阿托伐他汀影响C57BL/6J小鼠主动脉粥样硬化的机制

目的:探讨阿托伐他汀对C57BL/6J小鼠动脉粥样硬化的影响机制。方法:将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组和药物干预组。12周后酶法和免疫比浊法检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和apoA-I;HE染色观察主动脉病理形态学改变;高效液相色谱法检测动脉壁胆固醇含量;PepTag@Assay法检测蛋白激酶C活性变化;Westernblot检测动脉壁CD36蛋白表达。结果:相较于模型组,阿托伐他汀可以显著下调血清总胆固醇和LDL胆固醇水平,上调血清apoA-I水平,抑制胆固醇在血管壁的蓄积,降低内膜/中膜厚度比,下调动脉壁蛋白激酶C活性和CD36蛋白表达,有效地抑制了动脉粥样硬化的发展。结论:阿托伐他汀可能是通过抑制胆固醇合成、下调蛋白激酶C活性和CD36蛋白表达而发挥降脂、消斑、改善动脉壁功能的作用。     

2型糖尿病患者三磷酸腺苷结合盒转运子G1表达下调不依赖于肝X受体的调节

目的:研究2型糖尿病患者胆固醇外流的功能改变及调节基因三磷酸腺苷结合盒转运子G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)的表达,并探讨肝X受体(liver X receptor,LXR)对ABCG1表达的调节作用.方法:选取2型糖尿病和健康对照组各30例,抽取外周静脉血40 mL,分离人外周血单核细胞,经巨噬细胞集落刺激因子诱导分化为巨噬细胞.以[3H]胆固醇标记巨噬细胞,用液闪计数法测定胆固醇外流率.实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT PCR)法检测人单核巨噬细胞ABCA1/G1的mRNA表达,Western blot法检测ABCA1/G1的蛋白表达;siRNA法抑制LXRα、LXRβ,观察其对ABCG1mRNA表达的影响;电泳迁移率试验方法(electrophery mobility supershift assay,EMSA)检测LXR与ABCG1启动子区LXR反应元件(liver X receptor element,LXRE)结合的DNA结合蛋白的表达.结果:与健康对照组相比,2型糖尿病患者ABCG1的mRNA及蛋白表达水平与高密度脂蛋白介导的胆固醇外流率显著降低(19.0％ ±1.2％ vs.12.8％ ±3.6％,t=2.532,P=0.016),而ABCA1的mRNA及蛋白表达水平与载脂蛋白A1(Apolipoprotein A1,ApoA1)介导的胆固醇外流率差异无统计学意义(12.0％ ±1.2％vs.10.2％ ±2.3％,t=1.771,P=0.109).LXRα、LXRβ的mRNA表达水平以及LXR-LXRE DNA结合蛋白的表达差异均无统计学意义(t=1.025,P=0.315;t=-0.531,P=0.600;t=1.483,P=0.164),且LXR的siRNA抑制对ABCG1 mRNA的表达也无显著影响(t=2.143,P=0.061).结论:2型糖尿病患者巨噬细胞胆固醇外流功能的下降与ABCG1表达下调相关,而ABCG1的表达下调可能不依赖于LXR.     

三七总皂苷对泡沫细胞内ABCA1和LXRα mRNA表达的影响

目的 观察三七总皂苷(Panat notoginseng saponins,PNS)对泡沫细胞ABCA1和LXRα mRNA表达及脂质沉积的影响.方法 提取SD大鼠腹腔巨噬细胞纯化后,与高、中、低剂量PNS(80、40、20μg/ml)及氧化低密度脂蛋白共孵育48 h.油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值.采用RT-PCR法检测泡沫细胞ABCA1和LXRα mRNA表达情况.结果 模型组细胞中TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.05);与模型组相比,PNS高、中剂量组细胞内TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低(P<0.05).PNS高、中剂量组中ABCA1及LXRα mRNA的表达均显著高于模型组(P<0.01).结论 PNS可以上调ABCA1和LXRα mRNA表达并减少巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质沉积.     

麝香保心丸对小鼠动脉粥样硬化的作用及机制研究

目的探究麝香保心丸在载脂蛋白E(ApoE)敲除小鼠中的抗动脉粥样硬化作用及其作用机制。方法2019年9月—2020年8月于武汉科技大学实验动物中心进行实验。ApoE基因敲除雄性小鼠60只,按照随机数字表法分为2组,各30只。干预组小鼠予麝香保心丸(25 mg/kg)研沫+生理盐水灌胃,对照组予生理盐水(与干预组等体积)灌胃。2组小鼠均高脂饲养20周后处死,取主动脉树及主动脉窦染色,比较2组小鼠主动脉树及主动脉窦部斑块面积,取血液检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,免疫荧光法及PCR法检测小鼠主动脉组织白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,PCR及Western-blot法检测小鼠主动脉组织肝细胞X受体-α(LXRα)、LXRβ、ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ABCG1表达水平。结果干预组小鼠主动脉树及主动脉窦部斑块面积均低于对照组(t/P=3.021/0.019、3.238/0.001);血清TG、TC、LDL-C水平均低于对照组(t=5.074、6.327、4.492,P均<0.001),而HDL-C水平高于对照组(t/P=3.138/0.001)。干预组小鼠主动脉组织IL-6及TNF-αmRNA水平明显低于对照组(t/P=3.027/0.017、2.478/0.019),主动脉组织LXRα、LXRβ、ABCA1、ABCG1 mRNA均高于对照组(t=5.276、6.137、4.565、5.136,P均<0.01)。结论麝香保心丸通过抑制炎性反应和促进胆固醇流出,可达到抗动脉粥样硬化的目的。     

姜黄素通过LXRα-ABCA1通路抑制小鼠巨噬细胞脂质聚集

目的:探讨姜黄素(curcumine,CUR)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)所致小鼠巨噬细胞泡沫化过程中脂质聚集的影响及其机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,分别采用oxLDL(50 mg/L)和Dil(Dioctadecyl)-ox-LDL(10 mg/L)处理细胞24 h,将细胞培养于含不同浓度CUR(0.1~50.0μmol/L)的培养基,MTT法筛选合适的实验浓度;荧光共聚焦显微镜观察Dil-ox-LDL处理后脂质聚集情况;酶学终点法定量细胞内总胆固醇和游离胆固醇的变化;蛋白免疫印迹法检测细胞LXRα和ABCA1的表达水平。结果:与泡沫化组相比,CUR治疗组脂质聚集显著下降;总胆固醇和游离胆固醇的含量均明显下调;另外CUR可以在蛋白水平上引起LXRα和ABCA1的高表达。结论:CUR具有抑制ox-LDL氧化小鼠巨噬细胞脂质聚集的作用,且该作用可能与其上调LXRα-ABCA1表达从而调节细胞内胆固醇的含量有关。     

粉防已碱对高脂饮食兔主动脉壁血管细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶表达的影响

目的:探讨中药粉防已碱对高脂饮食兔主动脉壁血管细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT)表达的影响。方法:将18只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组(普通饲料,C组)、高脂模型组(高脂饲料,CH组)和粉防已碱组(高脂饲料 Tet,Tet组)。喂养12周后处死动物,从主动脉根部连续切片,常规HE染色,计算机图像扫描,分析主动脉内膜和管壁厚皮;血管壁脂质苏丹Ⅳ染色;Westemblot方法测定主动脉壁血管细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶表达。结果:CH组粥样斑块面积,内膜和血管壁厚度显著高于Tet组(P<0.01),而C和Tet组之间差异无显著性;ACAT蛋白含量各组差异无显著性(P>0.05)。结论:Tet具有抑制血管壁脂质沉积的作用,但不影响ACAT酶蛋白的表达。     

两种LXR激动剂对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化影响的对照研究

目的研究我校自行研制的LXR激动剂(MHEC)和进口LXR激动剂(T-0901317)在抑制动脉粥样硬化病变形成方面的作用及主要机制.方法以高脂饲养ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠为动脉粥样硬化模型,分为无药对照组、MHEC干预组和T-0901317干预组(10 mg·kg-1·d-1),每组6只,灌胃6周.检测血脂、分析主动脉壁中动脉粥样硬化病变的面积、用免疫组化SP法检测主动脉壁中ABCA1蛋白的表达.结果T-0901317组血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),MHEC组仅HDL-C显著高于对照组(P＜0.01);药物干预组的动脉粥样硬化病变面积均显著降低(P＜0.01),同时动脉壁中ABCA1的表达显著增强(P＜0.01).结论MHEC与T-0901317相比,有更好的血脂改善效果,二者均能显著抑制高脂饲养ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变的形成.这可能与它们能促进动脉壁中ABCA1蛋白的表达,增强胆固醇逆转运有关.     

硫酸吲哚酚对THP-1源性泡沫细胞ATP结合转运子A1和G1表达的调控

目的观察硫酸吲哚酚(IS)是否调节巨噬泡沫细胞脂滴的蓄积,以及对巨噬泡沫细胞ATP结合转运子A1(ABCA1)和ATP结合转运子G1(ABCG1)表达的影响。方法体外佛波酯(PMA)诱导人源单核细胞系THP-1分化为巨噬细胞,随后加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的IS以及ox-LDL共同作用24 h,油红O染色法观察细胞内脂滴的含量,RT-PCR法检测ABCA1和ABCG1 mRNA水平,Western blotting法检测ABCA1和ABCG1蛋白表达。结果 IS干预可明显促进细胞内脂滴蓄积,下调单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCA1和ABCG1 mRNA和蛋白的表达,且此作用呈浓度依赖性。结论 IS可通过下调ABCA1和ABCG1mRNA和蛋白的表达,增加细胞内脂滴蓄积,从而促进动脉粥样硬化的发生发展。     

脂联素对平滑肌源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

目的研究脂联素在体外干预泡沫细胞形成的内在机制及其对胆固醇外转运蛋白三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响。方法以平滑肌源性泡沫细胞为研究对象,采用不同浓度的脂联素体外干预平滑肌源性泡沫细胞,油红O染色观察细胞内脂滴的形成,Real-time PCR检测ABCA1转录水平的表达,Western-blot检测泡沫细胞膜蛋白LXRα、ABCA1、ABCG1和核蛋白PPARγ的磷酸化水平。结果 10μg/L脂联素能通过激活PPARγ/LXRα/ABCA1,促进胆固醇外转运蛋白ABCA1表达。结论脂联素可以激活PPARγ信号通路,促进外转运蛋白ABCA1表达,抑制平滑肌源性泡沫细胞的形成。