重组人瘦素的分离纯化

目的：探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法：采用强阴离子交换柱(Sepharose Qfast flow)和疏水层析柱(Phenyl Sepharose 6 fast flow)在pH7．5的条件下进行纯化。结果：经Q柱一步纯化后，产物纯度由42．3％到达89．6％，随后通过疏水层析纯化后，产物纯度达到96．2％。经SDS—PAGE证实为单一蛋白条带。结论：通过上述手段已成功分离纯化得到纯度较高的由毕赤酵母表达的重组人瘦素。     

HSA/IL1ra融合蛋白的纯化及生物学活性研究

目的:纯化HSA/IL1ra融合蛋白并对其生物学活性进行检测.方法:采用亲和层析及离子交换层析分离纯化HSA/IL1ra融合蛋白,检测其对IL1引起的对A375 S2的杀伤保护作用.结果:获得的HSA/IL1ra融合蛋白HPLC纯度在98%以上,并且具有与天然IL1ra相似的、对IL1杀伤A375 S2细胞的保护作用.结论:获得高纯度的HSA/IL1ra融合蛋白并且具有相应的生物学活性.     

重组人睫状神经因子的表达、纯化以及聚乙二醇修饰

目的 研究重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的表达、纯化及聚乙二醇化修饰、纯化方法.方法 重组人睫状神经因子(rh-CNTF)工程菌经37℃培养至对数生长期,加入IPTG诱导4 h,经Q Sepharose F.F凝胶柱纯化和复性后得到纯化的rh-CNTF.以体外培养鸡胚背根神经节(DRG)方法测定重组蛋白rh-CNTF的神经营养活性.用单甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD-20 k)对rh-CNTF进行修饰,所得修饰产物经DEAE Sepharose F.F和Superdex 75凝胶分离纯化后获得mPEG-rh-CNTF偶联物.结果 目的 蛋白占总蛋白30%左右,为包涵体,经Q Sepharose F.F凝胶柱纯化和复性,获得纯度达90%的rh-CNTF.表达的rh-CNTF能促进培养的鸡胚背根神经节神经突起的生长.修饰后的单聚PEG-rhCNTF经DEAE Sepharose F.F和Superdex 75凝胶纯化后纯度达到95%.结论 确立了rh-CNTF蛋白表达纯化及PEG修饰的方法.     

麦胚凝集素的分离纯化及其在亲和层析中的应用

目的 :将分离纯化麦胚凝集素 (WGA)的方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法进行改良 ,从而得到能够有效结合细胞膜受体的亲和层析柱。方法 :依次用去脂抽提、分级盐析、离子交换层析、甲壳素亲和层析的方法分离纯化WGA ;将制备的WGA与用溴化氰活化的琼脂糖 4B(Sepharose 4B)耦联固定。结果 :得到的纯化倍数为 15 8 5倍的WGA单体相对分子质量为 160 0 0 ,表观相对分子质量为 3 2 0 0 0 ,血凝活力为 8 3mg·L-1。WGA Sepharose4B可以与红细胞表面糖基特异性结合。结论 :改良的WGA分离纯化方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法简便、有效 ,可用于实验室中细胞膜受体的研究     

亲和层析法提取纯化人心肌肌钙蛋白I

目的 研究出一种提纯人心肌肌钙蛋白I (cTnI)的简便方法.方法 将兔骨骼肌肌钙蛋白C (sTnC)与经溴化氰活化的Sepharose 4B凝胶偶联,制成sTnC亲和层析柱.人心肌经匀浆、离心后, 上清液上sTnC亲和层析柱,洗脱后可获得cTnI纯品.结果 SDS-PAGE得到一条电泳带,其分子量为25 kD.Western blot结果表明,提纯的cTnI可被cTnI单克隆抗体特异性识别.cTnI产率为82.6 mg/100 g人心肌.结论 亲和层析法提高了cTnI的产率,为下一步cTnI体外诊断的研究工作打下基础.     

HCGβ抗肿瘤核酸疫苗的纯化工艺

对HCGβ抗肿瘤核酸疫苗的预处理和层析纯化工艺进行了研究。用碱裂解法对湿菌体进行预处理,当菌体湿重（g）∶悬浮液体积（mL）∶裂解液体积（mL）∶中和液体积（mL）为1∶2∶2∶2,碱裂解时间为8-12 min时,质粒的产量最高,可达32.94 mg/g。用Sepharose 6 FF凝胶过滤层析去除RNA和蛋白质,再用Plasmidselect亲和层析捕获超螺旋质粒DNA,质粒DNA的得率为48.3%。用L-Histidine-agarose亲和层析可从澄清的碱裂解液中一步分离纯化超螺旋质粒DNA,质粒DNA得率为51.62%。经琼脂糖核酸电泳检测,HCGβ抗肿瘤核酸疫苗超螺旋质粒DNA的纯度为100%电泳纯。     

蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ的分离方法研究

目的：探索蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ(antineoplastic polypeptide-Ⅲfrom APBMV,AP-Ⅲ)的分离和纯化方法。方法：蝎毒经预处理后,分别采用pharose FF阳离子交换凝胶柱(cm×5 cm交换柱,流速0．8 ml／min,梯度洗脱1 200 min)层析法和Sepharose FF阳离子交换凝胶柱与Sephadex G-50凝胶柱(柱：100cm×5 cm;流速：0．5 ml／min)联合层析法,分离AP-Ⅲ,用HPLC仪检测2种方法分离出的AP-Ⅲ的纯度及产率。结果：单独用Sepharose FF阳离子交换凝胶柱分离,AP-Ⅲ产率为2．24％,纯度为89％。Sephadex G-50凝胶柱与Sepharose FF阳离子交换凝胶柱联用,其产率及纯度分别提高至4．72％和％。结论：Sephadex G-50与Sepharose FF联用可提高AP-Ⅲ的产率及纯度,从而为开发和利用AP-Ⅲ提供了实验依据。     

SCR氧化法测定血清胆红素的质量评价

目的 :评价 SCR氧化法测定血清中总胆红素和直接胆红素。方法 :测定精密性、准确性、抗干扰性及与改良 J- G法的相关性。结果 :总、直接胆红素的精密度分别为批内 CV 0 .76 %与 0 .86 % ,日间 CV为 1.0 0 %和 1.2 6 % ;平均回收率为总胆红素 10 0 .4 % ,直接胆红素 98.6 % ;与改良 J- G法的相关性为 :总胆红素 Y(SCR) =0 .96 3X(改良 J- G) +0 .16 6 ,r=0 .998,直接胆红素 :Y(SCR) =1.0 0 3X(改良 J- G) - 0 .0 90 ,r=0 .998;血红蛋白浓度和甘油三酯在 5g/ L和 8.0 0 m mol/ L以下无干扰。结论 :该法准确、稳定、简单、快速 ,完全可以满足临床应用。     

HSA/IL1ra融合蛋白的纯化及生物学活性研究

目的：纯化HSA/IL1ra融合蛋白并对其生物学活性进行检测。方法：采用亲和层析及离子交换层析分离纯化HSA/IL1ra融合蛋白,检测其对IL1引起的对A375 S2的杀伤保护作用。结果：获得的HSA/IL1ra融合蛋白HPLC纯度在98%以上,并且具有与天然IL1ra相似的、对IL1杀伤A375 S2细胞的保护作用。结论：获得高纯度的HSA/IL1ra融合蛋白并且具有相应的生物学活性。     

EB病毒GST-Rta融合蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

目的 表达和纯化EB病毒的重组融合蛋白谷胱氨肽S转移酶（GST）-Rta185和GST-Rta150,并制备特异性多克隆抗体。方法 质粒表达载体pGEX-R185I、pGEX-R150I和pGEX-5X-3分别转入大肠杆菌BL21（DE3）中,异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导表达,用Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化目的蛋白。将纯化后的GST-R185、GST-R150和GST蛋白免疫新西兰大白兔制备抗血清。结果 在细菌裂解液中检测到高表达量的融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-Rta融合蛋白。应用Western blot和ELISA方法检测证实,用纯化的GST-Rta蛋白免疫家兔得到了特异性的多克隆抗体。结论 通过上述方法制备出来的融合蛋白纯度较高,免疫家兔获得的多克隆抗体具有良好的特异性,为研究EB病毒Rta蛋白及与EB病毒相关疾病的诊断和治疗提供了重要的条件。