D5 Stat5a对人类乳腺癌细胞钙粘蛋白表达的影响

【立论依据及设计思路】 Delta5 STAT5a是谭敦勇教授运用基因克隆等技术发现人类转录因子“STAT5a”的一种信使RNA剪切后的变体。大量前期工作证实D5 Stat5a在人类乳腺癌组织有异常表达,经腺病毒介导将D5 Stat5a cDNA转入培养的人乳腺癌细胞后,能显著促进癌细胞的增值与去分化。提示D5 Stat5a在乳腺癌的发生、发展及预后中,具有重要的病理学意义。E-cadherin位于上皮组织,是细胞与细胞之间相互连接的主要分子。在人的许多恶性肿瘤中E-cadherin表达减少或缺失与肿瘤发展,侵袭和转移密切相关,体外试验明确的证实了在培养状态下表达E-cadherin分子的肿瘤不侵入其附着的基质,但如果使E-cadherin表达缺失,肿瘤细胞获得侵袭能力。将E-cadherin的 cDNA 转染肿瘤细胞使其表达E-cadherin分子后,肿瘤丧失其侵袭能力。我们推测D5 Stat5a对癌细胞转移特性的影响与其调节E-cadherin等基因的表达有关。本课题拟通过采用腺病毒介导的基因转移技术转染人乳腺癌细胞,检测转染后E-cadherin表达的变化,以了解D5 Stat5a对人乳腺癌细胞E-cadherin的表达是否具有调节作用。 【实验内容】 培养乳腺癌细胞(MCF-7),分为空白组、阴性对照组和实验组。用腺病毒(Adv-D5)转染实验组乳腺癌细胞,同法构建不针对任何基因的阴性对照腺病毒。采用qRT-PCR、蛋白质印迹和细胞免疫荧光方法检测D5 Stat5a转染后E-cadherin在mRNA水平和蛋白水平的表达,将所得数据进行统计学处理并分析。 【材料】 D5 Stat5a和细胞系,RPMI 1640培养液10%胎牛血清,1%青链霉素,腺病毒(Adv-D5),Trizol试剂,E-cadherin的引物,PCR仪,逆转录反应试剂盒,36℃水浴箱,低速离心机,CO2细胞恒温培养箱。 【可行性】 E-cadherin是一类介导细胞间质同质粘附的钙依耐性跨膜糖蛋白,其下调可降低一个组织内细胞黏附的强度,导致细胞活动性增加。大量研究表明癌细胞中E-cadherin表达下调或异常表达。D5 stat5a可能是通过调控E-cadherin的表达来影响癌细胞的转移,实验的进展具有可预见性。 【创新性】 D5 stat5a作为一种刚被研究出来的STAT5a的基因变体,目前关于这种基因与E-cadherin在乳腺癌中的关系研究尚少,通过对比MCF-7与Adv-D5转染后MCF-7中E-cadherin的表达情况,探讨D5 stat5a对E-cadherin的影响,为D5 stat5a在乳腺癌的治疗中提供理论依据。     

实验克汀病大鼠几项生化指标的观察

作者观察用0.5％NaClO_4饮水复制克汀病大鼠几次生化指标。实验克汀病大鼠某些表现与人类克汀病相似。实验大鼠甲状腺相对重量和血清TSH水平明显高于对照组;血清T_4水平和肝脏α-GPD活性明显低于对照组,证实实验大鼠机体处于甲状肿腺功能低下状态。实验大鼠下丘脑5HT,5HIAA和5HIAA/5HT明显高于对照组证实了下丘脑组织中5HT系统在甲状腺低功条件下代谢旺盛。而另一方面,这种神经介质代谢的变化可能是神经克汀病某些异常行为的生化基础。     

RABEX-5和RAB5在乳腺癌中的表达及意义

目的 初步探讨RABEX-5和RAB5与乳腺癌的关系.方法 采用免疫组织化学法、RT-PCR和Western blot法检测RABEX-5及RAB5 mRNA和蛋白在60例乳腺癌、15例乳腺纤维腺瘤和15例乳腺正常组织中的表达,并检测相关临床病理指标与RABEX-5及RAB5表达的关系.结果 RABEX-5和RAB5 ...     

FTP5通过抑制Cdk5活性调节胰岛β细胞的胰岛素分泌

目的 探讨FTP5通过抑制周期素依赖性蛋白激酶(Cdk5)活性调节高糖环境下胰岛β细胞分泌胰岛素的作用.方法 体外培养小鼠胰岛β细胞株(Min6细胞).①体外抑制实验.将Cdk5活性抑制肽(CIP)和P5蛋白与Cdk5+p25激酶在试管混匀测定酶的活性,分为:p25+Cdk5组、p25+Cdk5+CIP组,p25+Cdk5+P5组.②细胞内试验.应用腺病毒表达空载体(EV),含有p5的重组腺病毒(p5)、和FITC-TAT合成的短肽(FTP5),分别转染细胞并给不同浓度的葡萄糖3 mmol(低糖,LG)和25 mmol(高糖,HG)刺激,分组为LG+EV组、HG+EV组、HG+FTP5组、HG+p5组.用免疫印迹和免疫荧光检测Cdk5和p35等蛋白表达,同位素标记测定Cdk5的活性,酶联免疫吸附试验测定胰岛素的分泌水平.结果 p5与CIP均可抑制Cdk5的活性,且前者的抑制作用更强;①高糖可以诱发p35表达增高,抑制胰岛素分泌;②FTP5和p5均抑制在高糖(25 mmoL)刺激下的Cdk5活性、恢复胰岛素的分泌,FTP5的作用更强(P＜0.05).结论 FTP5可以抑制Cdk5的过度活性,恢复胰岛素分泌,在2型糖尿病治疗中可能有潜在的广阔前景.     

脑缺血时5-羟色胺变化及其拮抗剂保护作用的研究（摘要）

本文旨在探讨脑缺血时5-羟色胺(5-HT)的变化及5-HT2受体拮抗剂保护作用。①本实验通过结扎沙土鼠双侧颈总动脉10min、30min及结扎30min再灌2h后，测定脑缺血及缺血再灌双侧大脑皮层5-HT和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的变化，结果发现：脑缺血时5-HT、5-HIAA含量显著降低5-HT假手术组为967.76±276.53ng·g^-1；缺血10min组为581．83±176．61ng·g^-1；     

补体C5a、C5a受体及其拮抗剂的研究进展

C5a是最重要的补体活化产物之一,它与相应的C5a受体结合被激活后,参与了多种疾病的病理过程,如急性肺损伤、脓毒血症、类风湿性关节炎、肾小球肾炎等疾病。如何阻断C5a信号的下传,从而减轻炎症反应一直是免疫学研究的热点问题。目前C5a和C5a受体的拮抗剂主要分为抗C5a抗体、小分子拮抗剂、C5a反义肽、C5a突变体和细菌来源的趋化抑制蛋白等。本文着重介绍C5a和C5a受体的结构与功能,以及相关拮抗剂的研究进展。     

5-羟色胺综合征1例

患者女性，42岁。以眠差、四肢无力、多汗2d之主诉入院。患者家属代诉因“抑郁症”发作服用博乐欣、阿米替林、碳酸锂及对症处理治疗1个月好转。2d前突然出现晚上睡眠差，每天睡眠不足8h，四肢发软、无力，不能做家务及农活，生活不能自理需人照顾，并且全身多汗，饮食欠佳，不能与人正常交谈，大小便正常。病期无寒战、高热惊厥症状。既往有“心境障碍”，呈双相型，多次治疗均好转。无手术、外伤史及其他躯体异常情况。体检：T36．5℃，P93次／min，R20次／min，BP130／70mmHg。全身皮肤黏膜未见黄染、皮疹、出血点，浅表淋巴结未触及肿大，双瞳孔等大等圆，对光反射存在，眼球运动不灵敏，咽、扁桃体检查不配合，颈项有抵抗力．心、肺听诊无异常现象．肝脾不肿大，     

基于西南地区居民EQ-5D-5L量表信效度评价

  目的  探究EQ-5D-5L量表应用于我国西南地区人群中生命质量评价的信度和效度。  方法  采用克朗巴哈α系数（Cronbach’s α）测量量表的内部一致性信度,探索性因子分析结合验证性因子分析测量结构效度、聚敛效度和区分效度。  结果  Cronbach’s α系数为0.857,探索性因子分析提取2个方差累计贡献率为77.311%的公因子,第一公因子代表行动能力、自己照顾自己能力和日常活动能力,第二公因子代表疼痛或不舒服、焦虑或抑郁。验证性因子分析两个公因子的相关性为0.659,第一公因子平均方差变异为0.862且组合信度为0.949,第二公因子的平均方差提取值为0.587且组合信度为0.739,四处走动、自我照顾和日常活动在第一公因子上的载荷分别为0.871、0.945和0.967,疼痛或不舒服、焦虑或沮丧在第二公因子上的载荷分别为0.708和0.820。  结论  EQ-5D-5L在应用于西南地区居民测量生命质量有较好的信度和效度。     

补体C5a/C5aR在肿瘤发生中作用的研究进展

补体系统是免疫系统的重要组成部分，补体能够有效清除体内的异物，维持身体内环境的稳定，补体系统在一定程度上能够有效抑制肿瘤的发生。但近年来随着研究的不断深入，发现补体系统过度激活也能促进肿瘤的发展。C5a/C5aR作为补体的重要组成部分，在肿瘤中的作用也逐渐受到关注，补体C5a/C5aR激活后可以诱导慢性炎症、免疫抑制微环境、血管生成和癌症相关的信号通路等，从而影响肿瘤的发生发展。提示C5a/C5aR可能成为抗肿瘤免疫治疗潜在的新靶点。文章就近年来国内外关于补体成分C5a/C5aR在肿瘤中相关研究进行综述。     

高效液相荧光检测法同时测定人体内5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸

目的建立高效液相荧光检测法(HPLC-FLD)来同时测定人体血浆、血小板、脑脊液中5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸的含量。方法样本经预处理后用高效液相色谱仪进行测定。色谱柱为KromasilC18(250mm×4.6mm,7μm),流动相:甲醇和0.1mol/L磷酸二氢钾(15:85),流速1.5ml/min,Ex=254.nm,EM=338nm,柱温为35℃。结果5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸得到良好分离,线性范围5-羟色胺为1.1328～1160ng/ml,5-羟吲哚乙酸为0.9765～2000ng/ml,日内RSD分别为0.743%和1.470%,日间RSD分别为1.310%和2.043%;5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸的平均回收率:血浆中分别为98.32%、98.50%,血小板中分别为91.41%、88.05%,脑脊液中分别为92.84%、93.51%。结论该法具有取样量少、简单、快速、准确、灵敏等特点,可作为临床检测的常规方法。     

程序化死亡基因5(PDCD5)在骨关节炎软骨中的表达及意义

目的：研究程序化死亡基因5(PDCD5)在正常及骨关节炎关节软骨中的表达规律，探讨PDCD5在骨关节炎发病中的作用。方法：取20例骨关节炎及10例股骨颈骨折行关节置换术时切除的关节软骨，分离软骨细胞，留取组织块制作石蜡切片。分别用流式细胞术、直接免疫荧光、激光共聚焦显微镜及RT-PCR检测PDCD5在正常及骨关节炎软骨细胞内的表达水平及部位，免疫组织化学检测PDCD5在关节软骨内的表达特征。结果：在骨关节炎软骨细胞中PDCD5表达上调，以细胞核内增强为主；在骨关节炎的组织切片中PDCD5表达增强，阳性细胞主要分布在表层及深层，而在股骨颈骨折中PDCD5阳性细胞主要分布在表层及中层。结论：PDCD5可能参与了骨关节炎软骨细胞的凋亡过程，在骨关节炎的发病中发挥作用。     

心电图Sv5振幅间期的改变对诊断左前分支传导阻滞的价值

对左前分支传导阻滞组（n=60）病人的心电图V5导联S波振幅、时间的变化与非左前分支传导阻滞组（n=60）进行对比，左前分支阻滞组两项指标均增加者50例（占83.33％），而无左前分支阻滞组仅8例（13．33％），两组差异有显著性（P〈0.005），提示，诊断左前半时，在排除引起Sv5增深、增宽的其它因素后，具有一定的参考价值。     

人趋化因子受体5基因5''侧翼区功能分析

目的：分析人趋化因子受体5（CCR5）基因5’侧翼区的调控序列。方法：构建CCR5基因不同长度5’侧翼区的萤光素酶报告基因载体，分别转染人Jurkat细胞中，检测分析其萤光素酶活性。结果：CCR5基因5’侧翼区-1006bp至-1bp、-804bp至-1bp、-586bp至-1bp和-478bp至-1bp区段的pGL3重组质粒在Jurkat细胞中能表现出明显的萤光素酶活性。结论：CCR5基因5’侧翼区-478bp至-1bp序列中存在基因转录的主要上调元件。     

5-HT2R拮抗剂类抗抑郁药的研究与开发

本文综述了5-HT受体亚型与抑郁症的关系及分类，并重点综述了5—HT2受体拮抗剂抗抑郁作用的机制及其新产品的研究与开发。表明中枢神经系统的5-HT2AR与血小板中5-HT2AR药理学特性相似，指出了血小板5—HT2AR套度为抑郁症的状态指标。     

三氯醋酸治疗女性尖锐湿疣疗效观察

目的:探讨用三氯醋酸治疗女性尖锐湿疣疗效报道。方法:2000年5月～2010年4月在我门诊治疗的女性尖锐湿疣72例,其中用三氯醋酸治疗64例,8例用5%5-FU软膏治疗。结果:用三氯醋酸治疗,治愈率为100%。结论:三氯醋酸无毒性,腐蚀度不深,方法简便,适合基层门诊部普查后的治疗。     

siRNA转染浓度和时间对HeLa细胞ANXA5表达的抑制作用

目的：优化靶向ANXA5的siRNA转染HeLa细胞的条件,为进一步研究ANXA5低表达对宫颈癌细胞生物功能的影响奠定基础。方法：将靶向ANXA5的siRNA转染HeLa细胞,设置不同的siRNA与脂质体的比值和转染时间,Western Blot检测ANXA5蛋白的表达。结果：siRNA与脂质体的比值为0.4：1时,转染入HeLa细胞72h后,HeLa细胞ANXA5蛋白的表达水平最低,即抑制作用最强。结论：siRNA与脂质体的比值和转染时间可影响HeLa细胞ANXA5的表达,存在最佳比值和转染时间。     

5α－还原酶缺乏症的初步实验研究

５α－还原酶缺乏症是一种罕见的性别分化异常病，临床表现为男性假两性畸形。本文将外阴皮肤组织５α－还原酶活性的测定及雄激素受体的分析技术应用于临床实践，结合激素测定和人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）刺激试验，以１２例正常同年龄组的男性为对照，发现２例男性假两性畸形患者睾酮（Ｔ）正常水平而双氢睾酮（ＤＨＴ）低下，经ｈＣＧ刺激后睾酮（Ｔ）水平随时相增加而双氢睾酮维持在低水平；虽然雄激素受体的配基结合活性基本正常，但５α－还原酶Ⅱ型同功酶活性明显缺陷，从而从病因学上诊断为５α－还原酶缺乏症。