CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在糖尿病发病中作用的研究

目的：探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞在糖尿病发病中的作用及机制。方法：选取BALB/c小鼠,每日腹腔注射链脲佐菌素（STZ）40mg/kg,连续5天,建立1型糖尿病模型;从小鼠内眦静脉采血,检测血糖;取小鼠尿液,检测尿糖;流式细胞术检测两种小鼠感染不同时间脾细胞悬液中CD4＋T细胞和CD4＋CD25＋T细胞百分含量;ELISA法检测脾细胞培养上清IFN-γ和IL-10水平。结果：BALB/c小鼠的IFN-γ水平在注射STZ第2周和4周明显增高（P〈0.05）;IL-10水平在注射STZ第2周和4周明显降低（P〈0.05）;CD4＋T细胞数量在注射STZ第2周未见明显升高,第4周水平明显升高（P〈0.05）;CD4＋CD25＋T细胞数量在注射STZ第2周和4周明显降低（P〈0.05）。结论：CD4＋CD25＋调节性T细胞通过抑制Th1型细胞因子分泌,分泌IL-10等细胞因子,防止糖尿病的发生,维持自身耐受。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对HCV感染者疾病进程影响的研究

目的：探讨HCV感染者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达状况以及与疾病进程的相关性。方法：选取HCV感染者69例及健康对照23例,应用流式细胞术检测外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达。结果：HCV感染组外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞比例明显高于对照组（P〈0.01）;慢性感染组外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例高于HCV无症状携带组（P〈0.05）;肝硬化组外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例高于慢性感染组（P〈0.05）。结论：HCV感染者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平与疾病进程具有相关性。     

非小细胞肺癌外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节T细胞分析

目的分析非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节T细胞（Treg）占CD4^＋T细胞的比例变化,探讨其临床意义。方法采用流式细胞仪检测32例非小细胞肺癌患者和15例正常健康者（对照组）外周血中CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞的比例。结果健康对照纽外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞比例为（0．54±0．51）％;NSCLC患者外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞比例为（1．40±0．98）％。两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论NSCLC患者外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞的比例明显升高,提示与肺癌免l癌逃逸有美。     

CD4^＋CD25%＋FoxP3^＋调节性T细胞在肺癌患者体内检测及其意义

目的研究肺癌患者外周血和肿瘤组织CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节性T细胞（Treg）的异常聚集,探讨其在肺癌患者体内调节免疫抑制作用。方法采用流式细胞术对28例肺癌患者的癌组织,相应的癌旁组织和外周血及15例正常志愿者外周血中CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节性T细胞的检测。结果肺癌患者癌组织中CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节性T细胞在CD4^＋T细胞中所占比例是（10．5±1．6）％;外周血中和癌旁组织表达分别是（5．2±2．1）％和（3．6±1．2）％,癌组织明显高于外周血和癌旁组织（P〈0．05）。肺癌患者外周血中Treg细胞（5．2±2．1）％明显高于志愿者（1．8±1．2）％。结论CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节性T细胞在肺癌组织及外周血中高表达,促进了肿瘤的进一步恶化,在癌组织学分型上也存在明显差异,肺腺癌表达阳性较高,可以作为肺癌免疫治疗的靶点。     

外周血CD4^＋CD25^＋CD127^-调节性T细胞在过敏性紫癜中的表达及意义

目的 探讨外周血CD4^＋CD25^＋CD127^＋调节性T细胞在HSP患儿治疗前和治疗后的表达及其临床意义。方法选取HSP患儿4l例作为观察组,选取健康儿童41例作为对照组,检测对照组儿童及观察组患儿治疗前后的CD4^＋CD25^＋CD127^＋值。结果（1）治疗前与对照组比较,CD4^＋CD25^＋CD127^＋明显降低（P〈0．05）;（2）与治疗前比较,观察组患儿的CD4^＋CD25^＋CD127^＋值在治疗后明显升高（P〈0．05）;（3）与对照组比较,观察组患儿治疗后CD4^＋CD25^＋CD127^＋值差异无显著性（P〉0．05）。结论外周血CD4^＋CD25^＋CD127^＋值在HSP患儿治疗前显著降低,给予有效的治疗后其值显著升高,可能在HSP的发生发展过程中调节性T细胞进行了参与。而对于HSP患儿对疾病的有效预测．可以对其CD4^＋CD25^＋CD127^＋值进行测定。     

NOD小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞功能变化研究

目的：观察NOD小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的功能变化。方法：流式细胞仪分析NOD小鼠胰腺引流淋巴结（PLN）CD4^＋CD25^＋T细胞频率,CD4^＋CD25^＋T细胞中FoxP3^＋细胞的比例,CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋T细胞的FoxP3平均荧光强度（MFI）;检测CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的抑制功能。结果：在不同的年龄阶段,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数量未发生明显变化,而随时间的推移,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞中FoxP3表达水平降低,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的功能也下降。结论：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的抑制功能降低可能是NOD小鼠糖尿病发作的根本原因。     

IL-10基因修饰的CD4^＋T细胞对哮喘小鼠气道核转录因子κB表达的影响

目的：研究携带小鼠IL-10基因的重组腺病毒表达载体修饰的CD4^＋T细胞对哮喘小鼠气道NF—κ3表达的影响，从而探讨IL-10治疗哮喘的可能分子机制。方法：BALB小鼠随机分成6组，正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）、IL-10基因修饰CD4^＋T细胞治疗组（C组）、LacZ基因修饰的CD4^＋T细胞治疗组（D组）、未经任何基因修饰的CD4^＋T细胞治疗组（E组）、生理盐水治疗组（F组）。应用卵白蛋白激发的哮喘模型。应用流式细胞仪分离小鼠外周血CD4^＋T细胞，基因转染采用重组腺病毒表达载体。应用Westemblot分析肺气道的Iv．B的表达。结果：IL-10基因转染的CD．可细胞在第7天表达IL-10最高，并可以持续维持高水平表达40d左右。C组与B组和F组IκB表达经统计学处理差异均具有显著性（P〈0．05）。结论：IL-10基因转染的CD4^T细胞使哮喘小鼠气道IκB表达上升，提示IL-10治疗哮喘可能通过抑制NF—κ3传导有关。     

哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与气道炎症反应的关系

目的 观察哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）数量的改变及其与气道炎症反应的关系。方法健康6周龄SPF级BALB/c小鼠20只,随机分为2组：正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）,B组以卵白蛋白（OVA）致敏激发方法建立小鼠哮喘模型;流式细胞术检测小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞的比例;检测小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）炎症细胞数;BALF炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数分别与外周血CD4^＋CD25^＋Treg作相关分析。结果A组、B组小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞比例分别为（5．81±0．76）％、（3．21±0．74）％,差异有统计学意义（P〈0．05）BALF炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数与外周血CD4^＋CD25^＋Treg呈负相关,相关系数分别为-0．929和-0．920。差异有统计学意义（P〈0．001）结论哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞比例较正常对照组显著减少。且与哮喘小鼠气道炎症反应密切相关。     

胰腺癌患者IAP与CD4^＋CD25^＋T细胞的相关性

目的探讨胰腺癌患者血清血清免疫抑制酸性蛋白（immunosuppressive acidic protein,IAP）和外周血CD4^＋CD25^＋T细胞的相关性及临床意义。方法分别采用ELISA法和流式细胞技术检测55例胰腺癌患者血清IAP水平和外周血CD4^＋CD25^＋T细胞数量并进行相关性分析,同时与胰腺良性疾病组和健康对照组比较。结果胰腺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞和血清IAP的表达水平明显高于胰腺良性疾病组和对照组（P〈0．05）,且与肿块的大小、远处转移及临床分期显著相关性（P〈0．05）,胰腺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞数量和血清IAP的表达成正相关。结论胰腺癌患者CD4^＋CD25^＋T细胞和血清IAP的水平与肿瘤的浸润转移和病程发展有关,胰腺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞数量的增多可能诱导IAP表达水平的增高。     

脉冲高容量血液滤过对脓毒症患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的：探讨脓毒症患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）的水平和意义以及脉冲高容量血液滤过（PHVHF）对它们的影响。方法：将2008年1月-2010年11月在安徽省立医院ICU住院的脓毒症患者40例按照疾病严重程度分为3组：脓毒症组14例,严重脓毒症组15例,脓毒症休克组11例。其中行PHVHF患者25例。40例脓毒症患者在入选当天和d5行流式细胞术检测血中CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例和CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋和CD4^＋/CD8^＋水平。同时选取20例健康人为对照组。结果：健康对照组CD4^＋CD25^＋Treg细胞表达率为（0.39±0.23%）;脓毒症组为（1.72±0.59%）;严重脓毒症组（2.72±0.22%）;脓毒性休克组（3.55±0.51%）,后3组间两两比较有显著性差异（均P〈0.05）。脓毒症组CD3^＋、CD4^＋和CD4^＋/CD8^＋较正常对照组显著升高（P〈0.05）。严重脓毒症组和脓毒症休克患者CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋/CD8^＋较正常对照组显著降低（均P〈0.05）。与死亡组比较,生存组PHVHF能更有效地降低CD4＋CD25＋Treg细胞的异常表达（P〈0.05）,上调CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋和CD4^＋/CD8^＋水平。结论：CD4^＋CD25^＋Treg细胞在脓毒症的免疫发病机制中可能起着重要作用,随病情加重,免疫抑制加强。PHVHF可调整脓毒症患者T细胞亚群比例,改善其免疫抑制状态,可作为脓毒症免疫调节治疗的手段之一。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对哮喘大鼠免疫功能影响

目的:观察CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对CD4+CD25-T细胞增殖和Th1/Th2细胞因子分泌的影响,探讨其在哮喘气道炎症中的作用机制。方法:将哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞分别与卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞和哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞联合培养,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测量细胞增殖情况,ELISA检测细胞IL-4、IL-5和IFN-γ含量。结果:OVA耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞能抑制CD4+CD25-T细胞增殖和Th2细胞因子分泌(P<0.05);哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞可明显抑制IFN-γ的分泌(P<0.05)。结论:OVA免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞可能通过抑制哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞增殖和影响Th1/Th2平衡发挥作用,哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞存在功能异常,可能与哮喘的发病有关。     

特异性免疫治疗对哮喘大鼠转化生长因子-β1和CD4＋CD25＋调节性T细胞的影响

目的 探讨特异性免疫治疗（specific immunotherapy,SIT）对哮喘大鼠转化生长因子-β1（TGF-β1）和CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Tr）的影响.方法 40只健康雄性清洁级Wistar大鼠随机分为哮喘组、正常对照组、SIT对照组和SIT治疗组4组,每组10只.通过卵蛋白（OVA）雾吸减敏的方法对致敏大鼠进行SIT,观察各组支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞分类及计数结果、血清和BALF中TGF-β1水平及外周血CD4＋CD25＋Tr百分率变化.结果 哮喘组血清和BALF中TGF-β1水平分别高于正常对照组（均P＜0.01）和SIT治疗组（P＜0.05或0.01）;正常对照组外周血CD4＋CD25＋Tr百分率显著高于哮喘组（P＜0.01）和SIT治疗组（P＜0.01）,而SIT治疗组CD4＋CD25＋Tr百分率高于哮喘组（P＜0.05）.结论 特异性免疫治疗可下调哮喘大鼠体内TGF-β1水平和纠正调节性T细胞的缺失状态.     

体外扩增小鼠CD8^＋NK1.1^＋NKT细胞的研究

目的研究体外扩增小鼠CD8^＋NK1.1^＋NKT细胞的表面分子标志、分化途径及细胞属性。方法获取超抗原SEB活化后体外扩增的小鼠效应细胞,用抗CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE、NK1.1-APC、TcRVβ8-FITC和CD69-FITC荧光抗体染色后,用流式细胞仪（FCMCalibueBD,USA）鉴定CD8^＋NK1.1^＋NKT细胞的表面分子标志和分化途径。用逆转录聚合酶链反应测定细胞内各种细胞因子和Foxp3基因转录水平。结果体外扩增的细胞中91.92%是CD8^＋T细胞,其中22.75%的细胞是CD8^＋NN1.1＋NKT细胞,高于正常值（0.21±0.19,n=12）108倍以上。19.61%NKT细胞是TcRVβ8＋NN1.1＋NKT细胞。CD69分子的表达由原始0.11%增加到85.95%。CD4＋T、CD3＋T细胞亚群和CD4＋NKT、CD3＋NKT及CD4-CD8-NKT细胞亚群没有增加。扩增细胞TGF-β的mRNA表达呈阳性,不表达Foxp3和细胞因子IL-2、4、5、6、10及IFN-γ。CD8^＋NKT细胞直接由CD8^＋T细胞分化而来。结论 CD8^＋NK1.1^＋NKT细胞的分子特征为CD69＋Foxp3-TcRVβ8＋TGF-β＋CD8^＋NK1.1^＋;它们既不是CD8^＋T调节细胞（Treg.）,也不是CD4^＋NKT细胞,直接由CD8^＋T细胞分化而来,带有TCRVβ8受体,应属于T细胞亚群。     

HIV／AIDS患者CD4^＋、CD8^＋及WBC检测分析

目的分析HIV／AIDS患者外周血T辅助细胞（CD4^＋）、T抑制细胞（CD8^＋）和白细胞（WBC）检测结果。方法CD4^＋和CD8^＋计数通过免疫荧光标记,采用流式细胞仪检测;白细胞（WBC）计数采用全自动细胞分析仪检测。结果118例HIV／AIDS住院患者,WBC降低组（3．00±0．61）×10^9/L的CD4^＋和CD8^＋分别为（68．60±38．98）个/ul和（266．89±126．52）处／ul,WBC正常组（7．13±5．12）×10^9／L的CD4＋和CD8＋分别为（104．39±61．37）个/ul和（380．17±134．06）个/ul,两者差异有统计学意义（t1＝5．78,守3．62,t3=5．35,P均〈0．01）;两组别CD4^＋／CD8^＋比值比较均呈有统计学意义（P〈0．05）。结论HIV,AIDS患者在发病过程中与CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋、WBC有密切相关,建议HIV感染者尽早进行医学咨询并做CD4^＋、CD8^＋和血常规的检测,以了解病情的进展及进行抗病毒治疗。     

TGF-β1诱导的新生儿脐带血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞增殖动力学研究

目的：探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）诱导的新生儿脐带血CD8^＋CD25^＋调节性T细胞增殖活性。方法：新生儿脐带血单个核细胞经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE）标记后,加入TGF-β1,同时用CD3mAb激活和IL-2培养扩增。培养第4、6、8天收集细胞,用流式细胞术检测活化增殖后的CD4^＋CD25^＋、CD8^＋T细胞增殖动力学变化。结果：培养后第6、8天,实验组CD4^＋CD25^＋T细胞增殖指数分别为11.52、23.04,高于对照组CD4^＋CD25^＋T细胞（6.68,10.46）及实验组CD8^＋T细胞（4.23,5.43）。培养后第8天,实验组CD4^＋CD25^＋T细胞第8代到第10代所占的比例为52.74%,在各代中以第8代所占比例最高,而对照组CD4^＋CD25^＋T细胞第8代到第10代所占的比例为36.26%;实验组CD8^＋T细胞第8代到第10代所占的比例为13.54%,在各代中所占比例最高的为第2代,而对照组CD4^＋T细胞第8代到第10代所占的比例为29.44%。结论：TGF-β1诱导的新生儿脐带血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞增殖活性明显强于CD8^＋T细胞。     

左归丸对小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的：观察左归丸制剂对小鼠脾细胞中Treg亚群及其相关细胞因子表达的影响。方法：Balb/c小鼠给予不同剂量左归丸处理后，利用流式细胞术检测小鼠脾细胞中Treg亚群（CD4^＋／CD25^＋）的变化；采用RT-PCR法检测小鼠脾细胞中IL-10、TGF-β、IFN-γ及Foxp3的表达水平；采用ELISA法检测小鼠外周血中IFN-γ的分泌水平。结果：小剂量左归丸对小鼠脾脏Treg亚群及相关细胞因子的表达没有显著影响；中剂量左归丸可明显上调小鼠脾脏Treg亚群比例（P〈0．05），提高Treg特异性胞内信号Foxp3及相关细胞因子IL-10、TGF-β的转录水平，同时抑制，IFN-γ的表达；大剂量左归丸可显著降低Treg细胞亚群比例，对Foxp3、IL-10、TGF-β、IFN-γ的表达均有明显的抑制作用（P〈0．05）。随着中、大剂量左归丸处理小鼠IFN-γ的转录下调，血清中IFN-γ的水平也明显下降（P〈0.05）。结论：左归丸可上调Treg细胞及相关细胞因子的表达水平，抑制IFN-γ的表达，但这种免疫效应有剂量限制性，大剂量应用时显示抑制作用，提示左归丸对Treg亚群有剂量依赖性的双向调节作用。