PTEN对髓系白血病细胞VEGF及MMP表达的影响简

 目的 探讨在慢性髓系白血病中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)对血管内皮生长因子(VEGF)及金属基质蛋白酶(MMP)相互影响及其作用机制。方法 1)研究10例慢性髓系白血病慢性期CML-CP、10例急变期CML-BC及10例正常人骨髓单个核细胞内PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平变化。2)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）及对照载体腺病毒（Ad-GFP）转染人慢性髓系白血病细胞系K562。MTT检测细胞增殖;荧光定量PCR（FQ-PCR）检测PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA水平变化,Western blot及明胶酶谱检测PTEN、p-Akt、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果 CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及正常对照组(P<0.05),而VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及正常对照组(P<0.05)。以MOI=200转染K562细胞3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平均明显低于Ad-GPF组和未转染组(P<0.05),PTEN与VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平负相关,转染Ad-PTEN-GFP组与转染Ad-GFP组比较VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平分别降低4.80、5.88、5.72倍,p-Akt及VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平分别降低26.0、5.23、2.86、4.76倍。结论 PTEN基因可能通过抑制VEGF、MMP-2、MMP-9表达,抑制髓系白血病细胞血管新生及侵袭。     

非霍奇金淋巴瘤合并急性髓系白血病一例

患者 女性,57岁,主因确诊非霍奇金淋巴瘤(NHL)5年,发现血常规异常1周,于2009年12月5日入保定市第一医院血液科.患者于2004年因发现颈部肿物曾就诊于保定市第一医院,淋巴结病理结果:NHL,小淋巴细胞型;免疫组织化学:CD+20,CD+79(*),CD-3,CD-45RO,,CD-10,TdT-,CyclinD1-.胸腹部CT示:腋下及深部纵隔、腹膜后均未查到肿大淋巴结,肝脾不大.血常规示白细胞(WBC) 5.6×109/L,血红蛋白(Hb)116g/L,血小板(Plt) 156×109/L.骨髓象三系增生正常.     

右美托咪定对心肌收缩蛋白表达的影响

目的 研究右美托咪定(DEX)对心肌细胞收缩相关蛋白表达的影响及其分子机制。 方法 在50 ml/L浓度氧环境下培养H9C2细胞,建立心肌低氧损伤模型。实验分为对照组、低氧组、低氧+DEX (0.01 μmol/ml、1 μmol/ml、100 μmol/ml)组。除对照组培养在正常细胞环境中外,其余四组培养在低氧环境下,且其中三组按要求添加相应浓度的DEX。细胞存活率和细胞凋亡水平分别采用MTT法和流式细胞仪进行检测,采用ELISA试剂盒检测细胞培养液中心肌酶谱蛋白cTnI、LDH和CK-MB的漏出量,Western blot法检测H9C2细胞中titin、β-MHC、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表达。 结果 低氧条件成功诱导心肌细胞缺氧损伤。低氧组细胞较对照组存活率低、凋亡增加、细胞培养液中cTnI、LDH和CK-MB蛋白水平增加;低氧+ DEX (0.01 μmol/ml、1 μmol/ml、100 μmol/ml)组较低氧组,细胞存活率增加、凋亡减少,cTnI、LDH和CK-MB蛋白水平降低,p-PI3K和p-Akt蛋白表达增加,β-MHC和titin蛋白表达降低,且随着DEX剂量增加,变化更显著。 结论 在低氧损伤心肌细胞中,DEX能抑制收缩相关蛋白表达,可能与PI3K/Akt信号通路有关,是否与激活PI3K/Akt信号通络相关,还有待进一步研究。     

厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法选用Survivin siRNA转染和厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,作用48 h后,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用,免疫组化法观察Survivin蛋白表达的变化。结果 Survivin siRNA转染和厄洛替尼两者单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549作用48 h后,两种因素单独或联合应用都对细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制率分别为（47.68±4.09）%、（60.28±3.23）%、（78.14±4.34）%,较对照组差别有统计学意义（P〈0.01）,并能明显降低细胞内Survivin蛋白的表达水平,联合应用较两者单独应用对细胞增殖的抑制作用更显著（P〈0.01）,对Survivin蛋白表达的抑制作用更强。结论应用siRNA沉默Survivin表达可以提高肺腺癌细胞对厄洛替尼的敏感性。     

厄洛替尼联合survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的:探讨厄洛替尼联合survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549的作用.方法:survivin siRNA转染、厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察对A549细胞的增殖抑制作用,免疫组化染色法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况.结果:survivin ...     

野生型PTEN基因增强青蒿琥酯抑制K562细胞的作用

 目的: 探讨野生型PTEN转染人白血病K562细胞系对青蒿琥酯敏感性的影响及其分子作用机制。方法: 将野生型PTEN以腺病毒为载体转染(感染复数为200)人白血病K562细胞(Ad-WT-PTEN),同时以转染空载体腺病毒(Ad)及未转染细胞为对照组,与青蒿琥酯(ART)联合作用,观察野生型PTEN增强青蒿琥酯抑制K562细胞的作用。根据IC₅₀计算PTEN对青蒿琥酯的增敏倍数。以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,real-time PCR检测PTEN 的mRNA水平,Western blot检测PTEN、蛋白激酶B(Akt)及磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白水平;caspase活性检测试剂盒检测caspase-3/7的活性。结果: Ad-WT-PTEN转染K562细胞后,对青蒿琥酯敏感性明显增加,依据IC₅₀计算增敏倍数为2.25倍。至第3天,Ad-WT-PTEN +ART组较Ad+ART组细胞活力下降、凋亡率升高。Ad-WT-PTEN转染K562细胞后PTEN 的mRNA及蛋白表达明显增加,p-Akt水平及caspase-3/7活性下调,以PTEN及青蒿琥酯联合作用组下调尤为明显。结论: 野生型PTEN可能通过降低K562细胞Akt磷酸化的水平,并增加caspase-3/7活性,增强细胞对青蒿琥酯的敏感性。     

Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡作用的研究

目的 探讨JAK2抑制剂Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡作用的机制.方法 用不同浓度(0、1、5、10、50、100、500 nmol/L)的Ruxolitinib处理HEL细胞,其中0nmol/L为对照组.CCK-8法检测细胞活力;Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;罗丹明123检测线粒体膜电位变化;试剂盒检测Caspase-3/7活性;RT-PCR检测JAK2 mRNA水平;蛋白质印迹法检测p-JAK2、p-ERK、Bcl-2、Bim蛋白表达.结果 不同浓度Ruxolitinib作用HEL细胞48h后,细胞活力分别为(97.0±4.4)％、(92.0±3.9)％、(88.0±3.7)％、(81.0±3.1)％、(64.0±2.9)％、(38.0±2.2)％;Hoechst33342凋亡细胞染色显示100 nmol/L Ruxolitinib处理细胞48 h后,亮蓝色凋亡细胞[(49.21±1.80)％]较对照组[(10.02±1.40)％]增多(P＜o.05);流式细胞术结果显示100 nmol/L Ruxolitinib作用细胞48 h后G0/G1期细胞比率[(73.1±3.6)％]高于对照组[(45.2±3.0)％];1～500 nmol/L Ruxolitinib作用12、24 h后,HEL细胞线粒体膜电位降低,Caspase-3/7活性增强;RT-PCR结果显示,不同浓度Ruxolitinib处理HEL细胞48 h后JAK2 mRNA表达呈剂量依赖性减低;蛋白质印迹检测结果显示,实验组细胞p-JAK2、p-ERK、Bcl-2蛋白表达较对照组降低(均P＜0.01),Bim蛋白表达增加(P＜0.01).结论 Ruxolitinib可能通过抑制JAK2及ERK激酶途径诱导HEL细胞凋亡.     

厄洛替尼及Survivin siRNA与非小细胞肺癌

肺癌是全世界癌症死因的首位,非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的80%以上.约65%的肺癌患者确诊时已属晚期,失去手术机会,最主要的治疗是化疗.尽管采用了手术、放疗和化疗等综合治疗措施,由于转移和多药耐药等原因,NSCLC的5年生存率仍低于10%.NSCLC患者在使用铂类以及紫杉醇等药物的一/二线化疗后,病情往往在较短时间内复发;吉非替尼等三线治疗方案疗效亦欠佳,不能延长患者生存期.因此,迫切需要寻找新的诊断指标和有效的治疗方法.下面就厄洛替尼及RNA干扰方面叙述NSCLC的治疗现状.