反应后的精子与
卵子结合。