| 金属β-内酰胺酶(IMP-1)的表达,纯化和鉴定 |
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| 引用本文： | 丁世家,邱宗荫,山口佳宏,后滕正文.金属β-内酰胺酶(IMP-1)的表达,纯化和鉴定[J].重庆医科大学学报,2005,30(4):519-521,529. |
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| 作者姓名： | 丁世家 邱宗荫 山口佳宏 后滕正文 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学医学检验系,重庆,400016
2. 熊本大学药学系 |
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| 摘 要： | 目的:建立金属β-内酰胺酶IMP-1的表达,纯化和鉴定方法,并探讨实验条件对分离纯化的影响.方法:pET9a/d-IMP-1质粒转化至E.coli Competent BL21(DE3)Cell并在LB培养基中表达后,通过SP Sepharose离子交换柱,得到粗提物,浓缩后用Sephadex G-75凝胶柱进一步纯化,得到IMP-1的精提物,对纯化产物用SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS进行鉴定,同时用Nitrocefin作底物,测定纯化的金属β-内酰胺酶IMP-1的活性.结果:纯化的IMP-1具有较高的活性,能水解大多数抗生素.其米氏常数Km=9.28μmol/L;用MALDI-TOF-MS法测得的分子量为Mr=25111.9.结论:本文建立了金属β-内酰胺酶IMP-1的表达、纯化、鉴定方法,该法可用于其它的金属β-内酰胺酶的表达和纯化.
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| 关 键 词： | 金属β-内酰胺酶 IMP-1 MALDI-TOF-MS |
| 文章编号： | 0253-3626（2005）04-0519-03 |
| 收稿时间： | 2005-01-07 |
| 修稿时间： | 2005-01-07 |
The expression, purification and characterization of metallo-β-lactamases(IMP-1) |
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| Ding ShiGu;Qiu ZongYin;Shan KouJiaHong;Hou TengZhengWen.The expression, purification and characterization of metallo-β-lactamases(IMP-1)[J].Journal of Chongqing Medical University,2005,30(4):519-521,529. |
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| Authors: | Ding ShiGu;Qiu ZongYin;Shan KouJiaHong;Hou TengZhengWen |
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