羟基喜树碱诱导SMMC-7721细胞凋亡时线粒体凋亡诱导因子的转位研究

目的研究羟基喜树碱诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡时线粒体凋亡相关蛋白凋亡诱导因子表达及从线粒体发生核转位的变化.方法用80 μg/ml羟基喜树碱作用于肝癌细胞株SMMC-7721后,用吖啶橙/溴化乙啶染色法观察细胞凋亡现象;用电子显微镜观察线粒体超微结构;分别用逆转录聚合酶链反应、Western blot检测凋亡诱导因子在mRNA与蛋白质水平表达的变化;用激光共聚焦显微镜观察凋亡诱导因子在细胞凋亡时从线粒体到核的迁移变化.结果 80μg/ml羟基喜树碱作用SMMC-7721细胞后,吖啶橙/溴化乙啶荧光双重染色可见细胞体积缩小、细胞皱缩、核碎裂等典型细胞凋亡形态学改变;超微结构观察发现线粒体肿胀;细胞凋亡时凋亡诱导因子在mRNA与蛋白质水平上的表达与对照组细胞相比没有明显变化,但凋亡诱导因子发生了从线粒体到核的迁移. 结论羟基喜树碱可以通过线粒体途径诱导人肝癌细胞发生凋亡;在线粒体凋亡途径中,线粒体凋亡相关蛋白凋亡诱导因子从线粒体释放并发生核转位可能与羟基喜树碱诱导细胞凋亡密切相关.     

生物分析化学课程的建设与实践

在生物分析化学课程建设中,加强师资队伍建设,根据学科发展动态,改革教学内容,采用多种方法探索教学新模式,通过加强教学管理,不断提高教学质量,促进课程建设的系统化和规范化。     

分析化学课程双语教学的探索

分析化学是医学检验本科学生必修的专业基础课,本文结合双语教学的实践经验,探讨了在医学检验本科分析化学课程双语教学中存在的主要问题,并从教材建设、师资培养和课程教学质量控制等方面提出了相应的建议。     

羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后线粒体蛋白质组表达差异的定量分析

目的 对羟基喜树碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡前后的线粒体进行定量蛋白质组学研究.方法 用羟基喜树碱诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,提取线粒体并鉴定其纯度;用可裂解的同位素标记的亲和标签技术标记线粒体蛋白质,利用二维液相色谱串联质谱分析鉴定蛋白质.结果 获得了羟基喜树碱诱导细胞凋亡前后的高纯度线粒体;分析鉴定了细胞凋亡前后,相对表达量差异有统计学意义的蛋白质74种,其中42种线粒体蛋白质在细胞凋亡后的表达量下调,32种蛋白质的表达量在凋亡细胞中上调.这些差异蛋白的分子功能主要表现为能量代谢和核酸的翻译、转录、复制以及细胞骨架等.结论 获得了羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后的线粒体差异蛋白信息,将促进对癌细胞凋亡机制及羟基喜树碱药理作用的深入理解,同时,实验所采用的整合技术平台将有助于亚细胞定量蛋白质组学研究.     

研究生《蛋白质组学》样品制备与分离的教学探索

样品制备与分离是蛋白质组学研究中非常关键和复杂的过程。为了提高医学研究生《蛋白质组学》教学中样品制备与分离的课堂教学质量,使其能够更好地掌握样品制备与分离的原则、技术和策略,达到培养和提高其科研能力的目的,根据学校和学生的实际情况,进行教学探索。     

生物分析化学中开展设计型实验考核的探索

把设计型实验作为生物分析化学实验考核,在学生已经掌握生物分析化学基本理论和基本操作技能的基础上,通过文献查阅、实验方案设计、实验报告和实验总结等10个方面的指标,考核学生运用知识能力和创新综合能力。考核结果的定量分析表明,学生实验考核成绩平均分87.8,标准差5.0,难度系数0.88,区分度0.12,实验考核信度系数0.9423。通过实施设计型实验考核,激发了学生的实验主动性,培养了学生分析问题和解决问题的能力,促进了学生的创新意识与动手能力的培养。     

提高卫生化学课程教学质量的探讨

通过丰富教师的专业知识，培养教师的创新能力，更新教学方法，达到提高《卫生化学》课程理论教学和实验教学质量的目的。     

将科研思维和实践引入研究生蛋白质组学教学的尝试

为了将理论知识内容与实际研究工作相结合,授课教师将科研思维和实践引入研究生的蛋白质组学课程教学中。如,为让学生真正了解2-DE蛋白分离技术,在讲授经典的2-DE技术基础上,结合实例用图示指出经典2-DE技术存在的问题和局限,再用改进的2-DE蛋白分离图谱,剖析如何在实际工作中加以应用;为提高研究生的科研思维能力,以肿瘤为实例,要求各专业的研究生查阅相关文献、提出科学问题、设计课题、寻求答案。通过这些教学尝试,探索能力型医学人才培养路径。     

羟基喜树碱通过线粒体途径诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的观察

目的:研究羟基喜树碱是否可通过线粒体途径诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡. 方法: 将不同浓度的羟基喜树碱作用于肝癌细胞SMMC-7721,用MTT法检测细胞增殖,光镜观察细胞形态;用荧光染料MitocaptureTM检测线粒体跨膜电位、用Western blot法检测细胞色素C从线粒体的释放;用Annexin Ⅴ-FITC,hoechst法及电镜检测细胞的凋亡状况. 结果:羟基喜树碱对肝癌细胞SMMC-7721的增殖有明显的抑制作用,IC50约是80 mg/L. 当用80 mg/L羟基喜树碱作用不同时间后:线粒体膜跨电位下降并伴随有细胞色素C从线粒体至细胞质的释放;细胞膜的磷脂酰丝氨酸外翻;细胞核染色质固缩,呈致密浓染的凋亡状态. 结论:羟基喜树碱通过线粒体途径引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一.     

羟基喜树碱诱导SMMC-7721细胞线粒体跨膜电位耗散的蛋白质组分析

目的比较蛋白质组,分析羟基喜树碱诱导肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡前后的线粒体蛋白质表达谱。方法用羟基喜树碱诱导肝癌SMMC-7721细胞发生线粒体跨膜电位耗散,提取线粒体并用Western blot法对线粒体纯度进行鉴定；用二维凝胶电泳分离溶解度不同的3种蛋白质组分并对蛋白质进行银染色；利用PDQuest图像分析软件分析比较凝胶结果,获得差异蛋白质；采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定部分差异蛋白质,并用Western blot法对部分差异蛋白质进行进一步的鉴定。结果羟基喜树碱成功地诱导线粒体发生跨膜电位耗散,并获得纯度很高的线粒体；通过PDQuest图像分析软件发现,线粒体发生跨膜电位耗散前后比较约有39个蛋白质点表达有差异,对其中28个差异蛋白质斑点进行了肽质指纹图分析,鉴定出20种可能的蛋白质。结论获得了羟基喜树碱诱导线粒体凋亡前后差异蛋白的相关信息,为从蛋白质水平进一步研究羟基喜树碱诱导癌细胞发生凋亡的机制奠定了基础。