CD40激发对恶性B淋巴细胞体外生物学行为的影响

目的 观察重组人可溶性CD40配体（rhsCD40L)及CD40L基因转染细胞（CD40L-TC）对恶性B淋巴细胞体外生物学行为的影响，探讨rhsCD40L在肿瘤生物治疗中的可能作用。方法 利用基因工程技术获得了rhsCD40L和CD40L-TC，分别与恶性B淋巴细胞株XG2，XG7，U266，8226，Raji及Daudi共同作用，分析了CD40激发对肿瘤细胞的体外增殖（锥虫蓝计数法），细胞周期（碘化丙锭掺入法），细胞表面共刺激分子的表达（免疫荧光标记法）以及细胞凋亡（Anexin-V-ETTC法）的效应。结果 （1）恶性B淋巴细胞株CD40表达呈异质性，XG2高表达CD40，8266，Raji和Daudi中度表达，而XG7和U266不表达CD40。显微镜下观察发现，rhsCD40L(5μg/ml）可引起XG2或Daudi细胞的同型聚集，该效应在作用6-8h后即可出现；与CD40L-TC细胞共育后（肿瘤细胞；CD40L-TC=5：1），XG2，Raji和Daudi细胞可粘附于CD40L-TC表面；（2）rhsCD40L和CD40L-TC均可显著抑制XG2，Raji和Daudi细胞的体外增殖，导致XG2细胞呈现G1期阻滞，而Raji和Daudi细胞阻滞于G2期，并诱导XG2，Raji,Daudi细胞的凋亡，凋亡率分别为：XG2细胞23.3%和18.8%,Raji细胞阻滞于G2期，并诱导XG2，Raji,Daudi细胞的凋亡，凋亡率分别为：XG2细胞23.3%和18.8%,Raji细胞11.6%和8.9%,Daudi14.2%和15.9%;(3)表型分析显示；rhsCD40L/CD40L-TC可明显上调XG2,Raji和Daudi细胞CD95的表达水平以及Raji细胞CD80的表达，而下调Raji细胞CD18的表达。结论 rhsCD40L能直接并显著地抑制恶性B淋巴瘤细胞株Raji,Daudi和多发性骨髓瘤细胞株XG2的体外增殖，诱导其凋亡，并上调Raji细胞免疫共刺激株Raji,Daudi和多发性骨髓瘤细胞株XG2的体外增殖，诱导其凋亡，并上调Raji细胞免疫共刺激分子CD80的表达，具有膜型CD40L的同样生物学功能，故rhsCD40L具有潜在的抗恶性B淋巴细胞肿瘤的作用。     

肿瘤相关巨噬细胞促进非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的研究

目的研究肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对非小细胞肺癌增殖、转移的影响。方法免疫组化方法分析肺癌组织中巨噬细胞浸润情况。CCK-8法和Transwell法分别检测单核巨噬细胞系THP-1(构建为M2型TAMs后)对肺癌细胞系A549细胞增殖和侵袭能力的影响。结果免疫组化结果显示,TAMs浸润数在肺癌组织中显著多于癌旁组织。激活诱导的TAMs细胞促进A549细胞的增殖和侵袭。结论巨噬细胞浸润增加造成的肿瘤周围炎症微环境可能是肺癌发展的机制之一。     

凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞对抗原特异性CTL的激活

为探讨凋亡Daudi细胞负载的树突状细胞 (DC )激发诱导肿瘤抗原特异性CTL及其生物学特性 ,采用常规方法从人外周血单个核细胞 (PBMC )诱导DC ,激发型CD40mAb联合 50Gyγ射线辐照诱导Daudi凋亡后负载DC ,然后与自体T细胞共育 ,并联合IL 2激发诱导肿瘤特异性CTL ;采用免疫荧光标记和流式细胞仪测定分析膜分子的表达 ;ELISA检测细胞因子的产生 ;Dextran FITC内吞实验分析DC的抗原摄取能力 ;3H掺入试验和51 Cr释放试验分别测定CTL的增殖和细胞毒效应。结果 :(1 )细胞因子序贯体外诱导 7d的DC ,对Dextran吞噬能力最强 ;(2 )CD40mAb诱导联合γ射线辐照 ,能有效介导Daudi细胞的凋亡 ;(3 )抗原负载联合CD40mAb激发可使DC上调表达CD1a、CD80、CD86和HLA DR ,并能促进IL 1 2的分泌 ;(4)凋亡Daudi负载后的DC在激发型CD40mAb作用下 ,能激发和扩增对Daudi细胞具有高效和特异杀伤作用的细胞毒性T细胞。因而认为凋亡肿瘤细胞负载联合CD40mAb刺激的DC可有效激活和扩增肿瘤特异性CTL。     

CD40配体对胃癌细胞AGS生长的影响及其作用机制

目的:研究CD40配体激发CD40信号对胃癌细胞AGS生长的影响,并探讨其分子机制,为治疗胃癌的药物研发提供实验依据。方法:以1 mg/L可溶性CD40配体(sCD40L)处理AGS,苔盼兰计数检测CD40激发对细胞增殖的影响;酶联免疫反应检测细胞培养上清中的血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平,并用抑制剂阻断VEGF信号通路,用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法探讨sCD40L对细胞增殖影响的分子机制。结果:sCD40L处理明显引起AGS细胞增殖;sCD40L激发促进细胞大量分泌VEGF(P0.05),磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂能完全阻断这种效应(P0.05);VEGF受体抑制剂能显著减弱sCD40L对AGS细胞的增殖作用(P0.05),而抗VEGF封闭型抗体则不能(P0.05)。结论:CD40配体激发信号通过激活VEGF受体信号通路而诱导AGS细胞增殖。因此在CD40作为肿瘤治疗的靶分子时,需要慎重考虑它的激发方式。     

CD40不同形式的活化对CD40突变的RPMI8226细胞增殖和表型的影响

目的 分析CD40抗体或配体不同形式刺激对RPMI8226细胞增殖及表面共刺激分子和黏附分子表达的影响,探讨RPMI8226细胞CD40基因突变在其生物学行为中的作用.方法 用RT-PCR方法和DNA序列测定检测RPMI8226细胞CD40基因突变体,分析RPMI8226细胞经CD40抗体或配体四种不同方式(CD40单抗、CD40单抗包板、rhsCD40L和CD40L转基因细胞)刺激后,其体外生长曲线、细胞表型及细胞周期的变化,并利用激光共聚焦显微镜对RPMI8226细胞表面CD40信号转导体的形成进行初步分析.结果 RPMI8226细胞表达CD40突变体(TCA→TTA,Ser→Leu),但是该点突变并未影响hmuCD40的抗原表位.三种激发CD40活化的分子(CD40单抗、rhsCD40L和CD40L转基因细胞)并不影响RPMI8226细胞的体外增殖,但是CD40单抗包板能明显抑制RPMI8226细胞的增殖[(2.5±0.6)×105 vs (7.8±1.2)×105,P＜0.05],并产生明显的G1期阻滞[(58.0±3.6)% vs (42.0±2.3)%,P＜0.05].RPMI8226细胞上黏附分子和共刺激分子的表达无明显变化.激光共聚焦显微镜分析结果显示,在CD40被激活后能形成CD40信号传导的复合体.结论 RPMI8226细胞高表达一种CD40基因突变体,该突变体能在被激活后形成相应的信号传导复合体.     

ATP—TCA法对乳腺癌常用化疗药物体外作用的评价

目的建识以三磷酸腺苷生物发光法肿瘤化疗药物敏感试验（ATP—TCA）法对乳腺癌常用化疗药物的体外作用评价方法。方法采用ATP—TCA法,对4组不同乳腺癌常用化疗药物选择相同规格、不同厂家共8种品规药品,同时检测对5株乳腺癌细胞株的杀伤效果,以比较同种乳腺癌细胞对同一品种、规格不同抗肿瘤药品的敏感性。结果4种药物对乳腺癌细胞株的敏感性顺序为紫杉醇（PTX）〉长存瑞滨（NVB）〉阿霉素（ADM）〉丝裂霉素（MMC）;同一种肿瘤细胞株对于不同厂家生产的同一种化疗药物的敏感性基本上具有一致性,但是也有个别具有差异性。结论ATP—TCA法可以作为评价不同厂家抗肿瘤药品体外作用的方法。     

ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测在筛选乳腺癌化疗药物中的应用

目的：探讨肿瘤体外药物敏感实验ATP生物荧光法（ATP-TCA法）在筛选乳腺癌常用化疗药物中的应用。方法：采用ATP-TCA法,对4组不同乳腺癌常用化疗药物选择相同规格、不同厂家共8种品规药品,同时检测对30例乳腺癌标本的杀伤效果,以比较同种乳腺癌细胞对抗肿瘤药品的敏感性。结果：ATP-TCA肿瘤药敏检测技术在乳腺癌标本中的可评价率为90%（27/30）,4种药物对乳腺癌细胞株的敏感性顺序为紫杉醇（PTX）＞长春瑞滨（NVB）＞阿霉素（ADM）＞丝裂霉素（MMC）;不同厂家生产的同一种化疗药物的敏感性基本上具有一致性,但是也有个别具有差异性。结论：ATP-TCA法可应用于临床作为乳腺癌化疗药物的筛选。     

透明质酸-紫杉醇纳米制剂在肿瘤治疗中的研究进展

紫杉醇是目前最有效的抗癌药物之一,但由于它的水溶性、药代动力学和体内分布性能较差,且其增溶剂对人体有很强的毒副作用,限制了它的临床应用.为了提高紫杉醇的水溶性、渗透率及稳定性,研究人员制备出一种具有缓释作用、可控及肿瘤靶向的药物——透明质酸-紫杉醇纳米制剂.以透明质酸为载体的纳米载药系统可以降低紫杉醇的毒副作用,利用合适的给药途径将透明质酸-紫杉醇纳米制剂输送至体内,提高了药物的靶向性、水溶性及长循环能力,使药物通过扩散、包吞或受体介导的内吞作用进入细胞.文章综述了透明质酸-紫杉醇纳米制剂在多种恶性肿瘤中的应用.     

IVIG对乳腺癌细胞株MDA-MB-453体外增殖抑制作用的实验研究

静脉注射丙种球蛋白(IVIG), 来源于健康志愿者捐献的血浆经灭菌、分离得到,因此是一种源自人体的安全的生物制品.IVIg主要适用于血小板减少性紫癜(ITP)、自体免疫疾病以及免疫介导的疾病的治疗[1-2].近年来,有文献报道IVIG还可用于治疗各种肿瘤,有一定的临床效果[3-4].乳腺癌是严重威胁人类健康的常见病和多发病,乳腺癌新发病人数每年有增加的趋势.本实验是利用目前较为先进的ATP-荧光发光法检测抑瘤率并结合流式细胞仪检测肿瘤细胞周期、凋亡指数,来探索IVIG体外对乳腺癌细胞增殖的影响.