间充质干细胞介导"酶-前药基因"CYP1A2靶向抗肿瘤效应研究

目的 将人细胞色素P450 1A2(CYP1A2)基因转染骨髓间充质干细胞(BMSC),检测转基因BMSC协同化疗前药达卡巴嗪(DTIC)对人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞的靶向促凋亡作用,为以间充质干细胞为载体的"基因介导的酶-前药双靶向抗肿瘤策略"提供体外实验依据.方法 从人肝细胞中克隆CYP1A2基因,构建真核表达载体,分离、鉴定并培养BMSC,脂质体法将CYP1A2基因导入BMSC和Raji细胞中,RT-PCR和Westem blot法检测CYP1A2基因的表达,Transwell法检测BMSC的肿瘤靶向性,MTT法检测转基因Raji细胞对DTIC敏感性的改变,Annexin V/PI染色标记法检测转基因BMSC联合DTIC诱导Raji细胞凋亡的作用.结果 成功克隆CYP1A2基因并将构建的真核表达载体转染BMSC和Raji细胞,流式细胞术检测体外诱导分化结果符合BMSC特性,RT-PCR和Westernblot检测到转基因细胞中CYP1A2表达,Transwell迁移实验证实BMSC有肿瘤趋向性,MTT法检测显示DTIC呈剂量依赖性抑制转CYP1A2基因的Raji细胞生长,而转CYP1A2基因的BMSC细胞对DTIC相对耐受(IC50值分别为1.67 mmol/L和7.53 mmol/L,P＜0.01).Armexin V/PI染色法显示CYP1A2能够使细胞在体外代谢DTIC,产生细胞毒效应使肿瘤细胞凋亡,而且具有旁观者效应.结论 CYP1A2可使细胞在体外代谢DTIC产生细胞毒效应.以BMSC为载体的CYP1A2-DTIC酶-前药系统可发挥双靶向抗肿瘤作用,在体外诱导人恶性淋巴瘤细胞凋亡.     

pEGFP-E1A真核表达载体的构建及其体外抑制SMMC-7721肝癌细胞作用研究

目的构建含有EGFP及Ad5.EIA基因的重组真核表达载体pEGFP-E1A,研究其在体外对肝癌细胞的裂解作用。方法对pUC119-E1A质粒双酶切获得E1A基因,定向克隆带EGFP和neo筛选标记的真核表达载体到pEGFP-C1载体中,构建pEGFP-E1A质粒,通过脂质体导入人肝癌细胞SMMC-7721中,经RT-PCR及间接免疫荧光方法确认EIA基因的导入,DNAladder法检测EIA基因对SMMC-7721细胞的凋亡诱导作用。结果酶切和序列测定结果显示重组质粒构建正确,RT-PCR及间接免疫荧光结果显示,外源性E1A基因已整合于SMMC-7721细胞并获稳定表达,在6小时就导致SMMC-7721出现细胞凋亡。结论初步证实E1A基因在体外对人肝癌SMMC-7721细胞具有诱导细胞凋亡的作用,为进一步探索Ad5.EIA基因的抗瘤作用提供实验基础。     

CD40激发对恶性B淋巴细胞体外生物学行为的影响

目的 观察重组人可溶性CD40配体（rhsCD40L)及CD40L基因转染细胞（CD40L-TC）对恶性B淋巴细胞体外生物学行为的影响，探讨rhsCD40L在肿瘤生物治疗中的可能作用。方法 利用基因工程技术获得了rhsCD40L和CD40L-TC，分别与恶性B淋巴细胞株XG2，XG7，U266，8226，Raji及Daudi共同作用，分析了CD40激发对肿瘤细胞的体外增殖（锥虫蓝计数法），细胞周期（碘化丙锭掺入法），细胞表面共刺激分子的表达（免疫荧光标记法）以及细胞凋亡（Anexin-V-ETTC法）的效应。结果 （1）恶性B淋巴细胞株CD40表达呈异质性，XG2高表达CD40，8266，Raji和Daudi中度表达，而XG7和U266不表达CD40。显微镜下观察发现，rhsCD40L(5μg/ml）可引起XG2或Daudi细胞的同型聚集，该效应在作用6-8h后即可出现；与CD40L-TC细胞共育后（肿瘤细胞；CD40L-TC=5：1），XG2，Raji和Daudi细胞可粘附于CD40L-TC表面；（2）rhsCD40L和CD40L-TC均可显著抑制XG2，Raji和Daudi细胞的体外增殖，导致XG2细胞呈现G1期阻滞，而Raji和Daudi细胞阻滞于G2期，并诱导XG2，Raji,Daudi细胞的凋亡，凋亡率分别为：XG2细胞23.3%和18.8%,Raji细胞阻滞于G2期，并诱导XG2，Raji,Daudi细胞的凋亡，凋亡率分别为：XG2细胞23.3%和18.8%,Raji细胞11.6%和8.9%,Daudi14.2%和15.9%;(3)表型分析显示；rhsCD40L/CD40L-TC可明显上调XG2,Raji和Daudi细胞CD95的表达水平以及Raji细胞CD80的表达，而下调Raji细胞CD18的表达。结论 rhsCD40L能直接并显著地抑制恶性B淋巴瘤细胞株Raji,Daudi和多发性骨髓瘤细胞株XG2的体外增殖，诱导其凋亡，并上调Raji细胞免疫共刺激株Raji,Daudi和多发性骨髓瘤细胞株XG2的体外增殖，诱导其凋亡，并上调Raji细胞免疫共刺激分子CD80的表达，具有膜型CD40L的同样生物学功能，故rhsCD40L具有潜在的抗恶性B淋巴细胞肿瘤的作用。     

导入RASSF1A基因抑制膀胱癌细胞增殖的研究

[目的]探讨RASSF1A基因的表达对人膀胱癌细胞株体外增殖的影响.[方法]通过脂质体介导的基因转染法将野生型RASSF1A基因的真核表达载体及空载体转染膀胱癌BIU87细胞株.以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖程度,原位凋亡细胞检测技术和流式细胞仪检测膀胱癌BIU87细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测膀胱癌BIU87细胞Cyclin D1蛋白表达的改变.[结果]成功建立稳定表达野生型RASSF1A基因的膀胱癌细胞株.野生型RASSF1A基因的表达可明显抑制膀胱癌细胞在体外的生长,可以显著降低BIU87细胞的增殖比和增高BIU87细胞的凋亡指数,与对照相组比差异显著( P <0.05).BIU87细胞的细胞周期发生 G1/S期阻滞,Cyclin D1蛋白的表达水平下调.[结论]野生型RASSF1A的重表达通过下调Cyclin D1,抑制膀胱癌BIU87细胞体外增殖.     

硼替佐米诱导Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡的研究

本研究探讨硼替佐米对Burkitt淋巴瘤Raji细胞是否具有凋亡诱导作用及其机制。以硼替佐米处理Raji细胞,观察细胞增殖抑制作用的时间效应和剂量效应,在光学显微镜下观察药物作用前后细胞的形态变化,用流式细胞术检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）,用RT—PCR法检测药物孵育前后NF—κB和p53基因的表达水平。结果表明,在一定剂量和时间范围内硼替佐米能抑制Raji细胞生长;硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡并显示时间和剂量效应;在硼替佐米诱导Raji细胞凋亡过程中,NF-κB及p53基因的袁达水平下调。结论：硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡,NF—κB基因和p53基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞凋亡的调控。     

抗CD20单克隆抗体诱导B淋巴瘤细胞株凋亡的实验研究

本研究探讨抗CD20单克隆抗体体外诱导B淋巴细胞株凋亡情况及其可能的作用机制。体外培养Daudi、Ramos、Namalwa和Raji细胞,采用XTT法测定细胞增殖抑制率;用流式细胞术测定细胞凋亡;Western blot测定Daudi、Ramos、Raji和Namalwa细胞经Rituximab 20μg／ml作用24小时后Bcl-2的表达情况。结果表明：抗cD20单克隆抗体对Daudi、Raft和Namalwa淋巴瘤细胞有轻度的抗增殖作用,对Ramos细胞无抗增殖作用,抗增殖作用与单克隆抗体作用浓度无关。抗CD20单克隆抗体对4株细胞无明显诱导凋亡作用,抑制率在3％-10％之间波动。Na—malwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后,Bcl-2蛋白表达下调。结论：单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa和Raji细胞株有轻度抗细胞增殖作用,但与作用浓度和作用时间无明显相关。单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa、Raji和Ramos细胞株有微弱的诱导凋亡作用。Namalwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后Bcl-2表达下调,这可能是抗CD20单克隆抗体增敏细胞毒药物作用的机制之一。     

小鼠甲状腺转录因子-2转基因动物表达载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

目的构建小鼠甲状腺转录因子-2（TTF2）转基因动物表达载体（pBROAD3-TTF2）,观察其在小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）中的表达。方法从C57BL／6J小鼠肝脏组织中提取基因组DNA,利用聚合酶链式反应方法扩增出nF2基因1113bD开放阅读框,通过DNA重组技术将丌R2基因片段插入克隆载体pMDl8．T中,经测序正确后,再重组于pBROAD3．mcs中,构建转基因动物表达载体pBROAD3-TTF2,用酶切电泳分析对其进行鉴定。运用脂质体转染试剂将其转染BMSC后,蛋白质印迹法检测717F2基因的表达。结果①DNA测序证实目的基因序列正确无突变,酶切电泳分析得到相应的目的片段,大小与理论计算值一致,成功构建转基因动物表达载体pBROAD3-TTF-2。②蛋白质印迹法显示转染的BMSC高表达TTF-2蛋白。结论成功构建了pBROAD3-TTF2转基因动物表达载体,显示其转染BMSC后丌F2基因的表达,为下一步建立刀F2转基因小鼠模型奠定了基础。     

和厚朴酚联合吉西他滨协同抑制 Burkitt 淋巴瘤细胞增殖和促凋亡作用简

本研究旨在探讨和厚朴酚（Honokiol,HNK）与吉西他滨（Gemcitabine,GEM）联合应用对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖和凋亡的影响.应用CCK-8法检测HNK和GEM单用及联合应用对Raji细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测两种药物诱导Raji细胞凋亡情况及细胞周期的变化;以Western blot法检测BCL-2抗凋亡蛋白水平的变化.结果表明,HNK与GEM联合后,细胞生长抑制明显高于HNK和GEM单药组（P＜0.01）,具有时间和浓度依赖性;细胞凋亡比例均较各单药组增多,差异具有统计学意义（P＜0.01）,两药联合后大部分细胞被阻滞在G0/G1期,S期细胞减少;细胞内抗凋亡蛋白BCL-2水平在联合组比在各单药组表达量下降,差异具有统计学意义（P＜0.01）.结论：HNK联合GEM具有协同抑制Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖并诱导其凋亡的作用,协同机制可能与两药联合后更多细胞发生G0/G1期阻滞,并抑制抗凋亡蛋白BCL-2的活化有关.     

体外Rituximab增敏吉西他滨/长春瑞宾细胞毒作用的实验研究

本研究探讨抗CD20单抗利妥昔(Rituximab,RTX)对Gemcitabine和Navelbine的化疗增敏作用及其可能的作用机制。体外培养Daudi、Ramos、Namalwa和Raji细胞,采用XTT法测定细胞增殖抑制率,计算出各自的IC50;比较Gemcitabine或Navelbine单药及Gemcitabine或Navelbine分别与RTX两药协同作用的IC50;用Western blot测定Daudi、Ramos、Raji和Namlwa细胞经RTX20μg/ml作用24小时后抗凋亡蛋白BCL-2的表达情况。结果表明:单药抗CD20单克隆抗体对4株细胞无明显诱导凋亡作用,抑制率在3%-10%之间波动。RTX可使Gemcitabine或Navelbine对Daudi、Namalwa和Raji细胞株的细胞毒作用有明显增强;在Namalwa和Raji细胞株经RTX作用24小时后,BCL-2蛋白表达下调。结论:RTX对新一代细胞毒药物Gemcitabine或Navelbine有明显的细胞毒增敏作用。Namalwa和Raji细胞株经RTX作用24小时后BCL-2表达下调,这可能是RTX增敏细胞毒药物的机制之一。     

基因修复关节软骨缺损的可行性研究:外源性Ad-TGF-β1转染修饰兔骨髓间充质干细胞

目的利用Ad5/CMV-TGF-β1转染体外培养兔骨髓间充质干细胞,测定TGF-β1的表达产物为关节软骨缺损的基因治疗提供实验基础.方法采用体外培养法对兔骨髓间充质干细胞进行原代培养,应用已构建好的Ad5/CMV-TGF-β1真核载体对其进行转染,并用免疫组织化学方法对转染细胞进行表达产物测定.结果采用腺病毒转染技术能够成功的实现骨髓间充质干细胞的外源性基因修饰,没有发生明细的细胞毒性反应;Ad5/CMV-TGF-β1对骨髓间充质干细胞的转染率为95%左右;转染8周后仍能观察到TGF-β1的表达.结论采用真核表达载体Ad5/CMV-TGF-β1可以成功转染体外培养的骨髓间充质干细胞并可获得TGF-β1的高表达.     

华蟾素对Raji/ADR细胞多药耐药的逆转作用及机制

本研究旨在探讨华蟾素对Raji/ADR细胞多药耐药的逆转作用及其机制.采用MTT法检测华蟾素对Raji及Raji/ADR细胞的生长抑制率、半数抑制浓度（IC50）、逆转阿霉素耐药倍数,并绘制生长抑制率曲线;应用RTPCR法测定MDR-1和MRP-1基因的转录;Western blot法和流式细胞术法测定P-gp、MRP-1蛋白的表达.结果表明：华蟾素对Raji及Raji/ADR细胞72 h增殖抑制率为75.6％和69.3％,IC50分别为3.9 mmol/L和4.6 mmol/L,逆转阿霉素耐药倍数为255.7倍.华蟾素作用于Raji/ADR前后,MDR-1和MRP-1基因转录水平明显下降（P＜0.05）,P-gp和MRP-1蛋白表达明显降低.结论华蟾素可逆转Raji/ADR细胞对阿霉素的耐药,其机制为通过转录途径下调P-gp和MRP-1蛋白的表达.华蟾素是一种有效的肿瘤多药耐药逆转剂.     

姜黄素调节B淋巴瘤细胞p300和HDAC1的研究

p300是一种具有组蛋白乙酰化酶活性的转录辅助因子，HDAC1是一种组蛋白去乙酰化酶。本研究查明姜黄素对B-NHL细胞株Raji细胞增殖的影响，并探讨这种影响与p300以及HDAC1转录调节表达的关系。以不同浓度（6．25-50μmol/L）的姜黄素作用于体外培养的Raji细胞，用MTT法检测细胞生长抑制率。Annexin．VFITC／PI双标流式细胞术检测细胞的凋亡率和应用RT-PCR和Western blot法检测Raji细胞中HDAC1和p300的mRNA表达和蛋白含量的变化。结果表明：姜黄素对Raji细胞抑制作用呈明显的时效和量效关系。24小时的IC50为25μmol／L；姜黄素能够诱导Raji细胞凋亡，凋亡率为14．38％-61．18％，并呈浓度依赖性。姜黄素明显抑制HDAC1和p300的活性和表达。在IC50浓度时，随着时间的延长，其p300和HDAC1 mRNA表达和蛋白含量逐渐降低，呈时间依赖性，与对照组相比有显著性（P〈0．05）。结论：姜黄素对B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞具有抗肿瘤细胞的增殖作用，并促进其凋亡。姜黄素能够抑制转录共激活因子p300及组蛋白去乙酰化酶HDAC1活性和表达，可能是其作用机制之一。     

醋酸棉酚诱导淋巴细胞白血病细胞凋亡的作用及联合地塞米松的效应

本研究旨在探讨醋酸棉酚诱导人急、慢性淋巴细胞白血病细胞凋亡的作用及联合地塞米松的效应。用流式细胞仪检测醋酸棉酚对人急、慢性淋巴细胞白血病原代细胞凋亡的影响。用MTT比色法测定醋酸棉酚对人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞及正常骨髓单个核细胞存活率的影响。用流式细胞仪检测醋酸棉酚与地塞米松联合诱导Raji细胞的凋亡率。结果表明,≥5μmol/L醋酸棉酚能诱导原代培养的人急性淋巴细胞白血病细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。醋酸棉酚对原代培养的慢性淋巴细胞白血病细胞诱导凋亡的浓度更高,50μmol/L醋酸棉酚作用48 h,急、慢性淋巴细胞白血病细胞的凋亡率分别为(90.4±6.2)%和(51.7±10.3)%。≤10μmol/L醋酸棉酚对正常骨髓单个核细胞的存活率没有明显影响,醋酸棉酚作用48和72 h,对正常骨髓单个核细胞的IC50值分别为Raji细胞的7.1和9.1倍。≥10μmol/L地塞米松能诱导Raji细胞凋亡,不同浓度地塞米松与10μmol/L醋酸棉酚联用,Raji细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:醋酸棉酚能诱导原代培养的人急、慢性淋巴细胞白血病细胞凋亡;对正常骨髓单个核细胞的抑制作用明显低于Raji细胞;与地塞米松联用可增强后者诱导Raji细胞凋亡的效应。     

bcl-2硫代反义寡核苷酸对Raji细胞增殖和凋亡的影响

研究bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2 ASODN)对淋巴系统恶性肿瘤的作用及机制。将bcl-2 ASODN与Raji细胞共孵育，应用MTT检测，电镜超微结构，流式细胞仪（FCM）分析和RT-PCR方法，观察bcl-2 ASODN对Raji细胞增殖及凋亡的影响，以及bcl-2蛋白及mRNA水平的变化。MTT检测显示bcl-2 ASODN可以部分抑制Raji细胞增殖；经ASODN作用48h，电镜超微细胞观察细胞呈现典型凋亡特征，包括胞膜出芽，异染色质核膜下浓聚形成凋亡小体及胞核破裂；FCM检测Annexin V^ /PI^-的凋亡细胞比例升高，20μmol/L bcl-2 ASODN处理Raji细胞72h，细胞凋亡率达43.86%，比对照组（10.05%）明显增高。bcl-2阳性细胞率逐渐下降，于72h达低谷为0.88%，明显低于对照组（79.54%）。bcl-2 mRNA水平亦显下降。结论 bcl-2 ASODN通过下调bcl-2蛋白表达水平，诱导Raji细胞凋亡。     

Effect of berberine on hepatocyte proliferation,inducible nitric oxide synthase expression,cytochrome P450 2E1 and 1A2 activities in diethylnitrosamine- and phenobarbital-treated rats

This study investigated the effect of berberine on the early phase of hepatocarcinogenesis stimulated by diethylnitrosamine (DEN, 150 mg/kg, 4 weeks) plus phenobarbital (PB, 75 mg/kg, 7 days) in rats. The expressions of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) were evaluated by immunohistochemistry. The activities of CYP isoenzymes were analyzed using different probe drugs including chlorzoxazone (CYP2E1) and phenacetin (CYP1A2) by high-performance liquid chromatography (HPLC) in vivo or in vitro. Results showed that the expressions of PCNA and iNOS were induced by DEN plus PB in liver tissues. Oral administration of berberine (50 mg/kg) inhibited the hepatocyte proliferation and iNOS expression, decreased cytochrome P450 content, inhibited activities of CYP2E1 and CYP1A2 in DEN-plus-PB-treated rats in vivo. Moreover, berberine (10, 50 and 100 μM) inhibited the activities of CYP2E1 and CYP1A2 in microsomes isolated from DEN-plus-PB-treated rats in vitro, suggesting that anti-hepatocarcinogenetic potential of berberine might be due to inhibiting oxidative metabolic activities of CYP 2E1 and CYP1A2, and decreasing NO production in rats.     

Genetic polymorphisms of drug-metabolizing phase I enzymes CYP2E1, CYP2A6 and CYP3A5 in South Indian population

CYP2E1, CYP2A6 and CYP3A5 enzymes belong to phase I group of drug-metabolizing enzymes, which are involved in the metabolism of various compounds and xenobiotics. Presence of polymorphisms in the genes coding for these enzymes results in interindividual variations in drug metabolism, therapeutic response and susceptibility towards various diseases. The frequencies of these variants in genes differ considerably between ethnic groups. This study was carried out to estimate the allele and genotype frequencies of common variants in CYP2E1, CYP2A6 and CYP3A5 in South Indian population. Six hundred and fifty-two unrelated healthy volunteers of South Indian origin (Andhra Pradesh, Karnataka, Kerala and Tamil Nadu) were included in this study. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, allele-specific PCR, real-time PCR, SNaPshot and gene sequencing methods were used for the identification of gene polymorphisms. The frequencies of CYP2E1*1B, CYP2E1*5B and CYP2E1*6 alleles in South Indian population were 14.3, 1.3 and 22.4%, respectively. The frequencies of CYP2A6*2, CYP2A6*4A and CYP2A6*5 alleles were found to be 1, 8.9 and 0.7%, respectively. The distribution of CYP3A5*3 allele was 63.5%. There were no variant alleles of CYP3A5*2, CYP3A5*4 and CYP3A5*6 in South Indian population. The frequencies of CYP2E1, CYP2A6 and CYP3A5 in the South Indian population are distinct from Caucasians, Chinese, Japanese, African Americans and other compared populations. This is the first study conducted in the South Indian population with a larger sample size. The findings of our study provide the basic genetic information for further pharmacogenomic investigations in the population.     

姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞表达Survivin、Bcl-2、Bax的影响

为探讨姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226的抑制生长和诱导凋亡的作用机制,应用MTT法检测姜黄素对肿瘤细胞的杀伤效应;用流式细胞术（FCM）分析姜黄素作用后肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化;用RT-PCR方法检测Survivin、Bcl-2、Bax mRNA水平的变化。结果表明：姜黄素明显抑制RPMI8226细胞的增殖,并表现为时间、剂量依赖性,24、48小时IC50值分别为12.15μmol/L、4.9μmol/L;凋亡率由10.6%增加到36.9%（p〈0.05）,细胞发生G2/M期阻滞;RPMI8226细胞细胞强表达Survivin、Bcl-2,弱表达Bax。RPMI8226细胞经10μmol/L姜黄素处理24小时后,survivin、Bcl-2 mRNA表达下调,而Bax表达上调。结论：姜黄素抑制多发性骨髓瘤细胞RPMI8226增殖,并诱导凋亡。姜黄素的抗瘤机制可能与凋亡相关蛋白survivin、bcl-2、bax在转录水平的调节有关。     

细胞色素酶CYP2C19代谢对沙利度胺体外抗骨髓瘤作用的影响

目的 研究人肝微粒体代谢对沙利度胺体外抗骨髓瘤作用的影响,并探讨细胞色素酶CYP2C19在其中的作用.方法 以沙利度胺或与人肝微粒体在体外孵育后分别处理多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266、NCI-H929、RPMI 8226、LP-1和CZ-1细胞,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡.结果 沙利度胺对MM细胞活力无明显抑制作用,10、50和100μg/ml沙利度胺处理5株MM细胞后的细胞活力分别为96.2%～103.7%、96.3%～103.7%和97.9%～106.5%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).但与人肝微粒体孵育后,沙利度胺明显抑制MM细胞活力,且该作用呈剂量依赖性.10、50和100μg/ml沙利度胺与人肝微粒体共孵育后对5株MM细胞活力抑制率分别为12.2%～22.9%、25.9%～36.4%和34.9%～46.3%,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05).100μg/ml沙利度胺与人肝微粒体孵育后,5株MM细胞凋亡的比例增加达18.5%～32.5%.在孵育体系中加入CYP2C19特异性抑制剂奥美拉唑后,沙利度胺与人肝微粒体孵育后对MM细胞活力的抑制作用减弱,5 μmol/L和10μmol/L奥美拉唑对100μg/ml沙利度胺经肝微粒体孵育后抑制细胞活力的逆转率分别为7.5%～21.9%和19.1%～38.3%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 沙利度胺的体外抗骨髓瘤作用需要人肝脏代谢,细胞色素酶系中的CYP2C19参与了这一过程.     

The expression of the solute carriers NTCP and OCT-1 is regulated by cholesterol in HepG2 cells

Drug disposition and response are greatly determined by the activities of drug-metabolizing enzymes and transporters. While the knowledge in terms of CYP enzymes and efflux ABC transporters (such as MDR1, P-glycoprotein) is quite extensive, influx transporters are increasingly being unveiled as key contributors to the process of drug disposition. There is little information on the regulation of these proteins in human cells, especially as regards the effect of endogenous compounds. In this study, we analysed the expression of CYP3A4 and three uptake transporters NTCP (SLC10A1), OATP-A/OATP1A2 (SLCO1A2) and OCT-1 (SLC22A1) in HepG2 cells following treatment with cholesterol. While CYP3A4 and OATP1A2 expression was unaffected, cholesterol treatment led to increased levels of NTCP and OCT-1 mRNAs. Alterations in the functional characteristics and/or expression levels of drug transporters in the liver may conceivably contribute to the variability in drug oral bioavailability often observed in the clinical settings.