siRNA表达载体对大鼠心肌H9c2细胞牛磺酸合成限速酶-CSD基因表达的抑制作用

目的研究siRNA对大鼠心肌半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)的抑制作用。方法根据已克隆的大鼠心肌CSD基因序列(EU786150)设计并构建了4个siRNAs及1个阴性对照siRNA表达质粒,利用脂质体LipofectamineTM2000将构建好的重组质粒siRNA1#、siRNA2#、siRNA3#、siRNA4#及阴性对照质粒分别转染H9c2细胞,应用荧光显微镜观察转染效率、四唑盐(MTT)法检测H9c2细胞增殖情况、实时荧光定量PCR和Western-blot检测CSD mRNA和蛋白表达。结果荧光显微镜观察细胞转染效率达70%左右;与阴性对照组、未转染组比较,siRNA1#重组质粒显著抑制了H9c2细胞中CSD mRNA和蛋白的表达(P<0.05),而siRNA4#质粒对CSD表达无明显抑制效应(P>0.05);MTT检测结果表明转染重组质粒siRNA1#、siRNA2#进入H9c2细胞48 h、72 h后细胞增殖明显受抑制,与阴性对照组、未转染组相比差异均达到显著水平(P<0.05)。结论 siRNA1#重组质粒能有效抑制CSD基因的表达,且显著抑制H9c2细胞增殖,为研究CSD基因及揭示牛磺酸在心肌细胞代谢中的作用奠定基础。[营养学报,2012,34(4):317-321]     

miR-137靶向下调SETD7表达对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激的影响研究

目的探讨miR-137对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的作用及其机制。方法心肌细胞H9C2分为空白组、缺氧复氧组、缺氧复氧组+miR-con、缺氧复氧+miR-137组、缺氧复氧+miR-137+pcDNA组、缺氧复氧+miR-137+pcDNA-SETD7组。qPCR检测H9C2细胞中miR-137和SETD7 mRNA表达,Western blot检测SETD7、Cyclin D1、Cleaved Caspase-3蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,比色法检测LDH、MDA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,TargetScan预测结合双荧光素酶报告实验分析miR-137和SETD7的靶向关系。结果缺氧复氧明显降低H9C2细胞中miR-137、Cyclin D1表达量和细胞存活率(P<0.05),显著提高SETD7 mRNA及蛋白水平、LDH活性、MDA含量、Cleaved Caspase-3蛋白水平和细胞凋亡率(P<0.05)。上调miR-137表达促进缺氧复氧处理H9C2细胞内miR-137、Cyclin D1表达量和细胞存活率(P<0.05),明显降低SETD7蛋白、LDH、MDA、Cleaved Caspase-3水平和细胞凋亡率(P<0.05)。miR-137靶向调控SETD7表达。过表达SETD7部分逆转miR-137保护缺氧复氧处理H9C2细胞的作用。结论 miR-137通过靶向下调SETD7表达来促进缺氧复氧处理的心肌细胞增殖并抑制细胞凋亡,保护缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤。     

柚皮苷对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞损伤保护作用

目的探讨柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,用H_2O_2诱导建立细胞凋亡模型。实验设对照组、模型组、柚皮苷低、中、高剂量组(10、20、40μmol/L),噻唑蓝法检测细胞活力并用显微镜观察各组细胞形态;原位末端标记法检测H9c2心肌细胞凋亡情况;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax、caspase-3 m RNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率[(17.2±2.1)%]明显升高(P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组细胞凋亡率[分别为(10.7±1.9)%、(5.7±1.2)%、(6.4±1.5)%]均下降(均P<0.05)。与对照组比较,模型组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平(0.76±0.16)明显下调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(5.42±0.52)、(1.09±0.11)]均上调(均P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平[分别为(1.37±0.11)、(1.65±0.09)、(1.65±0.15)]均上调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(2.78±0.55)、(3.43±0.15)、(2.69±0.26)和(0.59±0.08)、(0.77±0.06)、(0.82±0.05)]均下调(均P<0.05)。结论柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤具有一定保护作用,其机制可能与其对凋亡信号途径的抑制作用有关。     

miR-423-5p参与AMI大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的探讨miR-423-5p对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法采用冠状动脉左前降支结扎法建立AMI大鼠模型,将其随机分为模型组、阴性组和干扰组,另设只开胸穿针不做冠状动脉结扎的假手术组,每组7只;采用Real-time PCR检测各组心肌组织中miR-423-5p的表达水平,心脏彩超检测各组大鼠的心脏功能,TCC法检测各组大鼠的心肌梗死面积,TUNEL法检测各组心肌细胞的凋亡指数,Western blot检测Cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。结果与假手术组相比,模型组和阴性组中miR-423-5p表达水平、左室收缩末期内径(LVDS)、左室舒张末期内径(LVDD)和Bcl-2蛋白表达水平均降低,而左室长轴缩短分数(FS)、左室射血分数(LVEF)、心肌细胞凋亡指数、心肌梗死面积和Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达水平均明显升高(P0.05);与模型组和阴性组相比,干扰组中上述指标变化明显逆转(P0.05)。结论 miR-423-5p可通过下调Cleaved caspase-3、Bax和上调Bcl-2表达抑制AMI大鼠心肌细胞凋亡,改善心脏功能,从而减轻AMI。     

miR-181b靶向鼠双微体-2对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨miR-181b靶向鼠双微体-2 (MDM2)对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法应用RTPCR检测宫颈癌组织miR-181b mRNA表达,RT-PCR及免疫组化法检测MDM2表达。用miRcramble、miR-181b mimics、阴性对照siRNA (NC组)及靶向抑制MDM2的si NRA (si-MDM2)转染人宫颈鳞癌Caski细胞,通过转染miR-181b mimics后MDM2表达及转染si-MDM2后miR-181b表达检测初步证实miR-181b与MDM2的靶向关系,miR-NC、Wt-MDM2+miR-181b mimics和Mut-MDM2+miR-181b mimics共转染后双荧光素酶活性检测确定MDM2是否为miR-181b的靶基因。应用Transwell小室检测过表达miR-181b或抑制MDM2表达后Caski细胞侵袭及迁移能力,应用Western blotting检测MDM2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、STAT3及p-STAT3的蛋白表达。结果 miR-181b在宫颈癌中的表达显著低于正常宫颈组织(P0. 05),MDM2在宫颈癌中的表达显著高于正常宫颈组织(P0. 05)。MDM2是miR-181b的靶基因。miR-181b mimics和si-MDM2均可抑制Caski细胞侵袭及迁移能力,下调MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达(P0. 05)。结论 miR-181b可靶向MDM2抑制宫颈癌Caski细胞侵袭及迁移能力,机制与下调STAT3信号有关。     

HMGB1对缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探讨高迁移率蛋白1(HMGB1)对缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡的影响及机制。 方法 心肌细胞H9C2分为正常组、H/R组、siRNA-NC组、HMGB1 siRNA组。其中正常组细胞为正常培养的H9C2细胞,H/R组、siRNA-NC组、HMGB1 siRNA组细胞分别进行缺氧复氧处理,HMGB1 siRNA组、siRNA-NC组细胞在缺氧处理前48 h分别转染HMGB1小干扰RNA(HMGB1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control)。RT-PCR和Western blot检测细胞中HMGB1表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)水平,Western blot检测信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达水平。 结果 与正常组相比,H/R组细胞中HMGB1 mRNA、HMGB1蛋白、细胞凋亡率、LDH和MDA、 Cleaved Caspase-3水平显著升高(P<0.05),而SOD、p-STAT3水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。siRNA-NC组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、LDH、MDA及SOD水平、STAT3、p-STAT3、Cleaved Caspase-3水平与H/R组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与H/R组相比,HMGB1 siRNA组细胞中HMGB1 mRNA、HMGB1蛋白、细胞凋亡率、LDH和MDA、 Cleaved Caspase-3水平明显降低,而SOD、p-STAT3水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 HMGB1表达下调可能通过降低缺氧复氧对心肌细胞的氧化损伤而抑制心肌细胞凋亡。     

过氧化氢致H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤作用

目的 研究不同浓度过氧化氢(H2O2)对H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤及诱导细胞凋亡的作用.方法 H9c2心肌细胞处理组分别暴露于50,100,200,400μmol/L H2O2中1,3,6,12,24 h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;采用丫啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染技术观察细胞凋亡;利用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)观察细胞DNA损伤.结果 H2O2可以引起H9c2心肌细胞损伤,随时间呈剂量效应关系(P<0.05),其中24 h,400μmol/L剂量组细胞存活率最低达40.6%.H2O2可诱导H9c2心肌细胞出现凋亡并观察到明显的凋亡形态学的改变,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中6 h时,100 μmol/L剂量组细胞凋亡最明显,凋亡率达22.2%.H2O2可引起H9c2心肌细胞DNA损伤,且损伤随剂量增加而增大(P<0.01),以400 μmol/L剂量组最为明显,细胞DNA损伤率可达64.0%.结论 H2O2造成H9c2心肌细胞氧化损伤和DNA损伤,随着其暴露剂量和时间的不同表现为凋亡和坏死.     

构建siRNA慢病毒载体抑制A549细胞株VEGF受体KDR基因的表达

目的构建针对血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR基因的siRNA慢病毒载体,鉴定其对肺癌细胞株A549基因干扰效果。方法设计合成针对KDR编码区的三条siRNA序列及阴性对照序列,克隆到PGCL-GFP载体,构建重组质粒,行PCR鉴定、DNA测序分析;转染人肺癌细胞株A549,Real-Time PCR及Western blot分别检测KDR mRNA、蛋白水平变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期。结果成功构建pGCL/KDR-siRNA重组质粒。A549干扰组KDR mRNA表达率下降,KDR蛋白表达量明显减少,细胞周期改变。结论构建的pGCL/KDR-siRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制A549细胞株KDR基因的表达。     

钙调神经磷酸酶Aβ小干扰RNA筛选及对心肌细胞肥大的抑制

目的 在细胞水平上筛选钙调神经磷酸酶(CaN)Aβ基因(mRNA)的小干扰RNA (siRNA)的干扰序列,为研究抑制在体心肌肥大的方法提供理论基础.方法 针对CaN Aβ mRNA,参照siRNA设计原则,应用软件设计候选干扰序列,构建相应的小发夹RNA表达载体(si1053,si 1280,si1539).培养乳鼠心肌细胞,分为6组:空白对照组,肥大模型组(醛固酮诱导),肥大+si 1280组,肥大+si1539组,肥大+si1053组,肥大+siGFP阴性对照组(转染针对GFP特定序列的shRNA质粒).48h后显微镜下测量心肌细胞直径、CaN Aβ及心房利钠因子(ANF)、β-重链肌球蛋白(β-MHC)mRNA水平.结果 肥大模型组心肌细胞直径以及心肌组织CaN Aβ、ANF、β-MHC mRNA表达水平较空白对照组明显增加(P＜0.05).肥大+si1053、肥大+si1280、肥大+si1539组细胞直径以及CaN Aβ、ANF mRNA水平均较肥大模型组及肥大+siGFP阴性对照组降低(P＜0.05),3组之间的CaNAβmRNA水平无明显差异(P＞0.05),其中肥大+si1280组的细胞直径、ANF及β-MHC mRNA水平较肥大+si1053组、肥大+si1539组有明显减低(P＜0.05).结论 成功构建CaN Aβ mRNA的小发夹RNA表达质粒,siRNA抑制CaN Aβ mRNA的表达,可抑制细胞水平醛固酮诱导的心肌细胞肥大；其中1280(21 bp)为RNA干扰的相对更有效片段.     

miR-9-3p对HepG2细胞脂蛋白调节因子ABCA1蛋白表达的影响

目的 评估miR-9-3p对ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-bindingcassettetransporterA1,ABCA1基因及蛋白表达的影响。方法 采用HepG2细胞，应用细胞培养、miR-9-3pmimics转染、实时定量PCR技术（qRT-PCR）以及Westernblotting免疫印迹等实验技术，分析miR-9-3p对细胞ABCA1mRAN及蛋白表达水平的影响。结果 (1) miR-9-3p转染组miR-9-3p水平较对照组显著升高，差异有统计学意义（P<0.001），证明转染成功；(2)两组ABCA1mRNA水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；(3) miR-9-3p转染组ABCA1蛋白水平较对照组显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-9-3p能够抑制细胞内ABCA1蛋白表达，但对转录水平未见显著影响。     

单端孢霉烯族T—2毒素毒性与其结构效应关系的研究

为探讨Ｔ－２毒素毒性与其结构效应的关系，采用细胞毒性试验和动物毒性试验观察了Ｔ－２毒素与其代谢产物Ｔ－２四醇、脱环氧基Ｔ－２四醇的毒性作用。结果表明，Ｔ－２毒素与Ｔ－２四醇均明显抑制ＬＬＣ－ＰＫ１细胞的增殖及ＤＮＡ的合成。Ｔ－２毒素的毒性大于Ｔ－２四醇，两者约相差１００倍。在１０ｍｇ／Ｌ毒素剂量范围内，脱环氧基Ｔ－２四醇对ＬＬＣ－ＰＫ１细胞增殖及ＤＮＡ合成没有呈现毒性效应。Ｔ－２毒素对鸡胚心肌及关节软骨呈现明显的损伤作用；Ｔ－２四醇对心肌有损伤作用，脱环氧基Ｔ－２四醇对心肌有轻度损伤，但两者对关节软骨均未见毒性作用。Ｔ－２毒素水解后产生的Ｔ－２四醇仍具有一定的毒性作用，但其强度明显小于Ｔ－２毒素，提示Ｔ－２毒素环状结构的侧键基团在保持毒素毒性中具有不可忽视的作用。母核中环氧环打开后，毒素的毒性发生明显的改变，表明环氧结构是毒素发挥毒性作用的决定性基团。     

葡萄籽原花青素对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制研究

目的探讨葡萄籽原花青素(GSP)对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制。方法用H2O2作用于PC12细胞,MTT检测细胞活性,用流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率,共聚焦显微镜观察细胞Caspase-3活性的变化。结果与模型组比较100μg/ml葡萄籽原花青素可使PC12细胞活性升高(P<0.05)和凋亡率下降(P<0.01),并可抵抗H2O2诱发的PC12细胞Caspase-3活性增强(P<0.01)。结论葡萄籽原花青素可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-3活化有关。     

北京早园竹叶有机提取物对细胞DNA断裂损伤的保护与修复作用

目的 探讨北京早园竹叶提取物对H<,2>O<,2>诱导的中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)DNA损伤的保护与修复作用.方法 采用乙醇-水溶液超声辅助提取方法制备竹叶粗提物,经SP825大孔树脂吸附分离,分别以10%,30%,60%的乙醇水溶液洗脱得到不同成分的提取液,并用高效液相色谱(HPLC)定性分析早园竹叶提取物的主...     

维生素C、E对体外氧化血管内皮细胞保护作用的研究

目的观察维生素C(VC)、维生素E(VE)及其联合作用对体外氧化损伤血管内皮细胞抗氧化作用的影响。方法采用体外细胞培养方法,将血管内皮细胞分为正常对照组,H2O2氧化损伤对照组,损伤加VC低、中、高浓度组(VC-L、M、H组),损伤加VE低、中、高浓度组(VE-L、M、H组),损伤加VC、VE联合低、中、高浓度组(VC-L+VE-L、VC-M+VE-M、VC-H+VE-H组)。分别将不同剂量的VC、VE加入到培养液中,预孵24h,再加入除菌后的H2O2进行损伤,终止培养后收集细胞,测定各组细胞抗氧化指标。结果与H2O2氧化损伤对照组比较,VC、VE、VC+VE各组均能增强其SOD、GSH-PX及CAT活性,降低LDH释放率,差别有统计学意义。与正常对照组相比较,(VC+VE)-M、H组差别无统计学意义。此外,(VC+VE)-L组与VC、VE-L差别无统计学意义,但(VC+VE)-M、H组SOD均高于VC、VE-M、H组,(VC+VE)-H组LDH释放率低于VC、VE-H组,差别有统计学意义。结论VC、VE能够提高氧化损伤血管内皮细胞的抗氧化能力,且二者联合作用优于单独作用。     

维生素C、E对血管内皮细胞氧化损伤保护作用

目的 观察维生素C(VC)、维生素E(VE)对体外培养H2O2氧化损伤血管内皮细胞(VEC)超微结构的影响.方法 采用体外细胞培养方法,将血管内皮细胞分为正常对照组,H2O2氧化损伤对照组、VC+H2O2组(VC100μmol/L),VE+H2O2组(VE100μmol/L).分别将VC、VE加入到培养液中,预孵24h,再加入除菌后的H2O2进行损伤,终止培养后收集细胞,进行电镜观察.结果 透射电镜观察VEC,可见H2O2损伤对照组细胞超微结构明显异常,细胞表面呈光滑状,丢失特征性的细胞突起及微绒毛;胞质内线粒体损伤严重,形态模糊;粗面内质网明显扩张呈大囊泡状;溶酶体增多;少数细胞严重水肿,核形不规则,核内染色质部分溶解.VC+H2O2和VE+H2O2组血管内皮细胞超微结构仅有轻度损伤,多数细胞与正常对照组细胞相似;大部分细胞表面微绒毛和胞质突起均趋于正常,胞质内细胞器均在正常范围内;细胞核未见异常,核膜完好,核内染色质分布正常;仅有少数细胞粗面内质网有轻度扩张,线粒体结构模糊不清.结论 VC、VE可一定程度保护氧化损伤的血管内皮细胞的超微结构.     

不同分期肝癌患者血清IGF-2及IGFBP-2水平与肝癌侵袭能力的相关性分析

目的探讨不同分期肝癌患者血清胰岛素样生长因子-2(IGF-2)及胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)水平与肝癌侵袭能力的相关性。方法对来我院就诊的124例肝细胞癌患者分为I期、II期、III期及IV期,分别有29、31、36、28例,对各期患者血清IGF-2、IGFBP-2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其抑制剂TIMP-2进行检测。结果Ⅱ期患者IGF-2、IGFBP-2水平较Ⅰ期显著升高(P0.05);Ⅲ期患者IGF-2、IGFBP-2水平较Ⅰ、Ⅱ期均显著升高(P0.05);Ⅳ患者IGF-2、IGFBP-2水平较Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期均显著升高(P0.05)。Ⅱ期患者MMP-2/TIMP-2较Ⅰ期显著升高(P0.05);Ⅲ期患者MMP-2及TIMP-2与Ⅰ期比较差异均有显著性(P0.05);MMP-2/TIMP-2较Ⅰ、Ⅱ期患者均显著升高(P0.05);Ⅳ期患者MMP-2、TIMP-2水平及MMP-2/TIMP-2水平与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期比较差异均有显著性(P0.05)。IGF-2与TIMP-2、MMP-2/TIMP-2呈显著相关(P0.05),IGFBP-2与TIMP-2、MMP-2/TIMP-2呈显著相关(P0.05)。结论 IGF-2及IGFBP-2水平与细胞外基质重构密切相关,是反映肝细胞癌进展的重要因子。     

前列腺液中COX-2和PGE2与慢性非细菌性前列腺炎症状相关性研究

[目的]通过测定COX-2和PGE2在前列腺液中的含量,分析其与慢性非细菌性前列腺炎症状之间的相关关系。[方法]选择泌尿外科门诊前列腺炎患者,以前列腺按摩前后"两杯法"(PPMT)筛出慢性非细菌性前列腺炎患者48名,年龄20～42岁,平均(28.96±6.04)岁。依据美国国立卫生院前列腺炎症状指数评分表(NIH-CPSI)进行评分。选择无临床症状、前列腺液常规检查正常的32名做对照,年龄20～39岁,平均(28.19±6.73)岁。检验前列腺液常规后,检测前列腺液中COX-2和PGE2含量,同时SPSS13.0统计软件包对测量数据进行统计学分析。[结果]CNBP组前列腺液中平均每高倍镜视野下WBC计数与COX-2及PGE2水平均高于正常对照组;CNBP患者前列腺液中COX-2及PGE2水平均与NIH-CPSI疼痛不适症状评分呈正相关(r=0.853,0.679,P﹤0.01)。与NIH-CPSI症状总评分呈正相关(r=0.671,0.564,P﹤0.01)。而CNBP患者前列腺液中WBC计数与COX-2及PGE2水平和临床症状无明显相关性;CNBP患者前列腺液中COX-2水平与PGE2水平呈正相关(r=0.491,P﹤0.05)。[结论]研究结果显示慢性非细菌性前列腺炎患者,疼痛或不适症状与前列腺液中COX-2及PGE2表达水平明显升高呈正相关。慢性非细菌性前列腺炎患者疼痛或不适症状的产生可能与氧化应激诱导COX-2路径活化,导致PGE2产生相关。     

衰老与海马神经元细胞内钙离子水平升高和钙稳态改变的相关性

衰老与神经退行性疾病如帕金森综合征和阿尔茨海默征引起的神经易损性增高及中风和癫痫引起的神经元丧失相关联.一些研究揭示,细胞内钙离子浓度([Ca2 ]I)升高引起神经元丧失与衰老相关疾病的发生有关.然而,以幼年和中年动物海马神经元为标本,直接进行[Ca2 ]I和Ca2 稳态机制的比较研究尚未见报道.该研究应用Fura-2检测了幼年(4～5月)和中年(12～16月)SD大鼠快速分离的CA1区海马神经元[Ca2 ]I.结果发现,中年大鼠神经元基础[Ca2 ]I的水平明显高于幼年大鼠.用谷氨酸盐诱导胞内Ca2 超载,中年大鼠神经元转运多余Ca2 所需的时间比幼年大鼠长,这些研究结果为动物出现Ca2 稳态改变的年龄明显早于以往认为的老年阶段(≥24月)提供了直接的证据.Ca2 动力学的改变使衰老神经元对中风、癫痫或头部损伤相对于引起的神经元死亡更为敏感.阐明钙稳态机制不仅有助于理解衰老引起神经元丧失增多,而且也有助于开发靶向降低[Ca2 ]I,进而维持衰老神经元正常钙稳态的临床药物.     

维生素A缺乏及补充对大鼠胚胎存活及后脑Hoxa-2和Hoxb-2基因表达的影响

目的:研究维生素A(VA)缺乏及补充对大鼠胚胎后脑Hoxa-2和Hoxb-2mRNA表达的影响。方法:初断乳SD雌性大鼠60只,按体重随机分为VA缺乏组(A),VA缺乏妊娠0d(E0)补充组(B)和正常对照组(N)。A组和B组喂饲VA缺乏饲料,B组自E0天起改喂VA补充饲料(含VA10000IU/kg饲料),N组喂饲VA充足饲料(含VA4000IU/kg饲料),雄鼠饲以普通饲料。喂饲7w后采集尾血,将雌雄大鼠2︰1合笼交配,分别于妊娠D12.5(E12.5)和妊娠D19.5(E19.5)将孕鼠处死,留取血标本,剖腹取出胚胎。用微量荧光法测定母鼠血清中VA含量;观察E12.5和E19.5胚胎存活情况,记录活胎数、死胎数及吸收胎数;并用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测E12.5胚胎组织Hoxa-2、Hoxb-2mRNA的表达。结果:与N组相比,A组孕鼠血清VA水平下降;E12.5和E19.5胚胎的存活率显著降低,死胎及吸收胎的发生率增加,E12.5胚胎Hoxa-2、Hoxb-2mRNA表达水平明显下降;B组孕鼠各项指标同正常组相比无显著性差异。结论:胚胎后脑发育基因Hoxa-2、Hoxb-2可能介导VA对大鼠胚胎存活的影响。     

MMP-2和TIMP-2在肾间质纤维化大鼠模型中的表达和意义

[目的]观察基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2,TIMP-2)在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型中的动态表达,探讨MMP-2/TIMP-2在肾小管间质纤维化中的作用机制.[方法]54只SD大鼠随机分为正常组、假手术组和单侧输尿管梗阻模型组(UUO),分别于术后3 d、7 d、14 d、21 d处死,采用western blot法检测肾组织MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平;明胶酶谱法检测肾组织MMP-2的酶活性;HE染色光镜观察肾纤维化;电镜观察细胞外基质的变化.[结果]与假手术组相比,模型组肾组织MMP-2蛋白表达(F=125.558,P＜0.01)、TIMP-2的蛋白表达(F=9.833,P＜0.05)均于术后d 3即出现增高并随梗阻时间延长递增.[结论]在大鼠UUO肾纤维化形成过程中,MMP-2的蛋白表达在肾损伤早期即明显增加,并随纤维化程度加重而逐步升高,从而促进肾纤维化的发生.而TIMP-2的高表达可能是加重肾间质损害的因素之一.