抗体芯片分析炎性细胞因子在复发性鼻息肉中的表达

目的：应用抗体芯片分析复发性鼻息肉黏膜组织中炎性细胞因子的表达。方法：用生物素标记从鼻息肉组,复发性鼻息肉组及对照组患者鼻黏膜组织中提取的总蛋白,然后与预先点有40个主要炎症相关细胞因子的特异抗体的抗体芯片膜反应,目标蛋白与辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗链霉生物素抗体结合并曝光显示反应信号,最后用激光扫描仪将其转化为图像文件进行分析。结果：与对照组相比,鼻息肉患者组血清中多种炎性细胞因子包括促炎因子、抗炎因子、趋化因子、某些细胞因子受体等的表达水平大幅度提高;而复发性鼻息肉中较鼻息肉高表达的主要是趋化因子,在鼻息肉中高表达的促炎因子在复发性鼻息肉中呈现低表达趋势。结论：鼻息肉与复发性鼻息肉组织中细胞因子的表达存在差异;趋化因子高表达在鼻息肉复发中起重要作用。     

抗体芯片分析氯喹对巨噬细胞炎性细胞因子分泌的影响

目的利用抗体芯片分析氯喹对小鼠巨噬细胞RAW264.7经细菌内毒素(LPS)刺激后炎性细胞因子分泌的影响。方法体外培养单核-吞噬细胞系RAW264.7,用生物素分别标记从空白组、LPS处理组、氯喹处理组及氯喹加LPS处理组细胞中提取的总蛋白,然后与预先点有40个主要炎症细胞因子的特异性抗体的抗体芯片膜反应,目标蛋白与辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗链霉素生物素抗体结合并曝光显示反应信号,最后用激光扫描仪将其转化为图像文件进行分析。结果与LPS处理组比较,氯喹加LPS处理组炎症细胞因子的表达呈现低表达。结论氯喹对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子的分泌具有抑制作用。     

鼻息肉发病机制的研究进展

鼻息肉是多种致病因素作用下鼻黏膜的慢性持续性炎症,不同患者的致病因素可能不同,其病因可能与感染相关因素和变态反应因素关系最为密切。细胞因子网络在鼻息肉的形成及发生发展中起了非常重要的作用,这些细胞因子包括促炎因子、抗炎因子、趋化因子以及某些细胞因子受体等。鼻息肉中有些细胞因子的表达水平大幅度提高,主要包括白细胞介素8、肿瘤坏死因子α、嗜酸粒细胞趋化因子、白细胞介素6受体、肿瘤坏死因子受体,这些细胞因子的表达及其互相调控可能是鼻息肉发病机制的重要环节。     

炎症相关细胞因子及趋化因子在小鼠自身免疫性肝损伤不同时期的表达及作用

目的 研究促炎性细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),抗炎性细胞因子白介素-10(interleukin-10,IL-10),以及趋化因子CXCL10[chemokine (C-X-C motif) ligand 10]在实验性自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,EAH)小鼠发病期及缓解期肝脏中表达水平差异及相互关系,探讨炎症相关细胞因子及趋化因子在自身免疫性肝损伤中的作用。方法 制备EAH模型,设立正常对照组(0周),在建模后发病期(2周)及缓解期(6周)行HE染色观察肝脏病理变化,测定血清ALT及AST水平;实时荧光定量PCR方法检测各组小鼠肝组织IL-6、TNF-α、IL-10和CXCL10的mRNA相对表达水平;ELISA法检测肝组织匀浆中IL-6、TNF-α、IL-10和CXCL10的蛋白表达水平,并行相关性分析。结果 肝脏中的促炎性细胞因子IL-6、 TNF-α和趋化因子CXCL10在发病期的mRNA和蛋白表达水平均升高(P＜0.05),在缓解期IL-6 和CXCL10则下降(P＜0.05);抗炎性细胞因子IL-10表达水平呈现相似的动态改变,在发病期上升,缓解期下降,但都高于正常水平(P＜0.05)。CXCL10与IL-6、TNF-α、IL-10均呈正相关(P＜0.05);IL-10与IL-6、TNF-α均呈正相关(P＜0.05)。结论 促炎性细胞因子IL-6、TNF-α和趋化因子CXCL10主要在发病期高表达促进自身免疫性肝损伤,抗炎性细胞因子IL-10的表达伴随前者动态改变以发挥抗炎作用,3种细胞因子的表达有密切联系。对炎症相关细胞因子和趋化因子进行干预或可缓解自身免疫性肝损伤。     

抗CXCL1中和抗体在急性溃疡性结肠炎小鼠模型中的治疗作用

目的：探讨抗CXC趋化因子配体1(CXCL1)中和抗体对葡聚糖硫酸钠(dextra sulfate sodium,DSS)诱导的 急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型的治疗作用,并阐明其对结肠组织中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL- 17,IL-10的表达及中性粒细胞浸润的影响。方法：雌性BALB/c小鼠48只,随机分为正常对照组(DSS-)、疾病组 (DSS+saline)、抗CXCL1中和抗体治疗组(DSS+anti-CXCL1 Ab)和治疗对照组(DSS+IgG Ab),每组12只。正常对照组小 鼠给予蒸馏水自由饮用,疾病组、治疗组及治疗对照组给予3.5%的DSS自由饮用,至第8天处理小鼠。其中治疗组于 造模第3天和第6天腹腔注射抗CXCL1中和抗体(4 mg/kg),治疗对照组予以等量大鼠IgG抗体,正常对照组和疾病组 注射等量生理盐水。对各组小鼠进行疾病活动指数评分(disease activity index,DAI)及结直肠组织损伤学评分,并采用 RT-PCR法检测各组小鼠结肠组织中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-17和IL-10的表达。运用免疫组织化学检测各组小鼠 结肠组织中中性粒细胞特异性标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表达。结果：与正常对照组相比,疾病 组小鼠DAI评分及结直肠组织损伤学评分明显增高,但是予以抗CXCL1中和抗体干预治疗后能明显减低急性UC小鼠 的DAI和结直肠组织损伤学评分。RT-PCR检测结果显示：与正常对照组相比,疾病组小鼠结直肠组织中促炎细胞因 子TNF-α,IFN-γ和IL-17 mRNA表达水平均显著升高,抑炎因子IL-10 mRNA表达下降。而使用抗CXCL1中和抗体干预 治疗,明显抑制DSS诱导的小鼠结肠组织中促炎细胞因子TNF-α,IFN-γ和IL-17 mRNA表达水平的升高及抑炎因子IL- 10 mRNA表达水平的下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学结果显示：疾病组小鼠结肠组织中中性粒 细胞的浸润明显增加,予以抗CXCL1中和抗体治疗能显著减少结肠组织中中性粒细胞的浸润,差异具有统计学意义 (P<0.05)。结论：抗CXCL1中和抗体缓解了DSS诱导的急性UC的进展,其发挥抗炎作用的机制可能与抑制促炎因子的 表达和中性粒细胞的浸润有关。     

Toll样受体-2和血红素加氧酶-1在复发性鼻息肉中的表达及意义

目的：研究复发性鼻息肉组织中TLR-2、HO-1的表达和意义,并探讨2者表达与鼻息肉复发的关系．方法采用免疫蛋白印记技术,检测复发性鼻息肉组20例组织、鼻息肉组20例组织及正常对照组20例钩突粘膜组织中TLR-2、HO-1蛋白表达情况,并比较分析2者之间的关系．结果复发性鼻息肉组织中TLR-2、HO-1的表达量与鼻息肉组织相比差异有统计学意义（P〈0.05）;鼻息肉组织中TLR-2、HO-1的表达量与正常鼻黏膜组织相比差异有统计学意义（P〈0.05）;TLR-2和HO-1在各组的表达量存在明显的相关性（P〈0.05）．结论 TLR-2、HO-1在鼻息肉复发机制中发挥着重要作用,2者可能作为鼻息肉患者术后随诊和复发趋势判断的客观指标．     

推拿康复治疗脑性瘫痪的炎症细胞因子调节机制

目的 探讨推拿康复治疗痉挛型小儿脑性瘫痪(cerebral palsy,CP)的机制.方法 选择30例痉挛型小儿CP患者采用选择性脊柱推拿康复疗法进行治疗,同时设立10名性别和年龄匹配的健康志愿者作为对照组.使用统一的观察量表观察病人的肌痉挛程度、关节活动度和7项疗效评估情况,疗程结束后进行统计分析.分别采集治疗前、治疗3 m后各CP患者和健康者的外周血3 mL,用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,应用炎症细胞因子与受体PCR芯片进行基因表达检测,绘制基因表达谱,筛选有表达差异的基因.外周血离心取血清,运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-10蛋白表达.结果 治疗后患儿肢体的肌痉挛程度和关节活动度明显改善,与治疗前相比差异具有统计学意义(P＜0.05),7项疗效评估有效率为90.00％,表明推拿康复疗法对CP取得较好的疗效.基因芯片检测结果表明,与健康对照组相比,治疗前CP患者组表达上调的促炎性反应细胞因子与受体基因有7个,表达下调的抗炎细胞因子与受体基因有6个.与治疗前比较,治疗3 m后CP患者组中表达上调的抗炎细胞因子与受体基因有4个,下调的促炎细胞因子与受体基因有6个.ELISA检测结果发现,治疗前CP患者组外周血血清中TNF-α和IL-6蛋白水平都显著高于健康对照组(P＜0.01),而IL-10蛋白水平都显著低于健康对照组(P＜0.05)；与治疗前比较,治疗3 m后CP患者组血清中TNF-α和IL-6蛋白水平都明显降低,IL-10蛋白水平显著升高(P＜0.05).与健康对照组相比,治疗前CP患者组血清中TNF-α/IL-10和IL 6/IL-10比值均显著升高(P＜0.01)；与治疗前比较,治疗3 m后CP患者组血清中TNF-α/IL-10和IL-6/IL-10比值均显著降低(P＜0.05).结论 CP患者存在促炎性细胞因子基因表达上调和抗炎症细胞因子基因表达下调,这可能是CP患者机体中出现高促炎性反应状态的原因和发病的新机制；推拿康复疗法可能通过下调促炎性细胞因子基因表达和上调抗炎性细胞因子基因表达,重塑促-抗炎性细胞因子网络和促-抗炎性反应体系新的平衡来治疗痉挛型小儿脑瘫.     

糖皮质激素对鼻息肉组织中eotaxin蛋白的影响

目的:探讨糖皮质激素治疗鼻息肉的可能机制。方法:随机将15例鼻息肉患者均分为强的松治疗组、地塞米松治疗组和未治疗组,以同期手术的5例鼻中隔偏曲者的下鼻甲黏膜组织作对照,用免疫组化法测定鼻息肉组织中嗜酸细胞趋化因子(eotaxin)蛋白的表达。结果:激素未治疗组eotaxin蛋白的表达比对照组显著增高(P<0.01);激素治疗组eotaxin蛋白表达下降,与未治疗组比较差异有统计学意义(P<0.01),与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Eotaxin蛋白是诱导嗜酸细胞在鼻息肉组织中浸润的重要趋化因子,糖皮质激素可下调eotaxin蛋白的表达,发挥抗嗜酸细胞炎症的作用。     

慢性鼻窦炎鼻息肉术后8～10wk三种促炎因子的表达及意义

目的:通过检测VCAM-1、Eotaxin及VEGF在鼻息肉组织以及鼻息肉术后8～10wk术区黏膜组织中表达情况,探讨鼻息肉术后8～10wk术区愈复情况。方法:对25例鼻息肉组织标本及术后25例鼻息肉病人术区囊泡、肉芽组织,用HE染色及免疫组化检测VCAM-1、Eotaxin及VEGF在鼻息肉组织以及鼻息肉术后8～10wk术区黏膜组织中的表达与分布情况,并对切片进行分析。结果:鼻息肉组可见大量嗜酸性粒细胞浸润,术后8～10wk明显减少。术后组中嗜酸性粒细胞数与Eotaxin的血管表达面积呈正相关;三种促炎因子在各组上皮、腺体及血管细胞区域均有不同程度表达,有统计学意义。结论:(1)、慢性鼻窦炎鼻息肉术后,术腔黏膜良性转归和上皮化发展与病灶性改变两种机制的相互完成的过程,三种促炎因子在这一相互完成过程中发挥重要作用。鼻息肉术后8～10wk三种促炎因子仍有不同程度的表达,此期间仍需随访治疗。(2)、鼻内镜手术是治疗慢性鼻窦炎鼻息肉的首选方法,术后随访及综合治疗是影响病人预后的重要因素。术后监测上述三种促炎因子在术腔囊泡、肉芽组织中的含量可能有利于慢性鼻窦炎鼻息肉术后治疗,并据此制定个性化治疗方案、制定随访期限,防止其复发。     

白介素5和趋化因子eotaxin在鼻息肉中的表达及其意义

目的:研究白介素5和趋化因子eotaxin在鼻息肉中的表达,及与嗜酸性粒细胞(EOS)浸润状态的相关性。方法:运用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)结合半定量分析方法检测20例鼻息肉和8例下鼻甲黏膜组织(对照组)中白介素5和eotaxin的mRNA的表达水平。同时运用HE染色、免疫组织化学方法检测两组中EOS的分布及白介素5和eotaxin的蛋白表达情况,比较两组间差异,分析每组中EOS浸润数目与白介素5和eotaxin表达的相关性。结果:120例鼻息肉组织中以EOS浸润阳性(+)以上者有75%(15例),明显高于8例对照组的12.5%(1例)。且鼻息肉组织中的浸润EOS率21.64±4.33明显高于对照组1.15±0.68(P<0.01);2鼻息肉组织中白介素5和eotaxin的蛋白表达阳性细胞数明显高于对照组(P<0.01);3白介素5和eotaxin的mRNA在鼻息肉组织中的表达明显高于正常对照组(P<0.05)。4白介素5和eotaxin的表达与EOS浸润相关(P<0.01),且两种因子之间也呈正相关关系(P<0.05)。结论:从基因水平和蛋白水平均表明在鼻息肉组织中白介素5和eotaxin含量明显升高,而且与组织中EOS浸润呈明显相关性,提示白介素5和eotaxin是鼻息肉病变中重要的EOS趋化因子,并增强该细胞的局部作用,参与了鼻息肉的发病机制,且二者有协同作用。     

糖皮质激素对鼻息肉组织中嗜酸粒细胞阳离子蛋白质表达的影响

[目的]观察糖皮质激素对鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞(EOS)和嗜酸粒细胞阳离子蛋白质(ECP)的影响.[方法]采用HE染色、免疫组织化学技术(SABC法)观察糖皮质激素治疗组(实验组)与未用糖皮质激素治疗组(对照组)鼻息肉组织中EOS计数和ECP表达水平,并进行比较.[结果]实验组组织中EOS浸润数及ECP阳性表达水平均显著低于对照组,相比较差异均具有统计学意义(P<0.01).[结论]糖皮质激素通过减少嗜酸性粒细胞的募集和活化,减轻鼻息肉组织中的炎症反应程度,抑制鼻息肉组织中ECP的表达,达到治疗鼻息肉的作用.     

血管内皮生长因子在鼻息肉组织中的表达和意义

目的探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在鼻息肉组织中的表达及其在鼻息肉发病中的意义。方法将鼻息肉患者分为A、B组,A组为Ⅱ型1、2期患者,B组为Ⅱ型3期及Ⅲ型患者。另有20例鼻中隔偏曲患者的正常下鼻甲组织作对照组。采用免疫组化SP法检测三组VEGF的表达。结果正常鼻黏膜中VEGF的染色呈弱阳性,而在A、B组鼻息肉组织中VEGF的阳性率明显高于对照组,B组中阳性率和阳性细胞数均高于A组;VEGF在鼻息肉组织中主要定位于基底膜周围的炎性细胞和上皮细胞以及腺体、血管周围和血管壁内皮细胞。结论VEGF通过在鼻息肉组织中过度表达促进息肉组织内的血管增殖和炎性细胞聚积,促进鼻息肉的发生发展。     

白介素-10在鼻息肉中的表达

目的探讨白介素（IL）-10在鼻息肉中的表达及其意义。方法运用免疫组化方法检测IL-10在30例鼻息肉和14例正常下鼻甲组织中的表达,对IL-10阳性细胞的类型、分布进行分析。结果IL-10在鼻息肉组织中表达较正常下鼻甲组织明显增强,差异有显著性（P〈0．叭）。IL-10主要表达于鼻息肉的上皮细胞及炎性细胞中。结论IL-10在鼻息肉组织内的多种炎性细胞中明显表达,能客观反应免疫或炎症反应的程度,提示IL-10在鼻息肉中可能发挥重要的抗炎作用。     

水通道蛋白-5与鼻息肉手术疗效的相关性

目的观察水通道蛋白-5（aquaporin-5,AQP5）在鼻息肉术后未复发及复发患者鼻息肉组织中的表达及分布,初步探讨AQP5在鼻息肉中的表达程度与鼻息肉手术疗效的相关性。方法选取鼻息肉患者63例,两侧病变以病重侧计,所有病例均在鼻内镜下行鼻息肉摘除及窦口开放术。取63例鼻息肉组织,用4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,应用HE染色和免疫组织化学技术检测AQP5在未复发和复发鼻息肉组织中的阳性细胞的表达,对AQP5表达程度和手术疗效进行相关性统计学分析。结果AQP5在鼻息肉术后未复发组中的阳性细胞表达显著降低,与复发组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论AQP5的高表达可能与术后鼻息肉复发有一定关系;鼻息肉的AQP5的表达程度可以作为预测鼻息肉患者预后指标之一。     

COX-2对鼻息肉炎症形成的作用研究

目的: 检测COX-2在鼻息肉组织中的表达水平及其分布情况,认识鼻息肉炎性发病机制.方法: 利用免疫组织化学染色以及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR反应)检测35例鼻息肉及23例下鼻甲标本的COX-2表达.结果: COX-2主要分布于鼻息肉黏膜上皮、黏膜下腺体、血管内皮细胞以及炎性细胞的胞质或胞膜,呈胞质膜型及包涵体型.鼻息肉组织中COX-2表达明显高于下鼻甲.结论: 鼻息肉组织中COX-2表达明显增高,鼻息肉发病过程中有前列腺素参与.     

鼻息肉中核因子κB亚单位P50活性与IL-4、γ-IFN因子表达的关系

目的测定鼻息肉中核因子κB亚单位P50的活性及其与IL-4、γ-IFN表达的关系，探讨PSO对TH1/TH2细胞因子表达调节的可能机制。方法采用SP免疫组化染色法检测40例鼻息肉患者与加例正常钩突黏膜中IL-4、γ-IFN、P50的表达，以核染阳性率来评估P50活性。对P50活性与IL-4，γ-IFN因子行直线相关分析。结果①鼻息肉中P50胞浆、胞核均有阳性表达，主要位于上皮细胞、炎症细胞及腺上皮细胞胞浆，P50活性显著增强（P〈0．001），IL-4表达亦明显增强（P〈0．001），γ-IFN表达无明显改变（P〉0．05）；②Pearson相关性分析提示，PSO活性与IL-4表达呈直线正相关关系（r=0．70，P〈0．001），而与γ-IFN表达无相关性（r=0．14，P=0．40）。结论鼻息肉中P50的活性明显增强。P50的激活上调IL-4的表达可能是鼻息肉中Th1/Th2因子失衡的重要环节之一。