非小细胞肺癌紫杉醇化疗耐药前后血清CK18水平的变化

目的 研究血清细胞角蛋白18（CK18）水平与非小细胞肺癌患者紫杉醇化疗耐药的关系.方法 以紫杉醇联合卡铂方案化疗（2～6个周期）第1个周期结束时点RECIST疗效评价为病情稳定或以上的30例非小细胞肺癌患者作为研究对象,采集第1个治疗周期结束时点及出现病情进展（耐药）时点的外周血样本.ELISA双抗体夹心法检测耐药前后患者血清CK18水平.结果 患者耐药前后血清CK18水平分别为（0.356±0.199）ng/mL和（0.566±0.189）ng/mL,差异有统计学意义（P=0.002）;其中4例患者血清CK18水平略有下降（＜20%）,均为化疗第2个周期结束时点疗效评价为病情进展（即耐药）的患者;其余26例患者血清CK18水平表现为升高,且均为接受至少3个周期化疗后发生病情进展的患者;其中20例增高大于20%,最高达947.17%.结论 血清CK18水平与非小细胞肺癌患者紫杉醇化疗耐药有关.血清CK18水平检测可为晚期非小细胞肺癌患者的个性化治疗提供参考依据.     

应用差异凝胶电泳及质谱技术筛选肺癌患者血浆差异蛋白

目的 建立健康者、肺部炎症患者和肺癌患者的血浆蛋白表达谱,寻找与肺癌早期发生相关的差异蛋白.方法 应用差异凝胶电泳（DIGE）和基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）对健康者、肺部炎症患者和I期肺癌患者血浆进行蛋白质组学比较研究,寻找肺癌相关差异蛋白.结果 应用DIGE进行分离后,成功获得了蛋白质组分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱;Decyder 6.5软件分析获得差异大于2倍的蛋白质点共有72个;质谱鉴定去冗余后确定了12种蛋白质,其中7种与肿瘤相关,分别为酰基辅酶A合成酶家族成员3、抗血小板膜糖蛋白I b特异性抗体、γ-纤维蛋白原、4型血清淀粉样蛋白A、补体因子H、钙结合微丝蛋白、载脂蛋白I.结论 应用DIGE及MALDI-TOF-MS分离并初步鉴定了12种蛋白质,筛选出7种在肺癌患者血浆中高表达的肿瘤相关蛋白.     

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其特性研究

目的 建立耐紫杉醇的人肺腺癌A549(A549/Taxol)细胞株,并初步研究其生物学特性.方法 应用抗肿瘤药紫杉醇以体外浓度递增和短时作用法筛选A549细胞株.用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的耐药指数及对多种抗癌药物的敏感性;免疫细胞化学法检测P-糖蛋白(P170)、β-tubulin等耐药相关蛋白的表达情况.结果 A549/Taxol细胞的紫杉醇半数抑制浓度(IC50 )是亲代A549细胞的512.8倍,群体倍增时间是亲代细胞的1.28倍,对紫杉醇、丝裂霉素、长春新碱、诺维本的耐药指数依次为512.8、66.48、4.88和 2.06;而对顺铂、健择无交叉耐药.A549/Taxol细胞高表达P170,β-tubulin表达水平高于其亲代细胞系.结论 成功建立了一株耐紫杉醇的A549/Taxol,并呈多药耐药特性.     

组织特异性启动子及其在肿瘤基因治疗中的应用

随着基因治疗研究的深入，愈来愈多的组织特异性启动子已被用于调控目的基因在靶器官中的表达，尤其是携带治疗性基因可以实现对肿瘤组织的特异性杀伤作用，组织特异性启动子的应用已成为基因治疗中的一个重要手段，现综述各系统启动子的分类及其应用。     

健康人肝组织麦胚凝集素亲和型糖蛋白表达谱分析

目的分析健康人肝组织麦胚凝集素(wheatgermagglutinin,WGA)亲和型糖蛋白表达谱。方法从30例健康人肝组织混合样本的总蛋白中用WGA凝集素亲和层析分离纯化糖蛋白,再利用双向电泳结合SYPRO Ruby荧光染色进一步分离WGA亲和型糖蛋白。目的蛋白质点经质谱鉴定后对其进行生物信息学分析及功能分类。结果初步建立WGA亲和型糖蛋白的双向电泳图谱,图谱均点数为(650±50)个,质谱鉴定并去冗余共获116个蛋白。经生物信息学分析104个蛋白具有不同程度的N糖基化位点,最后按Gene Ontology的分类原则进行功能分类。结论凝集素亲和层析结合双向电泳荧光染色、质谱鉴定是一种高通量的检测方法,WGA亲和型糖蛋白表达谱的初步构建为后续研究奠定了基础。     

HBV启动子对肝细胞具有特异性转录活性的研究

目的：探讨HBV转录调控核心序列在肝细胞中转录的活性。方法：构建HBV增强子和启动子调控的荧光素酶报告栽体，用脂质体转染法将其转染肝细胞和非肝细胞，双荧光素酶报告基因试验检测其在不同细胞中的转录活性。结果：HBV启动子在2、2.15细胞中转录活性最高，在其他肝细胞中的转录活性显著高于非肝细胞。结论：由HBV启动子构建的载体可能是一种新颖的有前景的靶向性肝癌细胞基因治疗栽体。     

应用差异凝胶电泳及质谱技术筛选肺癌患者血浆差异蛋白

目的 建立健康者、肺部炎症患者和肺癌患者的血浆蛋白表达谱,寻找与肺癌早期发生相关的差异蛋白.方法 应用差异凝胶电泳(DIGE)和基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对健康者、肺部炎症患者和I期肺癌患者血浆进行蛋白质组学比较研究,寻找肺癌相关差异蛋白.结果 应用DIGE进行分离后,成功获得了蛋白质组分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱;Decyder 6.5软件分析获得差异大于2倍的蛋白质点共有72个;质谱鉴定去冗余后确定了12种蛋白质,其中7种与肿瘤相关,分别为酰基辅酶A合成酶家族成员3、抗血小板膜糖蛋白I b特异性抗体、γ-纤维蛋白原、4型血清淀粉样蛋白A、补体因子H、钙结合微丝蛋白、载脂蛋白I.结论 应用DIGE及MALDI-TOF-MS分离并初步鉴定了12种蛋白质,筛选出7种在肺癌患者血浆中高表达的肿瘤相关蛋白.     

紫杉醇耐药与敏感细胞的差异表达蛋白分析

目的 比较人肺腺癌细胞系A549与肺腺癌紫杉醇耐药细胞系A549-Taxol的差异表达蛋白.方法 提取A549和A549-Taxol总蛋白,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离,ImageMaster 5.0软件分析并筛选出两者间差异表达的蛋白点,质谱分析加以鉴定.结果 获得分辨率高且重复性好的肺腺癌耐紫杉醇细胞系及亲代细胞系2-DE图谱.ImageMaster软件分析差异大于2倍的蛋白质点共有80个,其中33个在耐药细胞系中上调,47个下调.质谱分析鉴定出19种差异表达蛋白,其中A549-Taxol中上调蛋白11种,涉及细胞骨架蛋白、代谢酶类、分子伴侣和信号转导相关蛋白质.结论 应用2-DE技术整体展示了紫杉醇耐药细胞系及敏感细胞系的蛋白表达谱,质谱法鉴定的差异蛋白为进一步从多因素角度研究紫杉醇耐药机制提供了新线索.     

组织特异性启动子及其在肿瘤基因治疗中的应用

随着基因治疗研究的深入,愈来愈多的组织特异性启动子已被用于调控目的基因在靶器官中的表达,尤其是携带治疗性基因可以实现对肿瘤组织的特异性杀伤作用,组织特异性启动子的应用已成为基因治疗中的一个重要手段,现综述各系统启动子的分类及其应用.     

蛋白质指纹图谱技术在肺癌分子标志物研究中的应用

目的 分析肺癌与肺部良性疾病及正常人血浆蛋白质指纹图谱的变化,建立肺癌血浆标志物诊断模型。方法 应用蛋白质指纹图谱(SELDI-TOF-Ms)技术检测108例肺癌患者、40例肺部良性疾病患者和22例正常人血浆标本,采用层次聚类分析和主成分分析建立决策树模型,应用该模型盲筛21例肺部良性疾病和47例Ⅰ期肺癌。结果 筛选到23个差异蛋白峰（P<0.001）。盲筛分析显示决策树模型诊断敏感性和特异性分别为72.34%和71.43%,阳性预测值和阴性预测值分别为85.0%和78.95%,诊断正确性为72.06%。结论 应用SELDI-TOF-Ms技术初步建立的蛋白质模型为肺癌的早期诊断提供了新的技术平台。