Immune safety of a novel oncolytic mutant M1 after administration In Vivo

The aim of this study was to evaluate the safety and efficiency of a novel,oncolytic adenovirus mutant M1 administered in conjunction with immunosuppressive agents.Animal models were established by administering purified M1 either intravenously or retroperitoneally.At different time points,blood samples were taken from the mice for testing of liver and renal function.Microscopic examination of the liver was performed to observe pathological changes.Immunohistochemical analyses were used to evaluate the expression of the adenovirus in the liver.Lymphocyte recruitment to the liver and the activation of adenovirus specific T cells were also analyzed.No signs of general toxicity were observed,but transient increases in ALT and Scr were observed following the administration of M1.Microscopic examination revealed a mild inflammatory response in the liver.Compared to intravenous injection,higher expression levels of adenoviral proteins were observed after retroperitoneal injection.Combined treatment with cyclosporine A resolved the liver and kidney dysfunction and increased the concentration of the adenovirus in the liver.The use of the novel oncolytic adenovirus mutant M1 in vivo is safe,and the combined administration of M1 with immunosuppressive agents was able to enhance the effectiveness and safety profile of M1.     

RNA干扰技术沉默Smad4基因表达对ECV304细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨利用RNA干扰技术下调Smad4基因表达对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力的影响，初步了解Smad4在血管生成中的作用。方法：设计并合成靶向人Smad4基因的小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）片段siRNA1和siRNA2，脂质体介导转染入人脐静脉内皮细胞株ECV304。应用实时定量RT-PCR和Western印迹法检测转染前后Smad4基因表达水平；应用细胞周期分析和羧乙基锗倍半氧化物（6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester，CFSE）－流式细胞仪检测ECV304细胞转染前后细胞增殖能力的变化；通过单层细胞划痕实验观察细胞转染前后迁移能力的变化。结果：从2条siRNA中成功筛选出1条siRNA，于RNA和蛋白水平可明显下调Smad4基因的表达；ECV304细胞转染Smad4的siRNA后，细胞的增殖和迂移能力明显增强。结论：利用RNA干扰技术能够筛选出高效的特异阻断Smad4基因表达的siRNA；Smad4基因表达下调能够明显促进血管内皮细胞的增殖和迁移。     

STAT-3与Enolase-1在乳腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨乳腺癌组织中信号转导及转录活化因子3(STAT-3)和糖酵解酶烯醇化酶(Enolase-1)的表达与雌孕激素受体、淋巴结转移、临床分期、病理分级等的关系.方法 免疫组织化学SP法检测126例乳腺癌和26例乳腺良性病变组织中STAT-3与Enolase-1的表达情况,并分析他们与临床病理参数之间的关系.结果 乳腺癌组织中STAT-3和Enolase-1的阳性表达率分别为82.5％和77.8％,明显高于乳腺良性病变组织(11.5％和7.7％),差异均有统计学意义(x2=42.416,P＜0.05;x2=57.211,P＜0.05);在有淋巴结转移的乳腺癌组织中阳性表达率分别为85.7％和90.5％,高于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义(x2=9.184,P＜0.05;x2=11.014,P＜0.05).相关分析表明STAT-3和Enolase-1的表达呈正相关.在雌激素受体阳性(ER+)和/或孕激素受体阳性(PR+)或表皮生长因子受体2阳性(HER 2+)乳腺癌组织中,有淋巴结转移组中STAT-3和Enolase-1的表达水平均明显高于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 STAT-3与Enolase-1的表达与乳腺癌的发生发展及侵袭转移相关,且二者有协同作用(r=0.379,P＜0.05).在ER+和(或)PR+或HER-2+乳腺癌组织中,STAT-3和Enolase-1的高表达与淋巴结转移相关.在高表达STAT-3的乳腺癌组织中Enolase-1表达也较高,其联合检测可作为判断乳腺癌恶性程度、评价预后及指导治疗的一项评估指标.     

人外周血单核细胞3种不同转染方法的比较

目的 采用3种不同方法转染原代人外周血单核细胞,以寻找一种简便、高效的单核细胞转染方法.方法 采用人淋巴细胞分离液从健康人外周血中分离出单个核细胞,锥虫蓝拒染法检测细胞存活率.单个核细胞在孔板内培养2 h后吸弃悬浮的淋巴细胞,获得贴壁的单核细胞.分别采用Lipofectamine 2000介导载体质粒(PEGF-N1)...     

应用siRNA技术下调Wnt2B抑制乳腺癌细胞恶性表型的研究

目的:通过体外实验探讨Wnt2B在乳腺癌发生发展中的作用.方法:应用免疫组织化学的方法检测正常乳腺组织和乳腺癌组织中Wnt2B的表达；采用RNA干扰技术,在MCF7细胞中沉默Wnt2B的表达,并经Western blot检测其沉默效率；应用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测、观察Wnt2B沉默后对MCF7细胞凋亡、细胞骨架构成的改变.同时在蛋白水平上检测沉默Wnt2B后对细胞P53/P21通路的影响.结果:Wnt2B蛋白在乳腺癌中的表达明显高于在正常乳腺组织中的表达；第2对Wnt2B siRNA(2号siRNA)对Wnt2B的沉默效果最为明显；沉默Wnt2B后细胞早期凋亡率和晚期凋亡率相对于对照细胞均明显增高并伴有细胞骨架明显的改变,表现为细胞骨架溶解,正常形态消失.同时,细胞内P53及P21表达水平随Wnt2B沉默而明显下降.结论:Wnt2B基因可以改变乳腺癌细胞的凋亡水平和骨架结构,在乳腺癌的发生发展中起着重要的作用,为乳腺癌的治疗提供了新的靶点.     

Chk1/2和Plk1蛋白在宫颈良恶性病变组织中的表达及其意义

背景与目的：Chk1/2（checkpoint kinase 1/2）和Plk1（polo-like kinase 1）是各细胞周期检测点启动DNA损伤修复的主要激酶.本研究主要探讨3种激酶蛋白在宫颈良恶性病变中的表达差异、与宫颈癌临床病理特征的关系及3种激酶在宫颈癌组织中表达之间的相互关系.方法：应用免疫组化SP法检测43例宫颈癌组织和20例慢性宫颈炎性组织中Chk1、Chk2和Plk1蛋白的表达情况.结果：Chk1、Chk2和Plk1蛋白在宫颈癌患者中的阳性率分别为76.7%、60.5%和32.6%,在慢性宫颈炎患者中的阳性率分别为30.0%、35.0%和0;Chkl和Plk1蛋白在宫颈癌组织中的表达显著高于慢性宫颈炎组织（P＜0.01）,而Chk2的表达差异无显著性（P＞0.05）.Chk1、Chk2和Plk1蛋白的表达在不同年龄、病理类型和临床分期的宫颈癌患者中差异无显著性（P＞0.05）;但Chk1和Plkl的表达在不同分化程度的宫颈癌患者中差异有显著性（P＜0.05）.Spearman等级相关分析,在43例宫颈癌患者中,Chk1与Chk2的表达呈正相关（r=0.492,P=0.001）.结论：Chk1和Plk1可能成为比较理想的宫颈癌治疗靶点.     

上皮性卵巢癌组织中YAP1的表达及临床意义

目的:探讨Hippo-Yes相关蛋白(YAP1)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达及与临床病理学特征及预后的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测44例EOC组织及15例EOC癌旁间质组织芯片中YAP1蛋白的表达情况。qPCR及Western Blot检测9例上皮性卵巢癌及5例卵巢良性肿瘤组织中YAP1 mRNA和蛋白水平表达情况。结果:YAP1蛋白在EOC组织中的表达主要定位于细胞质和细胞核,阳性表达率为75. 0%(33/44),癌旁间质组织的阳性表达率为6. 7%(1/15),两者间差异有统计学意义(P<0. 05)。YAP1蛋白阳性表达与EOC患者临床分期相关(χ2=8. 574,P=0. 014),而与年龄、组织学类型、病理分级、CA125值、腹水无关(P>0. 05)。Spearman秩相关检验分析结果显示,YAP1蛋白在EOC组织中的表达与HIF-1ɑ的表达呈正相关(r=0. 343,P=0. 044)。Kaplan-Meier检验结果显示YAP1蛋白阳性表达与EOC患者不良预后相关(P=0. 028)。qPCR及Western Blot结果显示,与卵巢良性肿瘤组织比较,在EOC组织中YAP1 mRNA和蛋白呈高表达。结论:YAP1有可能作为预测上皮性卵巢癌患者预后的一项指标,且可能参与缺氧对卵巢癌发生发展的调节作用。     

TCT联合HC-Ⅱ HPV筛查宫颈病变及药物干预的方法

目的探讨应用液基薄层宫颈刷片细胞学检测(Thinprep cytological test,TCT)及杂交捕获二代(Hybrid captureⅡ,HC-Ⅱ)人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)分型检测筛查宫颈病变的意义和对高危病例进行药物干预的方法。方法2004年4月~2005年8月,采用TCT和HPV DNA分型检测对17 320例患者进行宫颈病变的筛查,并以病理组织学活检为标准来验证筛查结果,同时应用氟尿嘧啶(5-Fu)可吸收缓释药膜对适宜病例进行局部干预治疗。结果TCT结果异常者1 754例,其中高危型HPV-DNA阳性450例;431例TCT提示无HPV感染病例中有172例高危型HPV-DNA阳性;TCT或TCT联合HC-ⅡHPV筛查宫颈上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)II级及以上病变的敏感性和特异性分别为81.12%、89.65%和72.08%、97.99%;采用5-Fu可吸收缓释药膜治疗25例CINⅠ级HPV高危型感染患者后,其病毒负荷量下降幅度、转阴率和病理逆转率均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论TCT和HPV分型检测联合应用于宫颈病变筛查可提高CINⅡ级及以上病变的特异性检出;5-Fu可吸收缓释药膜治疗CINⅠ级HPV高危型感染患者可降低其病毒负荷量,甚至清除。     

湖北省基层妇幼保健院子宫颈癌防控一体化门诊规范化建设专家共识

子宫颈癌是一种可以通过病因学预防、发病学预防及临床预防达到有效控制直至消除的恶性肿瘤。中国在子宫颈癌综合性防控体系建设方面存在发展不平衡、能力建设不足及机构分散等问题。湖北省政府于2022年启动了为期三年的全省1 267万35～64岁的妇女进行免费宫颈癌筛查的政府民生工程。充分利用本轮宫颈癌筛查人群全覆盖的规模和队伍优势,构建基层妇幼保健院宫颈癌防控一体化门诊,实施规范化建设与管理,是一个历史性的机遇,具有重要意义。湖北省妇幼保健协会宫颈疾病防治专业委员会专家组结合国内外最新进展和湖北省的实际情况,制定了本共识。共识中阐释了一体化门诊建设的一般要求、HPV疫苗接种门诊建设规范与工作流程、子宫颈癌筛查门诊建设规范与工作流程、阴道镜门诊建设规范及工作流程、癌前病变治疗门诊建设规范及工作流程、癌前病变治疗后的随访、科普及公众教育等,适合于指导湖北省内辖区基层（县、区级）妇幼保健院宫颈癌防控一体化门诊的规范化建设与管理。