多西紫杉醇的细胞毒性和体外放射增敏作用

目的:观察新的抗肿瘤药多西紫杉醇(Doxtaxol)细胞毒性和对体外放射增敏作用.方法:应用克隆形成分析多西紫杉醇对鼻咽癌细胞的细胞毒性和体外放射增敏作用.放射增敏作用研究采用药物浓度为半数抑制剂量(ID50).常规照射剂量2Gy时的放射增敏比(SERSF2)定义为2Gy时对照存活分数(SF)和药物处理组SF.结果:多西紫杉醇的细胞毒性呈剂量依赖性关系,ID50为3.2×10-8mg/ml.当3.2×10-8mg/ml多西紫杉醇作用3,6,12和24 h,各时间点均可见放射增敏效应.相应的放射增敏比SERD0分别为1.27,1.44,1.53和1.58;SERDq分别为1.40,3.20,5.0和7.5;SERSF2分别为1.38,2.2,3.0和3.4.结论:多西紫杉醇的细胞毒性呈剂量依赖性,对人鼻咽癌细胞系CNE1有明显的放射增敏作用,与时间相关.     

多烯紫杉醇对SPC-A1肺癌细胞放射增敏作用及其机制的实验研究

目的观察多烯紫杉醇对SPC-A1肺癌细胞放射增敏作用及其机制。方法①将SPC-A1肺癌细胞分别暴露于多烯紫杉醇24h和48h后给于γ射线照射。照射后培养10天统计不同剂量γ射线照射后的存活分数,以单靶多击模型分析各实验组存活分数在37%时的放射增敏比(SER);②向上述经过多烯紫杉醇处理后的SPC-A1肺癌细胞培养液中加入2′,7′-二氯双氢荧光素二乙酸盐(DCFH-DA)和二氢乙啶(HE),利用流式细胞仪测定活性氧活性。结果1.25×10-10和2.5×10-10mol/L多烯紫杉醇作用于SPC-A1肺癌细胞24h的SER分别为1.10和1.23;作用48h的SER分别为1.36和1.43。1.25×10-10和2.5×10-10mol/L多烯紫杉醇作用于SPC-A1肺癌细胞24h后细胞内活性氧分别为42.59%和49.22%;作用48h后细胞内活性氧分别为51.42%和66.03%;与对照组(21.71%)比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论①多烯紫杉醇对体外培养的SPC-A1肺癌细胞具有放射增敏作用;②多烯紫杉醇的放射增敏作用与活性氧有关。     

紫杉醇增敏放射对培养的胶质母细胞瘤细胞凋亡和增殖活性的影响

目的:探讨紫杉醇增敏放射对胶质母细胞瘤细胞凋亡和增殖活性的影响.方法:采用人胶质母细胞瘤细胞系BT325. ①细胞经紫杉醇和(或)照射处理后,每 6h 收集一批细胞,至 48h 结束.行流式细胞术细胞凋亡分析. ②细胞经紫杉醇和(或)照射处理后,培养 4d,作嗜银染色、AgNOR计数.结果:照射后 24h 出现凋亡率高峰;紫杉醇加照射组的凋亡率高于单纯照射组,尤其是较低剂量照射 (2 和 4Gy)时,相差更为显著.对照组、紫杉醇组、照射组和紫杉醇加照射组平均每个细胞的AgNOR数分别为 22.8、16.2、15.5 和 6.4.结论:紫杉醇能促进放射诱导的胶质母细胞瘤细胞凋亡.紫杉醇增敏放射后残存肿瘤细胞的增殖活性显著下降.     

低温热疗对肺腺癌细胞放射敏感性的影响

目的：研究低温热疗(≤42℃)对肺腺癌细胞株SPC-A-1的放射增敏作用及其对生长周期的影响。方法：集落形成率实验观察低温热疗的放射增敏作用；流式细胞仪观察细胞生长周期的变化。结果：单纯放射时细胞的Do、Dq值分别为1．693、2．453Gy，放射合并41．5℃加热时Do、Dq值分别为1．390、1．426Gy，热增敏比为1．218。放射及热放射后细胞周期出现了再分布。未处理组流式细胞仪检测到S期细胞比例为14．81％，照射6Gy后48、72h分别为18．80％和31．91％；照射后立即41．5‘12加热1h，48、72h的s期细胞分别为5．89％和9．08％。结论：低温热疗对肺腺癌细胞系有放射增敏作用，低温热疗能去除放射引起的细胞S期阻滞，其机制可能与加热抑制了肿瘤细胞对放射所致亚致死损伤和潜在致死损伤的修复能力有关。     

低剂量多西紫杉醇对中晚期食管癌放疗增敏作用的近期疗效观察

目的观察低剂量多西紫杉醇联合放疗对中晚期食管癌的放射增敏作用及毒副反应。方法48例不能手术或拒绝手术的中晚期食管癌患者,随机分成增敏组和单放组,每组24例,增敏组在放疗的同时给予多西紫杉醇15mg/(m2·周),连用6周。两组放疗方法相同,均采用直线加速器6MVX线,2Gy/次,5次/每周。照射剂量66～70Gy,采用X线和CT检查比较两组近期疗效,并且比较两组间毒副反应的差别。结果增敏组近期有效率(CR PR)83.33%,单放组为54.17%(P<0.05)。增敏组Ⅰ、Ⅱ度骨髓抑制毒副反应较单放组大,但经处理后均能顺利完成治疗。结论低剂量多西紫杉醇联合放疗可增加食管癌放疗的放射敏感性,能提高食管癌的近期有效率,毒副反应患者均能耐受。     

多西紫杉醇对宫颈癌细胞系Hela细胞毒性和放射增敏作用的研究

目的探讨多西紫杉醇对宫颈癌细胞系Hela的细胞毒性和放射增敏作用。方法MTT法检测多西紫杉醇对Hela的细胞毒性以及1.0nM多西紫杉醇对Hela不同分割放疗方式的增敏效果;克隆形成实验分析不同浓度多西紫杉醇对Hela细胞生长抑制的影响,多靶单击拟合模型方程测定的各组细胞放射增敏比,评价增敏效果。结果0.1￣20.0nM多西紫杉醇对Hela细胞的细胞毒性有明显剂量和时间依赖性,20.0nM以上浓度及药物作用超过48h多西紫杉醇的细胞毒性并无明显增加。1.0nM和5.0nM多西紫杉醇放射增敏比分别为1.26和1.69。1nM多西紫杉醇对2.0Gy/次、1.0Gy/次(×2)、0.5Gy/次(×4)分割放疗组的放射增敏比分别为:2.03、2.51、3.57;多西紫杉醇增敏比分别为:1.41、1.82、2.92,每组中放射增敏比较多西紫杉醇增敏比高。结论多西紫杉醇对宫颈癌细胞系Hela有良好的细胞毒性和放射增敏作用,对低剂量分割放射的增敏作用更强。     

凋亡抵抗在人肺腺癌SPC-A1／多西紫杉醇细胞系耐药机制中的作用

目的:比较人肺腺癌细胞SPC-A1与耐多西紫杉醇细胞系SPC-A1/多西紫杉醇(Docetaxel)经多西紫杉醇诱导后凋亡的差异,研究抗凋亡机制在肺腺癌多西紫杉醇耐药中的作用。方法:以AnnexinV/PI双染法检测SPC-A1/Docetaxel细胞与SPC-A1细胞经不同浓度多西紫杉醇诱导后的凋亡率,免疫组化法及RT-PCR法分别检测SPC-A1/Docetaxel细胞与SPC-A1细胞bcl-2、bax在蛋白和mRNA水平的表达。结果:SPC-A1/Docetaxel细胞与SPC-A1细胞的自然凋亡率分别为(7.5±1.1)%和(4.7±0.7)%;经5、10和20μg/L的多西紫杉醇作用48 h后,SPC-A1/Docetaxel细胞的凋亡率分别为(7.8±2.1)%、(11.3±3.1)%和(25.6±4.5)%,SPC-A1细胞的凋亡率分别为(23.7±4.5)%、(44.2±5.0)%和(40.9±2.8)%;各组SPC-A1/Docetaxel细胞的早期凋亡率均显著低于SPC-A1细胞(P<0.05)。免疫组化结果显示,SPC-A1/Docetaxel细胞中bcl-2蛋白表达较SPC-A1细胞明显升高(P<0.05),而bax蛋白表达明显降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示,与SPC-A1细胞相比,SPC-A1/Docetaxel细胞的bcl-2 mRNA表达升高(P<0.05),而bax mRNA表达降低(P<0.05)。结论:抗凋亡是肺腺癌SPC-A1/Docetaxel细胞多药耐药的机制之一,且与抗凋亡因子bcl-2表达上调和促凋亡因子bax表达下调相关。     

拓扑替康对鼻咽癌放射增敏的体外实验研究

目的 应用克隆形成方法，研究拓扑替康(Topotecan)对人鼻咽癌高分化细胞系(CNE-I)的放射增敏作用。方法 实验分为单纯照射组及照射加药组。采用台盼蓝染色计数法及克隆形成方法，求出拓扑替康的半数致死量(ID50)。照射加药组在照射后给予拓扑替康0．5μg／ml，作用4h。应用克隆形成方法，观察单纯照射和照射加Topotecan对CNE-I细胞的杀伤作用。计算细胞存活率，用单击多靶数学模型进行曲线拟合作图。结果 CNE-I细胞单纯照射组D0值为1．5164Gy，Dq值为0．6686Gy，N值为1.5542，SF2为66％；照射加Topotecan组D0值为1．2666Gy，Dq值为0.1223Gy，N值为1．1014，SF2为49％；放射增敏比SERm为1．20，SERDq为5．47，SERSF2为1．35。结论 研究结果显示，Topotecan对CNE-I细胞具有较强的放射增敏作用，细胞水平的研究表明其放射增敏的机制是减弱了CNE-I细胞放射后亚致死性损伤与潜在致死性损伤修复能力，并且Topotecan在低浓度时有作用。本研究为临床的鼻咽癌放疗和Topotecan的联合应用提供了实验依据。     

重组人腺病毒p53提高肺腺癌放射敏感性的实验观察

目的:评价重组人腺病毒p53(rAd-p53)注射液对肺腺癌A2细胞系放射敏感性的影响。方法:实验分空白对照组(C组)、照射组(R组)、加药组(D组)、照射加药组(R D组),利用单击多靶数学模型拟合辐射剂量效应曲线,应用细胞克隆形成实验观察各组细胞存活情况,应用流式细胞仪技术分析各组细胞周期分布和细胞凋亡率。结果:R组与R D组平均致死剂量(D0)分别为1.26Gy、0.45Gy,准阈剂量(Dq)分别为3.37Gy、1.05Gy;两组放射增敏比SERD(0D0之比)为2.8,SERD(qDq之比)为3.21;流式细胞仪结果提示R D组G2/M期细胞比例及细胞凋亡率增加最明显(P<0.05),二者之间存在正相关关系(rs=0.989,P<0.05)。结论:rAd-p53对体外培养的肺腺癌A2细胞具有放射增敏作用。     

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞株交叉耐药性实验研究

目的 通过建立体外肺腺癌耐药细胞株,研究紫杉醇交叉耐药性,为临床治疗提供有益的实验依据.方法 应用浓度递增和短时作用相结合,建立人肺腺癌紫杉醇耐药株SPC-A1/Taxol.通过MTT法检测加入不同药物后耐药细胞的半数抑制浓度,计算耐药指数.结果 SPC-A1/Taxol耐药细胞株对多西紫杉醇、长春瑞滨、长春新碱和阿霉素显示高度耐药,对喜树碱类和鬼臼毒素类显示中度或低度耐药,对铂类药物、抗代谢药和中药榄香烯乳未见交叉耐药性.结论 SPC-A1/Taxol耐药细胞株为一个较好的多药耐药体外模型,对其交叉耐药性的实验研究可以为临床用药提供有益依据.     

端粒酶11-聚体寡核苷酸对肺癌细胞的作用

目的探讨端粒酶11-聚体正义寡核苷酸(S0DN)、反义寡核苷酸(ASODN)对肺腺癌细胞株(SPC-A1)的作用。方法脂质体介导的11-聚体正、反义寡核苷酸与肺腺癌低分化SPC-A1细胞株共培养后，MTT法检测细胞生长抑制率；瑞氏染色后观察细胞形态学变化；流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡。结果①ASODN抑制肺腺癌细胞SPC-A1生长，诱导细胞凋亡。②SODN抑制肺腺癌细胞SPC-A1生长，可能通过诱导细胞分化途径。③无义寡核苷酸(NODN)对肺腺癌细胞SPC-A1生长无抑制。结论ASODN和SODN分别通过诱导细胞凋亡和诱导细胞分化途径抑制肺腺癌细胞SPC-A，生长。     

丙戊酸钠对人肺癌SPC-A1细胞的增殖抑制作用及其机制

目的探讨丙戊酸钠对人肺癌SPC-A1细胞的增殖抑制作用及其机制。方法采用MTT法及克隆形成抑制实验观察丙戊酸钠对肺癌SPC-A1细胞的增殖抑制作用,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞早期凋亡水平,Western blotting检测细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl,Bcl-2,Mcl-1及Caspase-9,Caspase-3表达的改变。结果不同浓度的丙戊酸钠作用于肺癌SPC-A1细胞48 h,均能显著抑制细胞增殖,SPC-A1细胞的IC50为1.8 mmol/L;丙戊酸钠能显著抑制SPC-A1细胞克隆形成,且导致显著的细胞凋亡,8 mmol/L的丙戊酸钠作用细胞48 h,细胞早期凋亡率达60.44%,细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl,Bcl-2,Mcl-1表达减少,Caspase-9,Caspase-3蛋白酶切活化。结论丙戊酸钠通过诱导细胞凋亡,显著抑制肺癌SPC-A1细胞的增殖。     

维拉帕米逆转肺癌细胞株多药耐药性的研究

体外实验研究钙通道阻滞剂维拉帕米对多药耐药性肺癌细胞株SPC—A1／ADM耐药性的逆转作用。结果显示，无细胞毒作用剂量的维拉帕米可逆转SPC－A1／ADM细胞对长春新碱、阿霉素的耐药性，而对顺铂的耐药性无明显影响，该逆转作用有药物浓度依赖性。表明维拉帕米可望作为一种化学增敏剂应用于肺癌的治疗。     

半胱氨酸蛋白酶8在姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨姜黄素对人肺癌细胞(SPG-Al)抗癌作用机制。方法 采用细胞培养、荧光显微镜、细胞凋亡检测、原位杂交等技术。结果 姜黄素处理后的癌细胞，光镜下可见有细胞脱壁，悬浮培养液中；荧光镜下可见细胞核破碎，裂解成大小不等的凋亡小体；20μmol/L姜黄素作用24h凋亡率达43．67％，人肺癌细胞半肮氨酸蛋白酶8mRNA表达明显增高。结论 姜黄素可诱导人肺癌细胞凋亡，其作用机制可能与半胱氨酸蛋白酶8表达增高有关。     

黄芪注射液对SPC-A1肺肿瘤细胞株细胞增殖活力和细胞凋亡影响的实验研究

目的：观察黄芪注射液对人肺肿瘤细胞株SPC-A1细胞增殖活力和细胞凋亡影响。方法以SPC-A1肿瘤细胞株为研究材料,分别用终浓度为0、4、8、16、32μl/ml黄芪注射液刺激细胞株,分别用CCK8 kit法检测细胞活力和用流式细胞仪PI染色检测细胞凋亡。结果高浓度的黄芪注射液对SPC-A1的增殖有促进作用,对其凋亡无显著性影响。结论高浓度黄芪注射液促进SPC-A1增殖。     

In vitro cytotoxicity of TCDD on SPC-A1 cells

Objective The toxicology of TCDD （2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin） has been studied mainly with regard to the carcinogenicity of its metabolites, but its phototoxicity is not well understood. Although some studies have indicated the lethal phototoxicity of TCDD, this study was designed to investigate its effect on SPC-Al cells. Methods SPC-Al cells were cultured in 1640 medium and treated with 10 nmol/L, 0.1 μmol/L, 1 μmol/L TCDD for either 24 h or 96 h at each concentration. SPC-Al cells were co-cultured with TCDD at different concentrations. Then the cell morphology, DNA fragment electrophoresis, and cell cycle were analyzed by flow cytometry, and enzyme assays were used to observe the effect of TCDD on the morphology, growth rate, and enxyme change of SPC-A1 cells. Results With the increasing concentrations of TCDD and prolongation of culture time, the morphology of SPC-Alcells was changed from round shape to spindle, and the ability of SPC-Al cells to adhere to wall was decreased. With debris emitted around the cells, the morphologic changes included reduction in cell volume. Nuclear ehromatin condensation and PI were observed. With the increasing concentrations of TCDD, DNA ladder occurred. After treatment with TCDD, extraction of cancer cells exhibited typical DNA fragmentation, and flow eytometry analysis showed apoptosis in a dose-dependent manner. As the concentration of TCDD rose from 10 nmol/L to 1 μmol/L, the ratio of apoptotic cells increased from 10.76% to 21.82%. Conclusions TCDD has in vitro cytotoxicity on SPC-Al cells, and the cytotoxicity is positively related to its concentration and culture time. TCDD may inhibit the growth and proliferation of SPC-A lcells through the pathway of apoptosis introduction.     

反义肽核酸阻抑线粒体基因表达诱导肺癌SPC细胞凋亡的实验研究

目的:探讨以反义肽核酸(Anti-sense peptide nucleic acid,asPNA)封闭肺癌SPC-A1细胞线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)转录启动子后,对其生物学特性的影响.方法:合成针对mtDNA重链转录启动子区的asPNA,构建asPNA-三苯磷复合物并鉴定,以该复合物转染人肺腺癌SPC-A1细胞系.激光共聚焦显微镜确定该复合物的亚细胞定位,RT-PCR检测转染48h后对mtDNA编码基因转录的影响,流式细胞术评估细胞周期分布及凋亡/坏死情况,自发光荧光仪检测细胞内ATP浓度,以未转染asPNA-三苯磷复合物的肺腺癌SPC-A1细胞为对照.结果:成功获得asPNA-三苯磷复合物,激光共聚焦显微镜显示该复合物顺利进入SPC-A1细胞线粒体;同未转染组相比,转染组SPC-A1细胞mtDNA编码基因的转录水平有所下降,而细胞内ATP浓度明显降低(P＜0.01);同时,细胞周期分析显示,转染组出现明显的亚二倍体峰,而Annexin V-PI双标结果进一步证实,转染组肺癌细胞凋亡率明显增加.结论:asPNA在电子移位亲脂性阳离子-三苯磷的运载下,能够进入SPC-A1细胞线粒体并阻抑其mtDNA编码基因的转录,进而影响肺癌细胞的能量合成并诱导其凋亡.     

PI3K/Akt抑制剂对肺癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物联合使用对肺癌细胞A549、SPC-A1化疗效果的影响.方法 将LY294002联合化疗药物作用于肺癌细胞A549、SPC-A1,用MTT法检测单独使用顺铂、紫杉醇及联合PI3K抑制剂LY294002对体外培养的肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物的敏感性,用流式细胞术检测肺癌细胞A549、SPC-A1凋亡率和细胞周期变化.结果 联合LY294002作用后肺癌细胞A549、SPC-A1对化疗药物顺铂、紫杉醇敏感性显著增强(P<0.01),且细胞凋亡率显著提高(P<0.01),G0/G1期细胞比例增加,S+G2/M期细胞比例减少(P<0.05).结论 LY294002能有效提高化疗药物顺铂、紫杉醇体外对A549、SPC-A1细胞抑制作用的敏感性,抑制PI3K介导的信号转导通路,显著提高肺癌化疗效果.     

核素介导生长抑素类似物对非小细胞肺癌细胞的体外杀伤作用

目的观察核素介导生长抑素类似物对非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)细胞的体外杀伤作用。方法 MTT法测定核素介导生长抑素类似物对人肺癌细胞A549和SPC-A1增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell侵袭实验验证核素介导生长抑素类似物对肿瘤侵袭的影响。结果 2~6 d内,核素介导生长抑素类似物对A549和SPC-A1细胞的抑制率随时间延长明显增加。经核素介导生长抑素类似物处理48 h后,A549和SPC-A1细胞凋亡率分别为23.1%和22.6%。与对照组相比,核素介导生长抑素类似物处理过的A549和SPC-A1细胞侵入胶原的数量减少了约1/3。结论核素介导生长抑素类似物具有诱导NSCLC细胞凋亡的作用,这可能为NSCLC的放射治疗提供了新的思路。