脂肪酸代谢异常是二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化发病机制之一

目的：二甲基亚硝胺（DMN）诱导的大鼠肝纤维化模型是经典的动物模型,其病理变化与人类肝纤维化发生相类似。普遍观点认为,DMN化学刺激导致肝细胞的损伤,是诱导肝纤维化发生的直接原因,然而其具体的发病机制并不清楚。糖脂代谢异常是脂肪性肝病发生的主要原因之一。糖脂代谢紊乱是否也在DMN诱导肝纤维化模型中占有重要地位,至今尚不清楚。本研究采用全基因芯片技术与生物信息技术相结合方式,研究糖脂代谢异常与DMN诱导肝纤维化之间关系。方法：雄性Wistar大鼠每周前3天连续腹腔注射10mg?kg^-1DMN,持续4周,正常组大鼠给予等量生理盐水。造模2周末,正常组和模型组各5只大鼠做动态观察;造模4周末,剩余大鼠被全部处死,收集肝脏标本。进行肝组织全基因芯片分析,将结果导入生物信息分析软件IPA进行分析。结果：2周模型组与正常组之间、4周模型组与正常组之间共有55个共同差异基因（logRatio>2）。共同差异基因构成的分子网络,主要参与了9条信号通路,它们与炎症、免疫、肝纤维化、脂代谢和血管新生有密切关系。在造模2周（肝纤维化形成期）时,以脂肪酸代谢异常为主要表现;在造模4周（肝硬化形成期）时,以细胞增殖为主要表现。结论：脂肪酸代谢紊乱可能是DMN诱导肝纤维大鼠发病机制之一。     

一贯煎保肝作用研究

一贯煎保肝作用的有效成分和单味药药理作用研究表明,一贯煎含有人体生命活动所必需的微量元素8种:Zn、Fe、Cu、Mn、Sr、Co、Mo、Se,煎剂中含有至少18种游离氨基酸,其中人体必须氨基酸有8种,并含有皂苷、植物甾醇、三萜类、内酯、香豆素及黄酮类化合物等.具有保肝抑制肝纤维化、抗缺氧、抗疲劳、镇痛、抗感染和提高机体免疫功能的作用.     

基于方证相关理论解析肝硬化湿热内蕴病机

在肝硬化发病过程中,湿（瘀）热内蕴是重要的中医证候病机之一。对方剂效应原理的研究由以往侧重于方药配伍转向方-证互参,采用多个模型进行类方比较研究,来验证方证病理基础。茵陈蒿汤及其类方（栀子柏皮汤、茵陈五苓散、甘露消毒丹和茵陈四逆汤）对DMN、CCl₄和胆管结扎等大、小鼠肝硬化模型干预作用,表明DMN诱导的肝纤维化大鼠模型与茵陈蒿汤方证病机高度相关,属于湿（瘀）热内蕴。进一步揭示炎症早期属于湿热内蕴,是以库普弗细胞（KC）经典激活途径为主的炎症反应及脂肪酸代谢异常,为茵陈蒿汤方证的主要病理基础。针对此病机,尤其是肝硬化失代偿期,炎症活动明显,肝功能明显异常时,湿（瘀）热内蕴可能是其主要证型。应用清热利湿的茵陈蒿汤以及茵陈蒿汤类方治疗时,需首辨阴阳,分清湿热偏重,时刻不忘活血化瘀。只有精准明辨中医证候病机,临床才可取得满意疗效。     

茵陈蒿汤对二甲基亚硝胺与四氯化碳诱导的肝硬化大鼠模型凋亡相关基因影响的比较研究

目的：通过＂方-效-证＂相结合研究,明确茵陈蒿汤对二甲基亚硝胺（di methylnitrosamine,DMN）或四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）两种造模方式所致的肝硬化模型大鼠的疗效特点。方法：分别采用DMN和CCl4建立大鼠肝硬化模型,以肝纤维化已经形成并向肝硬化发展的时期（CCl4造模8周后）及其肝硬化成型后（DMN造模4周后）作为干预治疗的切入点,横向比较茵陈蒿汤在不同模型中的药效。基因芯片技术检测肝脏基因表达情况。结果：在DMN模型中,随着造模时间的延长,模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（alanineaminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、γ谷氨酰转移酶（gamma-glutamyl transferase,GGT）活性和总胆红素（total bilirubin,TBil）含量逐渐升高,均于4周时达到高峰（P〈0.01）;血清白蛋白（albumin,ALB）含量逐渐降低,4周时降至最低（P〈0.01）;与6周模型对照组比较,茵陈蒿汤组大鼠血清ALT、AST和GGT活性及TBil含量显著降低（P〈0.05或P〈0.01）,血清ALB含量显著升高（P〈0.05）。在CCl4模型中,茵陈蒿汤显著降低血清ALT、AST和GGT活性（P〈0.05）,但对血清TBil和ALB含量的改善没有显著作用。茵陈蒿汤能显著改善DMN大鼠肝脏病理改变,降低羟脯氨酸含量,但对CCl4模型则没有显著作用。基因芯片结果表明,在CCl4模型中,茵陈蒿汤显著抑制Fas、Bax和caspase-3的表达,促进Bcl-xL的表达,但不能抑制CCl4诱导的肝细胞凋亡,反而促使酪氨酸激酶受体上调了4.8倍。结论：茵陈蒿汤对DMN和CCl4两种大鼠肝硬化模型都表现出了疗效,但对DMN模型的干预尤其是降低肝组织羟脯氨酸含量、改善肝组织病理变化及调控凋亡基因等的作用显著优于CCl4模型。     

黄芪甲苷抗二甲基亚硝胺诱导肝纤维化大鼠效应研究

目的探讨黄芪甲苷对二甲基亚硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)诱导肝纤维化大鼠模型的作用。方法选取27只雄性Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组和黄芪甲苷组。模型组和黄芪甲苷组大鼠,采用腹腔注射DMN诱导肝纤维化模型,持续4周。于造模第3周开始,黄芪甲苷组在继续造模的同时予以黄芪甲苷干预,正常组和模型组给于等容量蒸馏水灌胃。4周末(即药物干预两周)处死全部大鼠,观察各组大鼠一般情况、肝组织病理学;检测各组大鼠血清肝功能水平、肝组织中羟脯氨酸(Hydroxypro鄄line,Hyp)含量;免疫组化法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组肝脏明显缩小,组织炎细胞浸润增加,胶原沉积明显增多,肝功能指标明显异常(P<0.01),提示纤维化形成。与模型组比较,黄芪甲苷可以显著改善肝脏病理,减轻肝脏胶原沉积及肝脏Hyp含量,降低血清ALT、AST、GGT水平及TBil含量,升高ALB含量,显著抑制肝组织α-SMA蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论黄芪甲苷具有显著保肝降酶抗肝纤维化形成作用,其机制可能跟抑制肝星状细胞的活化相关。     

经典退黄三方抗二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的方证比较研究

目的：通过观察经典退黄三方茵陈蒿汤、茵陈五苓散和栀子柏皮汤对二甲基亚硝胺（dimeth—ylnitrosamine,DMN）诱导的大鼠肝纤维化模型的效应,探讨该模型的病机。方法：48只大鼠按体质量分层随机分为正常对照组、模型组、茵陈蒿汤组、茵陈五苓散组和栀子柏皮汤组,采用DMN腹腔注射4周的方法诱导大鼠肝纤维化模型。从造模第3周开始,各药物组在继续造模的同时予以相应的药物干预,正常对照组和模型组给以等量生理盐水。4周末结束实验,杀鼠取材,观察各组大鼠一般情况、肝组织病理学、羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量及肝功能变化。结果：与正常对照组相比,模型组大鼠出现显著的肝损伤和肝纤维化,肝组织Hyp含量显著升高（P〈0．01）,肝功能显著异常（P〈0．01）。与模型组比较,茵陈蒿汤可显著改善肝功能（P〈0．05或P〈0．01）,显著改善肝组织病理改变,降低肝组织Hyp含量及肝脏胶原增生程度（P〈0．01）;茵陈五苓散可显著降低血清总胆红素含量（P〈0．01）,对肝组织病理影响不明显;而栀子柏皮汤显著改变肝脏病理,并对肝组织Hyp含量有降低作用。结论：茵陈蒿汤对DMN诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果优于茵陈五苓散和栀子柏皮汤;DMN诱导的大鼠肝纤维化模型在其形成期的病机以“湿（瘀）热内蕴”为主,且湿（瘀）热并重,与茵陈蒿汤方证高度相关。     

椒形药棉治疗外科疑难病症2例

目的探究椒形药棉技术在外科疑难病症中的治疗效果。方法用椒形药棉技术配合中药治疗。结果所选2例外科疑难病症取得满意的疗效。结论椒形药棉技术在部分外科疑难病症中的治疗效果确切。外科伤口因合并细菌感染,常导致伤口缠绵难愈,是临床面临的棘手问题。椒形药棉因其形似辣椒,作为各种祛腐生肌药的载体,可有效深入疮口内部,对于疮口较深甚至形成窦道的不规则难愈疮口,尤为适用。笔者从事中医外科十多年,在使用椒形药棉治疗各类创口窦道类疾病方面积累一定经验,常能功起沉疴。     

Xiayuxue Decoction(下瘀血汤)Attenuates Hepatic Stellate Cell Activation and Sinusoidal Endothelium Defenestration in CCI_4-Induced Fibrotic Liver of Mice

Objective:To investigate the effects of ancient Chinese medical formula Xiayuxue Decoction(下瘀血汤,XYXD) on activation of hepatic stellate cells(HSCs) and defenestration of sinusoidal endothelial cells(SECs) in CCI_4-induced fibrotic liver of mice.Methods:High performance liquid chromatography was used to identify the main components of XYXD and control the quality of extraction.C57BL/6 mice were induced liver fibrosis by CCl_4 exposure and administered with XYXD for 6 weeks simultaneously.Liver tissue was investigated by hematoxylin-eosin and Sirius-red staining.Sinusoidal fenestrations were observed by scanning electronic microscopy and fluorescent immunohistochemistry of PECAM-1(CD31).Whole liver lysates were detected of α-smooth muscle actin(α-SMA) and type-1 collagen by Western blot.Primary rat HSCs-T6 cells were analyzed by detecting a-SMA,F-actin,DNA fragmentation through confocal microscopy,Western blot,terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling(TUNEL) assay and cellomics arrayscan,respectively.Results:Amygdalin and emodin in XYXD were identified.XYXD(993 mg/kg) inhibited Sinus red positive area up to 70.1%(P0.01),as well as protein levels of α-SMA and type-1 collagen by42.0%and 18.5%(P0.05) respectively.In vitro,XYXD(12.5 μg/mL,50 μg/mL) suppressed the activation of HSCs and reversed the myofibroblastic HSCs into quiescent,demonstrated as inhibition of fluorescent F-actin by 32.3%and 46.6%(P0.05).Besides,XYXD induced the apoptosis of HSC-T6 cells by 20.0%(P0.05)and 49.5%(P0.01),evidenced by enhanced TUNEL positivity.Moreover,ultrastructural observation suggested XYXD inhibited defenestration of SECs,which was confirmed by 31.1%reduction of protein level of CD31(P0.05).Conclusions:XYXD inhibited both HSCs activation and SECs defenestration which accompany chronic liver injuries.These data may help to understand the underlying mechanisms of XYXD for prevetion of chronic liver diseases.     

278例强直性脊柱炎患者中医证候分类研究

目的探讨强直性脊柱炎的中医证候分类,为强直性脊柱炎证候诊断客观化提供参考依据。方法收集278例强直性脊柱炎患者的临床四诊信息,以因子分析法提取公因子并测量症状载荷,以系统聚类分析法归纳证候群,确定强直性脊柱炎的中医证候分型。结果通过因子分析,从强直性脊柱炎患者的临床四诊信息中提取出24个公因子;利用因子得分作为变量进行聚类分析,总结出强直性脊柱炎的4个具有代表性的中医证候群,即肾虚督寒证、肾阴虚证、湿热痹阻证和瘀血痹阻证;其中肾阴虚证可兼见阳虚和湿热,湿热痹阻证可兼有脾虚。结论因子分析联合聚类分析结合中医基础理论归纳强直性脊柱炎的证候分型具有可行性。     

茵陈蒿汤和茵陈四逆汤抗二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的方证比较研究

目的：通过观察茵陈蒿汤和茵陈四逆汤对二甲基亚硝胺（DMN）诱导的大鼠肝纤维化模型的效应,探讨该模型的证候病机。方法：大鼠随机分为正常组、模型组、茵陈蒿汤组和茵陈四逆汤组,采用腹腔注射DMN 4周诱导大鼠肝纤维化,于造模第3周开始,各给药组在继续造模的同时予以相应的药物干预,正常组和模型组给以等量生理盐水。4周末杀鼠取材,观察各组大鼠一般情况、肝组织病理学、羟脯氨酸（Hyp）含量及肝功能变化。结果：与正常组相比,模型组出现显著的肝损伤和肝纤维化,肝组织Hyp含量显著升高（P〈0.01）,肝功能显著异常（P〈0.01）。与模型组比较,茵陈蒿汤可显著改善肝组织病理,降低肝组织Hyp含量及肝脏胶原增生程度（P〈0.01）,显著改善肝功能（P〈0.05或P〈0.01）;而茵陈四逆汤不但不能改善任何指标,而且还加重了DMN诱导的大鼠肝脏的炎症和肝纤维化。结论：茵陈蒿汤对DMN诱导的大鼠肝纤维化模型的治疗效果显著优于茵陈四逆汤;DMN诱导的大鼠肝纤维化模型在其形成期的病机以＂湿热内蕴＂为主,且湿热并重,与茵陈蒿汤方证高度相关。