原发性胆囊癌的诊治进展

原发性胆囊癌是胆道系统常见的恶性肿瘤,我国胆囊癌占同期普通外科疾病的0.1%～1.1%,平均0.28%;占同期胆道疾病的0.4%～3.8%,平均1.53%[1].胆囊恶性程度高,预后极差,总的5年生存率在0%～10%[2].胆囊癌缺乏典型的、特异性的临床症状,甚至手术时亦难识别,明确诊断时已多为晚期.手术是治疗胆囊癌的首选方法,放、化疗的应用价值还有待进一步研究.现就胆囊癌的诊断和治疗现状做一介绍.     

胃肠间质瘤患者血浆血管内皮生长因子的检测及其临床意义

目的探讨监测胃肠间质瘤（GIST）患者血浆中血管内皮生长因子（VEGF）的水平及其在GIST转移复发及治疗效果评价中的作州．方法应用ELISA法检测61例原发GIST患者、18例转移复发患者和28例健康人（对照组）的血浆VEGF含量。结果原发GIST患者术前血浆VEGF水平[（145．31±45．58）ng／L]和转移复发患者血浆VEGF水平[（145．72±52．73）ng／L]均明显高于对照组[（89．86±18．30）ng／L]差异有统计学意义（均P〈0．01）；原发及转移复发GIST患者间血浆VEGF水平差异无统计学意义（P〉0．05）。原发患者手术后及复发转移患者手术联合格列卫治疗后，血浆VEGF水平均较治疗前明显下降，分别为（101．81±27．63）ng／L和（112．45±38．58）ng／L，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论GIST患者和GIST转移复发患者血浆中VEGF水平明显高于正常人．监测血浆VEGF的水平有助于评价GIST治疗效果和预测GIST的转移复发。     

维泰醇类化合物抗肿瘤机制研究进展

维泰醇(alternol)是利用红豆杉树皮中一种微生物菌诱变株,经过发酵、纯化等工艺分离出的新型单体化合物。维泰醇类化合物对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用,其抗肿瘤机制已成为近年来的研究热点,现对近年来维泰醇类化合物抗肿瘤机制研究所取得的进展进行综述。     

ε-葡萄素抑制bFGF诱导血管新生作用分析

目的： 葡萄素（viniferin）是一类寡聚茋类物质,存在于葡萄等植物中,本文探讨ε-葡萄素（ε-viniferin）对血管新生是否具有抑制作用。 方法： MTT比色法测定ECV304细胞密度5×10⁴/mL条件下ε-viniferin浓度分别为0,10,20,30,40,50 μmol·L^-1时24 h和48 h的增殖抑制率;体外模型以0.5,1,5,10 mol·L^-1 ε-葡萄素的含药血清组和空白血清组培养碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导的人脐静脉内皮细胞系ECV304,用细胞划痕法和重建基底膜法测定药物对细胞迁移作用和内皮细胞拟管腔形成的影响;体内模型,用含5,10 mol·L^-1 ε-葡萄素的基质胶,Matrigel plug 法测定药物对bFGF诱导体内新生血管的影响;通过酶联反应法（ELISA法）检测5,10,20 mol·L^-1药物处理24 h的黑色素瘤细胞系（B16F10）培养上清液中血管内皮生长因子（VEGF）和bFGF浓度。 结果： 20 μmol·L^-1以上的ε-葡萄素能有效抑制ECV304细胞的增殖,0.5~10 μmol·L^-1的ε-葡萄素能抑制bFGF诱导的ECV304细胞迁移,在1~10 μmol·L^-1ε-葡萄素的作用下均可抑制bFGF诱导的ECV304细胞管腔形成,5~10 μmol·L^-1ε-葡萄素在体内Matrigel Plus模型也表现出抑制血管新生的活性。5~20 μmol·L^-1的ε-葡萄素能抑制黑色素瘤细胞B16F10细胞分泌bFGF和VEGF,其抑制能力强于紫檀茋。 结论： ε-葡萄素可以抑制血管的新生。     

胃肠道间质瘤Imatinib耐药细胞株的建立及其生物学特性

目的 建立胃肠道间质瘤耐药细胞模型GIST882-R.方法 采用间歇浓度梯度倍增法体外诱导胃肠道间质瘤细胞株GIST882对Imatinib靶向治疗耐药,建立耐药细胞模型GIST882-R.光学显微镜观察亲本细胞GIST882-S和耐药细胞GIST882-R的细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期的变化;噻唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间及细胞半数致死浓度(IC50);基因测序检测细胞耐药前后突变位点有无变化.结果 (1)耐药细胞的细胞形态呈上皮样,核浆比增加;高倍镜下可见多核细胞、胞质内颗粒样物质增多.(2)耐药前后细胞周期分别为S期20.23%比17.38%,G0/G1期68.33%比72.25%,G2/M期11.44%比10.37%,变化差异有统计学意义(P＜0.01).(3)GIST882-R的倍增时间(47.10±2.01)h,长于亲本细胞株GIST882-S(39.56±1.18)h(P＜0.01);耐药细胞GIST882-R较GIST882-S对Imatinib的IC50显著增高,分别为(1.549±0.366)μmol和(0.136±0.025)μmol,耐药指数为11.39(P＜0.01).(4)对GIST882-R和GIST882-S进行Kit基因测序,两者均存在13外显子K642E突变,但在CIST882-R中未发现新的基因突变.结论 成功获得耐药细胞GIST882-R,CIST882-R对Imatinib靶向治疗的敏感性明显降低.

Abstract：

Objective To establish the Imatinib-resistant model GIST882-R.Methods The intermittent concentration gradient doubling method was used to get Imatinib-resistant cell line GIST882-R.Changes of cell morphology were observed and compared under the optical microscopy.Changes of cell cycle were assayed and compared by using flow cytometer.The growth curvature,doubling time and IC50 were calculated by using methylthiazol tetrazolium (MTT) assay.Gene sequencing was applied to detect DNA mutation.Results (1) Significant changes occurred to the morphologic profiles,such as epithelioid shaped,the increased ratio of nucleolus to cytoplasm,emerging multinucleate cell,increase of granule substances;(2) The cell cycle of GIST882-S and GIST882-R was respectively 20.23% and 17.38% in S phase,68.33% and 72.25% in G0/G1 phase,11.44% and 10.37% in G2/M phase respectively (P＜0.01 );(3) The doubling time of GIST882-S and GIST882-R was (47.10 ±2.01 ) h and (39.56 ± 1.18)h respectively (P ＜0.01 ).IC50 for GIST882-S and GIST882-R was ( 1.549 ±0.366) μmol and (0.136 ±0.025) μmol respectively (P＜ 0.01 ).The resistance of GIST882-R to Imatinib was 11.39 fold of GIST882-S cells;(4) K642E mutation of exon 13 was found in both GIST882-S and GIST882-R.Conclusion The sensitivity of GIST882-R to Imatinib treatment is decreased significantly.     

甲磺酸伊马替尼耐药的胃肠间质瘤细胞中多药耐药基因1和KIT基因表达

目的 探讨多药耐药1（MDR1）基因和KIT基因与胃肠间质瘤（GIST）甲磺酸伊马替尼耐药的关系.方法 采用RT-PCR法半定量检测GIST882-S细胞和GIST882-R细胞中MDR1 mRNA和KIT mRNA表达水平;采用免疫细胞化学染色和Western blot检测GIST882-S细胞和GIST882-R细胞中P-gp和CD117蛋白表达情况.结果 GIST882-R细胞和GIST882-S细胞MDR1 mRNA相对表达量分别为0.321±0.033和0.157±0.056,差异有统计学意义（P＜0.05）;KIT mRNA相对表达量分别为0.389±0.063和0.339±0.067,差异无统计学意义（P＞0.05）;P-gp蛋白相对表达量分别为0.443±0.058和0.237±0.094,差异有统计学意义（P＜0.05）;CD117蛋白相对表达量分别为0.744±0.123和0.704±0.094,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 MDR1基因及其蛋白产物P-gp的过度表达可能与GIST甲磺酸伊马替尼耐药机制有关,而KIT基因可能未参与甲磺酸伊马替尼耐药.