血透患者血清庚型肝炎病毒RNA及抗体检测

目的:了解血透患者庚型肝炎病毒(HGV)感染率及与其他肝炎病毒重叠感染的情况。方法:收集57份血透患者血清标本,根据HGV RNA保守片段5′非编码区序列,设计了两对引物,采用逆转录巢式PCR扩增HGV RNA,以及EIA法检测HGV IgG抗体。同时还检测了HBV DNA及HCV IgG抗体。结果:57份标本中,4份HGV RNA阳性(7.0％),2份HGV IgG抗体阳性(3.5％)。HGV RNA与HGV IgG抗体呈“分离”现象。4份HGV RNA阳性标本中2份为HBV DNA阳性,2份为HCV IgG抗体阳性;其中1份标本HBV DNA和HCV IgG抗体均为阳性。结论:血透患者HGV感染率高于健康献血员和正常人群,HGV可与HBV和HCV重叠感染。     

多重PCR检测HBV和HCV方法的建立

目的:建立可同时检测血清HBVDNA和HCVRNA的多重PCR。方法:利用已知的基因序列设计了对于不同亚型HBV保守的C基因区的一对引物HBV-P623及对于不同亚型HCV高度保守的位于5’端非编码区(5’-NCR)的两对引物HCV-P289和HCV-P174,扩增经基因释放剂(Genereleaser)处理的HBV和HCV阳性血清。结果:多重引物、逆转录套式PCR反应体系可同时扩增HBV DNA和HCV RNA,分别在623bp和174bp处出现特异DNA扩增带。该反应体系具有较高的特异和敏感性,受检血清中仅含有10fgHBV DNA和5CID HCV RNA即可检出。血清标本不需要提取核酸,可直接进行PCR。用此体系检测30例输血后病人血清,其中15例为HBV感染,8例为HCV感染,7例为阴性。结论:多重PCR检测HBV及HCV的方法具有简便性和实用性。     

丙型肝炎病毒NS5B区基因的扩增、克隆及序列分析

目的 对丙型肝炎病毒(HCV)NSSB区基因克隆并测序，研究其变异状况。方法 从HCV RNA阳性血清中抽提病毒RNA，利用巢式RT-PCR对NS5B区基因进行扩增，将扩增获得的靶cDNA克隆至P^KPL-3a质粒载体中，并以内引物为测序引物进行序列测定分析。结果 构建了已克隆HCVNS5B区基因的重组质粒KHC5—1；序列分析表明，与HCV-BDS株同源性最高，属于主要流行于我国的HCV 1b基因亚型。结论 证实了在NS5B区，与RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)活性密切相关的基元结构Gly-Asp-Asp及其相邻序列的同源性非常高。     

丙型肝炎病毒核酸的荧光定量检测及其临床意义

目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV-RNA含量方法的临床应用价值。方法:在HCV基因组5’非编码区(5’-UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,PCR扩增目的片段并构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的巢式RT-PCR进行定性分析。结果:138例样本在HCV抗体阳性患者中,肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(P<0.05),而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.91)。结论:RFQ-RT-PCR检测HCV-RNA含量比ELISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HCV在体内的复制情况。     

庚型和丙型肝炎病毒的全长cDNA克隆在体内外的表达与复制

目的：研究HGV和HCV的复制和表达。方法：利用HGV全长cDNA克隆(HGVqz)及HCV1a／1b嵌合体cDNA克隆分别构建表达质粒p3．1HGV和p3.1HCV并转染张氏肝细胞,以HGVqz克隆建立HGV转基因小鼠。分别应用RT—PCR、免疫组化及Western印迹分析病毒正、负链RNA,蛋白表达和剪切。结果：在转染p3.1HCV的张氏肝细胞及HGV转基因小鼠某些组织中可检出相应病毒的负链RNA,但在转染p3．1HGV的张氏肝细胞中未能检出HGV负链RNA。Western印迹在转染p3.1HCV的张氏肝细胞中检测到针对HCV NS3蛋白、相对分子质量约70000的特异性条带,在HGV转基因小鼠某些组织中检测到2条特异性条带,相对分子质量约42000和100000,分别相当于HGV E2蛋白及其剪切中间体。然而,在转染p3．1HGV的张氏肝细胞中检测到针对HGV E2蛋白的特异性条带,其相对分子质量约为310000,相当于HGV整个前体蛋白。结论：HGV的表达与复制在体内、外存在差异。细胞内某些特异性因子在病毒前体蛋白剪切中起重要作用,HGV和HCV前体蛋白剪切所需宿主因子可能存在差异,故两种病毒体外培养时的嗜性细胞株并不完全一致。     

血液透析患者庚型肝炎病毒感染的研究

目的探讨血透患者庚型肝炎病毒(HGV)感染情况及其感染相关因素。方法采用ELISA法和RT—PCR法检测264例血透患者抗HGV和HGV—RNA，并同时检测抗HCV、HCV—RNA、HBsAg和抗HBc。结果血透人群HGV感染率为13．6％．其中，36例HGV阳性患者有21例与其它肝炎病毒合并感染(58．3％)，6例(16．7％)与HBsAg，6例(16．7％)与抗HCV／HCV—RNA，9例(25．0％)与抗HBc／HBsAg／抗HCV。HGV—RNA与HBV、HCV合并发生率为66．7％。HGV感染以女性人群多见，与年龄、输血史、输血次数、透析时间、HBV感染及HCV感染无相关性，感染者肝功能生化指标无异常改变。结论血透人群有较高的HGV感染率，其中多数感染与HBV、HCV合并发生。     

湖北地区健康献血员血清HGV抗体检测结果分析

庚型肝炎病毒（HGV）属黄病毒科，是一种RNA病毒，其传播途径与乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）相似，主要经血或肠道外途径传播，因此HGV可与HBV和（或）HCV同时感染。为了解健康献血员中HGV抗体情况，我门检侧90例健康献血员血清HGV抗体，现将结果报道如下。     

多重PCR技术检测病毒性肝炎相关病毒的研究

目的建立一种快速、特异的可同时检测血中多种病毒性肝炎相关病毒的多重PCR方法。方法参照各病毒特异性核酸序列,按多重PCR引物设计的特殊要求设计引物,以核酸测序确证扩增产物,用标准病毒株及临床阳性血清样本DNA、RNA为模板优化PCR反应体系和反应条件,建立病毒性肝炎相关病毒多重PCR检测方法。应用建立的多重检测方法对120例ALT升高的血清标本进行多重检测,并将检测结果与单一PCR检测结果进行比较。结果采用多重PCR技术可同时对EBV、TTV、HBV、HSV 4种DNA病毒进行扩增;采用多重RT-PCR技术可同时对Cox-V、HEV、HCV 3种RNA病毒进行扩增。各病原体单一及多重扩增条带均清晰、均一,无非特异性扩增条带,片段长度与理论值一致;核酸测序证实各扩增产物属各病原体特异性基因片段。临床标本检测多重感染率为19.2%,与单一检测结果一致。结论建立的多重PCR检测方法稳定可靠,敏感度、特异度好,适用于病毒性肝炎相关病毒的实验室诊断与临床筛查。     

广西肝癌高发区人群多种肝炎病毒感染的流行病学研究

目的 :对广西肝癌高发区健康人群及肝癌患者 HBV、 HCV、 HEV、 HGV感染状况及其与肝癌的关系进行血清流行病学研究。方法 :采用 EL ISA方法检测调查对象血清中 HBs Ag、抗 - HCV、抗 - HEV、抗 - HGV,用 RT- PCR方法检测肝癌患者血清中 HGV- RNA;用成组病例 -对照研究方法分析 HBV、 HCV、 HEV及 HGV感染与肝癌的关系。结果 :HBV、 HCV、 HEV、HGV相应的肝炎病毒感染率 ,健康人群分别为 17.8% (5 1/ 2 87)、 7.3% (2 1/ 2 87)、 6 .6 % (19/ 2 87)和 5 .9% (17/ 2 87) ;肝癌患者分别为 77.8% (2 8/ 36 )、 19.4% (7/ 36 )、 8.3% (3/ 36 )、 13.9% (4/ 36 ) ,HGV- RNA检出率为 13.9% (5 / 36 )。肝癌患者 HBV、HCV感染率高于健康人群 (P <0 .0 5 ) ;研究对象 HBV、HCV、HGV感染率高于广西及国内其他地方的自然人群 ;HBV、HCV、HGV、HEV感染者患肝癌的危险性 (OR)分别为 :11.5 2 ,3.38,2 .2 6和 0 .85。结论 :广西肝癌高发地区HBV、 HCV、 HGV流行较严重 ,再次证实 HBV感染是肝癌重要危险因素 ,其次是 HCV,不能排除 HGV感染与肝癌发生有关 ,HEV感染与肝癌发生无关 ,肝炎病毒感染是广西肝癌高发重要原因之一。     

聚合酶链反应检测血清及肝脏中丙型肝炎病毒核糖核酸的研究

本文报道了简便快速检测血清及肝脏中丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的聚合酶链反应(PCR)方法。检测单浆献血员61例,其中抗-HCV阳性30例,检出血清HCV RNA阳性者17例;抗-HCV阴性31例,检出血清HCV RNA阳性者9例。检测6例血清HCV RNA阴性、抗-HCV阳性丙型肝炎患者的肝穿标本,发现4例HCV RNA阳性。说明本文所建立的PCR方法是诊断HCV感染的特异性强、敏感度高的一种新方法。检测肝组织内的HCV RNA可提高HCV RNA的检出率。本文还对标本的处理及如何避免假阳性等问题进行了讨论。     

安徽省不同地区分离的五株庚型肝炎病毒5’末端编码区部分核酸序列比较

目的 :探索安徽省庚型肝炎病毒 (HGV)基因的变异。方法 :采用HGV中国株 5’非编码区序列设计引物、逆转录套聚合酶链反应法 ,检测我省不同地区血清中的HGVRNA ,5份阳性产物采用ABIPrism377DNA自动测序仪进行序列测定。结果 :测定的 2 13个碱基中 ,5株安徽HGV分离株与非洲GBV C(u36 380 )序列同源性分别为 88.2 6 %、85 .92 %、88.2 6 %、85 .45 %和 88.2 6 % ,与美国株 (u444 0 2 )序列同源分别为 92 .0 2 %、86 .85 %、86 .6 7%、89.2 0 %和 91.5 5 % ,而我省HGV分离株间的同源性均高于 92 .0 2 5。结论 :我省HGV分离株基因型不同于美国报道的GBV C和HGV亚型     

徐州地区部分人群庚型肝炎病毒感染的检测及分析

目的 了解徐州地区部分人群中庚型肝炎病毒感染状况。方法 以逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｅｅｄ ＰＣＲ）对血清ＨＧＶ ＲＮＡ进行检测。结果 ＨＧＶ ＲＮＡ阳性率在血液透析患者及丙型肝炎病人中分别为５．５Ａ％（１１／３１）,１９．０％（１９／１００）,显著高于自然人群１．３％（１／８０）及职业献血员５．８０％。     

Detection of hepatitis G virus RNA in hepatitis C patients and hepatitis C virus infected hemodialysis patients

AlthoughsensitiveandspecificimmunoassayandmolecularbiologicaltechniquesforthedetectionofthehepatitisA--Evirusesareavailable,theetiologyofasubstantialfractionofpost--transfusionandcommunity--acquiredhepatitiscasesremainsundefined[1],suggestingtheexistenceofadditionalcausativeagents.Anewhumanhepatitisviruswasisolatedbytwoindependentgroups.ThenewvirusisprovisionallydesignatedashepatitisGvirus(HGV)[ZJorGBvirusC(GBV~C)[3'4),whichwasthoughttobetheagentofpartofthenon--A--Ehepatitispatients.Fro…     

某农村人群庚型肝炎病毒感染的流行病学调查

目的 了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在人群中的流行病学特点及临床意义,并比较与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的异同。     

庚型肝炎病毒非结构基因（NS）5区部分序列的一级结构及其变异

测定庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构基因５（ＮＳ５）区部分基因序列。方法从３例献血员，２例肝硬化患者及１例非甲－戊型肝炎患者血清中通过逆转录－套式－聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出长９９４ｂｐ的ｃＤＮＡ序列，ＰＣＲ产物纯化后以双脱氧末端终止法测定其序列。结果所分离的６株ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与国外报道的３株（ＧＢＶ－Ｃ、ＰＮＦ２１６１、Ｒ１０２９１）比较，同源性为８７．２％～９３．９％；６株间同源性为９０．１％～９３．８％。根据所测得的６株ｃＤＮＡ序列推导出其编码的氨基酸序列，与国外发表的３株序列相比，同源性在９３．６％～９８．７％，６株之间为９３．６％～９８．４％。在此区内发现有１６个保守的脯氨酸残基及８个保守的半胱氨酸残基。结论从不同慢性肝脏疾病患者及献血员血清中分离出６株ＨＧＶ，其ＮＳ５区部分序列在核苷酸水平及氨基酸水平均较保守。可依赖此区序列设计诊断试剂     

维持性血液透析患者庚型肝炎病毒感染状况

目的 探讨庚型肝炎病毒合并其他肝炎病毒在血液透析患者中的感染状况。方法 逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测血液透析患者血清ＨＧＶ ＲＮＡ,ＥＬＩＳＡ法检测乙肝对半及ＨＣＶ,ＨＤＶ抗体。结果 ８０例血透患者中,ＨＧＶ阳性１５例（１８．７％）,ＨＣＶ阳性１８例（２２．５％）,ＨＢｓＡｇ阳性２１例（２６．２％）,未检出ＨＤＶ阳性。在１５例感染ＨＧＶ的患者中,７例（４６．７％）同时感染其他肝炎     

Hepatitis G viral RNA co-infection in plasma and peripheral blood mononuclear cells in patients with hepatitis C

Hepatitis G virus( HGV) is identified as a mem-ber of Flaviviridae family and is a single chain( )RNA virus.The transmission route of HGV is sameas that of hepatitis C virus( HCV) ,mainly thoughthe approaches of blood product use and intravenousinjection.Thus,HCV- HGV co- infection becomespossible.There has been domestic report about de-tecting HGV RNA in serum of hepatitis C,but notdetecting it in peripheral blood mononuclear cells( PBMCs) simultaneously.Therefore,some patients…