氨基末端B型利钠肽原与B型利钠肽检测在急性脑梗死合并心力衰竭时的诊断价值研究

目的 探讨心衰标志物氨基末端B型利钠肽原(amino-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)与B型利钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)在单纯心衰和急性脑梗死伴心衰患者血液水平的变化趋势及相关性,为临床医生选择合适的检测项目并科学分析检测结果提供客观依据.方法 采用美国临床与实验室标准化协会(Clinical and Llaboratory Standards Institute,CLSI)颁布的EP15-A2文件对电化学发光免疫检测系统罗氏Cobas E601和化学发光免疫检测系统西门子ADVIA Centaur检测NT-proBNP与BNP的精密度和准确度进行验证,并采用稀释回收试验确定高值标本的最大稀释倍数,保证试验数据符合要求;然后收集203例单纯心衰和急性脑梗死伴心衰患者与60例正常体检者标本,分析NT-proBNP与BNP结果的变化趋势与相关性;与此同时,检测急性脑梗死合并心衰患者同型半胱氨酸( homocysteine,Hcy)及NT-proBNP水平,分析二者相对于正常对照组的差异情况及相关性.结果 Cobas E601与ADVIA Centaur对NT-proBNP与BNP检测均具有良好的重复性,总不精密度分别小于2.93％与3.50％,与定值校准品的偏差分别小于3.60％与2.60％,符合临床检测要求;超出测量上限的样本可采用的最大稀释比例均为1:2;相对于单纯心衰患者,急性脑梗死伴心衰患者NT-proBNP水平会明显抬高(P=0.003),与BNP数值间相关性差,BNP仅在急性脑梗死合并Ⅲ级心衰患者体内明显升高(P＜0.001);急性脑梗死伴心衰患者Hcy与NT-proBNP测定结果均明显高于正常对照组(均P＜0.001),但二者无明显相关.结论 NT-proBNP与BNP均能够很好的反应单纯心衰的严重程度,但在评价急性脑梗死合并的心力衰竭时,NT-proBNP检测结果失去诊断价值,且不可通过Hcy进行校正.在急性脑梗死合并的心力衰竭的评价中,NT-proBNP不能准确反映心帅程度,且不可通过Hcy进行校正.     

羟基喜树碱诱导SMMC-7721细胞凋亡时线粒体凋亡诱导因子的转位研究

目的研究羟基喜树碱诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡时线粒体凋亡相关蛋白凋亡诱导因子表达及从线粒体发生核转位的变化.方法用80 μg/ml羟基喜树碱作用于肝癌细胞株SMMC-7721后,用吖啶橙/溴化乙啶染色法观察细胞凋亡现象;用电子显微镜观察线粒体超微结构;分别用逆转录聚合酶链反应、Western blot检测凋亡诱导因子在mRNA与蛋白质水平表达的变化;用激光共聚焦显微镜观察凋亡诱导因子在细胞凋亡时从线粒体到核的迁移变化.结果 80μg/ml羟基喜树碱作用SMMC-7721细胞后,吖啶橙/溴化乙啶荧光双重染色可见细胞体积缩小、细胞皱缩、核碎裂等典型细胞凋亡形态学改变;超微结构观察发现线粒体肿胀;细胞凋亡时凋亡诱导因子在mRNA与蛋白质水平上的表达与对照组细胞相比没有明显变化,但凋亡诱导因子发生了从线粒体到核的迁移. 结论羟基喜树碱可以通过线粒体途径诱导人肝癌细胞发生凋亡;在线粒体凋亡途径中,线粒体凋亡相关蛋白凋亡诱导因子从线粒体释放并发生核转位可能与羟基喜树碱诱导细胞凋亡密切相关.     

重庆垫江牡丹皮HPLC指纹图谱研究(Ⅲ)——刮丹皮指纹图谱

中国药房2010,(3):238-241目的:建立重庆垫江药用牡丹刮丹皮的标准高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,为科学评价与有效控制牡丹皮的质量提供新的依据和技术手段。方法:利用HPLC法测定重庆垫江产刮丹皮样品10批     

茅莓总皂苷的含量测定

目的:建立茅莓总皂苷的含量测定方法.方法:通过对样品采用不同溶剂及不同提取方法所得的提取液显色后,以分光光度法测定总皂苷的含量.结果:本法测定的线性范围为22～176μg(r=0.9997);平均回收率为102.1%,RSD=2.82%(n=6);样品以70%乙醇回流提取所得的总皂苷含量最高.结论:该方法灵敏、可靠,显色后的样品比较稳定,可用于茅莓药材的质量控制及品质评价.     

金属β-内酰胺酶(IMP-1)的表达,纯化和鉴定

目的:建立金属β-内酰胺酶IMP-1的表达,纯化和鉴定方法,并探讨实验条件对分离纯化的影响.方法:pET9a/d-IMP-1质粒转化至E.coli Competent BL21(DE3)Cell并在LB培养基中表达后,通过SP Sepharose离子交换柱,得到粗提物,浓缩后用Sephadex G-75凝胶柱进一步纯化,得到IMP-1的精提物,对纯化产物用SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS进行鉴定,同时用Nitrocefin作底物,测定纯化的金属β-内酰胺酶IMP-1的活性.结果:纯化的IMP-1具有较高的活性,能水解大多数抗生素.其米氏常数Km=9.28μmol/L;用MALDI-TOF-MS法测得的分子量为Mr=25111.9.结论:本文建立了金属β-内酰胺酶IMP-1的表达、纯化、鉴定方法,该法可用于其它的金属β-内酰胺酶的表达和纯化.     

重组人GM-CSF／IL-3融合蛋白(G3)的分离纯化

Ｇ３是由基因工程技术构建、在大肠杆菌中高效表达获得的由ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－３组成的融合蛋白,能刺激造血细胞的增殖、分化和调节免疫应答。Ｇ３的生物学活性与ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－３相比有明显提高［１］。本文用抗Ｇ３单抗（ＭＧ３１）分别与ＣＮ－Ｂｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ和ｒＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ偶联制备免疫亲和色谱（ＩＡＣ）柱,对Ｇ３进行纯化,取得了满意的结果。１　材料和方法１．１　ＭＧ３１单抗［２］的纯化　饱和硫酸铵溶液沉淀法。１．２　ＭＧ３１－ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱（…     

高效液相色谱法检测血中表阿霉素的研究

用ＺｏｒｂａｘＣ－８柱成功地分离了阿霉素、表阿霉素及其代谢产物。在此基础上建立了用阿霉素作内标物定量测定表阿霉素的分析方法，其最低检测限为２ｎｇ／ｍｌ，线性范围１０－３００ｎｇ／ｍｌ。     

柱前手性衍生化反相高效液相色谱法拆分地佐西平对映异构体的研究

用乙酰葡萄糖异硫氰酸酯(GITC)作柱前手性衍生化试剂,以反相高效液相色谱法成功地拆分了地佐西平对映异构体。在此基础上建立了地佐西平对映异构体纯度和血药浓度测定方法。已用于测定右旋地佐西平的光学纯度和小鼠血药浓度。     

大鼠脑组织蛋白质双向电泳技术的建立

目的：建立大鼠脑组织蛋白质双向电泳技术。方法：利用不同体积的裂解液提取大鼠脑组织中的蛋白质，并通过不同的蛋白质上样量（1mg，2mg，3mg），进行双向电泳，考马斯亮蓝染色，图谱分析。结果：在等电点3～10，分子量6．5～200ku范围内分离得到蛋白质斑点为，1mg蛋白质上样量为546个蛋白质斑点，2mg为780个，3mg为805个斑点。2mg蛋白质上样量的双向电泳图谱更清晰，分离更好。结论：成功建立了大鼠脑组织蛋白质的双向电泳技术。