中药地龙中参环毛蚓环介导等温扩增快速检测方法

[目的]建立中药材地龙中参环毛蚓的环介导等温扩增(LAMP)检测技术,实现对参环毛蚓的快速检测。[方法]采集不同产地地龙,提取总DNA后将所提取的总DNA进行线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基(COI)基因片段扩增、测序、比对,判断各产地地龙物种。用设计的LAMP引物组进行地龙LAMP实验,反应结束后向扩增产物中加入核酸染料SYBR GreenⅠ,分别在自然光、紫外光下直接通过肉眼来观察颜色变化及利用琼脂糖凝胶电泳来检测其引物的特异性。[结果]利用新设计的LAMP引物对参环毛蚓实现了特异性扩增,且检出限达40 fg/μL,具有极高的灵敏度。[结论]利用LAMP技术可实现参环毛蚓的现场快速检测。     

延胡索标准汤剂研究

目的:制备延胡索标准汤剂,并进行质量标准研究。方法:药材经DNA分子鉴定为延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎。采用饮用水煎煮2次制备延胡索标准汤剂,考察延胡索标准汤剂特征图谱及延胡索乙素含量测定方法,并分别计算延胡索标准汤剂的出膏率、延胡索乙素含量及含量转移率,测定15批延胡索标准汤剂特征图谱。结果:15批延胡索标准汤剂出膏率为14.5%~32.5%;延胡索乙素含量为0.10%~0.24%;延胡索乙素含量转移率为30.7%~71.1%;对15批延胡索标准汤剂进行特征图谱测定,确定了9个共有峰,通过对照品指认4个色谱峰。结论:该方法中延胡索标准汤剂制备方法规范,样品质量稳定,方法精密度、稳定性、重复性良好,可为延胡索标配方颗粒质量标准建立提供参考。     

近红外光谱法快速测定侧柏叶配方颗粒槲皮苷含量

目的：建立测定侧柏叶配方颗粒中槲皮苷含量的近红外光谱定量模型,快速测定槲皮苷含量。方法：用积分球漫反射光谱采样系统测定样品的近红外光谱,做一阶导数预处理,采用偏最小二乘法（Partial Least Squares, PLS）建立定量模型。结果：定量模型的最佳主因子数为7,内部交叉验证均方差为0.096,决定系数 r 为0.998,外部验证预测均方差为0.068,系统精密度 RSD 为0.10％,方法精密度 RSD 为0.60％。结论：建立的预测模型测定侧柏叶配方颗粒中槲皮苷含量,快速、简便可行。     

窄带成像技术在香港的应用

窄带成像(narrow band imaging,NBI)是一项光学影像增强技术,通过光栅过滤,将普通白光内镜中红、绿、蓝3种光中波长最长的红光滤掉,只释放出中心波长为415nm(蓝光)和540nm(绿光)两种波长的光。波长变     

变应性鼻炎患者鼻黏膜 SEB 和 TIM4的表达及其相关性研究

目的：观察葡萄球菌肠毒素 B（SEB）和 T 细胞免疫球蛋白粘蛋白4（TIM4）在变应性鼻炎患者鼻黏膜中的表达,并探讨其相关性。方法收集24例过敏性鼻炎（AR）患者和22例非 AR 患者手术切除的鼻黏膜标本。从手术切除的鼻黏膜中分离单核细胞并进行流式分析。采用 ELISA、qRT －PCR 和 Western blot 检测 AR 患者鼻黏膜中 SEB 和 TIM4水平。结果在 AR 患者的鼻黏膜中检测到了大量的 B 细胞,同时表达高水平的 TIM4和共刺激分子。在 AR 鼻黏膜检测到高水平的 SEB。加 SEB 培养时, SEB 能介导鼻黏膜 B 细胞 TIM4的表达。 SEB水平和 TIM4＋ B 细胞频率呈正相关（r ＝0.596,P ＜0.05）。结论AR 鼻黏膜中 SEB 和 TIM4表达升高;接触 SEB能介导幼稚 B 细胞表达 TIM4和共刺激分子。 TIM4＋CD19＋B 细胞可能成为治疗 AR 的潜在靶点。     

水通道蛋白5与呼吸道变应性疾病

水通道蛋白是一组与水转运有关的细胞膜转运蛋白，在体内液体转运和分泌方面具有重要的生理作用。其中水通道蛋白5广泛分布于哺乳动物呼吸系统中，参与水转运和腺体分泌，与气道炎性／免疫性反应和黏液的过度分泌有关，在呼吸道变应性疾病的发生发展中起着重要作用。本文就水通道蛋白5与呼吸道变应性疾病的关系做一综述。     

IL-6诱导小鼠骨髓中性粒细胞中MMP-9的生成与释放的实验

目的 探讨IL-6诱导小鼠骨髓中性粒细胞（PMN）生成和释放基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的作用及激活途径。方法 分离小鼠骨髓PMN,将其分为空白对照组、IL-6刺激组、IL-6+DMSO组、IL-6+STAT3抑制剂Ⅷ组。实时荧光定量聚合酶链式反应检测细胞内MMP-9 mRNA表达,明胶酶谱检测PMN释放的MMP-9活性,Western blot检测PMN中STAT3蛋白磷酸化改变。结果 IL-6刺激后,PMN中MMP-9 mRNA水平明显升高（P=0.0050）,明胶酶谱检测的释放到胞外MMP-9活性明显高于对照组（P=0.0087）,IL-6刺激后PMN中STAT3磷酸化水平明显升高（P=0.0089）。在IL-6作用时加入特异性STAT3抑制剂Ⅷ后,MMP-9 mRNA水平、培养上清液中MMP-9活性以及PMN中磷酸化STAT3蛋白水平与IL-6刺激组相比均明显下降（P=0.0067, 0.048和0.0098）。结论 IL-6刺激骨髓PMN中MMP-9的生成和释放,该作用可能是通过诱导STAT3信号通路磷酸化实现的。     

肿瘤相关CD66b阳性中性粒细胞对预测宫颈癌Ⅰb至Ⅱa期复发的价值

  目的  :探讨宫颈癌组织中的多形核嗜中性粒细胞（polymorphnuclear neutrophil,PMN）数量在预测宫颈癌复发中的作用。  方法  回顾性分析1999年2月至2006年12月湖北省妇幼保健院及武汉大学中南医院92例初治宫颈癌Ⅰb~Ⅱa期患者的临床病理资料。采用免疫组织化学法检测宫颈癌组织中阳性CD66b的PMN数量,计算PMN数量平均值。将患者按宫颈癌组织中PMN浸润数量分组,数量 > PMN平均值为A组,数量≤PMN平均值为B组。以无复发生存（recurrence free survival,RFS）为结点,采用Kaplan-Meier法进行单因素分析,采用Cox风险回归模型进行多因素分析。  结果  A组的RFS期明显短于B组（P=0.001）。单因素及Cox风险回归模型多因素分析结果显示,腺癌（HR为3.020,95%CI为1.340~6.805,P=0.008）、淋巴结转移（HR为2.450,95%CI为1.065~5.637,P=0.035）、PMN浸润数量增加（HR为2.866,95%CI为1.274~46.447,P=0.011）为宫颈癌患者RFS的独立危险因素。  结论  宫颈癌组织中PMN数量的增加与宫颈癌患者RFS期缩短相关,是宫颈癌患者预后不良的一个潜在预测指标。