血管活性肠肽对人胰腺癌细胞生长的自分泌调节作用及其机制的研究

采用３Ｈ－胸腺嘧啶掺入研究了血管活性肠肽（ＶＩＰ）对我院所建一株人胰腺癌细胞生长的影响，并对该细胞株进行ＶＩＰ受体、受体后细胞内介质ｃＡＭＰ和多胺产生的研究。发现ＶＩＰ在１０－８Ｍ和１０－７Ｍ对具有ＶＩＰ受体的人胰腺癌细胞有明显促生长作用，且成浓度依赖关系，这种作用可被其受体拮抗剂（４－Ｃｌ－Ｄ－ｐｈｅ６，Ｌｅｕ１７）ＶＩＰ所阻断；ＶＩＰ能显著促进本株人胰腺癌细胞细胞内ｃＡＭＰ及多胺的产生，表明ＶＩＰ的促生长作用可能与细胞内ｃＡＭＰ和多胺的生物合成增加有关；本株细胞在培养过程中可向培养基中分泌一定量的ＶＩＰ，ＶＩＰ抗体能抑制其在无血清培养基中生长，提示ＶＩＰ对本株人胰腺癌细胞的生长有自分泌调节作用。     

血管利钠肽减弱去甲肾上腺素对心肌生长的刺激作用

本实验目的在于研究血管利钠肽（ Ｖ Ｎ Ｐ）对去甲肾上腺素（ Ｎ Ｅ）促心肌生长作用的影响,并对其机制进行探讨。分离、培养乳鼠心肌细胞,完全随机分为三组:对照组、 Ｎ Ｅ组和 Ｖ Ｎ Ｐ＋ Ｎ Ｅ组。以 Ｍ Ｔ Ｔ法和总蛋白含量测定法观察各组细胞的生长情况。进而采用放射免疫方法研究了 Ｖ Ｎ Ｐ对细胞内ｃ Ｇ Ｍ Ｐ,ｃ Ａ Ｍ Ｐ水平的影响。结果发现: Ｎ Ｅ（１０－ ７ ｍ ｏｌ／ Ｌ～１０－ ５ ｍ ｏｌ／ Ｌ）可以使培养的乳鼠心肌细胞 Ｍ Ｔ Ｔ Ｏ Ｄ值显著升高（ Ｐ＜ ０．０５ ｖｓ 对照组）,并且具有剂量依赖性。 Ｖ Ｎ Ｐ（１０－ ７ ｍ ｏｌ／ Ｌ）可以显著降低 Ｎ Ｅ（１０－ ６ ｍ ｏｌ／ Ｌ） 刺激的心肌细胞 Ｍ Ｔ Ｔ Ｏ Ｄ值和细胞内总蛋白含量（ Ｐ＜０．０５ ｖｓ Ｎ Ｅ组）。对照组和 Ｎ Ｅ组细胞内ｃ Ｇ Ｍ Ｐ,ｃ Ａ Ｍ Ｐ水平无显著差异,而 Ｖ Ｎ Ｐ（１０－ ７ ｍ ｏｌ／ Ｌ）能升高细胞内ｃ Ｇ Ｍ Ｐ水平,降低ｃ Ａ Ｍ Ｐ水平（ Ｐ＜ ０．０５ ｖｓ对照组、 Ｎ Ｅ组）。提示 Ｖ Ｎ Ｐ能减弱 Ｎ Ｅ对心肌生长的刺激作用,其机制可能与ｃ Ｇ Ｍ Ｐ,ｃ Ａ Ｍ Ｐ等信号转导分子有关。     

家兔十二指肠粘膜碳酸氢盐分泌机理的研究

本实验旨在探讨ＨＣＯ３－分泌的调节及其转运的离子通道。取大白兔近端十二指肠，置于尤氏小室间（ＵｓｓｉｎｇＣｈａｍｂｅｒ），测定血管活血肠肽（ＶＩＰ）、前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２），二丁酰环磷腺甙（ｄｂ－ｃＡＭＰ）及电刺激（ＥＦＳ）对碳酸氢盐（ＨＣＯ３－）分泌量、电流（Ｉｓｃ）和电位差（ＰＤ）的影响，以及缺氧、缺氯、缺钠和加入ＤＩＤＳ（４，４－ｄｉｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎｏｓｔｉｌｂｅｎｅ－２，２’－ｄｉｓｕｌｆｏｎｉｃａｃｉｄ）、哇巴因（Ｏｕａｂａｉｎ）和神经毒素（Ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ，ＴＴｘ）后对上述指标的影响。结果示，ＶＩＰ、ＰＧＥ２、ｄｂ－ｃＡＭＰ和ＥＦＳ均刺激ＨＣＯ３－分泌和Ｉｓｃ、ＰＤ的升高，而缺氧、缺钠和哇巴因呈抑制作用。ＤＩＤＳ和缺氯则完全抑制由ＰＧＥ２引起的刺激作用，部分抑制（５０％）由ＶＩＰ的刺激作用，而对ｄｂ－ｃＡＭＰ则无抑制作用。ＴＴＸ抑制由ＥＦＳ引起的作用。ＨＣＯ３－分泌与ＶＩＰ、ＰＧＥ２及ｄｂ－ｃＡＭＰ引起的细胞内ｃＡＭＰ水平不成正相关。     

血管活性肠肽受体在大鼠肝脏贮脂细胞的表达及其在肝纤维化中的意义

在特异引物引导下，用反转录ＰＣＲ方法扩增出预期长度的大鼠血管活性肠肽受体（ｖａｓｏａｃｔｉｖｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｐｔｉｄｅｒｅｃｅｐｔｏｒＶＩＰ－Ｒ）的ｃＤＮＡ片断（７５０ｂｐ），随后该ｃＤＮＡ片段与３２Ｐ－标记的ＶＩＰ－Ｒ探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，结果证实大鼠肝脏贮脂细胞有ＶＩＰ－Ｒ的ｍＲＮＡ表达。放射受体交联试验表明贮脂细胞上存在ＶＩＰ－Ｒ的蛋白，分子量约４０ＫＤ。不同浓度的ＶＩＰ（０．１５ｎｍ－１５０ｎｍ）作用于培养的大鼠贮脂细胞，能显著抑制细胞Ⅰ型胶原的分泌并呈量效关系（ｒ＝－０．９８９，ｎ＝６，Ｐ＜０．００１）。ＶＩＰ受体拮抗剂［Ｄ－Ｐ－ｃｌ－Ｐｈｅ６，Ｌｅｕ１７］－ＶＩＰ能减弱ＶＩＰ这一作用。这些结果表明：大鼠贮脂细胞上存在ＶＩＰ－Ｒ；ＶＩＰ通过ＶＩＰ－Ｒ影响贮脂细胞的胶原分泌并可能在肝纤维化的发病过程中起一定的调节作用。     

血管活性肠肽与消化系肿瘤

血管活性肠肽对消化系肿瘤细胞的增殖、分化有调节作用，在胃癌、结肠癌、胰腺癌细胞膜上存在特异性ＶＩＰ受体，ＶＩＰ对它们的增殖，分化调节有促进或抑制效应，这与ＶＩＰ作用于受体后引起细胞内ｃＡＭＰ水平，ＯＤＣ活性，ｃ－ｍｙｃ基因表达改变有关。     

双丁酰环腺苷酸对体外HT29细胞增殖的调节

采用酸性磷酸酶细胞原位计数及流式细胞仪（ＦＣＭ）技术，观察了双丁酰环腺苷酸（ｄｂ－ｃＡＭＰ）对体外人结肠腺癌细胞系（ＨＴ２９）增殖的影响。结果：ｄｂ－ｃＡＭＰ在１０－４～１０－９Ｍ范围内可促进细胞增殖，尤其在１０－６～１０－８Ｍ时，ｄｂ－ｃＡＭＰ组ＯＤ值分别为１．５０±０．１１，１．５８±０．０７，１．５７±０．１２，分别为对照组的１０．３０％，１６．１８％和１１．７６％，差异显著（Ｐ＜０．０５或０．０１）。ｄｂ－ｃＡＭＰ浓度为１０－３Ｍ时，则抑制细胞增殖，至培养第５天，ｄｂ－ｃＡＭＰ组ＯＤ为１．０５±０．１３，对照组为１．２３±０．１７，有显著差异（Ｐ＜０．０５）。ＦＣＭ结果提示，ｄｂ－ｃＡＭＰ对细胞的抑制作用，与延长细胞Ｇ１／Ｓ期有关。结果表明，ｄｂ－ｃＡＭＰ对ＨＴ２９细胞增殖有双向调节作用。作者还对其作用机制进行了探讨。     

TSH受体抗体对甲状腺细胞功能的调控及途径

ＴＳＨ受体抗体（ＴＳＡｂ）是Ｇｒａｖｅｓ病的主要病因子，与甲状腺细胞上ＴＳＨ受体结合后，通过不同的信号途径调节甲状腺细胞生长，分化和激素合成及分泌，参与ＴＳＡｂ调节作用的信号途径包括腺苷酸环化酶（ＡＣ）－ｃＡＭＰ，磷脂酶Ｃ－Ｃａ＾２＋和磷脂酶Ａ２－ＡＡ等，其中ＡＣ－ｃＡＭＰ和磷脂酶Ａ２－ＡＡ参与甲状腺细胞生长的调节，磷脂酶Ｃ－Ｃａ＾２＋与甲状腺激素合成密切相关，通过激活不同的信号途径来区分ＴＳＡｂ     

血小板衍生生长因子和钙拮抗剂对大鼠肝细胞胶原合成及？…

目的：观察血小板衍生生长因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｄｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）和钙拮抗剂（Ｃａｌｃｉｕｍａｎｔａｇｏｎｉｓｔ，Ｇａ－Ａ）对原代培养大鼠肝细胞胶原合成及细胞内游离钙浓度（Ｃａ＾２＋）ｉ）的影响，方法：应用＾３Ｈ－脯氨酸掺入率和Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光示踪法分别测定细胞内胶原含量及（Ｃａ＾２＋）结果：ＰＤＧＦ能促进细胞内胶原合成，提高肝内（Ｃａ＾２＋）ｉ且与浓度呈正相     

抗恶性疟原虫有性期单克隆抗体的制备和鉴定

以培养的恶性疟原虫ＮＦ５４（３Ｄ７）株配子体蛋白抽提液及我国云南现场采集的恶性疟原虫细胞骨架分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，以ＩＦＡ法筛选出８株抗恶性疟原虫有性期ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株。经免疫球蛋白类别鉴定，６株为ＩｇＧ１（Ｍ２Ａ１０Ｃ９、Ｍ２Ｃ１Ｂ８、Ｍ４Ｃ７Ｂ１０、Ｍ４Ｇ１２Ｃ１、Ｍ５Ｂ７Ｅ６和Ｍ６Ｅ１Ｇ１１），２株为ＩｇＭ（Ｍ４Ｄ７Ｆ７和Ｍ６Ｆ４Ｄ６）。其中３株ＭｃＡｂｓ（Ｍ４Ｃ７Ｂ１０、Ｍ４Ｄ７Ｆ７和Ｍ６Ｅ１Ｇ１１）的靶抗原定位于配子体以及大滋养体和裂殖体期无性体原虫；其余５株仅定位于配子体。经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹试验，ＭｃＡｂ所识别的蛋白区带各异（１６－１２０ｋＤ），与已发现的有性期特异性抗原相比较，３２ｋＤ抗原国内外尚未报道。各株ＭｃＡｂ与猴疟（Ｐ．ｃｙｎｏｍｏｌｇｉ）红内期、鸡疟（Ｐ．ｇａｌｉｎａｃｅｕｍ）子孢子和杜氏利什曼原虫前鞭毛体均无交叉反应。     

GRH调节的AC－cAMP系统对垂体生长激素瘤发病机制中的影响

在２１例体外培养的人生长激素（ＧＨ）瘤细胞研究了生长激素释放激素（ＧＲＨ）对细胞内ｃＡＭＰ水平与ＧＨ分泌的影响和腺苷酸环化酶－环磷酸腺苷（ＡＣ－ｃＡＭＰ）系统激动剂霍乱毒素（ＣＴ）、Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ和双丁酰ｃＡＭＰ（ｄｂｃＡＭＰ）对ＧＨ分泌的凋节作用及其相互关系。结果显示：分别有６１．９％（１３／２１）和５７．１／（１２／２１）的患者ＧＨ瘤细胞的ＧＨ分泌对ＧＲＨ和ＣＴ的刺激个敏感；而Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ和ｄｂｃＡＭＰ可使８８．９％（８／９）和１００％（５／５）患者的垂体瘤细胞ＧＨ分泌显著增加（Ｐ＜０．０５）；在９例瘤细胞中有４例ＧＲＨ可使细胞内ｃＡＭＰ水平升高至对照的１３４．２％～７２４．３％（Ｐ＜０．０５），在另５例ＧＲＨ对ｃＡＭＰ水平无影响。以上结果说明，多数ＧＨ瘤细胞存在着ＧＲＨ受体和（或）受体后鸟苷酸调节蛋白     

GRH调节的AC—cAMP系统对垂体生长激素瘤发病机制中的影响

在２１例体外培养的人生长激素（ＧＨ）瘤细胞研究了生长激素释放激素（ＧＲＨ）对细胞内ｃＡＭＰ水平与ＧＨ分泌的影响和腺苷酸环化酶－环磷酸腺苷系统激素剂霍乱毒素（ＣＴ）、Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ和双丁酰ｃＡＭＰ（ｄｂｃＡＭＰ）对ＧＨ分泌的调节作用及其相互关系。说明了多数ＧＨ瘤细胞存在着ＧＲＨ受体和受体后鸟苷酸调节蛋白（Ｇｓ）的缺陷。     

鼠疫菌外膜蛋白单克隆抗体制备及初步应用

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，蛋白免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）等技术，对鼠疫菌外膜蛋白（ＯＭＰ）组成成分及免疫学特性进行了研究、在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上，鼠疫菌锡林郭勒高原型较其他型强、弱毒菌少一条亚基分子量为３２ＫＤ的蛋白带。以ＥＶ７６ｐ、ＥＶ苗的ＯＭＰ为免疫原，所获抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，认为ＯＭＰ具有良好的免疫原性及免疫反应性。采用杂交瘤技术，得到七株抗鼠疫菌的ＭｃＡｂ。四株为ＩｇＧ，三株为ＩｇＭ。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定。四株ＭｃＡｂ抗ＯＭＰ的分子量，４Ｇ５株为２１０ＫＤ，３Ｂ９、ＩＤ１０株为４０ＫＤ，２Ｃ６株为１０ＫＤ。以七株ＭＣＡｂ对鼠疫菌强、弱毒株３２株作全菌体ＥＬＩＳＡ进行鼠疫菌分型的初步研究发现，３Ｂ９株ＭｃＡｂ与２４株强毒菌发生阳性反应，而不与弱毒菌反应；１Ｄ１０株与锡型及弱毒菌不发生反应，与其它强毒菌发生阳性反应。     

红细胞抗高血压因子和川芎嗪对大鼠血管平滑肌cGMP含量的影响

观察红细胞抗高血压因子（ＡＨＦ）和中药川芎嗪（ＴＭＰ）对血管平滑肌细胞环一磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）产生的影响。方法实验用８～１０周的Ｗｉｓｔａｒ大鼠（ｎ＝６）。分离主动脉（Ａ）及肠系膜动脉（ＭＡ），其中Ａ一半去内皮，另一半保留内皮完整，将肌条分别制备成匀浆，用放射免疫分析法测定ｃＧＭＰ含量。结果ＡＨＦ（１０－５ｇ／ｍｌ）和ＴＭＰ（１０－４ｍｏｌ／Ｌ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）ｃＧＭＰ生成有显著刺激作用。在ＡＨＦ作用下，Ａ组有、无内皮组和ＭＡ组ｃＧＭＰ含量分别是对照组的１．２５倍，１．２６倍和１．７２倍；在ＴＭＰ作用下的实验组ｃＧＭＰ含量分别为对照组的１．６０倍，１．５０倍和１．５２倍，与对照组比较差异均有显著性（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．００１）。结论ＡＨＦ和ＴＭＰ均能升高Ａ和ＭＡｃＧＭＰ水平，且ＡＨＦ对阻力血管的影响明显高于容量血管，而ＴＭＰ对两种血管的ｃＧＭＰ水平影响无明显差异，ＡＨＦ与ＴＭＰ对血管ｃＧＭＰ的增高作用似乎与内皮无关。     

甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌对氨基糖苷抗生素耐药机制的研究

为研究甲氧要耐药金黄色球菌（ＭＲＳＡ）对氨基糖苷类抗生素的耐药机制，应用氨基醭 抗生素耐药谱推测法、核素标记分析法、Ｓｏｕｔｈｅｍ印迹和斑点杂交试验对１００株ＭＲＳＡ进行了耐药研究。结果：根据细菌对氨基糖苷抗生素的耐药谱，１００株ＭＲＳＡ可以分成４类，６５株细菌产生ＡＡＣ（６）－ＡＰＨ（２）钝化酶，２４株产生ＡＡＣ（６）－ＡＰＨ（２）＋ＡＰＨ（３），１０株产生ＡＡＣ（６），还有１株产生ＡＡＣ（６）     

低硒低维生素E诱导肝细胞凋亡及cAMP和细胞内Ca2+的作用

目的 研究低硒（Ｓｅ）低维生素Ｅ（ＶＥ）能否诱导大鼠肝细胞凋亡及ｃＡＭＰ和细胞内Ｃａ＾２＋所起的作用。方法 以天然的和人工半合成的低Ｓｅ低ＶＥ饲料喂养大鼠１７周,采用流式细胞术检测肝细胞凋亡,采用放免法检测ｃＡＭＰ含量,Ｆｕｒａ－２负载荧光分光光度法测定细胞内Ｃａ＾２＋含量。结果 与补Ｓｅ和ＶＥ组大鼠相比,低Ｓｅ低ＶＥ组大鼠肝细胞凋亡显著增加;ｃＡＭＰ含量明显升高;细胞内Ｃａ＾２＋含量明显升高。结     

血管紧张素Ⅱ诱导肾小球系膜细胞纤维连接蛋白产生？…

目的：观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激后系膜细胞ＡｎｇⅡ受体基因表达和分泌纤维连接蛋白（ＦＮ）的情况，方法：从６日龄人胎肾培养系膜细胞，经ＡｎｇⅡ刺激后用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测胎肾系膜细胞ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ的表达情况，分别用ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测系膜细胞产生的ＦＮ和基因表达。结果：（１）经１０＾－８，１０＾－７，１０＾－６和１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ的Ａ     

转染血管紧张素Ⅱ受体（AT1）反义核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的 …

目的：评价转染ＡＴ１我核菩酸（ＡＴ１Ａ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）血管紧张Ⅱ（ＡｎｇⅡ）受体亚型ｍＲＮＡ表达、蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）、丝裂素活化蛋白激酶Ｐ＾３８（Ｐ＾３８ＭＡＰＫ）蛋白表达,及蛋白核酸合成的作用。方法：ＲＴ－ＰＣＲ克隆ＡＴ１ ｃＤＮＡ序列（４７６ｂｐ）,将克隆的ＡＴ１ ｃＤＮＡ反向插入ＰｃＤＮＡ３．１,构建一完整的含ＡＴ１Ａ的质粒（ＰＡＴ１Ａ）,测序鉴定。转染培养的大鼠ＶＳＭＣｓ     

雷公藤内酯醇对T细胞功能的影响与cAMP／PKA的关系

目的：观察雷公藤内酯醇是否能够影响淋巴细胞内环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）水平及依赖ｃＡＭＰ蛋白激酶（ＰＫＡ），探讨雷公藤内酯醇影响了Ｔ细胞功能的作用机制。 方法：以人外周血Ｔ细胞为研究对象，分别采用放射免疫法和酶底物显色法测定细胞内ｃＡＭＰ水平及ＰＫＡ酶活性。 结果：（１）雷公藤内酯醇能够明显增加Ｔ细胞内ｃＡＭＰ水平，同时细胞内ＰＫＡ酶活性也明显增强，并且与雷公藤内酯醇的浓度密切相关；（２）应用腺苷酸环     

细胞因子对正常甲状腺细胞cAMP生成的调节

目的　本文研究白介素１（ Ｉ Ｌ１） 、干扰素α（ Ｉ Ｆ Ｎα） 和肿瘤坏死因子（ Ｔ Ｎ Ｆ） 对人正常甲状腺细胞环磷酸腺苷（ｃ Ａ Ｍ Ｐ） 生成的影响。方法　运用人甲状腺细胞原代培养技术和放免分析技术，检测不同种类细胞因子刺激甲状腺细胞引起的ｃ Ａ Ｍ Ｐ 释放状况。结果　（１） Ｉ Ｌ１ 、 Ｉ Ｆ Ｎα和 Ｔ Ｎ Ｆ 均可促进甲状腺细胞基础ｃ Ａ Ｍ Ｐ 的释放。（２） Ｉ Ｌ１ 在１０ － ３ ～１０３ Ｕ／ｍｌ 的浓度范围内，可明显增强促甲状腺激素（ Ｔ Ｓ Ｈ） 对甲状腺细胞生成ｃ Ａ Ｍ Ｐ 的刺激效应，其中以１０ － １ Ｕ／ｍｌ 的 Ｉ Ｌ１ 作用最强。（３） Ｉ Ｆ Ｎα对 Ｔ Ｓ Ｈ 刺激甲状腺细胞ｃ Ａ Ｍ Ｐ 的生成具有双向调节作用，１０ － ２ ～１ Ｕ／ ｍｌ 可增加ｃ Ａ Ｍ Ｐ 释放，而１０３ Ｕ／ｍｌ 时则抑制 Ｔ Ｓ Ｈ 的刺激效应。（４）１０ ～１０４ Ｕ／ｍｌ 的 Ｔ Ｎ Ｆ 使 Ｔ Ｓ Ｈ 刺激甲状腺细胞生成ｃ Ａ Ｍ Ｐ 的量显著减少。结论　多种细胞因子参与甲状腺功能的调节，并可能与自身免疫性甲状腺疾病的发生发展过程有一定关联。     

TSH受体基因突变与自主性功能性甲状腺腺瘤

综述了促甲状腺激素（ＴＳＨ）受体突变在自主性功能性甲状腺腺瘤（ＡＦＴＮ）发病中的作用。ＴＳＨ受体基因的体细胞性突变可使ＴＳＨ受体发生构成型激活改变,甲状腺细胞内腺苷环化酶－ｃＡＭＰ系统持续激活,从而使该甲状腺细胞的生长、分化及功能处于自主状态,进而形成ＡＦＴＮ。