鼠疫菌外膜蛋白单克降抗体制备及初步应用

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，蛋白免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ），单克隆抗体（ＭｃＡｂ）等技术，对鼠疫菌外膜蛋白（ＯＭＰ）组成成分及免疫学特性进行了研究。在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上，鼠疫菌锡林郭勒高原型较其他型强，弱毒菌少一条亚基分子量为３２ＫＤ的蛋白带。以ＥＶ７６Ｐ，ＥＶ苗的ＯＭＰ为免疫原，所获抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，认为ＯＭＰ具有良好的免疫原性及免疫反应性。采用杂交瘤技术，得到七株抗鼠     

抗恶性疟原虫有性期单克隆抗体的制备和鉴定

以培养的恶性疟原虫ＮＦ５４（３Ｄ７）株配子体蛋白抽提液及我国云南现场采集的恶性疟原虫细胞骨架分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，以ＩＦＡ法筛选出８株抗恶性疟原虫有性期ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株。经免疫球蛋白类别鉴定，６株为ＩｇＧ１（Ｍ２Ａ１０Ｃ９、Ｍ２Ｃ１Ｂ８、Ｍ４Ｃ７Ｂ１０、Ｍ４Ｇ１２Ｃ１、Ｍ５Ｂ７Ｅ６和Ｍ６Ｅ１Ｇ１１），２株为ＩｇＭ（Ｍ４Ｄ７Ｆ７和Ｍ６Ｆ４Ｄ６）。其中３株ＭｃＡｂｓ（Ｍ４Ｃ７Ｂ１０、Ｍ４Ｄ７Ｆ７和Ｍ６Ｅ１Ｇ１１）的靶抗原定位于配子体以及大滋养体和裂殖体期无性体原虫；其余５株仅定位于配子体。经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹试验，ＭｃＡｂ所识别的蛋白区带各异（１６－１２０ｋＤ），与已发现的有性期特异性抗原相比较，３２ｋＤ抗原国内外尚未报道。各株ＭｃＡｂ与猴疟（Ｐ．ｃｙｎｏｍｏｌｇｉ）红内期、鸡疟（Ｐ．ｇａｌｉｎａｃｅｕｍ）子孢子和杜氏利什曼原虫前鞭毛体均无交叉反应。     

鼠疫菌弱毒株粗制鼠毒素含量及其SDS—PAGE电泳图形比较

鼠疫菌ＥＶｐａｒｉｓ的湿菌体和等湿菌体帛的菌粉，用２．５％ＮａＣｌ浸洗可溶性蛋白质，硫酸 铵分段沉淀法制备粗制鼠毒素，收获量及其ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳形基本相同。用ＬＢ固体培养基增殖鼠疫菌弱毒株，每株培养面积３００ｃｍ＾２，收获湿功和体ＥＶｐａｒｉｓ株０．６ｇ，ＭⅡ４０株、Ｏｔｔｅｎ株、Ａ１１２２株１．２ｇ，１７５株１．４ｇ。不同菌株每克湿菌 体收获粗制鼠毒素的量分别为：ＭⅡ４０ｓｒｉ９．３４ｍｇ，     

小肠结肠炎耶尔森氏菌致Graves’病作用的实验研究

目的　研究小肠结肠炎耶尔森菌（ Ｙ． Ｅ 菌） 感染和 Ｇｒａｖｅｓ’病发病的相关性。方法　用 Ｏ：３ Ｙ． Ｅ 菌免疫新西兰兔，研究 Ｙ． Ｅ 菌抗体（ Ｙ Ｅ Ａｂ） 和 Ｔ Ｒ Ａｂ 的相关性及其对 Ｆ Ｒ Ｔ Ｌ５ 细胞释放ｃ Ａ Ｍ Ｐ 的影响。结果　 Ｏ：３ Ｙ． Ｅ 菌免疫１２ 周后，其中４ 只兔（４／１０） 产生了 Ｙ． Ｅ 菌抗体（ Ｙ Ｅ Ａｂ） ，滴度为１ ：５０００ ～１ ：２５０００ ，同时免疫兔甲状腺功能（ Ｔ３ 、 Ｔ４） 也明显升高。交叉吸附试验表明 Ｙ Ｅ Ａｂ 和 Ｔ Ｒ Ａｂ 能竞争性地与 Ｔ Ｓ Ｈ 受体蛋白结合，另外， Ｙ Ｅ Ａｂ 阳性血清中提取的 Ｉｇ Ｇ 能刺激 Ｆ Ｒ Ｔ Ｌ５ 细胞释放ｃ Ａ Ｍ Ｐ。结论　在免疫学和细胞生物学水平证实了 Ｙ． Ｅ 菌感染与 Ｇｒａｖｅｓ’病发病有关。     

抗恶性疟原虫有性期单克隆抗体的制备和鉴定

以培养的恶性疟原虫ＮＦ５４（３Ｄ７）株配子体蛋白抽提液及我国云南现场采集的恶性疟原虫细胞骨架分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，以ＩＦＡ法筛选出８株抗恶性疟原虫有性期ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株。经免疫球蛋白类别鉴定，６株为ＩｇＧ１（Ｍ２Ａ１０Ｃ９、Ｍ２Ｃ１Ｂ８、Ｍ４Ｃ７Ｂ１０、Ｍ４Ｇ１２Ｃ１、Ｍ５Ｂ７Ｅ６和Ｍ６Ｅ１Ｇ１１），２株为ＩｇＭ（Ｍ４Ｄ７Ｆ７和Ｍ６Ｆ４Ｄ６）。其     

CLINICAL APPLICATIONS OF ELECTROGASTROGRAPHY．

ＣＬＩＮＩＣＡＬＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳＯＦＥＬＥＣＴＲＯＧＡＳＴＲＯＧＲＡＰＨＹ．ＫｅｎｎｅｔｈＬ．Ｋｏｃｈ，Ｍ．Ｄ．ＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙＤｉｖｉｓｉｏｎ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＴｈｅＰｅｎｓｙｌｖａｎｉａＳｔａｔ...     

FUNCTION ALDYSPEPSIA：PATHOGENESIS ANDMANAGEMENT

ＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬＤＹＳＰＥＰＳＩＡ：ＰＡＴＨＯＧＥＮＥＳＩＳＡＮＤＭＡＮＡＧＥＭＥＮＴＲｏｂｅｒｔＷＳｕｍｍｅｒｓ，Ｍ．Ｄ．Ｄｅｐｔ．ｏｆＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ．ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＩｏｗａＣｏｌｅｇｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ．Ｉｏｗａ...     

抗眼肌膜抗体与Graves眼病的关系

目的　探讨抗眼肌膜抗体（ Ｅ Ｍ Ａｂ） 与 Ｇｒａｖｅｓ 眼病的关系及其临床意义。方法　应用间接酶联免疫吸附测定（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 和 Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹方法检测 Ｅ Ｍ Ａｂ 。结果　 Ｇｒａｖｅｓ 眼病的恶性突眼组抗体均值和阳性率均明显高于良性突眼组，后者高于无突眼甲状腺功能亢进（ Ｇ Ｄ） 组及对照组， Ｅ Ｍ Ａｂ 值与眼球突出度呈正相关，而与 Ｆ Ｔ３ 、 Ｆ Ｔ４ 、 Ｓ Ｔ Ｓ Ｈ、 Ｔ Ｇ Ａ、 Ｍ Ｃ Ａ 及病程无关，眼征好转后， Ｅ Ｍ Ａｂ 值明显下降。恶性组中相对分子量为９５ Ｋ Ｄ、６４ Ｋ Ｄ、５５ Ｋ Ｄ 和２３ Ｋ Ｄ 蛋白反应带、良性组中６４ Ｋ Ｄ 蛋白反应带有一定特异性，无特异性蛋白带。结论　抗眼肌膜抗体与 Ｇｒａｖｅｓ 眼病密切相关，其高低可反映眼病的活动性，能鉴别突眼的性质及分度，预测可发展为 Ｇｒａｖｅｓ 眼病的易感性，并可评估疗效及预后。     

EGG AS A PHYSIOLOGICAL MARKER OF MOTIONSICKNESSINASIANANDNON＿ASIANSUBJECTS．

ＥＧＧＡＳＡＰＨＹＳＩＯＬＯＧＩＣＡＬＭＡＲＫＥＲＯＦＭＯＴＩＯＮＳＩＣＫＮＥＳＳＩＮＡＳＩＡＮＡＮＤＮＯＮ＿ＡＳＩＡＮＳＵＢＪＥＣＴＳ．ＲｏｂｅｒｔＭ．Ｓｔｅｒｎ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｓｙｃｈｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＰｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａＳｔａｔ...     

恶性疟原虫疫苗研究：VI.多价保护性抗原的免疫原性

利用工程菌ＰＷＲ－１／ＪＭ１０９以融合蛋白的形式表达人工合成的恶性疟重组基因ｐｆＣＭＲ。经培养，ＩＰＴＧ诱导后收集菌体，超声波破菌，透析，电泳纯化等步骤，分离表达蛋白，结果在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中显示６５ｋＤ蛋白诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的体液免疫和细胞免疫反应进行了观察，结果表明，纯化后的蛋白免疫鼠血清能与表达产物粗提物产生特异的免疫反尖，其抗体滴度达高１：５１０２；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ６５ｋＤ处亦产生     

抗人CD154单克隆抗体的构建及免疫学特性分析

为进一步研究人CD154单克隆抗体在抑制动脉粥样硬化发生和发展中的作用。采用重组人CD154分子免疫BALB／c小鼠,用杂交瘤技术制备抗人CD154单克隆抗体,并分析其免疫学特性,结果发现,（1）有6c5,1b6,5d3共三株杂交瘤细胞株的培养上清与GST－hCD154融合蛋白反应,与GST不反应,6c5,1b6和5d3培养上清效价分别为1：128,1：256和1：64。（2）经Western-bolt鉴定,在分子质量为56kDa处有一抗原抗体结合的条带,而分子质量为26kDa处无特异性条带,证明三株杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体可以结合GST－hCD154但不与GST反应,是特异性结合人CD154的单克隆抗体。（3）流式细胞术发现,6c5细胞株分泌的单克隆抗体能与激活的人外周血T细胞结合,说明已构建的单克隆抗体是特异性针对人CD154的,为下一步用人CD154单克隆抗体抑制动脉粥样硬化的研究打下了基础。     

抗弓形虫McAb的建立及应用研究

应用杂交瘤技术 ,建立了 5株分泌抗弓形虫单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中 1E9和 4C10 2株分泌的 Mc Ab效价达 1∶ 12 80 0。该 2株单克隆抗体均属 Ig G1亚类 ,其识别的弓形虫抗原分别为 P2 2、P2 8。1E9和 4C10 Mc Ab混合后与兔抗弓形虫抗体联合 ,进行双抗体夹心 EL ISA测定弓形虫的敏感性分别为 12 .5和 2 5个虫体 / m l。检测 146份有不良孕产史妇女血清 ,11份弓形虫循环抗原 ( CAg)阳性 ( 7.5 3% )。检测 11份自然流产物 ,1份 CAg阳性 ,该流产物转种小鼠后证实确含有弓形虫。 92份育龄妇女血清 1份弓形虫 CAg阳性 ( 1.0 9% )。有不良孕产史的妇女血清弓形虫 CAg阳性率明显高于育龄妇女血清阳性率 ( P<0 .0 5 )。弓形虫经 1E9、4C10 Mc Ab处理后对小鼠腹腔巨噬细胞攻击 ,感染率分别为 7.8%和 7.5 % ,而对照组感染率为 14.5 % ,证明该 2株单克隆抗体对弓形虫有明显的抑制作用     

华支睾吸虫排泄分泌抗原McAb的制备及双抗夹心ELISA的初步建立

目的 以华支睾吸虫排泄分泌抗原(ESA)免疫小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体,并建立一种可检测ESA的双抗体夹心酶联免疫吸附试验的方法。方法 用ESA免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选杂交瘤细胞株,制备高效价单克隆抗体并鉴定;单抗经HRP标记和配对筛选,建立双抗夹心ELISA并分析其特异性及灵敏度。结果 成功制备出抗华支睾吸虫ESA McAb:B7、F1;抗体类型均为IgG₁,抗体滴度高,特异性好,以筛选到的两株单抗建立双抗夹心ELISA法,最佳线性范围为0.014~0.248 μg/mL(R²=0.996 9),最低检出限为0.014 μg/mL。结论 初步建立了检测华支睾吸虫ESA的免疫诊断方法。     

空肠弯曲菌共同抗原单克隆抗体的研制及其在细菌检验中的应用

应用B淋巴细胞杂交瘤技术,建立了5株稳定分泌抗空弯菌共同抗原(CA)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其中4株的McAb针对CA中的耐热抗原成分,1株的McAb针对CA中的不耐热抗原成分。应用32种其它细菌对这些McAb的特异性检查表明,除与幽门弯曲菌发生交叉反应外,均为阴性反应。应用不同地区、不同来源的516株空弯菌对这些McAb进行检查,结果均为阳性反应。应用BA-ELISA、间接-ELISA对909份实际标本进行了检测,结果均与常规培养法无显著差异,可在28小时内报告结果。这表明本文研制的McAb对空弯菌的鉴定与检测具有特异、敏感和对本菌覆盖率高的特点,可用于人、兽空弯菌的鉴定与检验。     

卡氏肺孢子虫病实验与临床研究Ⅳ 4D7 单克隆抗体免疫组织化学法检查卡氏肺孢子虫的研究

用４Ｄ７单抗－免疫组织化学方法检查３１例经病原学确诊的卡氏肺孢子虫肺炎病人肺组织切片及１２例高危病人合并肺部感染的痰标本。结果显示，前者３１例均呈阳性，阳性率１００％（３１／３１）；后者１２例中１例阳性。与银染色法及亚甲胺蓝染色法比较表明，在３种方法的阳性率之间无显著性差异。而以单抗法更为清晰，易于判断。     

布鲁氏菌病快速检测试纸条的探索

目的 建立一种操作简单、结果肉眼可视,并具有良好敏感性和特异性的适合现场快速检测布鲁氏菌病的胶体金层析方法。方法 将重组的布鲁氏菌外膜蛋白OMP22和OMP28作为胶体金标记物,抗OMP22单克隆抗体作为质控线,OMP22和OMP28蛋白作为检测线组装试纸条。结果 该试纸条检测牛布鲁氏菌标准阳性血清最大稀释度可达1:128;并且与牛结核、蓝舌病、牛病毒性腹泻、口蹄疫、牛白血病及小反刍兽疫血清无交叉反应;检测牛、羊源血清样品结果与商品化的ELISA检测试剂盒(IDEXX)符合率为95%,与虎红平板凝集试验(RBPT)检测的符合率为97.4%。结论 胶体金层析试纸条在检测布鲁氏菌病方面具有快速、敏感性高及特异性强的特点,适用于布鲁氏菌病动态流行病学调查和临床快速筛查。     

抗人血管内皮细胞膜蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的研制特异性抗人血管内皮细胞膜蛋白的单克隆抗体,为深入研究血管内皮细胞的功能及血管内皮细胞与疾病的关系提供基础。方法以血管内皮细胞株为免疫原直接免疫Balb/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,通过细胞酶联免疫吸附试验筛选分泌抗人血管内皮细胞膜蛋白的特异性单抗的阳性克隆后,将杂交瘤细胞株腹腔注射Balb/c小鼠诱生腹水。腹水中的单抗用蛋白质G琼脂糖凝胶-4B柱亲和层析纯化后,采用酶联免疫吸附试验、流式细胞术、免疫组织化学染色法及免疫印迹法对其特异性进行鉴定。结果获得了一株可稳定分泌抗人血管内皮细胞膜蛋白单抗的杂交瘤细胞株。特异性单抗NH-2亚型为IgG1,腹水NH-2效价为1×10-6,含量为18.82g/L。NH-2与人血管内皮细胞株和原代培养的人脐静脉内皮细胞均有特异性结合,并可识别细胞裂解液还原条件下相对分子量为40kDa左右的蛋白多肽。NH-2对相应抗原具有高度的细胞特异性及组织特异性,在体内与正常组织的交叉反应少。结论成功制备了抗人血管内皮细胞膜蛋白的单抗,在血管内皮细胞的生物学功能及临床意义研究方面将具有潜在的应用价值。     

抗弓形虫单克隆抗体免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库

目的　探讨自制的抗弓形虫单克隆抗体 (McAb)相应抗原的分子结构机制 ,为弓形虫疫苗的研制寻找有效抗原提供依据。方法　用自制的抗弓形虫速殖子的McAb免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库 ,对阳性克隆cDNA插入片段进行PCR鉴定并测序分析。结果　 2个McAb第一轮分别获得 6个和 3个阳性克隆。分别进行第 2轮筛选 ,选取其中持续阳性最强的2个进行体外剪切 ,提取质粒DNA并进行PCR扩增和序列测定 ,经核苷酸同源性比较 ,可能为 2个新基因 ,其中 7C3-C3筛选的基因命名为WX2 (GenBank登录号为 :AY2 38892 ) ,2B9-G1筛选的基因命名为WX(GenBank登录号为 :AY2 0 8994 ) ,并用蛋白质分析软件对新基因编码的蛋白质结构和功能进行预测。结论　自制的具有一定保护性效果的McAb免疫筛选获得的阳性克隆插入基因片断的表达产物 ,可能具有抵抗弓形虫感染的作用 ,值得进一步深入研究。     

抗人神经肽Y单克隆抗体的制备及鉴定

目的：建立抗人神经肽Y（NPY）的单克隆抗体细胞株。方法：用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,用ELISA法筛选出阳性克隆,经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株,并对得到的单抗进行亚类、效价、纯度、亲和常数以及结合位点的测定和分析。结果：获得了3株稳定分泌抗hNPY单抗杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定分别为IgG3、IgG2b、IgG1,腹水效价为1：20万～1：200万,纯化抗体效价为0．05μg／ml-0．0005μg／ml,4A8抗体纯度达到95％以上,抗体亲和常数分别为5．27×10^6L／mol、3．39×10^6L／mol、1．05×10^7L／mol,不同单抗配对经时间分辨免疫荧光法检测结果提示3株单抗是针对不同抗原决定簇。结论：成功制备了3株抗hNPY单抗,为研究NPY及其抗体在脂肪移植及肥胖治疗中的机制和应用奠定基础。     

哮喘豚鼠免疫治疗初步观察

目的初步观察抗白细胞介素５（ＩＬ５）单抗对哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）的影响。方法用鸡卵清蛋白（ＯＶＡ）腹腔注射法复制豚鼠哮喘模型，随机分为两组，每组１５只，联合应用雾化吸入和腹腔注射法分别给予生理盐水（ＮＳ）及抗ＩＬ５单克隆抗体（ＭｃＡｂ）治疗，比较基础、治疗前、后外周血（ＰＢ）和支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中ＥＯＳ的改变。结果ＭｃＡｂ治疗组豚鼠外周血ＥＯＳ计数治疗前［（１７６±０２７）×１０９／Ｌ］与治疗后［（１６３±０２６）×１０９／Ｌ］比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５），而ＮＳ组则无明显改变（Ｐ＞０．０５）；治疗后ＭｃＡｂ组ＢＡＬＦ中ＥＯＳ数［（０４１±００６）×１０９／Ｌ］与ＮＳ组［（０４６±００７）×１０９／Ｌ］比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论该抗ＩＬ５单抗具有下调外周血和气道ＥＯＳ功能