白细胞介素13抑制肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素1β的分泌

目的：探讨白细胞介素13（IL-13）对体外培养的大鼠系膜细胞的增殖及其产生白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法：用四甲基偶氮唑（MTT）法测定系膜细胞增殖,用酶联免疫吸附（ELISA）法测定培养系膜细胞的上清液IL-1β蛋白水平。结果：IL-13在1.0、10、100ng/ml浓度范围呈剂量依赖性地抑制系膜细胞的增殖;含5?S的RPMI1640培养状态下的系膜细胞几乎检测不出IL-1β分泌,加入LPS可诱导系膜细胞分泌IL-1β,IL-13在抑制系膜细胞的增殖的相应浓度范围可显地抑制诱导的系膜细胞IL-1β。结论：IL-13对体外培养的系膜细胞增殖具有抑制作用 ,IL-13可能对肾小球系膜细胞炎症具有拮抗作用。     

白细胞介素13对肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素1β表达的影响

目的：探讨白细胞介素13（IL－13）对体外培养的大鼠系膜细胞的增殖及其产生白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法：用四甲基偶氮唑（MTT）法测定系膜细胞增殖,用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）及酶联免疫吸附（ELISA）法测定系膜细胞IL－1β mRNA表达IL-1β蛋白水平。结果IL－13在1．0,10,100ng/ml浓度范围呈剂量依赖性地抑制系膜细胞的增殖。含5％小牛血清（FCS）的RPMI 1640培养状态下的系膜细胞检测不出IL－1β,IL－13在抑制系膜细胞的增殖的相应浓度坷显著地抑制LPS诱导的系膜细胞IL－1β mRNAg表达及L-1β分必,IL－13在10ng/ml浓度时即可几乎完全抑制LPS诱导的系膜细胞IL－1β mRNA表达,结论：IL－13对体外培养的系膜细胞增殖及炎症效应具有抑制作用。     

白细胞介素1β对人肾小球系膜细胞LOX-1和ABCA1表达的影响

目的 研究白细胞介素1β（IL-1β）对人肾小球系膜细胞株（HMCL）植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）以及腺苷三磷酸结合盒转运体A1（ABCA1）表达的影响，及其与细胞胆固醇稳态的关系。 方法 实时定量PCR和Western印迹法检测IL-1β对人肾小球系膜细胞LOX-1、ABCA1表达的影响。 结果 人肾小球系膜细胞表达LOX-1 mRNA和蛋白。IL-1β促进人肾小球系膜细胞LOX-1 mRNA和蛋白表达，5 μg/L IL-1β刺激细胞0~24 h，LOX-1 mRNA表达于6 h达高峰，为对照的6.87倍；LOX-1蛋白24 h达高峰，为对照的1.88倍。IL-1β降低脂质负荷的人肾小球系膜细胞 ABCA1 mRNA和蛋白表达。5 μg/L IL-1β刺激细胞0~48 h，48 h时ABCA1 mRNA和蛋白下降最明显，分别为对照的19.0％和50.62％。 结论 IL-1β促进人肾小球系膜细胞LOX-1表达，抑制ABCA1的表达，导致细胞内胆固醇的失衡，促使其变成泡沫细胞，可能加重肾小球硬化和肾病的进展。     

通脉口服液主药不同配伍比例对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：观察中药复方“通脉口服液”中主要组成药物不同比例配伍前后对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）增殖的影响。方法：应用细胞培养技术进行肾小球系膜细胞的传代培养,采用血清药理学方法,制备通脉口服液不同配伍比的含药血清,观察各组合药血清对脂多糖刺激下肾小球系膜细胞增殖的影响。结果：各组含药血清均可抑制大鼠肾小球系膜细胞的增殖,各组之间比较,通脉口服液3：1组作用要优于6：1组及1．5：1组。结论：通脉口服液黄芪、三七以不同比例配伍均对体外培养的肾小球系膜细胞的增殖有抑制作用,其中以黄芪：三七为3：1时其作用最强。     

百令胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原及TGF-β1 mRNA表达的影响

目的：观察百令胶囊对高糖刺激后系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原（typeⅣCollagen,ⅣC）、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA表达的影响。方法：培养正常SD大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入百令胶囊、苯那普利含药血清后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察肾小球系膜细胞增殖;酶联免疫吸附法（ELISA）测量培养细胞上清液中ⅣC的含量;实时荧光逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）测定TGF-β1mRNA的表达。结果：百令胶囊、苯那普利含药血清在24 h可抑制高糖对大鼠肾小球系膜细胞的促增殖作用,72 h最为明显（P〈0.01）;高糖刺激后ⅣC、TGF-β1mRNA在肾小球系膜细胞内表达增多（P〈0.01）,百令胶囊、苯那普利含药血清能明显抑制肾小球系膜细胞增殖（P〈0.01）、ⅣC分泌及TGF-β1mRNA的高表达（P〈0.05）。百令胶囊与苯那普利组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：百令胶囊可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖所致ⅣC分泌,抑制高糖引起的TGF-β1mRNA过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。     

白细胞介素13通过下调核因子—kB活化抑制系膜细胞白细胞介素1β的表达

目的：研究白细胞介素13（IL－13）对脂多糖（LPS）引起的肾小球系膜细胞核因子－kB（NF－kB)活化及白细胞介素1β（IL-1β）表达的影响,以探讨其抗炎作用的机制。方法：以体外培养的大鼠肾小球系膜细胞为靶细胞,用凝胶电泳迁移率试验（EMSA）测定NF－kB活性;用酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）观察系膜细胞IL－1β蛋白及基因表达。结果：LPS可诱导系膜细胞NF－kB活化及IL－1β表达,这作用能被NF－kB抑制剂吡咯二硫氢基甲醋酯（PDTC）抑制。IL－13亦有此抑制作用。结论：IL－13对于系膜细胞炎症反应的抑制 作用可通过抑制NF－kB活化而实现。     

P38信号通路在脂多糖诱导的大鼠系膜细胞产生白细胞介素1β中的作用

目的探讨p38信号通路在肾小球系膜细胞促炎介质白细胞介素l(IL-1)β表达中的作用.方法采用免疫沉淀法、免疫复合物蛋白激酶测定,Western blotting检测p38信号通路在脂多糖(LPS)诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA观察p38信号通路抑制剂SB203580对肾小球系膜细胞促炎介质IL-lβ mRNA和蛋白质表达的影响.结果脂多糖刺激肾小球系膜细胞引起p38信号通路活化,p38信号通路抑制剂SB203580对肾小球系膜细胞促炎介质表达有显著抑制作用.结论 p38信号通路在大鼠系膜细胞炎症反应产生炎症介质IL-1β中可能起主要的作用.     

益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的：观察益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达的影响。方法：以体外培养肾小球系膜细胞为研究对象,应用血清药理学方法,分别采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法、荧光倒置显微镜及RT-PCR技术检测系膜细胞增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达情况。结果：与正常对照组比较,其他各组MC均有不同程度的增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达上调（P〈0.05或P〈0.01）;与脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）组比较,益肾胶囊可明显抑制MC增殖及TGF-β1 mRNA表达,并诱导MC凋亡（P〈0.01）。结论：益肾胶囊抑制MC增殖并诱导其凋亡可能与下调TGF-β1 mRNA表达有关。     

蛋白酪氨酸磷酸酶2/核因子-κB途径介导脂氧素A4拮抗系膜细胞白介素6的合成

目的探讨脂氧素A4(LXA4)拮抗白介素(IL)1β促进肾小球系膜细胞IL-6合成的作用，及其信号转导机制。方法LXA4预处理培养的大鼠肾小球系膜细胞，加入IL-1β共同孵育，或单用IL-1β刺激肾小球系膜细胞。应用酶联免疫吸附(EIASA)法检测上清液中IL-6蛋白表达量。用RT—PCR法检测IL-6中mRNA表达量。用免疫印迹法检测含Sre同源区2(SH2)蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP-2)的磷酸化水平。用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)检测核因子-κB(NF—κB)DNA结合活性。结果LXA4呈剂量依赖性抑制IL-1β诱导的系膜细胞IL-6蛋白分泌及mRNA表达，拮抗IL-1β诱导的SHP-2磷酸化与NF—κB的活化。应用NF—κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)可抑制IL-1β诱导的系膜细胞IL-6蛋白分泌与NF—κB活化。结论LXA4能够拮抗IL-1β促进肾小球系膜细胞IL-6合成，其机制涉及SHP-2／NF—κB信号转导途径。     

白细胞介素1β通过植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1途径促进人肾小球系膜细胞摄取氧化低密度脂蛋白

目的 研究白细胞介素（IL）1β是否促进人肾小球系膜细胞（HMC）摄取氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）以及对其植物血凝素样受体（LOX-1）表达的作用,探讨IL-1β影响脂质摄取的可能作用途径。 方法 脂质化学染色、流式细胞计数观察IL-1β对HMC脂质摄取的影响,分析LOX-1受体的功能及IL-1β影响脂质摄取的可能作用途径。实时定量 PCR和Western印迹方法检测IL-1β对LOX-1表达的影响。 结果 油红“O”染色发现IL-1β增强HMC对Ox-LDL的摄取;流式细胞仪计数发现IL-1β呈剂量和时间依赖性促进HMC摄取荧光Dil标记的Ox-LDL（Dil-Ox-LDL）,抗LOX-1抗体部分阻断IL-1β诱导的HMC 对Ox-LDL的摄取,约为单纯IL-1β组的89.8%（P < 0.05）。5 μg/L IL-1β刺激HMC,LOX-1 mRNA于6 h达高峰,为对照的6.87倍,IL-1β剂量依赖性促进LOX-1 mRNA的表达,当刺激HMC 12 h,LOX-1 mRNA于10 μg/L组达高峰,为对照的6.57倍。IL-1β剂量和时间依赖性促进LOX-1蛋白的表达。5 μg/L IL-1β刺激HMC,LOX-1蛋白表达于24 h达高峰,为对照的1.88倍。10 μg/L 组刺激细胞24 h达高峰,LOX-1蛋白为对照的2.57倍。 结论 HMC基础状态下摄取Ox-LDL,IL-1β可能通过LOX-1途径增强对Ox-LDL摄取,促进细胞内脂质的摄取,加重细胞内脂质失调。     

白细胞介素1β通过p38信号通路上调大鼠肾小球系膜细胞骨调素mRNA的表达

目的 探讨p38信号通路(1938MAPK)在白细胞介素1(IL-1)β介导的大鼠肾小球系膜细胞表达骨调素(OPN)中的作用。方法 应用Western印迹检测p38MAPK在IL-1β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度。应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察p38MAPK特异性阻断剂SB203580对IL-1β诱导的系膜细胞促炎症介质OPNmRNA的影响。结果 IL-1β以时间和剂量依赖方式刺激系膜细胞引起p38MAPK的活化，并明显上调系膜细胞OPNmRNA的表达。p38MAPK特异性抑制剂SB203580以剂量依赖性方式显著抑制IL-1β诱导的OPNmRNA的表达。结论 p38MAPK在IL-16介导的肾小球系膜细胞上调表达黏附分子OPN中起重要作用。     

白细胞介素6反义RNA对肾小球系膜细胞的影响

目的 为了观察白细胞介素6(IL-6)反义RNA对肾小球系膜细胞(MC)的影响。方法 将IL-6反义RNA用脂质体导入包装细胞PA_(317),经C_(418)筛选,PCR技术分析,并用~3H-胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入法、KD_(83)细胞株、North-ern杂交技术分别检测IL-6反义RNA对肾小球系膜细胞增殖、分泌IL-6以及表达IL-6mRNA的影响。结果 重组假病毒滴度为1×10~7CFU/ml,肾小球系膜细胞~3H-TdR掺入率及IL-6产生与mRNA表达均明显低于对照组。结论 IL-6反义RNA可抑制MC增殖,下调MC中IL-6的产生与表达。     

肾病Ⅰ号方对大鼠系膜细胞增殖及IL-6和FN表达的影响

目的：观察肾病Ⅰ号方（SBYHF）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的增殖及表达纤维连接蛋白（FN）及白细胞介素-6（IL-6）的影响,探讨其抗肾纤维化的机制。方法：通过体外培养大鼠肾小球系膜细胞技术及体外药物血清实验方法,采用CCK-8法检测GMC的增殖,ELISA法检测FN的分泌水平,RT-PCR法检测IL-6 mRNA的表达。结果：肾病Ⅰ号方可显著抑制GMC和增殖（P〈0.01）,减少FN的分泌和IL-6 mRNA的表达（P〈0.01）。结论：肾病Ⅰ号方可能通过减少GMC和FN的分泌,下调IL-6 mRNA表达,而抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖,从而发挥抗肾脏纤维化的作用。     

复方积雪草合剂对IgA1诱导的大鼠系膜细胞增殖及IL-6与TGF-β1表达的影响

目的：探讨复方积雪草合剂对IgA1诱导的大鼠系膜细胞（MsC）的增殖及分泌白细胞介素-6（IL-6）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响。方法：用体外实验的方法,将MsC经培养及传代,分成正常组、模型组,复方积雪草合剂高、中、低组,泼尼松组及代文组;经IgA1诱导后分别予以上述各药含药血清;用计数板对MsC进行计数、用RT-PCR及ELISA法分别检测IL-6 mRNA、TGF-β1 mRNA及其蛋白质的表达。结果：实验显示,复方积雪草合剂能抑制IgA1诱导的MsC增殖（与模型组比较P〈0.05）,且高、中剂量组明显优于其他治疗组;同时复方积雪草合剂能使MsC分泌IL-6 mRNA、TGF-β1 mRNA及其蛋白质下降（与模型组比较P〈0.05）,并呈一定的量效关系,尤其对IL-6的抑制作用更明显。结论：复方积雪草合剂可抑制IgA1诱导的MsC增殖,并减少IL-6 mRNA、TGF-β1 mRNA及其蛋白质的表达。     

HB-EGF对系膜细胞增殖及转化生长因子-β1表达的影响

目的：观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）对肾小球系膜细胞（GMC）增殖及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,采用MTT、ELISA、RT-PCR等方法观察外源性HB-EGF对系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响。结果：（1）不同浓度HB-EGF对系膜细胞增殖有不同影响,10ng/ml时无刺激GMC增殖作用（P〉0.05）,100、1000ng/ml均能刺激GMC增殖（P〈0.01）,100ng/ml作用最明显。（2）HB-EGF（10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）能刺激系膜细胞TGF-β1的表达（P〈0.01）,100ng/ml时作用最强。（3）100ng/mlHB-EGF刺激GMC24h、36h、48h,系膜细胞TGF-β1的表达均增加,随作用时间而变化,刺激36h和48h比24h作用更明显（P〈0.05）。结论：一定浓度范围内HB-EGF刺激GMC增殖,促进系膜细胞TGF-β1的表达,且具有一定的时间及浓度依赖性。     

肾茶对肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素1β表达的影响

目的 :探讨肾茶煎剂对原代培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及其产生白细胞介素 1(IL - 1β)的影响。 方法 :用四甲基偶氮唑 (MTT)法测定肾茶对系膜细胞增殖的影响 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)测定系膜细胞IL - 1β蛋白水平。结果 :肾茶在 5 0 μg/ml～ 2 5 0 μg/ml浓度范围明显抑制血清或脂多糖刺激的系膜细胞增殖 (与对照组比较 ,P <0 .0 1) ,在相同浓度范围内能够明显抑制脂多糖诱导的系膜细胞IL - 1β分泌 (与对照组比较 ,P <0 .0 1)。 结论 :肾茶对体外培养系膜细胞的增殖及IL - 1β分泌具有抑制作用     

甲状旁腺激素促进系膜细胞合成分泌转化生长因子β1

目的：研究甲状旁腺激素（PTH）对大鼠系膜细胞合成与分泌转化生长因子β1（TGF－β1）的影响。方法：（1）分别以10^-12,10^-11,10^-10,10^-9,10^-8mol/l的hPTH1-34刺激大鼠系膜细胞6，12，24，48h后，ELISA方法测定上清中TGF－β1的浓度；（2）分别以10^-12,10^-11,10^-10,10^-9,10^-8mol/L的hPTH1-34刺激大鼠系细胞48h,采用半定量RT－PCR方法检测细胞TGF－β1 mRNA的表达；（3）以10^-8mol/L的hPTH1-34分别刺激大鼠系膜细胞6，12，24，48h，采用半定量RT－PCR方法检测细胞TGF－β1 mRNA的表达，结果：（1）ELISA结果显示，hPTH1-34促进大鼠系膜细胞合成与分泌TGF－β1分泌作用达高峰（P＜0．01），（2）半定量RT－PCR方法结果显示，hPTH1-34促进大鼠系膜细胞TGF－β1 mRNA的表达，并具有浓度依赖和时间依赖性特点（各组与对照组间P＜0．05），结论：hPTH1-34从蛋白和基因水平显著促进系膜细胞TGF－β1的合成与分泌，且呈浓度依赖和时间依赖性特点。     

转化生长因子β1对大鼠原代肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨原代培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）对其表达的影响。方法：采用RT-PCR和Westernblot方法检测大鼠原代培养的肾小球系膜细胞VEGF表达及不同浓度、不同时间的TGF-β1刺激对VEGF表达的作用。结果：原代培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF164、120mRNA，TGF-β1呈时间依赖性增加其表达，在12h表达最高，分别为刺激前3．17、2．925倍，有统计学差异（P〈0．001）。在剂量反应曲线上，2ng／ml TGF-β1刺激作用最强，VEGF164、120mRNA表达分别为未刺激组的2．82、2．45倍，有统计学差异（P〈0．001）。与VEGF mRNA表达一致，大鼠原代肾小球系膜细胞仅见VEGF164蛋白表达，2ng／ml TGF-β1呈时间依赖性的增加VEGF 164蛋白表达，24h达高峰，为刺激前的2．37倍。结论：促进肾小球系膜细胞VEGF表达可能是TGF-β1介导肾脏损害发生、发展的机制之一。     

热打击联合脂多糖刺激对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响

目的：观察脂多糖（LPS）与热打击分别单独作用与联合作用对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响。方法：于37℃、5％CO2标准培养箱中培养人肠上皮细胞株SW480。实验分4组：空白对照组直接收集细胞上清;LPS单独刺激组（LPS组）分别使用0、0．01、0．1、1和10μg／ml的LPS刺激SW480细胞,24h后收集细胞上清;热打击组将SW480细胞进行热打击（42℃,1h）后在标准孵箱分别培养1h和24h后收集细胞上清;LPS＋热打击组将SW480细胞42℃热打击1h后给予上述浓度的LPS刺激,再重新置于标准孵箱中培养,24h后收集细胞上清。各组细胞上清用LiquiChip液相蛋白芯片系统分别检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、7干扰素（IFN-7）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等10种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平。结果：单独LPS刺激时呈剂量依赖性诱导SW480表达分泌IL-8,对其余9种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平影响不明显。单纯热打击仅诱导SW480细胞表达分泌IL-8的水平升高,且与空白对照组比较,仅热打击24h后IL-8的水平显著增加（P〈0．01）。热打击联合不同浓度的LPS刺激SW480细胞,LPS浓度低时并不影响SW480表达分泌IL-8的水平（P〉O．05）,而高浓度LPS可以显著减少其表达分泌水平（P〈0．05）。结论：人肠上皮细胞SW480作为脏器实质细胞,对炎性刺激仅能产生单一种类的细胞因子,其中LPS单独刺激和一定强度的热打击均可上调SW480分泌IL-8;但高浓度LPS在热环境下可抑制SW480细胞的IL-8表达分泌水平。     

白细胞介素—10对鼠肾小球系膜细胞增殖和核因子κB的抑制作用

目的：研究白细胞介素－10（rhIL-10)对小鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell,MC)增殖的影响及其细胞内作用机制。方法：采用3H－TdR掺入法观察MC的增殖反应,采用电泳适移改变法（EMSA）检测核因子κB（nuclear factorκB,NF-κB)活性。结果：rhIL-10(20ng/ml)抑制LPS刺激的小鼠MC增殖（P＜0．05）,同时rhIL-10亦显抑制LPS诱导的MC中NF－κB活化,结论：IL－10对LPS诱导的小鼠MC增殖的抑制作用至少部分与其对NF－κB活化的抑制有关。