木犀草素增强Cx32/Cx26组成的细胞缝隙连接功能

【目的】 体外观察木犀草素对转染并稳定表达缝隙连接蛋白32/ 26(Cx32/Cx26)的Hela细胞缝隙连接通讯功能(GJIC)和Cx26蛋白表达水平的影响。【方法】 用SRB法检测不同浓度木犀草素对Hela细胞的毒性;用细胞接种荧光示踪法观察不同浓度木犀草素对GJIC的影响;用western blotting 研究木犀草素在影响GJIC功能浓度范围内对Cx26表达的影响。【结果】 木犀草素在0 ~ 1 μmol/L浓度时对Hela细胞无毒性作用;木犀草素(0.01 ~ 1 μmol/L)能浓度依赖性地增强GJIC及Cx26蛋白表达量。【结论】木犀草素增强转染并稳定表达Cx32/Cx26的Hela细胞GJIC;这种增强作用可能与其增加Cx26蛋白表达水平有关。     

黄芩素增强Cx32组成的细胞缝隙连接提高顺铂的细胞毒性

摘 要:【目的】 黄芩素在转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞上,对顺铂细胞毒性的影响及其与GJ的关系?【方法】 SRB检测黄芩素对HeLa32细胞增殖性的影响,Parachute assay检测黄芩素对Cx32组成的GJ功能的影响?细胞集落实验用于检测黄芩素对顺铂细胞毒性的影响及其与Cx32组成的GJ的关系?Western blotting检测对Cx32蛋白的影响?【结果】 黄芩素24 h,100 μmol/L浓度以下不影响Hela32细胞增殖?黄芩素(0.0125 ~ 0.1 μmol/L)能浓度依赖性地增强Hela32细胞间的荧光传递?黄芩素(0.1 μmol/L)分别作用4 h,12 h,和24 h,细胞间荧光传递最强的作用时间是4 h?在生长融合细胞组(有GJ形成),黄芩素可以提高顺铂对HeLa32细胞的细胞毒性?在生长未融合细胞(无GJ形成),或用GJ抑制剂oleamide阻断GJ功能,黄芩素不改变顺铂对细胞的杀伤作用?多西环素调控HeLa32细胞Cx32的表达与GJ的形成?在生长融合细胞,不表达Cx32(无GJ形成),可以降低黄芩素增强顺铂细胞毒性的作用?在生长未融合细胞(无论Cx表达与否,均无GJ形成),改变Cx表达无此效应?黄芩素0.0125 ~ 0.1 μmol/L 作用细胞4 h,对Cx32蛋白表达没有影响?黄芩素0.1 μmol/L,作用细胞4 h,12 h,和24 h,对Cx32蛋白表达没有影响?【结论】黄芩素可增强HeLa32细胞GJ功能,提高顺铂的细胞毒性?黄芩素影响Cx32组成的GJ功能不伴有Cx32蛋白表达的增加?     

全反式维甲酸上调异位子宫内膜间质细胞GJIC功能的机制

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人异位子宫内膜间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能的调节作用及其机制.方法:取人子宫内膜异位症(EMs)患者的间质细胞,采用0.1,1,10 μmol/L ATRA于24,48,72,96和120 h分别进行处理,同时设置空白对照组.采用激光共聚焦显微镜检测异位内膜间质细胞的GJIC功能,并检测与GJIc功能密切相关的Cx43,Cx26和Cx32的基因及蛋白表达.结果:经ATRA处理后,1 μmol/L与10 μmol/L处理组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能明显增强;0.1 μmol/L处理组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能无明显变化.未经ATRA处理的异位内膜间质细胞中无Cx43,Cx26和Cx32的mRNA及蛋白表达;经1,10μmol/LATRA处理后,异位内膜间质细胞中检测到Cx43 mRNA和蛋白表达,但未见Cx26和Cx32的mRNA及蛋白表达.间质细胞的GJIC功能与去磷酸化Cx43蛋白的表达有关.结论:ATRA能选择性的诱导Cx43基因及其去磷酸化蛋白的表达,从而上调异位内膜间质细胞的GJIC功能;ATRA酸可能是治疗EMs的潜在药物.     

丹参酮ⅡA对HUVEC细胞间缝隙连接的作用

【目的】探讨丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA)对人胎脐静脉上皮细胞(HUVEC)缝隙连接细胞通讯(GJIC)的影响及其机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测丹参酮ⅡA对HUVEC细胞生长的影响,荧光显微镜观察及流式细胞仪荧光示踪法分析GJIC功能变化,并与阳性对照药全反式维甲酸(ATRA)比较,采用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)法分析Cx37、Cx40 m RNA的表达。【结果】丹参酮ⅡA作用HUVEC 24、48 h的半数致死量(IC50)分别为15、8.5μmol/L,32、64μmol/L丹参酮ⅡA作用HUVEC 48 h有明显细胞毒性,抑制率大于70%;选用0、4、8、16、32μmol/L丹参酮ⅡA作用HUVEC48 h,流式细胞仪检测结果显示:各组接受绿色荧光Calcein-AM的细胞数量与总细胞数比值明显升高,其中8、16、32μmol/L组可显著提高GJIC功能(P0.01)。q RT-PCR分析结果显示:与空白对照组比较,8、16、32μmol/L丹参酮ⅡA组可显著提高Cx37、Cx40 m RNA表达(P0.05或P0.01),并有一定的浓度依赖关系。【结论】丹参酮ⅡA能够提高Cx37、Cx40 m RNA表达,这可能是丹参酮ⅡA增强上皮细胞GJIC功能的机制之一。     

丹参素钠对小鼠黑色素瘤细胞B16细胞间缝隙连接的影响

[目的]研究丹参素钠(salvianic acid A sodium,SAAS)对小鼠黑色素瘤细胞株B16细胞间缝隙连接(GJIC)的影响及其机制.[方法]采用四甲基偶氮唑盐(MTr)法检测SAAS对B16细胞生长的影响,荧光显微镜观察及流式细胞仪荧光示踪法结合分析缝隙连接(GJ)功能变化,并与阳性对照药全反式维甲酸(ATRA)比较,采用western blot法分析缝隙连接蛋白Cx32和Cx43的表达.[结果]以0～8 μmol/L SAAS处理B16细胞48 h不影响其生存;用o、1、2、4、8μmol/L SAAS处理细胞48 h后,荧光显微镜下观察,SAAS能明显提高B16细胞Calcein传递,流式细胞术分析对照组和试验组的绿色荧光细胞(G4)与双阴性受体细胞(G3)比值(G4/G3)分别是0.10±0.01、0.16±0.02、0.20±0.01、0.21±0.02和0.25±0.02,各试验组G4/G3值显著高于对照组(P＜0.01);western blot分析结果显示:用0、1、2、4、8μmol/L SAAS处理细胞48 h能显著提高Cx32、Cx43的表达.[结论]体外较低浓度SAAS能够促进B16细胞细胞间缝隙连接功能,但在一定药物浓度作用后,不能再提高其功能.SAAS促进GJ机制可能是通过上调Cx32、Cx43蛋白表达途径.     

维甲酸对睾丸癌细胞缝隙连接蛋白Cx43表达及其功能的影响

目的 探讨维甲酸对睾丸癌细胞缝隙连接蛋白（Cx43）表达及其功能的影响。方法 体外培养的睾丸癌I-10细胞分别予2.5、5.0、10.0 μmol/L维甲酸处理24 h,Western blot法检测I-10细胞Cx43蛋白表达,细胞免疫荧光法观察细胞膜表面Cx43蛋白分布的改变,细胞接种荧光示踪法检测细胞荧光传递功能的变化。结果 Western blot结果显示,与对照组比较,维甲酸2.5、5.0、10.0 μmol/L可增加I-10细胞中Cx43蛋白表达(P<0.05),其增强率分别为43.14%±2.1%、58.09%±1.8%、143.13%±1.6%;细胞免疫荧光法结果显示,维甲酸2.5、5.0、10.0 μmol/L可显著增加I-10细胞膜表面Cx43蛋白的表达;细胞接种荧光示踪法结果显示,与对照组比较,维甲酸2.5、5.0、10.0 μmol/L可增强I-10细胞间荧光传递功能(P<0.01),增强率分别为26.1%±2.3%、63.3%±1.6%、140.5%±3.4%。结论 维甲酸可通过增加I-10细胞Cx43蛋白的表达来增强细胞间的缝隙连接功能。     

鞣花酸对转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞缝隙连接功能的影响

目的:观察鞣花酸(EA)对转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞中缝隙连接(GJ)通讯功能的影响。方法:细胞接种荧光示踪法观察EA对GJ功能的影响;细胞免疫荧光法检测EA对细胞膜上Cx32表达的影响。结果:EA4、8、16μmol/L分别使细胞荧光渗透率显著增强6.04%、12.50%和20.33%(P0.01),使细胞膜Cx32的荧光强度显著增强23.66%、46.09%和92.18%(P0.01)。结论:EA可通过增强胞膜Cx32的表达,增强细胞GJ通讯功能。     

雌二醇及雌酮对人子宫内膜细胞GJIC及连接蛋白的影响

【目的】 探讨雌二醇(E2)及雌酮(E1)对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)及连接蛋白(Cx)43?32表达的影响?【方法】 采用划痕染料标记示踪技术及激光共聚焦显微镜扫描技术(LSCM),观察E2及E1对原代培养的20例人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC的影响,采用激光共聚焦显微镜扫描技术,观察E2及E1对Cx 43?Cx 32表达的影响?【结果】 5 × 10-5 mol/L雌二醇作用48 h后间质细胞及腺上皮细胞GJIC功能没有明显变化(P > 0.05),2.5 × 10-5 mol/L雌酮作用间质及腺上皮细胞48 h后,细胞GJIC功能有所下降(P 0.05)?【结论】 E1抑制细胞GJIC功能,提示其在子宫内膜增殖性病变的阶段扮演重要角色;E1及E2均未影响子宫内膜细胞Cx43?Cx32的表达,提示Cx表达量不能完全反映GJIC功能?     

腺病毒介导Cx43基因修饰对急性白血病骨髓基质细胞GJIC功能的影响

目的观察急性白血病骨髓基质细胞(acute leukemia bone marrow stromal cells,ALBMSCs)经腺病毒介导的间隙连接蛋白43(Cx43)基因修饰后Cx43基因表达的变化以及对细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响。方法用重组腺病毒Ad-Cx43-GFP转染ALBMSCs,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达并计算转染效率,RT-PCR法、Westernblot法和免疫细胞化学法检测ABMSCs转染前后Cx43基因及蛋白表达情况,通过染料传输实验观察细胞间隙连接通讯功能的变化。结果荧光显微镜下观察可见ALBMSCs在转染Ad-Cx43-GFP后24h即有绿色荧光表达,计数绿色荧光细胞的百分率得出转染效率为(82.7±2.16)%;RT-PCR法、Westernblot法和免疫细胞化学法检测显示转染Ad-Cx43-GFP后ALBM-SCsCx43基因及蛋白表达较转染前增强(P<0·01);转染Ad-Cx43-GFP后ALBMSCs GJIC功能较转染前增强(P<0·01)。结论腺病毒介导Cx43基因修饰ALBMSCs后可上调其Cx43基因的表达并增强GJIC功能。     

吴茱萸碱对大鼠肝癌细胞缝隙连接细胞通讯功能及连接蛋白表达的影响

目的探讨吴莱萸碱抗肿瘤的作用机制。方法用终浓度为0．1,0．2,0．3μmol／L的吴茱萸碱作用于CBRH7919细胞,同时设不加吴茱萸碱的空白对照组。采用划痕标记染料示踪技术检测各组细胞缝隙连接细胞通讯（gap junctional intercellular communication,GJIC）功能;异硫氰酸荧光素间接免疫荧光法检测连接蛋白（connexin,Cx）26、Cx32表达的变化。结果与空白对照组相比,吴莱萸碱各浓度组CBRH7919细胞Cx26、Cx32表达显著增加,GJIC功能增强,并呈一定的剂量效应依赖关系。结论吴茱萸碱上调CBRH7919细胞Cx26和Cx32的表达及促进CBRH7919细胞的GJIC功能,可能是其抗肿瘤的机制之一。     

星形胶质细胞中缝隙连接蛋白connexin 43的表达及其功能调控

目的研究星形胶质细胞中缝隙连接蛋白connexin43（Cx43）的表达及由其形成的缝隙连接通讯功能的药物调控。方法
实验分为正常对照组、全反式维甲酸组（10µmol/L全反式维甲酸作用24h）及油酸酰胺组（25µmol/L油酸酰胺作用2h）。
western blotting法检测各组星形胶质细胞中Cx43总蛋白的表达;细胞免疫荧光法检测各组星形胶质细胞Cx43胞膜蛋白的表
达;荧光示踪法检测各组星形胶质细胞的缝隙连接通讯功能。结果与正常对照组相比,全反式维甲酸能增强星形胶质细胞中
Cx43总蛋白的表达（P<0.01）,油酸酰胺则能减弱其表达（P<0.01）;全反式维甲酸能增强Cx43胞膜蛋白表达,油酸酰胺能减弱其
表达;全反式维甲酸能增强星形胶质细胞缝隙连接通讯功能（P<0.01）,而油酸酰胺则可显著降低该功能（P<0.01）。结论药物
全反式维甲酸及油酸酰胺可以对星形胶质细胞缝隙连接通讯功能进行调控,其机制可能与其影响星形胶质细胞Cx43总蛋白和
胞膜蛋白的表达有关。
     

醛固酮对h9c2心肌细胞缝隙连接蛋白43的影响

目的：观察醛固酮对h9c2心肌细胞缝隙连接蛋白43（Connexin 43,Cx43）表达的影响。方法：将h9c2心肌细胞随机分为对照组和实验组,实验组用不同浓度（1×10^-8、1×10^-6、1×10^-4 mol/L）醛固酮处理24 h后,用RT-PCR和Western Blot观察不同浓度醛固酮下h9c2心肌细胞Cx43蛋白和mRNA的变化。结果：1×10^-8 mol/L醛固酮组Cx43mRNA和蛋白表达含量较对照组增加;1×10^-6 mol/L和1×10^-4 mol/L组的Cx43蛋白表达含量较对照组减少,而Cx43mRNA较对照组无明显改变。结论：醛固酮可能是通过对表达Cx43的双重影响来参与心肌细胞间隙连接重构的。     

缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响

目的观察宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响。方法采用荧光示踪实验检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能,及药物(油酸酰胺,维甲酸)对其功能的影响;采用标准细胞集落形成分析法检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞生长抑制作用的影响;采用Hoechst33258荧光染色检测缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞诱导凋亡作用的影响。结果荧光示踪实验结果显示油酸酰胺可显著降低缝隙连接通讯功能,而维甲酸则可增强该功能;标准细胞集落形成实验结果表明,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞生长的抑制作用,而维甲酸则增强依托泊苷的细胞生长抑制作用;Hoechst 33258荧光染色结果显示,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞的诱导凋亡作用,而维甲酸则增强依托泊苷的诱导凋亡作用。结论宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能降低,依托泊苷的抗肿瘤作用下降;而当通讯功能增强时,其抗肿瘤作用则增加。     

低剂量羟基脲联合丁酸钠对K562细胞γ珠蛋白基因表达的作用

目的：探讨低剂量羟基脲（hydroxyurea,HU）与丁酸钠（sodium butyrate,NaB）联合诱导人白血病细胞株（K562）细胞对γ珠蛋白基因表达的作用。方法：以K562细胞株为研究对象,用不同浓度HU和／或NaB作用于K562细胞,台盼蓝拒染活细胞计数观察细胞生长;联苯胺染色了解细胞红系分化,RT—PCR测定珠蛋白基因γ-mRNA表达。结果：25μmol／L HU与100μmol／LNaB是最佳用药组合,其对细胞生长抑制率为（46．09±1．54）％,与HU100μmol/L（64．31±5．19）％、NaB500μmol／L（86．25±1．10）％比较差异有显著性（P〈0．05）;联苯胺染色阳性细胞率达（17．72±0．58）％,与HU100μmoL／L（15．72±0．27）％、NaB500μmol／L（14．32±0．74）％比较差异有显著性（P〈0．05）;与亲本细胞比较Gγ—mRNA表达上调（2．04±0．13）倍,Aγ-mRNA表达上调（1．27±0．01）倍,差异有显著性（P〈0．05）。结论：低剂量HU与NaB联合用药能使K562细胞γ珠蛋白基因表达上调,并减轻细胞生长抑制,为临床联合用药提供实验依据。     

奥美拉唑诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制研究

【目的】探讨质子泵抑制剂奥美拉唑体外对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。【方法】0、100、200、300μmol／L奥美拉唑分别作用于体外培养的HeLa细胞,荧光显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测凋亡基因caspase-3和bcl-2的mRNA表达。【结果】HeLa细胞经奥美拉唑作用24h后,均可见染色质凝集;MTT法检测示各组24h增殖抑制率为（2．19±0．24）％、（16．70±1．61）％、（27．50±1．37）％和（31．20±2．04）％,48h增殖抑制率为（2．38±0．76）％、（16．80±3．00）％、（40．50±2．64）％和（45．80±2．18）％。增殖抑制率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;各组流式细胞仪检测24h凋亡率为（3．99±0．75）％、（11．50±2．61）％、（25．70±3．1）％和（37．3±2．67）％;200μmol／L组48h凋亡率为（45±2．15）％,72h为（62．4±2．89）％。细胞凋亡率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;RT-PCR结果示casepase-3基因表达随奥美拉唑浓度增加而增加,bcl-2基因表达随奥美拉唑浓度增加而降低。【结论】奥美拉唑通过上调casepase-3和下调bcl-2基因的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡。     

丙戊酸钠对乳腺癌细胞缝隙连接功能的增强作用及其机制

目的探讨丙戊酸钠对乳腺癌细胞Hs578T缝隙连接功能的影响及其可能机制。方法MTT法检测丙戊酸钠的细胞毒
性;细胞接种荧光示踪法测定Hs578T细胞之间荧光传递功能;Western blotting检测丙戊酸钠对Cx43总蛋白表达的影响;细胞
免疫荧光法观察丙戊酸钠对Hs578T细胞膜Cx43蛋白表达的影响。结果MTT检测结果显示丙戊酸钠在0~10 mmol/L浓度范
围内对Hs578T细胞几乎无细胞毒性;细胞接种荧光示踪结果显示丙戊酸钠0~5 mmol/L显著增强Hs578T细胞荧光传递功能
（P<0.01）;Western blotting结果显示丙戊酸钠0~5 mmol/L可显著增强Cx43总蛋白表达（P<0.01）;细胞免疫荧光结果显示丙戊
酸钠0~5 mmol/L可显著增强Hs578T细胞膜Cx43蛋白的表达。结论丙戊酸钠能够显著增强乳腺癌细胞Hs578T的缝隙连接
功能,这种增强作用可能与其增强Cx43总蛋白和细胞膜Cx43蛋白表达水平有关。
     

Cx43蛋白在宫颈癌细胞中的表达及其对细胞通讯功能的影响

探讨细胞间隙连接蛋白Ｃｘ４３在人子宫吕细胞系ＨｅＬａ中表达,及其对细胞间隙连接通讯的影响。方法应用流式细胞仪以及ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ划痕记荧光舆技术,研究维甲酸作用对ＨｅＬａ细胞Ｃｘ４３蛋白表达,以及细胞生长状态和间隙连接通讯功能的调节作用。