RT-PCR检测外周血CK19 mRNA及CEA mRNA诊断非小细胞肺癌微转移的研究

目的应用RT-PCR法检测CK19 mRNA、CEA mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中的表达情况并进行比较分析,探讨它们在NSCLC发生、转移及预后中的意义。方法NSCLC患者76例,肺良性疾病患者15例,Ⅳ期非肺癌恶性肿瘤患者30例,健康志愿者20例,均在治疗前抽取外周血,通过RT-PCR法检测CK19 mRNA和CEA mRNA的表达。结果NSCLC患者的CK19 mRNA和CEA mRNA阳性率显著高于肺部良性疾病患者和健康对照组(P<0.05)。CK19 mRNA和CEA mRNA在NSCLC与Ⅳ期非肺癌患者中的阳性表达率无差异(P>0.05)。CK19 mRNA在外周血中的表达率与肺癌组织学类型无关(P>0.05),CEA mRNA在肺腺癌中高度表达(P<0.05)。CK19 mRNA及CEA mRNA与P-TNM分期无关(P>0.05)结论两种肿瘤标志物均可单独作为RT-PCR检测肺癌患者外周血微转移的分子标志物,且CEA mRNA可以帮助临床判断病理类型。该方法的建立可能有利于早期诊断肺癌转移,从而指导临床分期和治疗。     

CEA mRNA及CK19mRNA在非小细胞肺癌外周血中的表达及其与临床病理参数的关系

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中癌胚抗原mRNA(CEA mRNA)及细胞角蛋白19 mRNA(CK19mRNA)的表达及与临床病理参数(病理类型、分期、细胞分化程度、淋巴结转移)之间的相关性。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测48例NSCLC患者、15例肺良性疾病(BLD)患者和10例健康人外周血中CEA mRNA及CK19 mRNA的表达。结果 NSCLC患者外周血中CEAmRNA及CK19 mRNA的阳性表达率分别为58.33%(28/48)、68.75%(33/48),在BLD患者中的阳性表达率分别为6.67%(1/15)、13.33%(2/15),而健康对照组均无表达,差异有统计学意义(P<0.05)。其中Ⅰ、Ⅱ期NSCLC患者外周血中CEA mRNA及CK19 mRNA阳性表达率分别为27.78%(5/18)、83.33%(10/12)及44.44%(8/18)、75%(9/12)。外周血CEA mRNA及CK19 mRNA的阳性表达与临床分期及淋巴结转移密切相关,而与病理类型及分化程度无关。结论 NSCLC患者早期(Ⅰ、Ⅱ期)外周血中也有微转移的存在,说明微转移可能是NSCLC预后不良的原因之一。CEAmRNA与CK19 mRNA均可作为检测NSCLC患者外周血微转移较为合适的分子标志物,联合检测有助于提高检测的准确度。     

非小细胞肺癌外周血中CK19mRNA与LUNXmRNA检测的临床意义

目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血细胞角蛋白19(CK19)及肺特异性蛋白X(LUNX)的表达,探讨其对检测NSCLC微转移的可行性。方法:应用RT-PCR技术检测30例NSCLC患者及15例健康人外周血CK19mRNA及LUNXmRNA的表达。结果:NSCLC患者外周血中CK19mRNA及LUNXmRNA的阳性表达率分别为30%及13.3%,而对照组外周血中均无表达,外周血CK19mRNA及LUNXmRNA的表达与临床分期密切相关,与病理类型无关。结论:CK19及LUNX均可作为检测NSCLC患者外周血微转移较为敏感的分子标志物,联合检测有助于提高检测结果的阳性率。     

非小细胞肺癌患者外周血CK19和LUNX mRNA的检测及意义

目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者CK19 mRNA和LUNX mRNA的表达情况,探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性。方法:选择初治的NSCLC患者62例,以肺部良性疾病10例和健康对照10例作为对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),检测患者外周血的CK19 mRNA和LUNX mRNA的表达。结果:62例NSCLC患者中外周血CK19 mRNA表达阳性率33.9%(21/62),明显高于非肿瘤组的5%(1/20)(P=0.012);NSCLC组外周血LUNX mRNA表达阳性率29.0%(18/62),明显高于非肿瘤组的0%(0/20)(P=0.007);外周血CK19mRNA和LUNX mRNA表达阳性率与病理分期、病理类型、肿瘤分化程度未见明显相关;外周血CK19 mRNA和LUNX mRNA表达未见明显相关(P=0.376)。结论:CK19 mRNA和LUNX mRNA可作为检测非小细胞肺癌患者微转移特异、敏感的分子标志物,可能有助于早期诊断肺癌转移,从而指导临床分期和治疗。     

外周血特异性肿瘤标志物mRNA表达诊断非小细胞肺癌微转移的研究

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血肿瘤标记物mRNA表达及联合检测的临床意义。 方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测47例NSCLC患者,26例肺良性疾病患者及20例健康对照者外周血细胞角蛋白19(CK19)、癌胚抗原（CEA）、粘蛋白-1(MUC1)、肺特异性 X基因(LUNX)mRNA的表达,分析它们作为NSCLC患者微转移标志物的可行性及与病理类型、分化程度、临床分期的关系。 结果 47例NSCLC患者外周血中CK19、CEA、MUC1、LUNX mRNA的阳性率分别为38.3％、44.7％、61.7％、57.4％;在良性肺疾病患者阳性率分别为3.8％、11.5％、0.0％、0.0％;健康组的外周血中没有四者的表达,差异有显著性; NSCLC组外周血CK19、MUC1、LUNX mRNA阳性表达率在鳞癌和腺癌患者比较差异无显著性,而腺癌患者与鳞癌患者中的CEAmRNA阳性率相比差异有显著性;MUC1、LUNX mRNA阳性率随分化程度升高而降低,差异有显著性,而CK19、CEAmRNA与肿瘤分化程度没有相关性;随着临床分期的加重,CK19、CEA、MUC1、LUNX mRNA阳性率均增高,而且,MUC1、LUNX mRNA阳性率差异有显著性。 结论 ①CK19、CEA、MUC1、LUNXmRNA可以作为检测NSCLC患者外周血微转移的标志物;②CEAmRNA在肺腺癌中的表达明显高于肺鳞癌,说明其对判断病理类型有一定意义;③MUC1、LUNXmRNA表达阳性率随TNM分期的增高而增加,随细胞分化程度的升高而降低。     

外周血特异性肿瘤标志物mRNA表达在非小细胞肺癌微转移研究中的意义

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血肿瘤标记物mRNA表达及联合检测的临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测47例NSCLC患者,26例肺良性疾病患者及13例健康对照者外周血细胞角蛋白19(CK19)、癌胚抗原(CEA)、黏蛋白-1(MUC1)、肺特异性 X基因(LUNX)mRNA的表达,分析它们作为NSCLC患者微转移标志物与病理类型、分化程度、临床分期的关系.结果 47例NSCLC患者外周血中CK19、CEA、MUC1、LUNX mRNA的阳性率分别为38.3%、44.7%、61.7%、57.4%; 在良性肺疾病患者阳性率分别为3.8%、11.5%、0.0%、0.0%; 健康组的外周血中没有四者的表达,差异有显著性; NSCLC组外周血CK19、MUC1、LUNX mRNA阳性表达率在鳞癌和腺癌患者比较差异无显著性,而腺癌患者与鳞癌患者中的CEA mRNA阳性率相比差异有显著性; MUC1、LUNX mRNA阳性率随分化程度升高而降低,差异有显著性,而CK19、CEA mRNA与肿瘤分化程度没有相关性; 随着临床分期的加重,CK19、CEA、MUC1、LUNX mRNA阳性率均增高,而且,MUC1、LUNX mRNA阳性率差异有显著性. 结论 (1)CEA mRNA在肺腺癌中的表达明显高于肺鳞癌,说明其对判断病理类型有一定意义; (2)MUC1、LUNX mRNA表达阳性率随TNM分期的增高而增加,随细胞分化程度的升高而降低.     

肺癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA表达的检测及临床意义

目的探讨CK19 mRNA、CEA mRNA能否作为判断肺癌血源性微转移的参考指标.方法取67例肺癌患者及37例健康体检者外周血,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测上述两个指标的表达.结果肺癌组外周血中CK19 mRNA阳性率(57.6%)及CEA mRNA阳性率(52.2%)均显著高于健康对照组的2.7%和5.4%(均P＜0.01),两个指标联合检测能将对肺癌微转移诊断的灵敏度提高至76.1%;CK19 mRNA的表达与临床分期相关(P＜0.01),CEA mRNA的表达与组织类型相关(P＜0.05).结论 CK19 mRNA和CEAmRNA可作为判断肺癌血源性微转移的参考指标,两者联检可提高诊断价值.     

外周血表皮生长因子受体和LUNX mRNA表达对肺癌微转移诊断的价值

目的:分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者和肺良性病变患者外周血表皮生长因子受体(EGFR)mRNA和LUNX mRNA表达情况,探讨其在肺癌微转移诊断中的价值.方法:采用荧光定量PCR方法检测42例肺癌患者和18例肺良性疾病患者外周血EGFR mRNA和LUNX mRNA表达.结果:42例NSCLC患者EGFR mRNA表达的阳性率为45.2%(19/42),LUNX mRNA表达的阳性率为40.5%(17/42),两者联合检测阳性率可提高到64.3%.良性肺部疾病患者均为阴性.结论:EGFR mRNA和LUNX mRNA可作为检测NSCLC患者外周血微转移的分子标志物,联合检测可提高外周血癌细胞的检出率.     

应用RT-PCR诊断非小细胞肺癌淋巴结微转移

目的:应用RT-PCR法检测CK19和MAGE-1 、-2 、-3 、-4 基因mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结中的表达情况,比较两者在诊断淋巴结微转移中的意义.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 方法检测53例患者的111组纵隔淋巴结CK19和MAGE-1 、-2 、-3 、-4 mRNA 的表达.结果:应用RT-PCR技术检测MAGE和CK19基因mRNA表达在病理阳性淋巴结的阳性率分别为87.1% (27/31)和 83.9%(26/31),差异无统计学意义(P＞0.05);非肺癌患者淋巴结4种MAGE基因表达均为0,CK19基因表达率为30.8%(4/13),差异有统计学意义(P＜0.05);应用常规病理检查和应用RT-PCR技术检测MAGE和CK19基因在淋巴结微转移阳性率分别为27.9 % (31/111)和48.6% (54/111),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:在应用RT-PCR法检测非小细胞肺癌淋巴结微转移的分子标志物中,MAGE基因较CK19基因更为准确.     

巢式PCR检测肺癌患者外周血CK19 mRNA和LUNX mRNA的临床意义

目的 研究肺癌患者外周血中CK19 mRNA,LUNX mRNA的表达及其联合检测的临床意义.方法 采用巢式PCR技术检测50例肺癌患者、20例肺良性疾病患者和20例健康人外周血CK19 mRNA、LUNX mRNA的表达,结合肺癌患者常规病理检查、肿瘤类型、临床分期对临床检测结果的敏感性、特异性进行统计学分析.结果 50例肺癌患者外周血标本中CK19 mRNA阳性25例(50%),LUNX mRNA阳性29例(58%);20例肺良性疾病中CK19 mRNA阳性2例(10%),LUNX mRNA均为阴性;20例健康人外周血CK19 mRNA、LUNX mRNA的表达均为阴性.在肺腺癌、肺鳞癌中,CK19 mRNA的表达阳性率分别为42.8%,55.2%,LUNX mRNA的表达阳性率分别为66.7%,51.7%.Ⅲ,Ⅳ期肺癌CK19 mRNA和LUNX mRNA的表达阳性率高于Ⅰ,Ⅱ期.结论 CK19 mRNA,LUNX mRNA可作为检测肺癌患者外周血微转移的标记物,联合检测有助于提高准确性.     

宫内缺血缺氧后胎鼠脑内c-jun与Fas mRNA的表达及其相互关系

目的:研究c-jun与Fas mRNA在胎鼠缺血缺氧后脑内的表达关系,探讨围生期缺血缺氧脑损伤发病机制.方法:结扎Wistar孕鼠子宫血管,建立胎鼠缺血缺氧脑损伤模型.用原位杂交检测剖宫产娩出后存活不同时间大鼠大脑c-jun mRNA及Fas mRNA的表达.结果:缺血后15 min,大脑皮层和海马即出现c-jun mRNA的表达,缺血后1～2 h和24 h, c-jun mRNA出现两次高表达;而缺血后1 h,Fas mRNA在大脑皮层和海马出现表达,4 h和48 h出现两次表达高峰.结论:缺血缺氧引起了c-jun 及Fas mRNA的表达增强,c-jun的表达增加可能是Fas高表达的信号通路之一.     

VEGF—C mRNA在口腔鳞癌中的表达

目的：探讨血管内生长因子－Ｃ（ＶＥＧＦ－Ｃ）ｍＲＮＡ在正常口腔粘膜、白斑及鳞癌等组织中的表达。方法：ＴＲ－ＰＣＲ法检测ＶＥＧＦ－Ｃ ｍＲＮＡ的表达。结果：鳞癌组织ＶＥＧＦ－Ｃ ｍＲＮＡ表达明显高于正常口腔粘膜及白斑（Ｐ〈０．０１）;鳞癌表达与病理分级（Ｐ〈０．０１）、淋巴结转移（Ｐ〈０．０１）密切相关,与临床分期无关（Ｐ〉０．０５）。结论：ＶＥＧＦ－Ｃ对鳞癌生长及转移有促进作用,有望作为检测淋巴管     

凋亡抑制基因Survivin在上皮性卵巢癌中的表达及其意义

目的：探讨凋亡抑制基因Survivin在上皮性卵巢癌组织中的表达，及其与卵巢癌的临床病理特征的关系。方法；应用RT—PCR的方法，检测Survivin在46例上皮性卵巢癌和20例正常卵巢组织中的表达。结果；46例上皮性卵巢癌组织中，Survivin阳性表达40例，表达率87％；20例正常卵巢组织中，survivin阳性表达4例，表达率20％，两者比较有极显著性差异(P＜0．001)。46例上皮性卵巢癌中，浆液性囊腺癌30例，Survivin阳性表达率90％(27／30)；粘液性囊腺癌16例,Survivin阳性表达率81．3％(13／16)；两者比较，差异无显著性意义(P＞0．05)。临床分期I—Ⅱ期Survivin阳性表达率71．4％(10／14)；Ⅲ—Ⅳ期Survivin性表达率93．8％(30／32)，两者比较，有显著性差异(P＜0．05)。病理分级I—Ⅱ级Survivin性表达率70．6％(12／17)，Ⅲ级Survivin性表达率96．6％(28／29)，二者比较，有显著性差异(P＜0．05)。结论:Survivin基因在卵巢癌中的异常表达而引起的细胞凋亡抑制，在卵巢癌的发生发展中起一定作用。     

基质金属蛋白酶组织抑制物-1 mRNA在胃癌组织中的表达

①目的　检测基质金属蛋白酶组织抑制物 1(TIMP 1)基因在胃癌及其癌旁组织中的表达 ,以探讨TIMP 1在胃癌发生发展中的作用。②方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测胃癌及相应癌旁组织中TIMP 1基因的表达。③结果　 30例胃癌组织中有 16例表达TIMP 1基因 ,阳性率为 5 3.3% ,30例癌旁组织中有14例表达TIMP 1基因 ,阳性率为 4 6 .7% ,TIMP 1基因在胃癌和癌旁组织中的表达无显著性差异 (χ2 =0 .2 6 7,P >0 .0 5 )。④结论　TIMP 1是一种肿瘤生长、侵袭、转移双向调节因子。     

血小板激活因子受体mRNA在小鼠附睾精子内的表达

①目的检测血小板激活因子受体(PAFR)mRNA在小鼠附睾精子内的表达,探讨PAFR对受精过程的影响.②方法分离提取小鼠附睾精子mRNA,经逆转录(RT)合成PAFR-cDNA.利用聚合酶链反应(PCR)扩增PAFR-cDNA,DNA序列分析验证扩增产物的准确性.③结果小鼠附睾精子表达PAFR-mRNA;DNA序列分析验证PCR产物为小鼠PAFR-cDNA.④结论小鼠附睾精子有PAFR-mRNA的表达.     

雌性小鼠颌下腺 NGF mRNA 的原位杂交检测

应用地高辛标记的人β神经生长因子ＤＮＡ探针原位杂交组化技术，研究雌性ＩＣＲ小鼠颌下腺的神经生长因子（ＮＧＦ）基因表达。颌下腺经４％多聚甲醛固定，常规冰冻切片，并以同种雄性小鼠颌下腺作阳性对照。实验结果显示，雌性小鼠颌下腺的ＮＧＦｍＲＮＡ分布与雄性小鼠相同，主要存在于纹状管和颗粒曲管上皮细胞中，但杂交信号明显弱于雄性小鼠；在原位杂交反应阳性的纹状管或颗粒曲管上皮细胞之间常可见到几个阴性细胞，阳性管道的密度亦显著低于雄性小鼠。研究表明，小鼠颌下腺ＮＧＦ基因的表达受到雄激素的调节，这种调节作用可能发生于转录水平。ＮＧＦ基因转录少，纹状管或颗粒曲管部分上皮细胞ＮＧＦ基因不开放以及颗粒曲管不发达是雌性小鼠颌下腺ＮＧＦ含量明显低于雄性小鼠的主要原因。     

腹腔脂肪型丝氨酸蛋白酶抑制剂与脂联素mRNA在肥胖及糖尿病大鼠肝脏中的表达

目的了解腹腔脂肪型丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)与脂联素(Adiponectin,APN)mRNA在肥胖及糖尿病大鼠肝脏中的表达及意义。方法雄性Wistar大鼠100只,适应性饲养1周后,随机分为三组:基础对照组15只喂以基础饲料;肥胖组20只喂以高脂饲料;糖尿病组47只喂以高脂饲料,4周后一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型。三组大鼠共饲养28周,采用半定量RT-PCR法检测大鼠肝脏组织中Vaspin及APN mRNA的表达。结果肥胖与糖尿病组大鼠Vaspin mRNA表达水平高于对照组(P<0.05),APN mRNA表达水平低于对照组(P<0.05),肥胖组Vaspin和APN mRNA表达与糖尿病组相比无统计学意义(P>0.05);Vaspin与APN mRNA表达呈中度负相关(P<0.05)。结论 Vaspin与APN mRNA表达的改变可能是糖脂代谢紊乱的一种适应性改变。     

肝细胞癌及癌旁组织中白蛋白mRNA和甲胎蛋白mRNA的表达

目的：检测肝细胞癌及癌旁组织白蛋白ｍＲＮＡ和甲胎蛋白ｍＲＮＡ表达，为外周血肝细胞癌转移指标提供依据。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测１８例肝细胞癌和１３例癌旁肝组织中白蛋白ｍＲＮＡ。结果：①白蛋白ｍＲＮＡ在１８例癌及１３例癌旁组织中均有高表达；②白蛋白ｍＲＮＡ检出率明显高于第一轮ＰＣＲ甲胎蛋白ｍＲＮＡ（Ｐ〈０．００１）；③白蛋白ｍＲＮＡ和甲胎蛋白ｍＲＮＡ可同时在癌组织中表达。结论：选择检测白蛋白ｍＲＮ     

阿霉素肾病大鼠肾脏nephrin、podocin mRNA表达

目的检测阿霉素肾病大鼠肾组织nephrin、podocin mRNA表达，探讨nephrin、podocin在阿霉素肾病蛋白尿发生中的可能作用，为进一步阐明蛋白尿的产生机制提供一定的实验基础。方法建立大鼠阿霉素肾病模型，采用逆转录聚合酶链反应检测阿霉素肾病大鼠肾组织内nephrin、podocin mRNA水平。结果与正常对照组相比，阿霉素组大鼠注药后14d（蛋白尿高峰前）及42d（蛋白尿高峰时）nephrin mRNA下调70％及78％（P〈0．001），podocin mRNA水平注药后14d上调2．7倍，注药后42d仍在上调水平（较对照组升高2倍）。结论阿霉素肾病蛋白尿的发生和进展与nephrin、podocin转录异常密切相关。     

体外传代培养对大鼠血管平滑肌细胞OPN mRNA表达的影响

目的探讨体外传代培养对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）表型标志分子骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）mRNA表达的影响。方法选择未经培养传代的VSMCs和体外传代一至五代的VSMCs作对比研究。用RT-PCR法检测VSMCs中OPN mRNA相对表达水平。结果体外培养至第一代时,VSMCs的OPN mRNA表达量较原代VSMCs显著增高（P〈0.01）,且随传代代数的增加有逐渐增高趋势。结论 OPN在原代VSMCs中表达甚微,体外培养可促使VSMCs多量表达OPN,OPN为VSMCs合成表型标志分子,即体外培养可促使VSMCs从收缩表型转为合成表型。