自体灭活T细胞免疫后诱导Treg下调的机制

目的 探讨自体灭活T细胞免疫注射后诱导体内调节性T细胞(Treg)下调的机制.方法 自体T细胞体外用刀豆蛋白(ConA)刺激活化,照射灭活T细胞给小鼠进行皮下和腹腔免疫(每只小鼠5×106/次),每隔5 d免疫一次,免疫3次后检测小鼠体内Treg的数量及功能;对照组小鼠皮下注射PBS.ELISA法检测血清中抗鼠CD25抗体.免疫小鼠血清分离后经尾静脉注入未免疫小鼠体内,检测受体小鼠Treg的数量及功能变化.结果 免疫小鼠体内CD4+CD25+Foxp3+Treg数量较对照组减少(P<0.01),抑制功能也显著降低(P<0.01),但血清中抗CD25的抗体增加(P<0.01).正常小鼠接受免疫小鼠血清后,Treg的数量和抑制功能下调(P<0.01).结论 采用ConA 活化的自体灭活T细胞免疫,可诱导抗CD25抗体增加,进而减少体内CD4+CD25+Foxp3+ Treg 细胞数量和功能.     

自体灭活T细胞免疫后诱导Treg下调的机制

目的 探讨自体灭活T细胞免疫注射后诱导体内调节性T细胞（Treg）下调的机制。方法 自体T细胞体外用刀豆蛋白(ConA)刺激活化,照射灭活T细胞给小鼠进行皮下和腹腔免疫（每只小鼠5×106/次）,每隔5 d免疫一次,免疫3次后检测小鼠体内Treg的数量及功能;对照组小鼠皮下注射PBS。ELISA法检测血清中抗鼠CD25抗体。免疫小鼠血清分离后经尾静脉注入未免疫小鼠体内,检测受体小鼠Treg的数量及功能变化。结果 免疫小鼠体内CD4+CD25+Foxp3+ Treg数量较对照组减少（P<0.01）,抑制功能也显著降低（P<0.01）,但血清中抗CD25的抗体增加（P<0.01）。正常小鼠接受免疫小鼠血清后,Treg的数量和抑制功能下调（P<0.01）。结论 采用ConA 活化的自体灭活T细胞免疫,可诱导抗CD25抗体增加,进而减少体内CD4+CD25+Foxp3+ Treg 细胞数量和功能。     

体外诱导扩增CD4＋ Treg细胞诱导大鼠心脏移植免疫耐受

目的探讨体外扩增CD4＋ T细胞对大鼠心脏移植的长期存活影响。方法采用磁珠分离供体大鼠CD4＋ T细胞并体外扩增,流式细胞法分析其表型变化,同时输注给受体大鼠后监测心脏移植大鼠的存活及移植心脏的病理变化。结果CD4＋ T细胞体外扩增后细胞表达CD4＋CD25＋,输注给受体大鼠能够明显抑制免疫排斥反应,而对照组免疫排斥反应强烈,证实体外诱导扩增的CD4＋ T细胞能够诱导移植器官的免疫耐受。结论体外诱导扩增的CD4＋ T细胞为iTregs胞,具有诱导器官移植免疫耐受功能。     

自身反应性T淋巴细胞在抗血小板抗体产生中的作用

目的 探讨自身反应性T淋巴细胞在抗血小板抗体产生中的作用.方法 采用亲和层析柱分离血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa,并以此为抗原刺激ITP患者(实验组)和正常人(正常对照组)的单个核细胞,观察单个核细胞的增殖活化情况及IL-6、抗GPⅡb/Ⅲa IgG抗体产生水平.结果 实验组单个核细胞的增殖数量明显多于正常对照组,且增殖的细胞以T细胞为主,CD4 T细胞略高于对照组, 实验组CD28 、CD25 T淋巴细胞均明显高于对照组.在9例增殖的ITP患者单个核细胞培养的上清液中检测到高于正常对照组的IL-6和抗GPⅡb/Ⅲa IgG抗体水平,12例ITP患者中3例T淋巴细胞增生不明显,其IL-6和抗GPⅡb/Ⅲa IgG抗体水平亦很低,对照组虽然有淋巴细胞的增殖,但在体外培养过程中产生的相应抗体含量极低.结论 GPⅡb/Ⅲa 抗原刺激增强了抗GPⅡb/Ⅲa IgG抗体的产生, 对GPⅡb/Ⅲa自身反应的T淋巴细胞在激活B细胞及抗GPⅡb/Ⅲa IgG抗体的产生中起到了重要作用.     

艾迪注射液对胃癌患者术后细胞免疫功能的影响

目的 探讨艾迪注射液对胃癌患者术后细胞免疫功能的影响.方法将40例行胃癌根治术的患者随机分为A、B两组,各20例,另选择40例健康体检者为对照组.B组患者仅给予常规抗炎支持治疗,A组患者术后在常规治疗基础上给予艾迪注射液静脉滴注.比较胃癌组和对照组术前细胞免疫功能[用外周血T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+T细胞及CD4+/CD8+)变化判断细胞免疫功能]及A、B组患者术前与术后14 d的细胞免疫功能.结果 (1)胃癌患者术前CD3+、CD4+、CD8+T细胞所占百分比及CD4+/C8+值与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(2)B组患者术后CD3+、CD4+、CD8+T细胞所占百分比及CD4+/CD8+值与术前比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(3)A、B两组患者术后CD3+、CD4+、CD8+T细胞所占百分比及CD4+/CD8+值间差异有统计学意义(P＜0.01).结论胃癌患者细胞免疫功能处于抑制状态,手术不能逆转胃癌患者的免疫抑制状态,而术后应用艾迪注射液可逆转胃癌患者的免疫抑制状态.     

移植免疫耐受中调节性B细胞与调节性T细胞的依赖性关系研究

目的 探讨在联合抗Tim-1/抗CD45RB抗体诱导的移植耐受中调节性B细胞(Bregs)与调节性T细胞(Tregs)的关系.方法 建立BALB/c小鼠到C57BL/6小鼠的同种胰岛移植长期耐受模型,将长期耐受小鼠(LTS)的B细胞过继输注至接受胰岛移植的B细胞缺陷小鼠(μMT-/-)体内,或加用抗CD25抗体(PC61)去除CD25+ Treg细胞,观察移植物的存活时间,用流式细胞仪检测Foxp3+ Treg数量变化.将CD4+ Foxp3-GFP-T细胞与Bregs细胞联合过继输注RAG小鼠体内,检测Foxp3+GFP+T细胞的扩增情况.建立小鼠皮肤移植模型,在双抗体治疗的同时加用抗CD20抗体祛除B细胞,观察对Tregs数量的影响.结果 继承性转移长期耐受小鼠的Bregs可诱导83.3％的小鼠长期耐受,但加用抗CD25单抗后,胰岛移植物在较短时间(MST=20 d)内全部被排斥;继承性转移长期耐受小鼠Bregs可使Tregs数量明显增加(P＜0.01),并且可诱导CD4+ Foxp-T细胞表达Foxp3;用抗CD20抗体祛除B细胞后,双抗体诱导的皮肤移植受体小鼠体内Tregs数量明显减少(P＜0.01).结论 在双抗体诱导的移植耐受中,Bregs可能通过促进Tregs生成而延长移植物的存活.     

bcr-abl多肽诱导健康人外周血αβ+T细胞克隆性增殖

目的 分析bcr-abl多肽诱导健康人外周血T细胞TCR Vα和TCR Vβ基因选用和克隆性增殖情况,了解bcr-abl多肽相关的αβ+T细胞克隆.方法 利用T细胞液体培养法,应用bcr-abl多肽(KQSSKALQR)联合IL-2+抗CD3单抗+抗CD28单抗体外诱导T细胞(HLA-A0201限制性)扩增,同时设不...     

调节性T细胞在烟熏诱导的小鼠肺气肿模型中的变化及意义

目的:研究CD4~+Foxp3~+调节性T细胞在烟熏诱导的小鼠肺气肿模型中的变化并探讨其意义。方法:6-8周龄C57BL/6FoxP3-GFP knock-in小鼠18只,按照随机对照方法分为吸烟组(S组)和非吸烟组(NS组),将吸烟组小鼠暴露自制烟熏箱里,每天烟熏4h,每周烟熏5d,连续24周建立小鼠肺气肿模型,正常对照组小鼠置入空气清洁的房间。24周后取两组小鼠的肺组织进行HE染色评价肺气肿,同时通过流式细胞术检测小鼠支气管肺泡灌洗液、肺组织、纵隔淋巴结、脾脏中Treg细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、CD4~+CD69~+T细胞、CD8~+CD69~+T细胞的数量变化。结果:与非吸烟鼠相比,烟熏24周后吸烟鼠肺组织的病理染色可见典型肺气肿表现;吸烟鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液及纵隔淋巴结中Treg细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞及其活化细胞(即CD4~+CD69~+T细胞和CD8~+CD69~+T细胞)的数量明显高于非吸烟鼠,差异有统计学意义(P<0.05),而上述细胞在两组小鼠的脾脏中的数量无明显差异(P>0.05)。结论:吸烟鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液及纵隔淋巴结中Treg细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞及其活化细胞的数量明显高于非吸烟鼠,提示小鼠肺气肿模型中存在将累及肺组织及其周围组织的异常炎症反应,而淋巴细胞可能在其中发挥了重要作用,而由于Treg细胞相对不足或功能障碍使其不能正常发挥免疫调节作用。     

超抗原SEB诱导的抗排斥反应中NKT细胞的重要作用

目的 探讨超抗原SEB（staphylococcal enterotoxin B）诱导的抗排斥反应作用中CD4^＋CD16^＋NKT细胞作用。方法 Lewis大鼠作为受体，F344大鼠作为供体。实验受体鼠在角膜移植前7天用缝线法处理角膜，建立高危角膜移植的模型。高危受体大鼠被随机分成7组，移植前5个实验组大鼠腹腔分别注射0．2ml不同浓度的SEB25、50、75、100μg／kg和50μg／kg SEB并结膜下注射地塞米松0．1ml（2．0mg／m1），每天1次，连续7天。异种移植对照组腹腔注射0．2ml生理盐水；同种移植对照组为（Lewis对Lewis大鼠）角膜移植。术后用裂隙灯显微镜观察记录角膜移植片的浑浊、水肿和新生血管指标，以移植排斥反应指数RI判断移植后存活天数；混合淋巴细胞培养（MRL）和迟发型过敏反应判断淋巴细胞对异原性抗原的反应能力和反应细胞，用流式细胞技术检测cD4^＋T、CD8^＋T和CD4^＋CD16^＋NKT细胞亚群数量，用ELISA方法检查IL-2、IL-10的水平。结果 腹腔注射50、75μg/kg SEB组的大鼠，移植片分别存活了10．7天和12．5天，比移植对照组延长时间3～5天（P≤0．05）；75μg／kg SEB组大鼠的淋巴细胞与ConA和外源性抗原的反应性分别由A值1．51下降到0．64和从0．83下降到0．47，并伴随迟发型过敏反应能力下降。在脾脏、下颌淋巴结中随移植片存活时间延长CD4^＋T、CD8^＋T细胞数量减少，CD4^＋CD16^＋NKT细胞数量明显增加。当SEB与糖皮质激素共同使用时，抗排斥反应作用消失，NKT细胞数量也随之下降，NKT细胞的增加伴随IL-2的降低和IL-10的增加。结论 超抗原SEB能活化NKT细胞并使高危角膜移植后移植片生存时间的延长。SEB诱导的抗排斥作用与全身性降低CD4^＋T、CD8^＋T细胞的数量和增加CD4^＋CD16^＋NKT细胞的数量有关；SEB活化的CD4^＋CD16^＋NKT细胞可能是Th2偏移的细胞，它们与IL-10共同参与了SEB诱导的免疫耐受和抗排斥作用。     

树突状细胞单克隆抗体对大鼠心脏移植排斥反应的免疫抑制作用

探讨树突状细胞单克隆抗体（DC McAb）对大鼠心脏移植排斥反应的免疫抑制效果及其对细胞免疫和体液免疫的影响。方法：以大鼠同种异体腹腔心脏移植为模型（Wistar→SD），应用含DC McAb的WZD腹水按1∶25（McAb 25组）和1∶50（McAb 50组）稀释，心脏移植后受体腹腔注射给药7?d，1?ml/d，观察移植心脏存活时间。另设非移植组，相同方法给药4～5?d后处死大鼠，取脾观察DC McAb对大鼠脾淋巴细胞增殖、白细胞介素 2（IL 2）生成活性及绵羊红细胞（SRBC）免疫后抗体形成细胞功能的影响。结果：受体体内短期应用DC McAb，McAb 25组大鼠移植心脏存活时间为（19.37±2.93）d，McAb 50组为（19.13±2.25）d，而生理盐水对照组（NS组）为（8.75±1.28）d(P均＜0.01)；两McAb组脾淋巴细胞增殖、IL 2生成活性及抗SRBC抗体形成能力均明显低于对照组（P均＜0.01）。结论：DC McAb能够明显延长大鼠移植心脏存活时间，对大鼠脾淋巴细胞增殖、IL 2生成活性及抗体形成细胞功能均有明显抑制作用。     

吸烟对大鼠免疫系统功能的影响

目的 探讨吸烟对大鼠血清CD3、CD4、CD8 T淋巴细胞和IgA、IgG、IgM及补体含量影响的时间效应.方法 雄性健康清洁级Wistar大鼠30只,随机分为对照组和烟草烟雾暴露组,每组15只大鼠.对照组暴露于正常饲养环境,烟草烟雾暴露组每日暴露于烟草烟雾环境30 min,每日2次.两组大鼠分别于烟草烟雾暴露时（T0）、烟草烟雾暴露1个月（T1）、烟草烟雾暴露2个月（T2）、烟草烟雾暴露3个月（T3）、烟草烟雾暴露4个月（T4）、烟草烟雾暴露5个月（T5）和烟草烟雾暴露6个月（T6）时采内眦静脉血,检测血清CD3、CD4、CD8 T淋巴细胞的含量,测定IgA、IgG、IgM、C4、C3含量.结果 烟草烟雾暴露组CD3、CD4T淋巴细胞自T3时逐渐下降（P＜0.05）,CD8 T淋巴细胞自T4时逐渐上升（P＜0.05）,对照组各指标各时点间均无明显差异.与对照组比较,烟草烟雾暴露组T3～T6时CD3和CD4 T淋巴细胞含量均明显减少（P＜0.05）,CD8 T淋巴细胞含量均明显增多（P＜0.05）.T4～T6时,对照组IgG、IgM和C4含量均明显高于烟草烟雾暴露组（P＜0.05）.烟草烟雾暴露组IgG、IgM和C4、C3自T4时逐渐下降;对照组各指标各时间点间均无明显差异.结论 烟草烟雾暴露损伤细胞免疫的时间窗为3个月.短期吸烟对体液免疫功能影响不大,长期可致体液免疫功能逐渐受损,具体机制尚需进一步研究证实.     

卵巢癌6B11抗独特型微抗体诱导抗肿瘤免疫应答的体外实验

目的:研究6B11抗独特型微抗体在体外抗肿瘤免疫情况,探讨其作为卵巢癌疫苗的可能性.方法:分离人外周血单个核细胞,用6B11抗独特型微抗体刺激并培养.采用3HTdR参入法、51Cr细胞毒实验分别观察淋巴细胞增殖情况和细胞毒作用,ELISA方法测定用6B11微抗体刺激后培养上清液中IFN-γ水平的变化,流式细胞术检测微抗体刺激后淋巴细胞表型的改变.结果:6B11抗独特型微抗体可以刺激人外周血淋巴细胞的增殖,最佳刺激剂量为20 mg/L;并对OC166-9表达阳性的卵巢癌细胞系有细胞毒作用;用6B11微抗体刺激后培养上清液中IFN-γ水平升高;淋巴细胞的表型表现为,疫苗刺激后CD3 的细胞明显增高, CD4 的细胞也增加, CD8 的细胞增加不明显.CD4 /CD8 的比率明显增高,差异有统计学意义.结论:6B11抗独特型微抗体在体外可诱导机体产生特异体液免疫和细胞免疫反应,为抗独特型微抗体疫苗的临床应用提供了一定的实验依据.     

高山红景天多糖对小鼠的免疫调节作用

［目的］探讨高山红景天中提取的红景天多糖对正常小鼠的免疫调节作用．［方法］以溶血空斑 试验确定最佳用药剂量后,采用同位素法结合单克隆抗体在体内外检测体液免疫、细胞免疫及巨噬细胞 的吞噬功能．［结果］红景天多糖可明显增加小民特异的抗体分泌细胞数,在７５ ｍｇ ／（ｋｇ·ｄ）体内剂量下, 可增强迟发型超敏反应强度、异型小鼠的混合淋巴细胞反应及巨噬细胞的吞噬功能,降低白细胞介素２ 的活性,辅助性Ｔ细胞百分率及辅助性Ｔ细胞／抑制性Ｔ细胞比值亦降低．［结论］红景天多糖为很有 前途的免疫调节剂。     

吸毒成瘾者免疫功能变化的研究

目的：测定吸毒者体液免疫和细胞免疫的各项指标,从而研究其免疫功能的改变。方法：取25例吸毒者及28例健康成人外周血,用ELISA法和免疫比浊法测其血清中抗体和补体;免疫荧光法和酶联免疫斑点法(ELISPOT)测其T细胞亚群和Th细胞亚群。结果：吸毒者IgG增高,C3下降,IgA、IgM和IgE与正常人无显著差异。吸毒者CD3、CD4^ 、CD4^ ／CD8^ 、Th1^ 和Th1／Th2低于正常人,而CD8^ 、CD20^ 和Th2与正常人相差不大。淋巴细胞转化试验吸毒者显著低于正常对照组。结论：吸毒者细胞免疫功能降低,而体液免疫变化不大。     

2型糖尿病肾病患者免疫相关因素分析

目的:探讨2型糖尿病肾病(DN)患者血液中细胞免疫、体液免疫的变化。方法:采用流式细胞术和免疫比浊法测定42例糖尿病肾病患者血液细胞免疫参数CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、B细胞和NK细胞,及血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)、补体(C3、C4)等体液免疫参数,并与50例2型糖尿病无肾病者及46例健康体检者比较。结果:2型糖尿病无论是否并发肾病,与健康对照组比较CD3、CD4、CD4/CD8、B、NK显著性减低(P<0.01),IgA、IgM、C3、C4显著升高(P<0.01);并发肾病组C4较单纯糖尿病组显著增高(P<0.01)。结论:2型糖尿病肾病患者存在细胞免疫和体液免疫异常,应提高患者免疫功能。     

异种黑色素细胞疫苗诱导小鼠抗恶性黑色素瘤免疫反应的机理研究

目的　研究异种黑色素细胞疫苗诱导小鼠抗恶性黑色素瘤免疫反应的机理。方法　制备异种黑色素细胞疫苗 ,免疫小鼠。采用间接 EL ISA法检测小鼠抗肿瘤抗体滴度及抗体亚型 ,纯化免疫球蛋白及进行体外抗肿瘤增殖 ,采用 Western blot法分析交叉抗原蛋白质。接种恶性黑色素瘤 ,观察肿瘤生长 ,采用免疫细胞去除法分析NK细胞及 T细胞亚群对疫苗抑瘤效应的影响。结果　异种疫苗免疫后 2周小鼠体内出现抗自身肿瘤抗体 ,产生的抗体以 Ig G为主 ,抗体认别的猪眼黑色素细胞及恶性黑色素瘤细胞交叉抗原为相对分子质量达 180× 10 3的蛋白质 ,纯化的免疫球蛋白在体外能抑制恶性黑色素瘤细胞增殖。异种疫苗诱导特异性保护性免疫反应使 90 %小鼠恶性黑色素瘤生长受到抑制 ,去除 NK细胞不影响疫苗抑瘤效应 ,去除 CD4 + T细胞使疫苗抑瘤效应消失 ,去除CD8+ T细胞 70 %小鼠恶性黑色素瘤生长仍受到抑制。结论　异种黑色素细胞疫苗诱导特异性体液免疫及细胞免疫反应 ,抑制恶性黑色素瘤的生长 ,CD4 + T细胞在这一过程中发挥了关键性作用。     

雷公藤挥发油对小鼠免疫功能的影响

观察雷公藤挥发油对小鼠免疫功能的影响,发现给药1周后,其可减少脾脏有核细胞数,减少 PFC 和 RFC 数目,抑制脾细胞对 ConA 诱导 T 细胞增殖的反应性,减轻DTH。这说明雷公藤挥发油对小鼠体液免疫和细胞免疫均有明显的抑制作用。     

乙肝病毒前C基因突变株感染者细胞免疫功能的观察

目的 检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ基因突变体感染者的细胞免疫水平,探讨细胞免疫与前Ｃ基因突变的关系。方法 用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术从６０名慢性乙肝患者中筛选出ＨＢＶ前Ｃ基因突变株感染者,ＨＢＶ野毒株感染者及ＨＢＶ已清除者各５人,用血源性ＨＢｓＡｇ和ＣＤ＾４＋Ｔ辅助细胞识别的抗原表位ＨＢｃＡｇ５０－６９合成多肽进行特异性淋巴结转移转化实验,结果 ＨＢＶ前Ｃ基因突     

人参茎叶总皂甙对原发性免疫缺陷大鼠(SHR)的免疫调节作用

应用空斑形成试验,花结形成试验及ConA诱导脾细胞增殖试验等测定了人参茎叶总皂甙对SHR大鼠的免疫调节作用。结果人参总皂甙在体内能使SHR大鼠脾细胞空斑形成值显著增加,对胸腺细胞的花环形成值有微弱作用,在体外对conA诱导的脾细胞增殖反应有明显促进作用,提示人参茎叶总皂甙在体内对萎缩性胸腺所致的细胞免疫功能缺陷作用甚微,但能激活脾脏内T细胞增殖,从而调节SHR大鼠的体液免疫功能。本文是在“人参茎叶总皂甙对自发性高血压大鼠免疫功能和高血压的影响一文的基础上,又增添了人参茎叶总皂甙不同给药途径对SHR大鼠免疫功能影响的观察。人参茎叶总皂甙对SHR大鼠免疫调节的给药途径以灌服最佳,皮下注射次之,腹腔注射较差。给药最适浓度为150mg/kg/日。