miR-372调控血管生成因子AGGF1的表达并抑制血管生成

目的:研究miR-372(miR-372)对新血管生成因子AGGF1基因的表达调控?方法:通过生物信息学预测找到可能靶向调控AGGF1基因的候选miRNA;通过荧光素酶报告基因实验?荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blot检测等实验证实miR-372对AGGF1基因表达的靶向调控;通过体外血管内皮细胞成管实验检测miR-372对血管生成的影响?结果:生物信息学预测显示miR-372靶向AGGF1;荧光素酶报告基因实验证实miR-372可通过结合AGGF1基因3′-非翻译区(3′-untranslational region,3′-UTR)而抑制其表达;qPCR和Western blot实验分别表明miR-372在mRNA水平和蛋白水平下调AGGF1表达;体外血管生成实验表明miR-372所介导的AGGF1表达下调可明显抑制血管生成?结论:miR-372可通过靶向结合AGGF1基因的3′-UTR下调其表达,并抑制内皮细胞血管生成能力?     

早期妊娠丢失患者蜕膜组织中血管重塑相关miRNA及其靶基因表达的研究

目的 探讨早期妊娠丢失（EPL）患者蜕膜组织中血管重塑相关miRNA及其靶基因的表达。方法 选取2020年10至12月在上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院门诊手术室行早孕人工流产手术的患者40例为研究对象,其中因EPL行人工流产手术者20例（EPL组）,正常早孕要求终止妊娠行人工流产者20例（对照组）,收集其废弃的流产蜕膜组织。采用q RTPCR法检测两组患者蜕膜组织中与血管重塑相关的差异表达miRNA。通过3’非翻译区（3’-UTR）荧光素酶报告基因验证miRNA与其预测靶基因之间的关系。qRT-PCR和Western blot法验证两组患者蜕膜组织中预测靶基因的表达。结果 EPL组患者蜕膜组织中miR-29c-3p、miR-193a-5p和miR-125a-5p表达水平均升高,而其对应的靶基因血管内皮生长因子A(VEGFA)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA和蛋白表达水平均下调。3’-UTR荧光素酶报告基因证实差异表达的miRNA与预测靶基因之间存在负调控。结论 蜕膜组织中miR-29c-3p、miR-125a-5p、miR-193a-5p可能通过下调靶基因VEGFA和...     

MiR-182/FOXF2信号通路在三阴性乳腺癌侵袭及血管生成中的意义

目的 探讨miR-182对三阴性乳腺癌侵袭的影响及其与靶基因FOXF2的调控关系。方法 通过CCK-8增殖实验和Transwell实验进行体外细胞功能验证,检测miR-182对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响;采用Targetscan软件预测miR-182靶向调控FOXF2基因表达结果;通过靶点验证及靶点突变测试验证miR-182在基因FOXF2上结合位点;采用qRT-PCR检测miR-182对FOXF2基因表达的靶向调控,ELISA检测HUVEC细胞系中VEGF蛋白表达。结果体外细胞功能实验证明,miR-182可明显促进乳腺癌细胞的增殖与侵袭（P＜0.01）;荧光素酶报告基因实验证实,miR-182可通过结合FOXF2基因3′-非翻译区688～695位点（3′-untranslational region, 3′-UTR）而抑制其表达;qRT-PCR检测发现,转染miR-182后MCF-7中FOXF2表达量明显降低(P＜0.01);体外血管生成实验表明,转染miR-182后HUVEC细胞培养液上清液中VEGF蛋白含量显著升高（P=0.004)。结论 miR-182作为促癌因素,直接作用于FOXF2基因,引起该基因表达下调,促进血管生成,发挥侵袭作用,可能是促进三阴性乳腺癌转移的生物学因素机制之一。     

miR-134通过下调叉头盒蛋白M1抑制肝细胞癌细胞增殖

目的 探讨miR-134下调叉头盒蛋白M1 (forkhead box M1,FOXM1)的机制及其影响肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用.方法 应用CCK-8法检测miR-134对HCC细胞增殖的作用;经Western blot和Real-time PCR检测人正常肝细胞L02和5种HCC细胞系中FOXM1和miR-134的表达;用miR-134模拟物(miR-134 mimic)或miR-134抑制剂(miR-134 inhibitor)转染HCC细胞后,经Western blot和Real-time PCR检测FOXM1及其下游靶基因CyclinD1的表达;应用生物信息学分析miR-134在人FOXM1 3'-UTR的可能结合位点,通过报告基因检测实验分析miR-134与FOXM1的3'-UTR的特异性结合;将miR-134 mimic和FOXM1表达质粒(无3'-UTR)共转染于HCC细胞后,经CCK-8法检测细胞的增殖情况.结果 miR-134可显著抑制HCC细胞增殖(P＜0.05);与人正常肝细胞L02相比,miR-134在HCC细胞中的表达明显降低(P＜0.05),而FOXM1蛋白表达明显增强,二者存在负相关(R2=0.705,P＜0.05);miR-134可显著下调FOXM1蛋白及其下游靶基因CyclinD1的表达(P＜0.05);报告基因检测实验证实miR-134可特异性结合于FOXM1 mRNA的3'-UTR(P ＜0.01);细胞增殖实验检测结果显示,过表达缺失3'-UTR的FOXM1可显著减弱miR-134对HCC细胞增殖的抑制效应(P＜0.05).结论 miR-134通过靶向结合于FOXM1的3'-UTR而下调FOXM1蛋白的表达,从而抑制HCC细胞的增殖.     

miR-483-5p靶向Timp2调控破骨细胞的生成

目的：miR-483-5p可促进破骨细胞分化和骨破坏，本研究探讨miR-483-5p是否通过靶向作用于Timp2调控破骨细胞的生成。方法：采用miRNAs靶基因预测软件Target Scan8.0对miR-483-5p的靶基因进行预测，并构建野生型和突变型3’UTR质粒，通过双荧光素酶报告基因验证靶基因是否与miR-483-5p存在靶向调控关系。用免疫印迹方法检测miR-483-5p的mimics或inhibitor转染细胞后靶蛋白表达水平的相应变化。用靶基因si RNA或靶蛋白慢病毒转染或感染细胞，RANKL诱导后分别进行TRAP染色和q-PCR检测。结果：运用生物信息学软件预测miR-483-5p的靶基因，发现具有调控破骨细胞作用的Timp2基因，且双荧光素酶报告基因检测系统发现miR-483-5p可以与预测的靶基因Timp2基因的3′-UTR位点互补，两者之间存在靶向调控关系。在RAW264.7细胞中上调miR-483-5p水平可减少Timp2的表达；敲低细胞中的Timp2，诱导后较正常组破骨细胞数量显著增多，且破骨细胞特异性基因表达升高。将靶基因和miR-483-5p共转染入细...     

miR-133b通过靶向调控EGFR影响食管鳞癌的侵袭、转移

目的 探讨miR-133b在食管鳞癌侵袭、转移过程中的作用及机制.方法 使用生物信息学工具预测miR-133b的靶基因;双荧光素酶报告基因实验验证miR-133b对靶基因表皮生长因子受体(EGFR)的直接靶向调控作用;细胞增殖实验、划痕实验和Transwell实验检测miR-133b的不同表达对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;qRT-PCR验证miR-133b与EGFR在食管鳞癌组织中的表达,并分析miR-133b与食管鳞癌临床病理特征之间的关系.结果 生物信息学工具预测EGFR为miR-133b的靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实 miR-133b可与 EGFR 3'UTR片段结合;体外实验通过上调食管鳞癌细胞中miR-133b的表达使细胞的增殖受阻(ECA109:P＜0. 05,KYSE150:P＜0. 01);细胞的迁移(ECA109:P＜0. 01,KYSE150:P＜0. 01)和侵袭能力(EC5A109:P＜0. 01,KYSE150:P＜0. 01)显著减弱.在食管鳞癌组织中 miR-133b与 EGFR的表达呈负相关性( P＜0. 01),且miR-133b的表达与食管鳞癌的TNM分期、淋巴结转移显著相关 (P均＜0. 05).结论 miR-133b可能通过下调EGFR的表达,抑制食管鳞癌的增殖、侵袭和转移,在食管鳞癌的演进中起负调控作用.     

miRNAs调控乳腺癌血管生成的研究进展

乳腺癌的发展和转移依赖于血管生成,当血管生成发生时,原发部位肿瘤向周围组织扩散会形成新的血管,因此,血管生成也是乳腺癌患者预后不良的主要原因。微小核糖核酸(miRNAs)是参与各种生物过程的非编码核糖核酸。它们可以与靶基因的3′-UTR结合,通过抑制靶基因的表达来充当癌基因或肿瘤抑制因子,其中一些基因直接或间接参与了血管生成信号通路,阻止其表达。miRNAs通过改变许多生物学途径来控制内皮细胞的活性,在乳腺癌进展和血管生成中起着关键作用。肿瘤衍生的细胞外囊泡通过向内皮细胞传递miRNAs直接参与肿瘤血管生成的调控。近年来在乳腺癌治疗中,miRNAs显示出抑制血管生成的巨大前景。本综述展示了乳腺癌血管生成中miRNA调节的信号通路,强调了在体内和体外研究中用于抑制血管生成的新疗法。     

miR-497-5p靶向VEGFA抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的实验研究

目的探讨miR-497-5p对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响及其机制。方法将体外培养的Ishikawa细胞分为miR-NC组、miR-497-5p组、pLV-VEGFA组和miR-497-5p+VEGFA组,采用Real time PCR检测miR-497-5p和血管内皮生长因子A（VEGFA）mRNA的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-497-5p和VEGFA的靶向关系,Western blot检测VEGFA蛋白和EMT相关蛋白神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,Transwell小室实验检测Ishikawa细胞的侵袭和迁移。结果转染miR-497-5p mimics可升高Ishikawa细胞中miR-497-5p表达,降低VEGFA mRNA表达（P<0.05）,VEGFA是miR-497-5p的靶基因。与miR-NC组比较,miR-497-5p组细胞中VEGFA、Vimentin和E-cadherin蛋白的表达水平、侵袭细胞数和迁移细胞数均明显降低,而N-cadherin蛋白表达升高（P<0.05）;与pLV-VEGFA组比较,miR-497-5p+VEGFA组细胞中VEGFA、Vimentin和E-cadherin蛋白的表达水平以及侵袭、迁移细胞数量均明显降低,而N-cadherin蛋白表达明显升高（P<0.05）。结论 miR-497-5p可靶向VEGFA抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的侵袭、迁移和上皮间质转化。     

松香酸通过上调miR-30a-3p表达增强缺氧诱导的HUVECs血管生成

目的探讨松香酸对急性心肌梗死(AMI)后内皮细胞血管生成及迁移的作用与机制。方法在体外构建人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)细胞缺氧模型;通过Matrigel小管形成实验检测HUVECs的血管生成情况;Transwell及伤口愈合实验检测HUVECs的细胞迁移;Western blot检测血管内皮生成因子A(VEGFA)的表达情况;qRT-PCR检测miR-30a-3p的转录水平。结果成功构建细胞缺氧模型;Matrigel小管形成实验显示缺氧抑制HUVECs的血管生成及细胞迁移,而利用松香酸处理缺氧细胞后,可以促进其血管生成和细胞迁移;Western blot结果显示,松香酸能够促进VEGFA的表达;进一步利用qRT-PCR检测松香酸处理后细胞内miR-30a-3p水平,发现松香酸可明显提高miR-30a-3p水平,而在细胞内转染miR-30a-3p inhibitor后,松香酸促进HUVECs的血管生成和细胞迁移作用被抑制。结论松香酸可能通过调节miR-30a-3p的表达,增强HUVECs的血管生成与细胞迁移。     

miR-30a-3p通过靶向调控BAFF在肾癌细胞迁移和血管生成能力中的作用研究

目的:研究微小RNA(miR)-30a-3p对肾细胞癌(RCC)细胞的转移和血管生成表型的影响。方法:结合癌症基因组图谱(TCGA)数据库提供的RCC中miR-30a-3p表达数据分析miR-30a-3p在RCC细胞系中的表达特征。结合生物信息学网站预测miR-30a-3p与B细胞激活因子(BAFF)3’非翻译区(3’-UTR)的结合。将RCC细胞系ACHN和786O分为LV-miR-30a-3p组[感染过表达miR-30a-3p的慢病毒载体]、LV-NC组[感染慢病毒载体阴性对照]、LV-miR-30a-3p+pcDNA-BAFF组[联合感染LV-miR-30a-3p和过表达BAFF的载体(pcDNA-BAFF)]以及LV-miR-30a-3p+pcDNA-EV组[联合感染LV-miR-30a-3p和空载体(pcDNA-EV)]。Transwell迁移小室法检测细胞的迁移能力,小管形成实验检测细胞血管生成能力。qPCR检测miR-30a-3p的表达。Western blot检测BAFF、促血管生成蛋白血管内皮生长因子A(VEGFA)的蛋白表达。双荧光素酶基因报告实验检测ACHN细胞中...     

MicroRNA 145 may play an important role in uveal melanoma cell growth by potentially targeting insulin receptor substrate-1

Background MicroRNAs （miRNAs） contribute to tumorigenesis by acting as either oncogenes or tumor suppressor genes. In this study, we investigated the role of miR-145 in the pathogenesis of uveal melanoma. Methods Expression profiles of miRNAs in uveal melanoma were performed using Agilent miRNA array. Quantitative real-time polymerase chain reaction was used to screen the expression levels of miR-145 in normal uveal tissue, uveal melanoma tissue, and uveal melanoma cell lines. Lenti-virus expression system was used to construct MUM-2B and OCM-1 cell lines with stable overexpression of miR-145. Cell proliferation, cell cycle, and cell apoptosis of these miR-145 overexpression cell lines were examined by MTT assay and flow cytometry respectively. The target genes of miR-145 were predicted by bioinformatics and confirmed using a luciferase reporter assay. The expression of insulin-like growth factor-1 receptor （IGF-1R）, insulin receptor substrate-1 （IRS-1） proteins was determined by Western blotting analysis. IRS- 1 was knocked down in OCM-1 cells. TUNEL, BrdU, and flow cytometry assay were performed in IRS-1 knocked down OCM-1 cell lines to analyze its function. Results Forty-seven miRNAs were up regulated in uveal melanoma and 61 were down regulated, miR-145 expression was significantly lower in uveal melanoma sample and the cell lines were compared with normal uveal sample. Overexpression of miR-145 suppressed cell proliferation by blocking the G1 phase entering S phase in uveal melanoma cells, and promoted uveal melanoma cell apoptosis. IRS-1 was identified as a potential target of miR-145 by dual luciferase reporter assay. Knocking down of IRS-1 had similar effect as overexpression of miR-145. Conclusion miR-145 might act as a tumor suppressor in uveal melanoma, and downregulation of the target IRS-1 might be a potential mechanism.     

miR-17-5p在大鼠垂体泌乳素腺瘤MMQ细胞耐药中的作用

目的：探讨microRNA-17-5p（miR-17-5p）在大鼠垂体泌乳素腺瘤MMQ细胞耐药中的作用及相关机制。方法：利用miR-17-5p类似物及拮抗物分别过表达和抑制大鼠垂体泌乳素腺瘤MMQ细胞中miR-17-5p的表达,并采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法进行检测。利用CCK-8法检测miR-17-5p表达调控前后细胞增殖以及对卡麦角林（CAB）治疗反应的变化。通过生物信息学方法预测miR-17-5p的靶点基因,然后采用荧光素酶报告检测法进行验证,继而用qRT-PCR及Western blot法检测miR-17-5p对靶基因表达的影响。慢病毒细胞转染过表达MMQ细胞中的PTEN基因,用Western blot检测PTEN的表达水平,并采用CCK-8法检测PTEN过表达对MMQ细胞耐药性的影响。结果：miR-17-5p过表达可促进MMQ细胞的增殖,而miR-17-5p敲减则能抑制MMQ细胞的增殖。miR-17-5p敲减能上调MMQ细胞对CAB治疗的敏感性,相反,miR-17-5p过表达则显著降低MMQ细胞对CAB治疗的敏感性。生物信息学方法预测PTEN为miR-17-5p潜在作用靶点,荧光素酶报告检测法进一步验证了两者的相互作用关系,同时miR-17-5p过表达的MMQ细胞中PTEN mRNA及蛋白表达量显著下降,而miR-17-5p敲减的MMQ细胞中PTEN mRNA及蛋白表达量显著上升。PTEN表达上调能部分逆转miR-17-5p过表达引起的MMQ细胞对CAB治疗敏感性降低。结论：miR-17-5p可通过下调PTEN的表达促进MMQ细胞增殖并降低其对CAB治疗的反应。     

过表达miR-18a靶向ATM对结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究miR-18a通过靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因 (ataxia telangiectasia mutated gene, ATM)调控结肠癌细胞的生物学特性。方法 通过软件预测miR-18a其中一个靶基因。设计合成miR-18a的模拟剂（mimics）和抑制剂（inhibitor）,通过转染不同组分上调或下调内源性miR-18a在结肠癌细胞株HCT116中的表达。采用实时荧光定量（qRT）-PCR、Western blot、 MTT法、克隆形成实验、Transwell等方法,检测过表达miR-18a调控ATM基因的表达对体外结肠癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果 软件预测发现miR-18a的其中一个靶基因是ATM。通过瞬时转染,过表达内源性miR-18a,可降低HCT116细胞内靶基因ATM蛋白的表达水平。 转染miR-18a mimics后能够下调HCT116细胞的增殖活力,同时显著降低HCT116细胞的克隆形成能力、横向迁移能力及纵向侵袭能力,以上各项改变均与miR-18a过表达有关。结论 证实了miR-18a通过负向调控ATM的表达,抑制结肠癌细胞HCT116的增殖和迁移能力。     

miRNA-145通过调控IRS-1影响葡萄膜黑色素瘤细胞增殖

背景：微小RNA（miRNA）在肿瘤发生过程中可以作为癌基因或者抑癌基因发挥作用。本文中我们研究了miR-145在葡萄膜黑色素瘤发生过程中所起的作用。 方法：采用安捷伦miRNA芯片在葡萄膜黑色素瘤中检测miRNA的表达谱,并用实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）验证miR-145在正常葡萄膜组织,葡萄膜黑色素瘤组织和葡萄膜黑色素瘤细胞系中的表达水平。使用慢病毒表达系统构建了稳定过表达miR-145的葡萄膜黑色素瘤细胞系MUM-2B和OCM-1。使用MTT方法检测细胞增殖。使用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。通过生物信息学预测miR-145的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因检测来验证。使用Western blot检测潜在的miR-145靶蛋白IGF-1R和IRS-1的表达。在OCM-1细胞系中敲除IRS-1基因通过TUNEL, BrdU以及流式细胞术验证其在细胞中的功能。 结果：与正常葡萄膜组织样本比较,葡萄膜黑色素瘤组织中发现了47种miRNA上调,61种miRNA下调。其中miR-145在葡萄膜黑色素瘤组织和细胞系中表达比正常葡萄膜组织显著下调。在葡萄膜黑色素瘤细胞系中过表达miR-145可以抑制细胞增殖,并将阻断细胞从G1期进入S期,同时还可以促进肿瘤细胞的凋亡。鉴定了IRS-1可能为miR-145在葡萄膜黑色素瘤中的靶基因。敲除IRS-1基因与过表达miR-145具有类似的效果。 结论：我们的数据首次表明了miR-145可能通过下调IRS-1而抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖。     

MicroRNA-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的  探讨microRNA-222（miR-222）对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法  将miR-222和对照分别转染入肺腺癌细胞系A549进行活细胞计数法试剂盒（CCK-8）增殖实验、Transwell迁移及Matrigel侵袭实验,观察miR-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。运用荧光素酶报告实验、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot验证miR-222靶向下调ETS1的过程。结果  CCK-8增殖实验,Transwell迁移及Matrigel侵袭实验发现,与对照组相比miR-222能够促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。荧光素酶报告实验、qRT-PCR及Western blot实验发现,miR-222可以靶向下调ETS1的表达,且ETS1参与调节上述过程。结论  miR-222通过靶向下调ETS1,促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

     

MiR-9在人神经胶质瘤中调节CBX7的表达

目的检测CBX7在人神经胶质瘤中的表达,研究人神经胶质瘤中异常表达的microRNA对CBX7的可能调控作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测2例正常脑组织、9例胶质瘤组织和3株胶质瘤细胞系中CBX7mRNA和蛋白水平的表达变化。结合Miranda和改良的机器学习法预测调控CBX7的miRNA。采用real-time PCR检测上述组织和细胞系中miR-9的表达,然后在细胞中过表达或敲低miR-9,结合荧光素酶实验和Western blot检测miR-9对CBX7表达的影响。采用MTT实验和流式细胞术分析miR-9敲低后对T98G细胞生长的影响。结果在胶质瘤组织和细胞系中,CBX7的mRNA水平改变不明显,而蛋白水平却明显下调。生物信息学预测CBX7可能受包括miR-9在内的多个miRNAs调控。与正常组织相比,miR-9在胶质瘤中表达明显增高。在293ET细胞中,过表达miR-9能抑制CBX7-3UTR报告基因活性。在T98G细胞中,敲低miR-9可增加CBX7-3UTR报告基因活性,对内源性CBX7的mRNA水平无明显影响,但使CBX7蛋白表达增加。敲低miR-9后,T98G存活细胞数增加,而且G1期细胞数比对照组明显减少。结论由于受到miR-9转录后水平的抑制,CBX7在人神经胶质瘤中表达下调甚至缺失。     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测人卵巢上皮细胞HOSEpi C以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区(3’-UTR)的野生型(WT)和突变型(mut)荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义(P <0. 05),选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miRNA-186靶向Twist-1促胃癌侵袭、迁移的机制研究

目的检测miRNA-186在胃癌中的表达情况,观察miRNA-186表达改变对人胃癌细胞株侵袭、迁移能力的影响并分析可能的分子机制。方法RT-PCR法检测40例胃癌患者胃癌及配对的正常胃黏膜组织中miRNA-186的表达水平,同时检测miRNA-186在胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平。在胃癌细胞中分别转染miRNA-186模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）以上调、下调miRNA-186的表达,应用Transwell试验观察其对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响。应用生物信息学软件预测miRNA-186可能的靶基因,并经双荧光素酶试验及Westernblot试验验证靶基因,分析其促转移的分子机制。结果胃癌组织相较于正常胃黏膜组织、胃癌细胞株相较于正常胃黏膜上皮细胞株的miRNA-186表达水平均降低（均P＜0.05）。在胃癌细胞中,分别上调、下调miRNA-186的表达水平,能够抑制、促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。miRNA-186与Twist-1之间存在反向调控的关系,Twist-1是miRNA-186的靶基因。同时发现,下调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达上调,E-cadherin表达下调,而当上调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调。结论在胃癌组织中miRNA-186的表达水平降低,可能通过靶向调控Twist-1的表达,改变E-cadherin和N-cadherin的表达水平,导致胃癌细胞上皮间质转化,进而促进胃癌细胞的侵袭、迁移。     

HOST2 lncRNA靶向结合miR-211干预卵巢癌细胞转移的机制研究

目的〖KG*2〗探讨HOST2 lncRNA靶向结合miR-211干预卵巢癌细胞转移的机制。 〖HTH〗方法〖KG*2〗实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测7种卵巢癌细胞系中HOST2 lncRNA及miR-211表达水平,选取其中差异表达最高卵巢癌细胞作为候选细胞系;双荧光素酶报告基因实验检测卵巢癌细胞中HOST2 lncRNA与miR-211间靶向相关性。将细胞分为转染无序HOST2 lncRNA及miR-211对照物的对照组、转染HOST2 lncRNA过表达载体的HOST2组、共转染HOST2 lncRNA与miR-211 mimic的（HOST2+miR-211）组。细胞划痕实验、Transwell小室实验及裸鼠腹腔移植瘤实验分别检测HOST2 lncRNA靶向miR-211对卵巢癌细胞体内外转移能力的影响;Western Blot检测卵巢癌细胞内转移相关蛋白的表达变化。 〖HTH〗结果〖KG*2〗HOST2 lncRNA在7种卵巢癌细胞中显著高表达,miR-211在7种卵巢癌细胞中显著低表达,二者表达存在显著负相关关系,其中SKOV3细胞中HOST2 lncRNA及miR-211表达差异最高（P＜0.01）。双荧光素酶报告实验显示野生型HOST2报告基因质粒共转染miR-211 mimic后SKOV3细胞内荧光素酶活性较对照组受到显著抑制;过表达HOST2 lncRNA促进细胞划痕愈合、体外侵袭和迁移及裸鼠体内腹腔移植瘤的转移,反之共转染miR-211 mimic后抑制过表达HOST2 lncRNA促进的细胞体内外的转移;Western Blot结果显示过表达HOST2 lncRNA显著提高细胞内SOX4、Snail1及N-cadherin蛋白表达,下调E-cadherin蛋白表达,反之共转染miR-211 mimic后逆转上述蛋白表达变化（P＜0.01）。 〖HTH〗结论〖KG*2〗HOST2 lncRNA可能通过作为内源竞争RNA竞争性结合miR-211促进卵巢癌细胞体内外的转移。     

miR-145抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖活性及其与CDK6的靶向关系

目的 在口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞中验证miR-145靶向CDK6对其细胞增殖活性的影响. 方法 构建pcD-NATM6.2-GW-pre-miR-145重组表达质粒并转染入Tca-8113细胞,以荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测转染后癌细胞miR-145的表达水平.MTT法评价miR-145对Tca-8113细胞增殖活性的影响,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-145对候选靶基因CDK6的调控作用,同时采用Western blot法检测miR-145对CDK6蛋白表达水平的影响. 结果 成功构建miR-145真核表达载体,qRT-PCR显示miR-145组中miR-145的表达显著高于内源性表达量（P＜0.001）,说明miR-145在Tca-8113细胞中具有较高的转染效率.MTT法提示miR-145的过表达能够显著抑制Tca-8113细胞的增殖（P＜0.01）,同时双荧光素酶报告基因分析表明,共同转入miR-145与CDK6野生型（CDK6-WT）会显著抑制Tca-8113细胞中的荧光酶表达（P=0.002）;Western blot进一步证实了miR-145的过表达能够抑制内源性CDK6蛋白的表达. 结论 miR-145可能通过直接靶向CDK6来抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞的增殖活性.