利福平对鱼藤酮致分化PC12细胞氧化应激的影响

【目的】 探讨利福平对鱼藤酮诱导的分化大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)细胞形态､活性氧(ROS)､还原型谷胱甘肽(GSH)及细胞凋亡的影响｡【方法】 利用鱼藤酮诱导分化PC12细胞建立帕金森病体外细胞模型;显微镜下观察细胞形态,酶标仪检测细胞还原型谷胱甘肽,流式细胞仪检测细胞活性氧和凋亡｡【结果】 鱼藤酮组细胞内还原型谷胱甘肽含量低于两对照组,而活性氧含量及凋亡率均高于两对照组;经100､200和300 μmol/L各浓度利福平预处理后,利福平预防组3组细胞内活性氧含量及凋亡率均低于鱼藤酮组,而细胞内还原型谷胱甘肽含量高于鱼藤酮组,且存在浓度依赖性｡【结论】 利福平可能通过氧化应激途径减轻鱼藤酮诱导的分化PC12细胞的损伤作用,且存在浓度依赖性｡     

活性氧与谷胱甘肽在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时的变化及机制探讨

目的:研究辛伐他汀(simvastatin)诱导K562细胞凋亡过程中细胞内活性氧与谷胱甘肽的变化及凋亡中发生的时间顺序,以探讨辛伐他汀诱导K562凋亡的机制.方法:20μmol/L浓度辛伐他汀处理K562细胞,48 h光学显微镜观察细胞形态学.12、24、48、72 h MTT法检测细胞活力,荧光染料流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞内活性氧,化学比色法检测细胞内谷胱甘肽.结果:辛伐他汀作用K562细胞48 h后出现典型的凋亡形态学改变;12、24、48、72h细胞抑制率为0、(19.02±O.92)%、(56.4±3.20)%、(74.4±5.54)%,K562细胞生长被抑制;细胞凋亡率升高为:(2.55±0.25)%、(6.1±0.35)%、(14.15±O.42)%、(30.70±O.65)%;活性氧的荧光强度升高为:1.61±0.15、13.1±1.54、10.0±1.05、8.10±0.87,与不同时间的对照组相比较均显著升高(P<0.05).细胞内谷胱甘肽含量为:274.7±11.5、262.5±9.8、272.4±1O.5、(357.2±16.8)mg/gprot,与不同时间的对照组相比较均显著降低(尸<0.05 o结论:辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内发生了氧化还原体系失衡,它可能是细胞凋亡的早期上游事件.     

双氢青蒿素对卵巢癌生长的抑制作用及其机制的研究

目的研究双氢青蒿素对体内外卵巢癌生长的抑制作用及其机制。方法双氢青蒿素卵巢癌细胞株HO-8910PM 24h后,CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞凋亡;以DCFH-DA为荧光探针检测卵巢癌细胞内活性氧(reactiveoxygen species,ROS)水平;Western blotting检测卵巢癌细胞中keap1蛋白、胞核Nrf2蛋白的表达;建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,免疫组织化学法检测肿瘤组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxi-dase,GPX)的阳性表达。结果与对照组相比,双氢青蒿素可明显抑制体外卵巢癌细胞生长,并明显诱导细胞凋亡;双氢青蒿素可显著下调卵巢癌细胞胞核卵巢癌蛋白表达,而促进细胞内Keap1蛋白表达;化学显示法结果显示,双氢青蒿素使卵巢癌细胞SOD、GPX的活性明显降低;双氢青蒿素亦可明显降低卵巢癌肿瘤组织中SOD和GPX的阳性表达。结论双氢青蒿素可显著抑制卵巢癌细胞的生长,该作用可能通过Nrf2-Keap1信号通路来促进卵巢癌细胞内活性氧的产生,进一步促进细胞凋亡。     

活性氧对硼替佐米诱导甲状腺癌细胞凋亡的影响

目的 探讨活性氧在蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用.方法 选取4种人甲状腺未分化癌细胞系ARO、FRO、KTC2、8305C,分别设空白对照组、还原型谷胱甘肽(GSH)组、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、硼替佐米组、硼替佐米+GSH组、硼替佐米+NAC组、R-丁胱亚磺酰亚胺(BSO)组、硼替佐米+BSO组、硼替佐米+BSO+GSH组.流式细胞仪检测细胞凋亡情况;测定还原型谷胱甘肽含量.DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇水平.结果 与空白对照组相比,4种细胞GSH组及NAC组中GSH水平显著增加(P＜0.01),BSO组中GSH水平减低(P＜0.05),但细胞凋亡率差异没有统计学意义(P＞ 0.05);FRO、KTC2细胞中硼替佐米组GSH水平减低(P＜0.01);ROS水平显著增加(P＜0.01);与硼替佐米组相比,GSH+硼替佐米组及NAC+硼替佐米组中GSH显著增加(P＜0.01),活性氧簇水平显著降低(P＜0.01);细胞凋亡率显著降低(P＜0.01);BSO+硼替佐米组中GSH显著减少(P＜0.05);细胞凋亡率显著增加(P＜0.01).结论 活性氧簇的生成可能参与甲状腺癌细胞对蛋白酶体抑制剂硼替佐米细胞毒素的应答;耐药肿瘤细胞诱导GSH水平,进而清除活性氧簇;减少细胞内GSH可增敏甲状腺癌细胞对硼替佐米的应答.     

活性氧介导紫花牡荆素诱导卵巢癌HO-8910细胞调亡

目的:探讨紫花牡荆素(Casticin,CAS)诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡是否涉及活性氧生成和线粒体膜去极化。方法:体外培养HO-8910细胞。AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;H2DCFH-DA探针FCM检测细胞活性氧生成;Rh123探针FCM分析细胞线粒体跨膜电位。结果:CAS诱导HO-8910细胞凋亡率增高,呈剂量依赖性。CAS以浓度依赖方式增高HO-8910细胞内活性氧水平。CAS处理细胞的Rh123平均荧光强度显著降低,表明CAS具有诱导细胞线粒体膜去极化作用。N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)部分拮抗CAS诱导细胞凋亡,并能减弱CAS诱导活性氧生成和线粒体膜去极化作用。结论:CAS诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡作用机制可能与促进细胞活性氧生成介导的线粒体膜去极化相关。     

As_2O_3诱导胃癌细胞凋亡时蛋白激酶C及cAMP水平的变化

目的从第二信使角度探讨As2 O3 诱导胃癌BGC 82 3细胞凋亡的作用机制。方法采用免疫组化、流式细胞术 ,观察As2 O3 诱导胃癌细胞凋亡的形态学改变及凋亡率 ;采用放免方法检测As2 O3 诱导胃癌细胞凋亡时环磷酸腺苷、蛋白激酶C水平变化。结果As2 O3 能够显著增加细胞凋亡率 (P <0 .0 5 ) ,诱导细胞出现凋亡形态学改变 ;并上调胃癌细胞内环磷酸腺苷水平 (P <0 .0 1) ,下调蛋白激酶C的水平 (P <0 .0 5 )。结论As2 O3 通过上调环磷酸腺苷水平 ,下调蛋白激酶C水平诱导胃癌细胞凋亡 ,抑制细胞增殖。     

中波紫外线诱导人真皮成纤维细胞凋亡的研究

①目的　探讨中波紫外线 (UVB)辐射所致人真皮成纤维细胞凋亡的机制。②方法　建立UVB(辐射强度为 1 .1 76× 1 0 - 4 J/cm2 )对体外培养人真皮成纤维细胞氧化损伤模型。用MTT法检测细胞增殖活性 ,酶法测定胞浆中超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH px)活性和活性氧 (ROS)的含量 ,流式细胞仪An nexinV FITC法检测细胞的凋亡率和死亡率。③结果　在离体条件下 ,UVB可显著抑制成纤维细胞的增殖活性 ;UVB可降低细胞内SOD ,GSH px活性 ,显著提高ROS的含量 (t =3.87～ 2 4 .4 1 ,P <0 .0 1 ) ;同时可显著提高细胞的凋亡率 (t =57.4 7,P <0 .0 1 )和死亡率 (t =1 3.2 7,P <0 .0 1 )。④结论　UVB所致人真皮成纤维细胞凋亡与其产生氧自由基、抑制细胞清除自由基能力有关。     

HHT诱导骨髓增生异常综合征细胞MUTZ-1凋亡过程中活性氧和线粒体膜电位的变化

目的研究活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)在高三尖杉酯碱(HHT)诱导骨髓增生异常综合征细胞MUTZ-1凋亡过程中的变化,以期进一步探讨HHT诱导细胞凋亡的机制.方法以100ng/mlHHT作用于MUTZ-1细胞一定时间后应用流式细胞仪,以Annexin V FITC和PI双染的方法检测细胞凋亡率,ROS捕获剂HE反应法检测细胞内ROS的水平,JC-1染色法检测细胞MMP的变化.结果HHT作用MUTZ-1细胞0、6、12、24h后的凋亡率分别为5.68%±0.52%、16.88%±0.96%、43.75%±2.33%、55.48%±3.67%.在细胞凋亡的同时,细胞内ROS水平升高(P＜0.01),线粒体膜电位下降(P＜0.01).结论细胞内ROS水平升高和线粒体膜电位下降是HHT诱导MUTZ-1细胞凋亡的重要机制之一.     

丙戊酸诱导耐药白血病细胞凋亡及其机理的研究

目的 观察丙戊酸(VPA)对白血病细胞尤其是耐药白血病细胞的体外抗肿瘤作用,探讨细胞内谷胱甘肽(GSH)水平及抗氧化酶系活性与VPA诱导细胞凋亡之间的关系.方法 采用体外细胞培养,通过MTT细胞活力测定,Caspase-3,8,9活性检测、细胞形态学观察、细胞周期分析及Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,观察VPA对白血病细胞的抗肿瘤作用;通过检测VPA作用前后细胞内总谷胱甘肽(tGSH)与GSH水平、谷胱甘肽还原酶(GSH-Rd)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性改变,以及GSH合成酶抑制剂丁胱亚磺酰亚胺(BSO)、GSH 前体N-乙酰-半胱氨酸(NAC)和过氧化氢酶(CAT)对VPA诱导凋亡的影响,分析谷胱甘肽-氧化还原(GSH-redox)系统在VPA诱导细胞凋亡中的作用.结果 VPA对所有受试细胞株均有增殖抑制作用,其IC50接近VPA抗癫痫有效血药浓度.VPA作用后细胞内Caspase-3,8,9活性增强,细胞出现凋亡形态学改变.VPA可使阿霉素耐药株K562/AO2及糖皮质激素(Gc)耐药株Jurkat细胞周期阻滞于Go/G1期,在VPA作用下,Jurkat和K562/AO2细胞内tGSH和GSH均降低,以GSH降低为主,GSH-Rd和GSH-Px的活性亦显著降低.NAC和CAT减弱VPA诱导的凋亡,而BSO增强VPA诱导的凋亡.结论 VPA抑制耐药白血病细胞增殖、诱导细胞周期阻滞与凋亡,这些作用与细胞内GSH-Rd、GSH-Px活性降低、GSH水平下调所导致的细胞内氧化应激反应激活有关.     

环孢素A对人胃癌BGC823细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究环孢素A(CsA)对人胃癌BGC823细胞的生长增殖以及凋亡的影响.方法 MTT法检测不同浓度CsA处理24、48、72 h后对BGC823细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期、活性氧(ROS)含量及细胞线粒体膜电位(△Ψm)改变;Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.结果 CsA在5～20 μmol/L浓度范围内和24 ～ 72 h时间范围对BGC823细胞增殖有显著抑制作用,与药物剂量、作用时间呈现量效和时效的依赖性;FCM结果显示CsA浓度依耐性使细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比差异有统计学意义(F=33.45,P＜0.05,P＜0.01);细胞凋亡率随CsA作用浓度增加而增加;5～ 20μmol/L CsA浓度范围细胞内ROS含量显著增加(F =46.17,P＜0.01),细胞线粒体膜电位明显降低.结论 CsA对BGC823细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞生长周期、细胞内ROS含量增加以及线粒体膜电位下降相关.     

三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡的机制研究

目的 通过研究三氧化二砷对人肝癌细胞株HepG2活性氧（ROS）、谷胱甘肽（GSH）水平、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和核因子E2相关因子2(Nrf2)表达的影响,探讨三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡的机制。方法 分别采用0、 2.5、5和10 μmol/L三氧化二砷处理HepG2达24 h后,MTT实验测定细胞存活率（另增25、50 μmol/L浓度组）,流式细胞术检测细胞凋亡水平,DCFH-DA荧光探针测定细胞内ROS水平,5,5-二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）比色法检测细胞中GSH含量,蛋白印记检测γ-GCS催化亚基GCLC和调节亚基GCLM以及核因子E2相关因子2（Nrf2）蛋白的表达水平。结果 随着三氧化二砷染毒浓度的增加,HepG2细胞凋亡率、ROS水平和Nrf2蛋白表达均增加(P<0.05),而细胞存活率、GSH含量、GCLC和GCLM蛋白表达量均降低(P<0.05)。结论 三氧化二砷通过诱导细胞产生ROS,抑制γ-GCS的表达以及减少GSH合成,从而诱导人肝癌细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡对端粒酶活性的影响

目的 探讨As2O3诱导细胞凋亡时对其端粒酶活性的影响及其作用机制.方法 采用光镜、电镜,PCRELISA,RT-PCR等技术,检测细胞凋亡,端粒酶活性及其催化亚单位的表达.结果 As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,但存在作用浓度,细胞株类型差异性;端粒酶活性随药物作用时间和浓度的增加而明显减弱,同时伴随hTERT mRNA表达水平的下降.结论 端粒酶活性和hTERT mRNA表达在As2O3诱导SKOV3、3AO细胞凋亡过程中共同发挥作用,两者有密切关系,是诱导细胞凋亡的分子机制之一.     

细胞内还原性谷胱甘肽水平与三氧化二砷治疗血液恶性肿瘤疗效的关系

三氧化二砷是治疗急性早幼粒细胞白血病的特效药。三价砷是巯基(-SH)的络合剂,砷化物与-SH结合后可能通过多条途径诱导细胞凋亡,此外,砷与-SH结合还直接导致细胞内的还原性谷胱甘肽耗竭,使活性氧产生增多。研究发现,还原性谷胱甘肽(GSH)水平与三氧化二砷对急性早幼粒细胞白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤等细胞株的疗效呈负相关,降低细胞内GSH水平会明显增强三氧化二砷的疗效。     

三氧化二砷对人肺腺癌裸鼠模型作用的超微结构观察

目的 研究三氧化二砷（As2O3 )对人肺腺癌细胞（AGZY）裸鼠模型超微结构的影响。方法 利用国内已建株的肺腺癌细胞株（AGZY）制造了裸鼠肺腺癌模型，分别用不同浓度的As2O3、顺铂、生理盐水治疗肺腺癌裸鼠，在电镜下观察四种不同用药方法作用后肿瘤细胞超微结构的改变，并探讨As2O3的作用机制。结果 有腺癌裸鼠经As2O3、顺铂治疗后，超微结构观察发现，As2O3能引起细胞核染色南聚集、边移，线粒体肿胀，细胞性发生凋亡。结论 动物实验证明，As2O3可诱导人肺腺癌细胞发生凋亡。     

阿司匹林增加人肝癌细胞对三氧化二砷敏感性的实验研究及机制探讨

目的 研究阿司匹林能否增加肝癌细胞对三氧化二砷（As2O3）的敏感性,并从氧化应激角度探索其增敏的机制。方法 采用10 μmol/L As2O3和不同浓度的阿司匹林联合处理人肝癌细胞HepG2 24 h后,采用MTT比色法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧（ROS）水平,Western blot检测总蛋白中血红素氧合酶1（HO-1）和核蛋白中核转录因子Nrf2的表达水平。结果 与空白对照相比,10 μmol/L As2O3可引起肝癌细胞存活率降低,凋亡率、ROS水平、HO-1和Nrf2表达升高;不同浓度（0.1、1.0、2.5、5.0 mmol/L）的阿司匹林与10 μmol/L As2O3联合处理时,HepG2细胞存活率、总蛋白HO-1以及核内Nrf2的表达均随着阿司匹林浓度的增加呈现先升高后降低的趋势,而细胞凋亡率和细胞内ROS水平则表现为先降低后升高。结论 阿司匹林对As2O3的增敏作用有限,只有在较高浓度（5 mmol/L）时表现出一定的增敏作用,其增敏机制可能是通过抑制Nrf2-HO-1途径从而导致ROS蓄积,增强As2O3对HepG2的凋亡诱导能力,进而增加HepG2对As2O3的敏感性。     

癌灵一号对人肝癌细胞凋亡作用的研究

研究癌灵一号对肝癌细胞的凋亡的作用。用台盼蓝染色观察药物对照细胞增殖的抑制人艇及其形态变化;采用流式细胞仪技术检测凋亡百分数及凋亡峰。结果表明,癌灵一号对人肝癌细胞具有抑制作用,并使细胞出现形态改变;     

三氧化二砷对卵巢癌细胞抑制作用及机制的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对卵巢癌细胞HO-8910体外生长的影响及其相关机制.方法：用倒置显微镜对细胞进行观察,用免疫细胞化学染色法检测p53基因表达.结果：（1）三氧化二砷作用浓度在0～12.0 μmol/L时,随着剂量的增加对卵巢癌细胞抑制作用增强.（2）卵巢癌细胞p53基因表达增强.结论：较高浓度三氧化二砷对卵巢癌细胞株HO-8910细胞有生长抑制作用并呈剂量-时间依赖效应 As2O3作用引起卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的机制与p53基因表达增强有关.     

细胞内Ca2+变化在砷剂诱导胰腺癌细胞株凋亡中的作用

目的：探讨细胞内游离Ca^2 在As2O3诱导的胰腺癌细胞株凋亡过程中的作用及Fas,Fas配体（FasL)的变化和意义。方法：2μmol/L的As2O3与胰腺癌细胞株SW－1990共同孵育后,H－E染色、光镜观察,抽提细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳,上流式细胞仪检测细胞凋亡特征; 用Fura-2荧光负荷技术测细胞内游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i),流式细胞仪检测Fas,FasL的表达情况。结果：2μmol/LAsO3作用于胰腺癌细胞48h后,胰腺癌细胞出现典型的凋亡特性改变,且凋亡过程中[Ca^2 ]i明显升高,Fas,FasL表达呈先升后降,结论：As2O3在诱导胰腺细胞凋亡过程中,肿瘤细胞凋亡与[Ca^2 ]i升高和Fas、FasL表达有关。     

活性氧（ROS）在三氧化二砷诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡中的作用

目的：利用Mn（Ⅲ）TBAP能特异性清除细胞内活性氧（reactiveoxygenspecies,ROS）,观察不同浓度三氧化二砷（As2O3）单独和联合Mn（Ⅲ）TBAP作用于人肝癌HepG2细胞后细胞内活性氧（ROS）的变化和对凋亡的影响,探讨活性氧（ROS）在三氧化二砷（As2O3）诱导肝癌细胞株HepG2凋亡中的作用。方法：实验分3组：对照组,不同浓度三氧化二砷（As2O3）组,三氧化二砷（As2O3）＋Mn（Ⅲ）TBAP组。用四甲基偶氮唑盐（MTr）比色法测定细胞生长增殖活性;激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内ROS的变化;AnnexinV／PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：2、4、8μol／L三氧化二砷（As2O3）处理HepG2细胞后各组细胞增殖抑制率高于对照组（P〈0．05）,细胞增殖抑制率随As2O3浓度的增加及作用时间的延长而升高（P〈0．05）;HepG2细胞内ROS的水平随As2O3浓度的增加而升高（P〈0．05）,As2O3处理组HepG2细胞内ROS水平高于空白对照组（P〈0．05）,As2O3＋Mn（Ⅲ）TBAP组HepG2细胞内ROS的水平低于As2O3组（P〈0．05）,但高于对照组（P〈0．05）。细胞早期凋亡率随As2O3浓度的增加及作用时间的延长而升高（P〈0．05）,且均高于Mn（Ⅲ）TBAP＋As2O3组和对照组,Mn（Ⅲ）TBAP＋As2O3组高于对照组。结论：三氧化二砷作用于HepG2细胞促进了细胞内ROS的产生,ROS水平的提高增加了三氧化二砷促HepG2细胞凋亡的敏感性。     

三氧化二砷在体外抑制结肠癌细胞的研究

目的 在体外观察三氧化二砷(As2O3)对结肠癌细胞系HT-29的抑制作用,并探讨其作用机制,为其是否能作为结肠肿瘤的化疗药物提供理论基础.方法 将不同浓度As2O3作用于HT-29细胞不同时间后,用MTT检测细胞抑制率,光镜及透射电镜观察细胞形态学和超微结构的变化,通过流式细胞仪及共聚焦显微镜分析凋亡及自噬.结果 4.0μmol/L As2O3作用72h可明显抑制HT-29细胞增殖及诱发其凋亡,且抑制率与药物作用时间及浓度成正比.在凋亡早期细胞形态学变化在光镜下可见细胞缩小变圆,在电镜上可见细胞质浓缩、核固缩及自噬溶酶体.4.0μmol/L As2O3作用72h后HT-29细胞凋亡率为25%.结论 As2O3能明显抑制结肠癌细胞系HT-29的增殖,其作用机制与引起凋亡及自噬密切相关.