cNO-pN2非小细胞肺癌行全胸腔镜肺叶切除手术初步体会

目的 探讨术前临床分期N0术后病理分期N2的非小细胞肺癌患者行全胸腔镜肺叶切除手术的可行性。方法 2006年9月至2010年1月施行全胸腔镜肺叶切除治疗非小细胞肺癌216例中术前临床分期N0患者206例,男103例,女103例;年龄29 ～85岁,平均(62.3±11.1)岁。按术后病理纵隔淋巴结是否转移分为Pn0组(168例,无纵隔淋巴结转移)和Pn2组(38例,存在纵隔淋巴结转移)。回顾性分析两组病例年龄、性别、肿瘤大小、位置、病理类型、分化程度、中转开胸、手术时间、术中出血、淋巴结清扫情况、引流时间、住院时间及并发症等围手术期数据。结果 206例中肺叶切除203例,复合肺叶切除2例,全肺切除1例,手术过程顺利。无严重围手术期并发症,围手术期死亡1例(肺部感染至呼吸功能衰竭)。两组年龄、性别分布差异无统计学意义。Pn0组肿瘤最大径明显小于Pn2组[(2.6±1.6)cm对(3.7±1.9) cm,P=0.001]。Pn0组肿瘤位于下叶者明显少于Pn2组(31.0％对50.0％,P =0.026)。两组腺癌比例无统计学意义(82.7％对73.7％,P=0.181),但Pn0组低分化癌比例明显低于Pn2组(19.0％对42.1％,P=0.002)。两组中转开胸率(7.1％对7.9％,P=1.000)、手术时间[(196.1±53.7) rmin对(208.6±56.8)min,P=0.202]、术中出血量[(253.2±247.9) ml对(279.0±183.3) ml,P=0.475]、术后引流时间[(7.7±3.2)天对(9.7±6.3)天,P=0.066]、住院时间[(10.6±4.6)天对(13.0±7.6)天,P=0.063]、并发症发生率(12.5％对21.1％,P=0.171)组间和纵隔淋巴结清扫站数[(3.1±1.2)对(3.3±1.1),P=0.237],差异无统计学意义。Pn0组纵隔淋巴结清扫枚数少于Pn2组[(9.9±6.8)对(12.7±8.4)枚,P=0.038]。结论 术前N0分期术后病理N2分期的非小细胞肺癌患者行全胸腔镜肺叶切除手术是安全可行的。     

dsRNA介导的PTEN基因表达上调及其与启动子区甲基化的关系

目的 观察以启动子区非CpG岛序列为靶点的dsRNA促进PTEN基因的表达,并探讨RNAa现象对PTEN基因启动子区DNA甲基化的影响.方法 将与PTEN基因启动子区非CpG岛DNA序列互补的双链RNA分子(dsPTEN) 转染入A549和H292肺癌细胞中,采用real-time聚合酶链反应(PCR)检测PTEN的表达,筛选能够促进PTEN基因表达的有效dsRNA序列.通过甲基化特异性PCR(MSP)产物测序,检测dsRNA转染前后启动子区甲基化程度的变化.结果 经多条dsRNA分别转染肺癌细胞,证实针对PTEN基因-57到-38的序列(dsPTEN2-2)转染H292肺癌细胞后出现PTEN基因表达的明显上调,上调最高达5.1倍(与对照dsRNA比较,P<0.05),证实了RNAa现象的存在;使用5-Aza处理后的A549和H292细胞与空白组比较CpG点甲基化明显减少(5±3比10±4、6±3比9±3,P均<0.05),而转染PTEN2-2 dsRNA后的两个细胞株CpG点甲基化情况与未转染组比较无明显变化(9±2比10±4、9±3比9±3,P均>0.05).结论 dsRNA可以促进PTEN基因表达的上调,RNAa现象并不改变PTEN基因启动子区甲基化程度.

Abstract：

Objective To evaluate the phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten (PTEN) gene activation induced by double-standed RNA (dsRNA) in lung cancer cell line and its correlation with CpG island methylation in the promoter region. Methods Specific dsRNA complementary to the non-CpG island sequence in the promoter of PTEN gene was designed and transfected into H292 and A549 cell lines, and the expression of PTEN mRNA was determined by real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR). The methylation status of the CpG island in the promoter region was tested by DNA sequencing on the bisulfate modified DNA. Results By testing several dsRNA sequences targeting promoter region of PTEN, a dsRNA named PTEN2-2 (target on -57 to -38 of the PTEN) was identified, which could upregulate the PTEN expression by 5.1 times at most (P<0.05, controlled with the dsControl). Epigenetic analysis of PTEN promoter region confirmed DNA hypermethylation. PTEN2-2 dsRNA transfection turned on the expression of PTEN without affecting the methylation status of promoter DNA (9±2 vs 10±4, 9±3 vs 9±3, both P>0.05), as the DNA methyltransferase inhibitor did (5±3 vs 10±4, 6±3 vs 9±3, both P<0.05). Conclusion The expression of PTEN mRNA could be enhanced by inducing the dsRNA into the cells, but no evidence was found that dsRNA could affect the methylation status of the CpG island in the promoter region of this gene.     

肺癌相关基因SLC35F2 RNA干扰重组慢病毒载体的构建和鉴定

目的 针对肺癌相关基因SLC35F2构建RNA干扰(RNAi)重组慢病毒质粒并进行慢病毒包装,建立SLC35F2表达稳定抑制的H1299肺癌细胞株,并探讨SLC35F2基因的功能.方法 应用pGCSIL-PUR慢病毒载体构建针对SLC35F2的ShRNA载体,转染包装293T细胞,收集病毒上清转染肺癌细胞株H1299,经嘌呤霉素(puromycin)筛选并扩大培养得到稳定克隆;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测癌细胞内SLC35F2的表达;CCK-8比色法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡.结果 成功构建SLC35F2-ShRNA慢病毒载体(SLC-siRNA)及SLC35F2表达稳定抑制的肺癌细胞株,经过检测证实SLC-siRNA慢病毒载体对SLC35F2的抑制效率达81.8%;CCK-8检测显示SLC-siRNA稳定转染的H1299细胞株生长抑制率达16.3%,稳定转染株凋亡细胞百分比较阴性对照组明显升高(14.88%比3.16%,P＜0.05).结论 慢病毒载体介导的靶向SLC35F2的RNAi可有效抑制SLC35F2表达,降低肺癌细胞的增殖能力,增加其凋亡比例.

Abstract：

Objective To investigate the possibility of SLC35F2 inhibition by lentiviral vector-mediated RNA interference (RNAi) and the influence on cell proliferation and apoptosis in lung cancer cell line,and to set up a lung cancer cell line in which SLC35F2 is stably suppressed.Methods The lentiviral vector of siRNA targeted against SLC35F2 (SLC-siRNA) was constructed and transfected into the packaging cells 293T,and the viral supernatant was collected to transfect H1299 cells.After selection by puromycin and culture expansion,the stable cell clones were attained.Quantitative real-time fluorescent polymerase chain reaction (PCR) and Western blotting were used to detect the expression of SLC35F2.The effect of SLC35F2 silencing by RNAi on cell proliferation was quantified by CCK-8 assay.Annexin V-FITC/PI staining was employed to examine the apoptosis.Results Lentiviral vector SLC35F2-shRNA was constructed successfully.As compared with control group,the SLC35F2 expression was decreased to 81.8% in RNA and protein levels.CCK-8 revealed that the inhibition rate of H1299 cells transfected with SLC35F2 was 16.3%,and the apoptosis rate was significantly increased as compared with negative control group ( 14.88% vs 3.16% ,P ＜0.05 ).Conclusion Lentiviral vector-mediated RNA interference targeting against SLC35F2 can effectively inhibit SLC35F2 expression and cell proliferation.The lung cell line in which SLC35F2 gene was stably suppressed was successfully established.     

全胸腔镜下肺叶切除手术的扶镜技巧

目的探讨全胸腔镜下肺叶切除手术中扶镜手的作用以及扶镜技巧。方法 2006年9月～2010年4月,我们完成全胸腔镜下肺叶切除术329例。通过胸部3个小切口非直视下完成肺叶解剖性切除,恶性肿瘤行淋巴结清扫。施行右肺上叶切除84例,右肺中叶切除32例,右肺下叶切除65例,左肺上叶切除73例,左肺下叶切除66例,联合肺叶或全肺切除9例。结果全部患者手术均顺利,因淋巴结干扰、出血或肿瘤体积大等原因而中转开胸27例。手术时间（194.5±60.1）min（75～490 min）,术中出血量中位数200 ml（20～1800 ml）。术后胸腔闭式引流时间（7.4±3.4）d（1～22 d）,术后住院时间（10.2±4.5）d（1～36 d）。无严重并发症发生,无围手术期死亡患者。结论全胸腔镜下肺叶切除手术中扶镜手需要熟知手术步骤,了解术者操作习惯,实时调节镜头焦距和角度,以配合术者进行手术。     

电视胸腔镜手术治疗食管平滑肌瘤

目的探讨电视胸腔镜手术治疗食管平滑肌瘤的安全性和可行性。方法1996年9月～2009年2月共施行电视胸腔镜食管平滑肌瘤摘除术49例。手术通过3～4个胸壁小切口完成,镜下剥离摘除食管平滑肌瘤操作与开胸手术基本相同。结果42例在胸腔镜下顺利完成手术,7例中转开胸（2例因胸膜腔致密粘连,3例因肿瘤〈1.0cm,胸腔镜下无法定位,2例因肿瘤较大并与食管黏膜粘连紧密）。手术时间平均90min（50～210min）,肿瘤长径平均3.7cm（0.5～10.0cm）,无严重并发症及手术死亡。43例随访1～73个月,平均27.1月,无复发。结论电视胸腔镜食管平滑肌瘤摘除术安全可靠,可替代大部分常规开胸手术。     

全胸腔镜肺叶切除治疗支气管扩张症

目的探讨全胸腔镜下肺叶切除治疗支气管扩张症的安全性、可行性和有效性。方法回顾性分析我中心2007年4月～2009年11月完成的24例全胸腔镜肺叶切除手术治疗支气管扩张症的临床资料。全胸腔镜下解剖性肺叶切除,不牵开肋骨,以切割缝合器分别处理肺血管和支气管。如遇严重粘连或出血等则中转开胸手术。记录手术时间、出血量、术后带管时间以及并发症等。结果全组中2例(8.3%)因为胸腔内粘连重,叶间裂分化差或肺门处严重粘连并有大量迂曲扩张的血管,镜下处理困难而中转开胸行VATS辅助小切口手术。余22例在全胸腔镜下完成,肺切除范围包括右肺上叶1例,右肺中叶1例,右肺下叶3例,左肺上叶2例,左肺下叶13例,左肺下叶+左肺上叶舌段1例,左肺下叶+右肺中叶1例。手术时间(173.6±57.1)min(80～280min),出血量(173.9±65.9)ml(50～300ml),术后带管时间(6.1±3.8)d(2～19d),术后住院时间(8.6±3.9)d(4～22d)。术后病理均符合支气管扩张症改变。无围手术期死亡。并发症4例,均为肺持续漏气7d,引流7～19d后自愈拔除胸腔引流管。全组随访1～31个月,平均13.7月,其中13例12个月。15例(62.5%)术后咳痰或咯血症状完全消失,7例(29.2%)痰量明显减少,但仍间断有咳痰或咯血等症状。2例(8.3%)咯血量或痰量较前无明显变化。结论全胸腔镜肺叶切除术是治疗支气管扩张症的一种安全有效的方法 。     

孤立性肺结节良恶性判断数学预测模型的临床验证及应用

目的 在前期初步建立的国人孤立性肺结节(SPN)良恶性判断数学模型的基础上,总结后续连续145例SPN患者临床资料,验证该模型的准确性,并与国外模型进行比较.方法 2009年10月至2011年8月,连续手术获得病理明确诊断的SPN 145例,其中男72例,女73例;平均年龄(59.4±12.2)岁.收集临床资料包括患者年龄、性别、病程、症状、吸烟史、吸烟量、戒烟时间、既往肿瘤史、肿瘤家族史、肿瘤部位、肿瘤最大径、肿瘤有无钙化、毛刺、分叶、胸膜牵拉征、边界清楚、血管集束征、空洞共17项临床资料,将所需资料代入相应模型中,分别验证国人模型与国外模型对SPN良、恶性判断的敏感性和特异性等,通过Hosmer-Lemeshow (H-L)检验判断各数学预测模型的校准度,并绘制ROC曲线,通过曲线下面积( AUC)检验其预测的鉴别度,判断临床应用价值.结果 145例SPN中良性47例(32.4％),恶性98例(67.6％).应用国人数学模型预测良、恶性的灵敏度为94.9％,特异度为66.0％,阳性预测值为85.3％,阴性预测值为86.1％.H-L检验结果显示,3个临床模型的拟合均较好(P＞0.05).国人数学模型的AUC为0.874±0.035,Mayo模型为0.784±0.041 (P =0.004),VA模型为0.754 ±0.041 (P =0.002),国人数学模型与国外模型比较差异有统计学意义,以前者预测准确率最高.结论 前期建立的国人SPN良、恶性判断数学预测模型有较高临床价值,效果优于国外模型.     

支气管内超声引导针吸活检术在肺内病变诊断中的应用

目的 探讨支气管内超声引导针吸活检术(EBUS-TBNA)在明确邻近大气道肺内占位诊断中的应用价值.方法 回顾性分析2009年9月至2011年9月,33例常规气管镜等检查未能明确诊断的影像学可疑肺癌患者,为明确肺内邻近大气道病变诊断接受EBUS-TBNA.对于经EBUS-TBNA检查后未能明确恶性诊断者,进一步接受胸腔镜或开胸手术确证.结果 33例经EBUS-TBNA检查后明确肺部恶性病变29例,其中非小细胞肺癌25例,小细胞肺癌4例;4例患者穿刺细胞及组织病理学检查无明确恶性证据,其中3例经电视胸腔镜或开胸手术证实为鳞癌,1例经胸腔镜手术证实为肺内炎性病变.本组EBUS-TBNA在大气道旁肺实质内占位中诊断的敏感性、特异性和准确性分别为90.2％、100.0％和90.9％,阳性预测价值和阴性预测价值分别为100％和25％.所有患者检查耐受良好,无任何相关并发症发生.结论 对于邻近大气道临床可疑肺癌的肺内病变,EBUS-TBNA具有较高的诊断价值.     

全胸腔镜下肺叶切除治疗早期非小细胞肺癌

目的 探讨全胸腔镜下肺叶切除在早期非小细胞肺癌治疗中的安全性、有效性及适应证.方法 2006年11月至2007年11月共施行全胸腔镜下肺叶切除治疗早期非小细胞肺癌44例,其中男2,4例,女20例;平均年龄61.5岁.手术全部通过3个胸腔镜切口完成,肺叶解剖性切除和系统性淋巴结清扫的操作顺序与常规开胸手术基本相同.结果 全部手术顺利,未发生严重并发症及围手术期死亡,中转开胸1例.平均手术202.6 min,平均出血216.8 ml,无输血病例.术后平均带胸管7.4 d.术后病理:腺癌30例,鳞癌10例,肺泡细胞癌3例,肉瘤样癌1例.随访平均7.7个月,1例Ⅲa期腺癌病人术后3个月发生转移,其余无复发.结论 全胸腔镜下肺叶切除在有效性、彻底性方面可以达到开胸手术相同的效果,对于早期非小细胞肺癌是一种安全、有效的手术方式.     

应用自体肺重植技术治疗上叶中心型肺癌

目的 探讨应用自体肺重植技术治疗上叶中心型肺癌的可行性。方法 ２例作双袖状右上叶中联合肺叶切除，因主支气管或肺动脉切除过长，吻龛和力过大，遂切断我脉，肺短时间离体后作下叶重植，将下肺静脉移植在上肺静脉残端。２例左上叶肺癌部分侵及斜裂，无法进行双袖状肺叶切除术，作全肺切除后，在器械台上行肿瘤切针修剪后的下叶肺组织重植。结果 随访至２０００年２月，２例病人已分别无瘤存活３３和２０个月，生活质量良好。１